em大鼠离体胸主动脉血管环实验方法介绍

依那普利对大鼠离体胸主动脉的舒张作用及其机制的开题
报告
引言：
依那普利是一种 ACE 抑制剂，广泛用于高血压、心力衰竭等各种心血管疾病的治疗。

其作用机制是抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统，从而减轻血管紧张作用，降低血压。

然而，依那普利对血管的舒张作用机制仍不十分清楚。

本文旨在探究依那普利对大鼠离体胸主动脉的舒张作用及其机制。

材料和方法：
1.实验动物：12只 SD 雄性大鼠。

2.分组：对照组和依那普利组（每组6只）。

3.实验操作：离体大鼠胸主动脉环切取平滑肌样本，记录血管张力并加入不同剂量的依那普利，记录张力变化。

结果：
1.依那普利可显著降低大鼠离体胸主动脉的张力，呈现明显的剂量依赖性。

2.依那普利对离体大鼠主动脉的舒张作用与皮质激素类似，可能是通过促进 NO 合成或抑制内皮素 ET-1 的释放来实现的。

结论：
依那普利可通过促进 NO 合成或抑制 ET-1 的释放来实现对大鼠离体胸主动脉的舒张作用。

这一结果为深入探究依那普利的作用机制及其临床应用提供了理论依据。

杜仲乙醇提取物对大鼠离体胸主动脉环的作用及机制岳晓洁1，，张炯炯1，许逸飞1 ，叶志孟1 ，张薇1，王会平2（1.浙江大学医学院临床二系，浙江杭州 310031; 2.浙江大学医学院生理学教研室，浙江杭州 310031）[摘要]：目的：探讨杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）醇提物对离体大鼠主动脉环收缩张力的作用及其可能机制。

方法：采用大鼠离体胸主动脉环灌流模型，采用累积加药法，观察杜仲醇提物对PE预收缩（苯肾上腺素组+E,-E）、氯化钾预收缩（氯化钾组+E,-E）的血管环的作用; 并检测杜仲对经无钙液预处理后的血管环的作用。

结果：不论是否有内皮，累计浓度杜仲对高浓度KCL及PE引起的血管环收缩均有明显的舒张作用。

格列苯脲（Glib），4－氨基吡啶(4－AP),四乙胺（TEA）,L-NAME,ODQ，吲哚（Indo）不能阻断杜仲对PE预收缩血管环的舒张。

胸主动脉环经无钙液孵育和杜仲处理后对PE的反应性降低。

结论：杜仲对胸主动脉环有非内皮依赖性的舒张作用，杜仲能通过抑制内钙释放而起到舒张血管环的作用。

[关键词]：杜仲乙醇提取物；胸主动脉环；内皮；钙通道Relaxant effect of Eucommia ulmoides Oliv On rat thoracic aorta YUE Xiao-jie, ZHANG Jiong-jiong, XU Yi-fei, YE Zhi-men, ZHANG Wei ,et al(The Second Department of Clinical Medicine, College of Medicine, Zhejiang University, Hangzhou 310031)[Abstract] Objective: To investigate the effect of Eucommia ulmoides Oliv on vascular circles and the underlying mechanisms. Methods: The study was performed with the model of isolate rat thoracic aorta rings in organ bath.The effect of accumulated of ethanol extract of the eucommia bark(EB) on aorta rings (+E,-E), pre-contracted with PE, and pre-contracted with KCl was observed. The effect of EB on aorta rings(-E) pre-contracted with PE(-E) with Ca2+ -free medium was also observed. Conclusion:With or without endothelium, communicative concentration EB has vasorelaxant effects on the thoracic aorta pre-contracted by KCL or PE. nitric oxide synthase inhibitor L-N (G)-nitroarginine methyl ester ( L-NAME), the Soluble guanylyl cyclase Inhibitor ODQ, voltage-dependent K+ channel inhibitor 4-AP, calcium-activated K+ channel inhibitor TEA, ATP-sensitive K+ channel inhibitor Glib, and cyclooxygenase inhibitor indomethacin can’t inhibit EB’s vasorelaxant effects. EB has no relaxation effect on aorta rings which are incubated with Ca2+ -free Kreb’s solution and pre-contracted with PE. Conclusion: EB can relax the rat thoracic aorta rings endothelium independent. And one mechanism is by inhibiting of intracellular calcium ions release .[Key words] :ethanol extract of the eucommia bark；The ring of thoracic aorta；endothelium；Ca2+ channel杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）是杜仲科植物，我国特有经济树种。

简易高效分离培养大鼠胸主动脉血管内皮细胞方法的建立韩松;曲彦明;李俊发【摘要】目的建立一种高效分离、培养大鼠胸主动脉血管内皮细胞的方法.方法用Wistar大鼠(200 ～ 250 g),无菌条件下开胸取胸主动脉,去除血管外膜,制备长约1.0～1.5 mm动脉环.将血管环垂直置于干燥的培养皿中,并向血管环内加入含有10％胎牛血清的DMEM/F12培养液、静止培养；24h血管环贴壁后,加入培养液；3～4d内皮细胞长出,弃血管环,并经0.25％胰蛋白酶消化传代.用形态学、免疫细胞化学及流式细胞分析等方法,鉴定血管内皮细胞标志物,vWF的表达.结果培养3～4d时有细胞自主动脉环内迁移出并贴壁生长,细胞汇合后呈现典型的“铺路石”样内皮细胞特征；免疫组化和流式细胞分析结果示,vWF表达阳性率可高达98.3％±0.2％.结论用改良的植块培养方法,不需要胶原及内皮细胞生长补充物,较传统酶消化法更为经济、高效,且简便易行,适用于细小血管内皮细胞的分离与培养.%Objective To establish a simple and efficient method for isolating and culturing vascular endothelial cells of rat thoracic aorta. Methods Under aseptic condition, the thoracic aorta was separated from Wistar rat. After stripping off the adventitia, the thoracic aorta was cut into vessel ringswith length of 1.0 ~ 1. 5 mm. The vessel rings were placed on culture dish vertically and filled with the culture medium DMEM/F12 containing 10% fetal bovine serum; After 24 h, the vessel rings had attached on the culture dish firmly and some new culture medium was added; 3 -4 d later, the thoracic aorta was discarded and the new culture medium was added into the culture dish. The migrating cells were digested by 0. 25% trypsin for serial subcultivation. The endothelial cells were identified by morphological,immunohistochemical and flow-cytometry methods with anti-vWF antibody. Results A amount of cells migrated from the aorta and adhered to the bottom of culture dish 3 ~ 4 d after cultivation. The confluent cells grew rapidly after being digested with 0. 25% trypsin and showed the typical cobblestone appearance. The cells were identified as endothelial cells, its positive ratio was ( 98. 3 ± 0. 2) % by using immunostaining and flow-cytometry with vWF. Conclusion The modified explanting cultivation method for isolating and culturing was established in this study. This method is simple, easy to handle and more economic without need of collagen and endothelial cell growth promoting substrate.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2011(031)011【总页数】5页(P1278-1282)【关键词】内皮细胞;胸主动脉;大鼠【作者】韩松;曲彦明;李俊发【作者单位】首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所,北京100069;首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所,北京100069;首都医科大学神经生物学系北京神经科学研究所,北京100069【正文语种】中文【中图分类】R339.5血管内皮细胞（vascular endothelial cells，VECs）具有多种重要的生物学功能，是研究肿瘤、心血管和炎性反应疾病的常用工具［1－3］。

杜仲皮水提取物舒张大鼠离体胸主动脉环的作用及机制作者：戴胜合作者：方晶晶，陈赟，张丽，刘金炜（浙江大学医学院02级临床医学三系0203班2组，3021831086）[摘要]目的：研究杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）对离体大鼠胸主动脉环收缩张力的作用及其机制。

方法：采用大鼠离体胸主动脉灌流模型，累积加药，检测杜仲对去氧肾上腺素（PE）和KCL 预收缩的胸主动脉环收缩张力的影响。

结果：内皮完整时，杜仲皮水提取物（0.2、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2 mg/mL）对PE（10-4mol/L）和KCL（60mmol/L）预收缩的血管环均产生舒张作用（p﹤0.01）；而用NO合酶（NOS）抑制剂L-NAME（10-4mol/L），鸟苷酸环化酶（GC）抑制剂ODQ（10µmol/L）以及环氧酶（COX）抑制剂Indo（10-5mol/L）处理血管后，杜仲皮水提取物的舒张血管效应均被阻断（L-NAME：p﹤0.05、ODQ：p﹤0.01、Indo：p﹤0.05）。

而用电压依赖性的K+ 通道阻断剂4-AP(1mmol/L)，Ca2+ 敏感性的K+ 通道阻断剂TEA(1mmol/L)以及ATP敏感性的K+ 通道阻断剂格列苯脲（Glib）(3µmol/L)处理后，对杜仲皮水提取物介导的内皮依赖性的舒血管效应阻断作用均不明显(p>0.05)。

去内皮时，杜仲皮水提取物（0.2、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2 mg/mL）对PE（10-4mol/L）预收缩的血管环舒张作用不显著（p>0.05）。

结论：杜仲皮水提取物通过NO-鸟苷酸环化酶途径和环氧合酶途径两条通路使大鼠离体胸主动脉环产生内皮依赖性的舒张效应。

[关键词] 杜仲；NO；胸主动脉环；内皮；血管舒张aqueous extracts of Eucommia ulmoides Oliv. induced endothelium dependent relaxation of rat thoracic aortaDAI Sheng ，FANG jing-jing，CHEN Yun，et alCollege of Medicine，Zhejiang University，Hangzhou 310003[Abstract]Objective：To investigate the effect of aqueous extracts of Eucommia ulmoides Oliv. on rat thoracic aorta rings and the underlying mechanisms. Methods: The study was performed with the model of isolate rat thoracic aorta rings in organ bath, we investigate the effects of accumulated aqueous extracts of Eucommia ulmoides Oliv. on the constriction of high KCL and Phenylephrine(PE) preconstricted rat thoracic aorta with or without endothelium. Results: Aqueous extracts isolated from eucommia bark (B) （0.2、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2 mg/mL）concentration dependently caused endothelium-dependent relaxation in vessels precontracted both with 10-4mol/L phenylephrine (PE) and 60mmol/L KCL, but it had no effect. on de-endothelialized vessels precontracted with PE. The endothelium-dependent relaxation evoked by B was either abolished or substantially inhibited by 10-4mol/L NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME)，10µmol/L guanyly cyclase inhibitor 1H-[1,2,4] oxadiazolo [4,3-alpha] quinoxalin-1-one (ODQ) and 10-5mol/L Indomethacin（Indo）, indicating the involvement of the nitric oxide (NO) synthase pathway in the vasorelaxant action of B. The relaxation to the aqueous extract of eucommia bark was not inhibited by 1mmol/L tetraethylammonium (TEA) 、 1mmol/L 4-aminopyridine（4-AP）and 3µmol/L Glibenclamide （Glib）. This suggests that the endothelium-dependent, NO-mediated relaxation evoked by the aqueous eucommia extracts may not involve the activation of K+ -channels. Conclusion:The results incated that aqueous extracts of Eucommia ulmoides Oliv.can relax the rat thoracic aorta rings with endothelium-dependent . The mechanism may include the activation of NO-GC pathway and COX pathway in vascular endothelium cells.[Key Words] Eucommia ulmoides Oliv. ；NO；thoracic aorta rings；endothelium；vascular relaxation- 1 -杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.；Du-zhong）是传统中药，祖国医学认为其具有补肝肾，强筋骨，安胎之功效[1] 。

一、实验目的1. 了解离体血管实验的基本原理和方法。

2. 观察和分析血管在不同理化因素作用下的变化。

3. 掌握实验数据的记录和分析方法。

二、实验原理离体血管实验是研究血管生理和病理生理的重要方法。

通过模拟体内环境，将血管取出体外，观察和分析血管在不同理化因素作用下的变化，从而揭示血管的生理和病理机制。

三、实验材料1. 动物：成年大鼠2. 实验仪器：手术显微镜、剪刀、镊子、注射器、针头、试管、离心机、CO2培养箱、显微镜等3. 实验试剂：生理盐水、肝素钠、RPMI-1640培养基、EDTA、NaOH、HCl等四、实验方法1. 取成年大鼠，处死并迅速取出心脏，将心脏放入含有生理盐水的容器中，清洗血管。

2. 使用手术显微镜和剪刀，将心脏周围的脂肪和结缔组织去除，暴露血管。

3. 使用镊子将血管从心脏上分离下来，剪成约2-3mm的血管段。

4. 将血管段放入含有肝素钠的生理盐水中，防止血管内血栓形成。

5. 将血管段放入含有RPMI-1640培养基的培养皿中，置于CO2培养箱中培养。

6. 根据实验目的，分别对血管进行以下处理：a. 调整培养基的pH值b. 调整培养基的温度c. 添加EDTAd. 添加NaOH或HCle. 添加不同浓度的药物7. 观察血管在不同处理下的变化，包括血管收缩、舒张、通透性等。

8. 使用显微镜观察血管的形态变化。

9. 收集实验数据，进行统计分析。

五、实验结果1. 调整培养基的pH值后，血管收缩程度明显增加。

2. 调整培养基的温度后，血管舒张程度明显增加。

3. 添加EDTA后，血管通透性增加，红细胞渗出。

4. 添加NaOH后，血管收缩程度增加。

5. 添加HCl后，血管舒张程度增加。

6. 添加不同浓度的药物后，血管收缩或舒张程度发生改变。

六、实验结论1. 离体血管实验可以模拟体内环境，研究血管在不同理化因素作用下的变化。

2. pH值、温度、EDTA、NaOH、HCl和药物等理化因素可以影响血管的收缩、舒张和通透性。

离体大鼠胸主动脉环实验目的：观察药物对大鼠离体胸主动脉血管环收缩活动的影响；动物：健康的SD大鼠，雄性，体重250～280克药品与试剂：20%氨基甲酸乙酯，3mo1氯化钾，10-5mo1/L维拉帕米，0.1％苯肾上腺素，1％酚妥拉明，Krebs液，95%O2+5%CO2混合气体器材：HV-4/SV-4离体组织器官恒温灌流装置，超级恒温水浴，温度计，5g张力换能器，BL-420生物信号采集系统，手术剪刀，眼科剪，眼科镊，培养皿，烧杯，100μl、1m1移液器，棉线；方法：1．BL-420生物信号采集系统参数设置：T:DC , F:10Hz ,采样率：100Hz, 扫描速度：25s/div，放大倍数200～500。

2．标本制备（1）大鼠用20%氨基甲酸乙酯按1g/kg体重腹腔注射麻醉，剪开胸腔，迅速取出心脏及胸主动脉放入盛有4℃的混合气体饱和的Krebs营养液的培养皿中，连续用混合气体充气。

分离出主动脉，将血管内的残存血液冲洗干净，小心剥去外围的结缔组织，将主动脉弓以下的胸主动脉剪成4mm长的动脉环数段备用。

（2）需要保存内皮的血管，动作应轻柔。

如需无内皮的血管环，可用棉签或牙签将血管内皮轻轻檫去。

（3）将不锈钢三角钩轻轻穿入血管环，并将另一的三角形不锈钢挂钩也轻轻穿入，通过挂钩悬挂于浴管内，下方固定于固定钩上，上方以一细钢丝挂钩连于张力换能器，通入混合气体，调节通气量至一个一个小气泡逸出为（如下图示）。

浴槽内温度应保持37±0.5℃。

图1 离体主动脉血管环孵育测量方式图示4）血管环的初始张力前15分钟调为1g，15分钟后调至2g，并以此张力平衡60分钟。

每隔15分钟换液一次。

5）用终浓度60mmol KCL收缩血管环，作用15 min诱导血管环收缩，激发舒缩活性，待收缩稳定后用预热的Krebs洗脱，反复冲洗直至张力恢复到初始值为止；重复加入同一浓度KCL，连续3次，用Krebs液反复脱洗标本观察收缩曲线波形使其张力信号回复初始值。

第15卷　第3期 医学研究生学报 V ol.15　N o.3　2002年6月 Journal of Medical P ostgraduates Jun.2002・论 著・介绍一种离体血管环的实验装置和方法刘　沙,　萧明第,　薛　松,　卢成宝(上海市第一人民医院心血管外科,上海200080)摘要:　目的:介绍一种离体血管环的实验装置和方法。

　方法:通过心桥软件将血管环的等长张力和内壁周长数据绘成长度2张力曲线,据此将血管环拉伸至最适长度后进行实验。

　结果:本实验装置和方法稳定、可靠、准确、灵敏。

　结论:这套装置能够更准确地反映血管的特点,可用于各种血管环实验。

关键词:　血管环;　张力测量;　长度2张力曲线中图分类号:　R443.8 文献标识码:　A 文章编号:　100828199(2002)0320199203ΞAn apparatus and method for the experiment of vessel ring ex vivoLI U Sha,XI AO Ming2di,X UE S ong,LU Cheng2bao(Department o f Cardiovascular Surgery,Shanghai Fir st People’s Hospital,Shanghai200080,China)Abstract:　Objectives:An apparatus and method for the experiment of vessel ring ex vivo was discussed.　Methods:Individual length2tension curves for each vessel ring were established via coropass s oftware by relat2 ing the is ometric tension with the corresponding internal circum ferential length.The vessel ring was investigat2 ed after being set at an optional point according to its own length2tension curve.　Results:The apparatus and method was stable,exact and sensitive.　Conclusions:The apparatus and method reflected the properties of vessels m ore accurately and therefore was suitable for the experiment of all types of vessel rings.K ey w ords:　Vessel ring;　T ension measurement;　Length2tension curve 我们参照国外资料[1,2]研制了一套离体血管环的实验装置,现简介如下。