死时间(dead time，t0)--不保留组分的保留时间。
即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。
在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间。
死体积(dead volume，V0)--由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。
它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。
其中只有Vm参与色谱平衡过程，其它3部分只起峰扩展作用。
为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。
V0＝F×t0（F为流速）
梯度方法的建立：
)1(N a 1-a 41Rs --
+=k
k ）（ )15.1/(∆Φ=-m G V F t k Rs ：分离度，表示两峰分离程度的物理量。
k ：容量因子，表示某溶质在固定相和流动相中物质的量的比，在等度洗脱中。
一种物质的k 值是恒定不变的。
上面两试针对的是梯度洗脱，k 表示的平均容量因子。
a ：分离因子，两个溶质的容量因子的比。
通常k 大的作为分子。
表示两物质分离能力的大小。
N ：理论塔板数，表示柱子的分离能力，也就是柱效。
G t ：梯度时间；F ：流速；m V ：死体积；∆Φ：梯度变化围。
常见问题和维护：
整个液相系统最值得关注的常数：压力
除体系受到污染之外，几乎所有柱前的问题都能在压力变化上表现出来。
压力来源：泵上的压力传感器
最常见的问题：
压力小（几乎为零）：说明没有流动相流过柱子。
可能原因：
柱前漏夜
流速设为0了
流动相干了
吸滤头没有放流动相液面之下
流路中有大段气泡
处理方法：
漏液：从泵的出口到柱子的前端接口（柱后漏液几乎不会影响压力值）顺次检查。
泵上有自己的漏液传感器。
检测到漏液。
会停止工作并蜂鸣，变红。
同时显示错误信息：ERROR ：LEAK DETECTED 。
发现漏液点，先停泵，重新接好。
将漏液擦干。
有的漏液不明显，这时压力的也不会太小，检查时要注意，可用手仔细摸各个接口，感觉是否湿冷。
流路中有大段气泡：
通过大流速（如5ml/min ）冲洗可以去除泵体气泡。
也就是常说的PURGE 。
按
下泵的面板上的purge键即可。
每次PURGE的时间和流速可以在面板上设定。
通常不改。
初始值应该是5ml/min，3min。
但有时候泵体空气太多，purge都不可以，或者很难抽上流动相，这是可以在purge 的同时，用注射器，在泵的废液出口处抽。
直到没有气泡。
关于偶尔出现的气泡，不用太过在意，因为：
1.有脱气机在。
2.在purge时，由于流速太大，难免会出现气泡。
尤其是在purge阀开超过180
度，废液出口处出现气泡就跟平常了。
3.只要气泡不在泵腔堆积，就几乎不会影响到分析结果。
只要出了泵口，在高
压下会
被压缩的很小。
不影响流路的延续性。
所以，只要观察压力变化，如果压力没有异常波动，就行。
在泵体有气泡堆积时，压力波动会变大。
什么样的波动算正常，需要大家注意观察。
根究经验，在以恒定流速，梯度不变时，面板上以MP为单位的显示值应该几乎不变。
频繁出现的气泡会影响到流路的延续性，应该注意。
吸滤头堵，管路脏（通常是水相）有可能带来频繁出现的气泡。
可以先A，B的溶剂瓶调换一下。
PURGE 三五次。
后换回来，再PURGE两次。
清洗一下管路。
压力过大：说明流路堵了
逐段排查，先从柱（预柱）前接口（因为柱子最易堵）断开，以一定流速走：压力正常，说明是柱子及其后的某一段堵了（通常是柱子）。
换柱子（或预柱）。
压力还高：说明是柱前某段堵了。
这时再将进样器出口（接柱子）的peek管接头拧下：
压力正常：说明是这段peek管堵了。
换peek管。
压力还高：说明是进样器之前的部分堵了。
通常是进样器六通阀堵了。
反冲或清洗流通阀。
其它部分依次类推。
压力波动大：说明流路中的液流不平稳，这时色谱图通常保留时间不稳定，峰型也不好。
得到的线性，重复性也不会好。
可能原因：泵体有气泡，泵头单向阀坏。
先确认是哪一台泵有问题。
先走100%A相。
看是否压力还是波动大，还大则说明A泵有问题。
压力正常则说明A泵正常。
再走100%的B相，过程如上。
确认好泵之后，先purge一下，以驱赶气泡。
Purge两次后，还是压力波动大，这有可能单向阀坏了，需要清洗或更换。
Ctc自动进样器的常用维护操作（实验室现场操作）：
换针：
调针位：
调针位：
设定洗针体积：
一些小概念：
PEEK：聚醚醚酮
色谱管道，外径多为1/16inch，1inch=2.54cm，1/16in=2.54cm，径大小以颜色标准，红色（我们用的）最小，为0.13mm（应该是国际统一标准）
PEEK接头手紧即可
不锈钢接头要用工具紧
接头分一体的和分为主体和压紧环两部分的。
后者在拧紧的过程中，不易带动管道扭曲变形。
不锈钢的压紧环是一次性的
单位换算：
1MPa=10bar=7500.6torr=14.5psi
Psi：pound per square inch (psi)
Torr：托里彻利，标准大气压的1/760。
也就是mmHg（毫米汞柱）
其它问题：
残留大：
很可能是洗针过程有问题，注意观洗针时有没有抽上液体，抽上来的液体是否有很多气泡。
出现过由于转子磨损，洗针液不能顺畅流出进样口。
造成洗针不充分。
清洗或更换转子。
也可能进样过程有问题，注意观察进样针活塞是否推到底。
可能由于流通阀堵塞，造成压力大，进样针没法推到底。
重现性不好：
标波动大，可能喷雾针脏了，使得喷雾不均匀。
可能是液相方法没有开发好。
峰型差，峰太宽都有可能造成面积不重复（不会差别太大）。
注意观察重现性不好的那几针，是否峰型比较特殊，保留时间也有较大变化，如果是，很有可能是由于pump里进了气泡，造成流速不稳，这点可以从压力变化得到确认，但是好像没法记录压力曲线。
质谱检测器的色谱图：chromatogram ，强度和时间的图。
等同于紫外检测的色谱图。
质谱检测器的光谱图：spectrum ，某一时间点（段时间平均）的强度相对质荷比的图
下图上半为一色谱图，下半部为图是灰色方块（2.5min 左右），平均强度相对质荷比的光谱图。
类似于紫外中的全波长图。
分辨率：unit 分辨率定义为半峰宽为0.7。
其意义如下：
2/1W =2
2ln W W=1.702/1W
2/1W =0.7则W=0.7*1.70=1.19
差不多刚好实现单位质荷比的分离
线性围：
信号强度与样品浓度的关系可用如下关系式表示：R=ARCX。
R为信号强度大小，AR为响应因子。
C为样品浓度，X为指数。
X=1，表示在线性围之，考虑到实验误差等因素。
一般只要X在0.98-1.92之间，就认为还在线性围之。
线性围是一个浓度围，下限比较难测。
通常就以最小检测量或最小检测浓度作为线性围的下限。
检测器的线性围。
