在自然界里，食用菌都不是单独存在的，而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在一起的。所谓菌种分离，就是把这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养，获得纯的优良菌种。菌种分母种、原种、栽培种。
(一）母种的分离培养
食用菌母种的分离，可分为孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等。
1.孢子分离法
孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。这种菌种生活力较强，但孢子个体之间有差异，且自然分化现象较严重，变异大，需经出菇试验才能在生产上应用。
（l）单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子， 让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝，有结实能力，可采用此法分离生产纯菌种。单孢分离生产上较少采用，而且技术复杂，一般采用多孢分离法。
（2）多孢分离法：就是把许多孢子接种在同一培养基上，让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法。具体操作方法，有以下几种：
① 种菇孢子弹射法：选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、出菇均匀、高产稳产，适应性强的八九分成熟的种菇，切去大部分，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的 纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分。在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿上面；上端小孔用棉花塞住。培养皿放 在一个铺有纱布的搪瓷盘上，静置12～20小时，菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。形成一层粉末状孢子印（平菇极淡紫色，蘑菇、草菇 为褐色，香菇、金针菇孢子印白色）。用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发早、长势好的菌落进 行试管培养。
还可用孢子采集器收集孢子。方法是选好种菇后，按上述程序，轻轻掀开玻璃钟罩，将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上，放在培养皿正中央。随即盖好玻璃罩，用纱布将钟掌周围塞好。并在纱布上倒少许升汞或无菌水。移入 20℃左右恒温箱培养。
第1章 微生物培养技术 第1节 微
生物的分离和纯培养学业达标测评
一、选择题
1．在光亮处用一种培养液分别培养绿藻和酵母菌，其结果如图所
示，造成这种结果的原因是培养液中( )
A．缺少无机盐
B．含氧量太高
C．缺少有机养分
D．不含二氧化碳
【解析】 绿藻(自养)增多，酵母菌(异养)数量减少，说明培养基
中缺少有机碳源。
【答案】 C
2．下表是某同学培养微生物时配制的培养基，关于此培养基的说
法中，错误的是( )编号①②③④⑤
成分(NH4)2SO4KH2PO4FeSO4CaCl2H2O
含量0.4 g4.0 g0.5 g0.5 g100 mL
A.此培养基可用来培养自养型微生物
B．此表中的营养成分共有三类，即水、无机盐、氮源
C．表中各成分的重量按照所培养的微生物的营养需要来确定
D．若除去①，此培养基可用于培养大肠杆菌
【解析】 由表格可知，该培养基不含有机物，且无碳源，因此可
培养自养型微生物，大肠杆菌为异养型，除去①之后，培养基中缺少碳
源和氮源，大肠杆菌无法生长。
【答案】 D
3．如何判断制作的培养基是否灭菌彻底( )
A．看培养基是否透明
B．有没有消灭细菌菌体
C．未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天后有无菌落生长
D．是否消灭了微生物的芽孢、孢子
【解析】 配制好的培养基，是否灭菌彻底，通常在使用前在恒温
箱中保温1～2天后检验有无菌落生长，若无则说明灭菌彻底。
【答案】 C
4．无菌技术包括以下几个方面的叙述，其中错误的是( )
A．对实验操作的空间、操作者的衣物和手进行灭菌
B．将用于微生物的培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌
C．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附
近进行
D．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触
【解析】 对实验操作的空间、操作者的衣物和手进行清洁是消毒
而不是灭菌。
【答案】 A5．培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所
采用的灭菌、消毒方法依次是( )
①化学消毒 ②灼烧灭菌 ③干热灭菌 ④紫外线灭菌 ⑤高压蒸
菌种的扩大培养、污染的检测与判别
种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。
微生物工业自从采用纯种发酵以来，产率有了很大的提高，然而防止杂菌污染的要求也更高了。人们在与杂菌污染的斗争中，积累总结出很多宝贵的经验。规范了管理措施，设计了一系列设备(例如密闭式发酵罐，培养基灭菌设备，无菌空气制备设备等)和管道，应用了无菌室甚至无菌车间，建立了无菌操作技术，因而大大降低了发酵染菌率。但是某些发酵工业还遭受着染菌的威胁，染菌后轻者影响产率、产物提取收得率和产品质量，重者造成“倒罐” ，不但浪费大量原材料，造成严重的经济损失，还会对周围环境造成破坏。凡是在发酵液或发酵容器中侵入了非接种的微生物统称为杂菌污染，及早发现杂菌并采取相应措施，对减少由杂菌污染造成的损失至关重要。
因此检查的方法要求准确、快速。发酵污染可发生在各个时期。种子培养期染菌的危害最大，因严格防止。一旦发现种子染菌，均应灭菌后弃去，并对种子罐及其管道进行彻底灭菌。发酵前期养分丰富，容易染菌，此时养分消耗不多，应将发酵液补足必要养分后迅速灭菌，并重新接种发酵。发酵中期染菌不但严重干扰生产菌株的代谢，而且会影响产物的生成，甚至使已形成的产物分解。
由于发酵中期养分已被大量消耗，代谢产物的生成又不是很多，挽救处理比较困难，可考虑加入适量的抗生素或杀菌剂。如果是发酵后期染菌，此时产物积累已较多，糖等养分已接近耗尽，若染菌不严重，可继续进行发酵;若污染严重，可提钱放罐。染菌程度越重，危害越大;染菌少，对发酵的影响就小。所以，实际生产中，应当根据污染程度和发酵时期区别对待。
器材与试剂
1.器材高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、带摇床的培养箱、显微镜、天平、三角瓶、试管、移液管、培养皿、 接种针、平板涂布器、酒精灯、载玻片
专题2 微生物培养与应用 专题复习表解
高考要求
实 验 要 求
（1）微生物的分离和培养
（2）某种微生物数量的测定
（3）培养基对微生物的选择作用
（4)利用微生物发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用 掌握程度参考本考试大纲中的：
一、考核目标与要求
2．实验与探究能力
知识整合
一、培养基
1.定义：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质――培养基。
2. 培养基的类型及其应用：
标准 培养基类型 配制特点 主要应用
物理性质 固体培养基 加入琼脂较多 菌种分离,鉴定,计数
半固体培养基 加入琼脂较少 菌种保存
液体培养基 不加入琼脂 工业生产，连续培养
化学组成 合成培养基 由已知成分配制而成，培养基成分明确 菌种分类、鉴定
天然培养基 由天然成分配制而成，培养基成分不明确 工业生，产降低成本
目的用途 鉴别培养基 添加某种指示剂或化学药剂 菌种的鉴别
选择培养基 添加（或缺少）某种化学成分 菌种的分离
3.微生物培养基中的营养
水 无机盐 碳源 氮源 生长因子
概
念 供给微生物碳素营养的物质 能被微生物吸收利用的含氮物质 某些微生物生长所必需的少量物质
来
源 磷酸盐、硫酸盐、钾、钠、钙、镁、铁等盐类 无机碳:CO2、NaHCO3等
有机碳源：糖类（最常）、脂肪酸、花生粉饼、石油等 无机氮源：N2、氨、铵盐、硝酸盐等
有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、玉米浆、豆饼粉等 维生素、氨基酸、碱基、牛肉膏、酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液（肝脏浸出液、麦芽汁）
作
用 微生物细胞的组成成分，溶解物质，生物化学反应的介质 为微生物生长繁殖及其一系列生命活动提供不可缺少的要用于合成微生物的细胞物质和一些代谢产物;异养微生主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物。 一般是酶和核酸的组成成分。
