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生活饮用水微生物检验方法和评价标准探讨
作者：张颖
来源：《科学与财富》2011年第10期
[摘 要] 我国政府一向十分关心和重视饮用水卫生工作,多次发布和修改饮用水卫生标准。水参与人体内新陈代谢的全过程，水在人体中的功能是维持细胞形态，增加代谢功能,调节血液和细胞组织液的正常循环，溶解营养素,使之易于吸收和运输,帮助排泄体内废物，散放热量,调节体温,并使血液保持酸碱平衡。构成人体的物质中有70%是水;正常人可以7天不进食，但不能一天无水，由此可见，饮用水对人是多么的重要。本文分析了生活饮用水微生物的检验方法。
[关键词] 生活饮用水 微生物检验 方法 评价标准 总大肠菌群
1、生活饮用水的微生物指标
生活饮用水已经过沉淀、过滤、加氯消毒等处理，含微生物很少，但当其水源水不洁或处理达不到要求时，仍然会含相当量的微生物甚至含有致病性微生物。供水管道破损及二次供水等环节也可能导致生活饮用水的污染。因此生活饮用水的微生物安全性日常检测是很重要的。我国生活饮用水水质标准(GB／T5750_2006)中规定生活饮用水中细菌总数不得大于100个/ml，总大肠菌群不得检出。
2、总大肠菌群的检验方法
2.1多管发酵法
多管发酵法适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定。总大肠菌群指一群在37℃培养24小时能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。多管发酵法需要培养基与试剂，有乳糖蛋白胨培养液、二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液、伊红美蓝培养基、革兰氏染色液。
2.1.1多管发酵法需要的仪器
多管发酵法需要培养箱、冰箱、天平、显微镜、平皿、试管、分度吸管、锥形瓶、小倒管、载玻片。
2.1.3检验步骤
这里叙述乳糖发酵试验检验步骤。 龙源期刊网
生活饮用水标准检验方法
在各种水体，特别是污染水体中存在有大量的有机物质，适于各种微生物的生长，因此水体是仅次于土壤的第二种微生物天然培养基。水体中的微生物主要来源于土壤，以及人类的动物的排泄物及污染。水体中微生物的数量和种类受各种环境条件的制约。
一般认为，水中微生物以革兰氏阴性杆菌占有较大优势。与其他水体相比，河水及溪水中革兰氏阳性菌相对较多，这是因为陆地微生物冲洗污染的缘故。
《中华人民共和国国家标准 生活饮用水标准检验法》提供了水质中细菌总数和总大肠菌群的检测方法。
1、国家标准中，细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。
对生活饮用水，直接吸取1ml水样于平皿中，加入营养琼脂后混匀，37℃培养24h，进行计数。
对水源水，根据情况对样品进行10倍梯度稀释，选择适宜稀释液1ml，加注平皿，营养琼脂混匀，37℃培养24h，进行计数。
按照规定格式报告每毫升水中细菌总数。
2、国家标准中，利用总大肠菌群作为粪便污染的指标。总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。水样中总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。
国家标准物质提供了多管发酵法及滤膜法检测总大肠菌群的方法。
3、多管发酵法检测总大肠菌群，分为三步：初发酵试验，平板分离，复发酵证实试验。
初发酵试验，采用乳糖蛋白胨培养液37℃培养24h，观察产酸产气情况。对阳性管培养物，接种于品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基，观察菌落特征，并进行革兰氏染色和镜检。对典型和可疑菌落，接种于乳糖蛋白胨培养液，进行复发酵证实试验，并根据标准所附检数表报告结果。
其中，对生活饮用水，初发酵试验接种水样总量300ml，即100ml接种2管，10ml接种10管，采用两个稀释度，12支发酵管。对水源水，初发酵试验接种水样总量55.5ml，即10ml接种5管，1ml接种5管，0.1ml接种10管，共采用三个稀释度，15支发酵管。两种接种方法，所用的检数表是不同的。
生活饮用水标准检验方法
微生物指标
1 菌落总数
1.1平皿计数法
1.1.1范围
本标准规定了用平皿计数法测定生活饮用水及其水源水中的菌落总数。
本法适用于生活饮用水及其水源水中菌落总数的测定
1.1.2术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
1.1.2.1
菌落总数 standard plate-count bacteria
水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数
1.1.3 培养基与试剂
1.1.3.1 营养琼脂
1.1.3.1.1 成分：
A 蛋白胨 10g
B 牛肉膏 3 g
C 氯化钠 5g
D 琼脂 10g~20g
E 蒸馏水 1000mL
1.1.3.1.2 制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中（如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经103.43kPa（121℃，151b）灭菌20min，储存于冷暗处备用。
1.1.4 仪器
1.1.4.1 高压蒸汽灭菌器。
1.1.4.2 千热灭菌箱。
1.1.4.3 培养箱36℃±1℃。
1.1.4.4 电炉。
1.1.4.5 天平。
1.1.4.6 冰箱。
1.1.4.7 放大镜或菌落计数器。
1.1.4.8 pH计或精密pH试纸。
1.1.4.9 灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等。
1.1.5 检验步骤
1.5.1 生活饮用水。
1.1.5.1.1 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。 1.1.5.1.2 待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36℃?℃培养箱内培养48h，进行菌落计数，即为水样1mL中的菌落总数。
生活饮用水标准检测方法汇总
参考：GB5749-2006《生活饮用水卫生标准》; GB5750-2006《生活饮用水标准检测方法》
表1 水质常规指标及限值
序号 项目 分析方法 依据标准 PDF页码 检测途径
微生物指标
1 总大肠菌群 滤膜法 GB/T5750.12-2006(2.2) 447 实验室
2 耐热大肠菌群 滤膜法 GB/T5750.12-2006(3.2) 452 实验室
3 大肠埃希氏菌 滤膜法 GB/T5750.12-2006(4.2) 455 实验室
4 菌落总数 平皿计数法 GB/T5750.12-2006(1) 439 实验室
毒理指标
5 砷 氢化物原子荧光法 GB/T5750.6-2006(6) 131 实验室
6 镉 无火焰原子吸收分光光度法 GB/T5750.6-2006(9) 149 实验室
7 铬（六价） 二苯碳酰二肼分光光度法 GB/T5750.6-2006(10) 154 实验室
8 铅 无火焰原子吸收分光光度法 GB/T5750.6-2006(10) 155 实验室
9 汞 原子荧光法 GB/T5750.6-2006(8) 144 实验室
10 硒 氢化物原子荧光法 GB/T5750.6-2006(7) 137 实验室
11 氰化物 异烟酸-吡唑酮分光光度法 GB/T5750.5-2006(4) 68 实验室
12 氟化物 离子色谱法 GB/T5750.5-2006(3) 61 实验室
13 硝酸盐 紫外分光光度法 GB/T5750.5-2006(5.2) 73 实验室
14 三氯甲烷 填充柱气相色谱法 GB/T5750.10-2006(1) 383 实验室
15 四氯化碳 填充柱气相色谱法 GB/T5750.8-2006(1) 214 实验室
16 溴酸盐 离子色谱法 GB/T5750.10-2006(14) 409 实验室
17 甲醛 分光光度法 GB/T5750.10-2006(6) 386 实验室
