HPLC法测定桔梗不同部位_不同产地药材中桔梗皂苷D含量

HPLC 法对杏桔合剂中桔梗皂苷 D 的含量测定研究芮海波;赵学龙;王文晓;张国花【摘要】目的：建立杏桔合剂中桔梗皂苷 D 的含量测定方法，为杏桔合剂的质量控制提供量化参考。

方法：采用 HPLC 方法测定桔梗皂苷 D 的含量。

结果：桔梗皂苷D 在0．5～8μg 范围内线性关系良好，回归方程：y ＝238632x ＋10382，r ＝0．9997，加样回收率93．64％，RSD ＝1．54％。

结论：应用 HPLC 测定杏桔合剂中桔梗皂苷 D 含量的方法可行，可以作为其质量控制的参考依据。

%Objective:To establish content determination method of platycodinD in apricot orange mixture so as to provide quanti-tative information for quality control of apricot orange mixture.Methods:HPLC was used to determine contents of platycodin D.Re-sults:Platycodin D in the range 0.5~8ug had good linear relationship,and the regression equation was:y=238632x +1 0382, r =0.9997,recovery was 93.64%,RSD=1 .54%.Conclusion:The method of HPLC to determine Platycodin D in apricot orange mixture is feasible,and it can be used as a reference for its quality control.【期刊名称】《世界中医药》【年(卷),期】2015(000)006【总页数】4页(P910-912,916)【关键词】杏桔合剂;桔梗皂苷D;含量;HPLC【作者】芮海波;赵学龙;王文晓;张国花【作者单位】南京市中医院药剂科，南京，210001;南京市中医院药剂科，南京，210001;南京中医药大学，南京，210014;南京中医药大学，南京，210014【正文语种】中文【中图分类】R284.1;R-331杏桔合剂为江苏省南京市中医院较早大量生产的浓缩剂之一,并收载于“南京市医院制剂规范”中。

HPLC法测定桔梗药材中桔梗皂苷D的含量洪玮;罗娟敏;郭磊;樊海燕;索卫国;黄卫东;蔡继宝【期刊名称】《江西中医药》【年(卷),期】2014(045)002【摘要】目的:建立HPLC法测定不同产地桔梗药材中桔梗皂苷D的含量.方法:HPLC分析采用Phenomenex Luna C18色谱柱,以0.1％磷酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速0.5mL/min,检测波长210nm.结果:桔梗皂苷D分离良好,质量浓度与峰面积在测定范围内线性关系良好(r＞0.999),重现性好,平均加样回收率为100.09％,13批不同产地桔梗药材中桔梗皂苷D占药材量的平均含量为0.2101％.结论:本研究所建立的HPLC方法稳定可靠,简便易行,可用于桔梗中桔梗皂苷D的定量,为桔梗的质量评价和质量控制奠定了基础.【总页数】3页(P59-61)【作者】洪玮;罗娟敏;郭磊;樊海燕;索卫国;黄卫东;蔡继宝【作者单位】江西中烟工业有限责任公司技术研发中心南昌330096;江西中烟工业有限责任公司技术研发中心南昌330096;江西中烟工业有限责任公司技术研发中心南昌330096;江西中烟工业有限责任公司技术研发中心南昌330096;江西中烟工业有限责任公司技术研发中心南昌330096;江西中烟工业有限责任公司技术研发中心南昌330096;江西中烟工业有限责任公司技术研发中心南昌330096【正文语种】中文【中图分类】R927.2【相关文献】1.HPLC法测定不同采收期及不同桔梗中桔梗皂苷D含量2.用HPLC法测定桔梗流浸膏中桔梗皂苷D含量的效果分析3.HPLC-ELSD法测定桔梗中桔梗皂苷D的含量4.RP-HPLC法测定桔梗中桔梗皂苷D的含量5.HPLC法测定桔梗不同部位、不同产地药材中桔梗皂苷D含量因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

高效液相色谱法检测桔梗中的皂苷D张娜;程满环;杨芬;王婉莹【摘要】建立了桔梗中皂苷D的HPLC快速测定方法.以甲醇为提取剂,超声波处理法提取皂苷D,以乙腈—水(体积比25∶75)为流动相,以C18为色谱柱,保留时间定性,峰面积定量.在该实验条件下皂苷D质量浓度在4.62～85.20 μg/mL范围内呈线性相关,R2=0.999 6,回归方程y=2.871 7x+0.343 2,检出限为2.31 μg/mL,样品的加标回收率为92.86％～95.12％,RSD为1.2％.该法样品处理简单、快速,检测灵敏度高,重现性好,适合测定桔梗中皂苷D的质量分数.【期刊名称】《淮海工学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(024)003【总页数】4页(P47-50)【关键词】桔梗;皂苷D;高效液相色谱【作者】张娜;程满环;杨芬;王婉莹【作者单位】黄山学院化学化工学院,安徽黄山 245041;黄山学院分析测试中心,安徽黄山 245041;黄山学院化学化工学院,安徽黄山 245041;黄山学院化学化工学院,安徽黄山 245041【正文语种】中文【中图分类】R2840 引言桔梗为桔梗科桔梗属植物桔梗（Platycodon grandiflorum）的干燥根，是我国传统的中药材.现代药理学研究表明，桔梗具有镇咳、降低胆固醇［1］、抗菌及抗癌［2－3］等作用.其主要化学成分有皂苷类、多糖类等［4］.近几年来，从桔梗中又先后获得10余种新化合物［5－8］.桔梗的主要活性成分为桔梗皂苷，其中桔梗皂苷D一直被作为桔梗质量控制的指标性化合物［9］.皂苷的提取方法主要有回流提取法、水提醇沉法、超声波提取法等，通常依靠盐沉淀分离、吸附分离、色谱分离以及膜分离技术进行纯化［10］.其定量分析方法有比色法、UV－Vis法、HPLC法等.本实验利用超声波法提取桔梗皂苷，湿法过柱对桔梗皂苷提取液进行纯化，HPLC 法对其进行定量检测分析.其中超声波的空化作用可以加速植物有效成分的浸出，缩短提取时间，提高产品产率［11］.桔梗中皂苷类成分种类多、含量少，其提取物中还含有大量的多糖类化合物，故其提取液还需用内径2 cm的硅胶柱进行纯化.而HPLC法具有分离效率高、检测灵敏度高等优点，因而大多数皂苷类检测通常采用此法.作为大宗药材品种，桔梗形似人参，药食两用，素有“南方人参”的美誉.桔梗产地较多，不同产地药材的质量品质不同.本文对其中桔梗皂苷D的提取及定性、定量方法进行探讨，以期为桔梗的研究与质量控制提供参考.1 实验部分1.1 实验仪器与试剂Agilent 1260型高效液相色谱仪（安捷伦），AUY220电子分析天平（岛津），JK－2200DVE超声波清洗仪（合肥金尼克）.对照品溶液：将桔梗皂苷D标准品（分析纯，北京裕策达科贸有限责任公司）配制成质量浓度为0.426 0mg／mL的甲醇溶液.供试品溶液［12］：取桔梗药材粉末4.000 0g，精密称定，加入体积分数为50%的甲醇50mL，超声处理30min，放冷，过滤，滤液置水浴上蒸干.残渣加水20mL，微热使其溶解，加入水饱和的正丁醇，振摇并提取3次，20mL／次，合并正丁醇液，用氨试液50mL洗涤，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水50 mL洗涤，弃去水溶液，将正丁醇溶液蒸干.残渣加甲醇3mL使溶解，加硅胶1.0g搅拌均匀，置水浴上蒸干，加于硅胶柱上［100～120目，20g，内径为2 cm，用三氯甲烷—甲醇（体积比9∶1）混合溶液湿法装柱］，以三氯甲烷—甲醇（体积比9∶1）混合溶液50mL洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷—甲醇—水（体积比60∶20∶3）混合溶液100mL洗脱，弃去洗脱液，继续用三氯甲烷—甲醇—水（体积比60∶29∶6）混合溶液100mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，过0.45μm的微孔滤膜备用.桔梗饮片（亳州沪谯药业有限公司），使用前于烘箱70℃干燥处理后打碎，使之呈细粉状，备用.甲醇、正丁醇、三氯甲烷（均为色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）；其余试剂为市售分析纯，实验用水为超纯水.1.2 色谱检测条件色谱柱为 Agilent Eclipse XDB－C18，5μm，4.6 mm×250mm；流动相为乙腈—水（体积比25∶75），流速1.0mL／min；柱温为室温；紫外检测器，检测波长210nm；进样量20μL.1.3 定性与定量分析分别取供试品溶液和对照品溶液进行液相分析，比较其在规定检测波长下色谱峰的保留时间，进行定性.标准曲线的绘制：将对照品溶液分别稀释5，10，25，100倍，标点质量浓度分别为85.20，42.60，17.04，4.26μg／mL.分别取上述稀释后的对照品溶液20μL 进样，测量保留时间和峰面积，用峰面积对皂苷D的质量浓度作图，绘制标准曲线.样品中皂苷D的质量分数测定：取20μL供试品溶液进样，根据保留时间定性，峰面积代入标准曲线定量.2 结果与讨论2.1 流动相的选择采用流动相乙腈与水的体积比分别为20∶80，25∶75进行试验［12］，考察流动相比例对样品分离效果的影响.试验结果表明，当乙腈与水的体积比为20∶80时，流动相对样品分离效果虽好，但干扰峰的峰面积较大；当乙腈与水的体积比为25∶75时，不仅分离效果好，而且干扰峰的面积也有所减小.故选择乙腈与水的体积比为25∶75作为流动相.2.2 定性分析分别取供试品溶液和对照品溶液进行液相分析，对照品溶液与供试品溶液的色谱图如图1和图2所示.由图1可以看出，桔梗皂苷D对照品溶液在14.23min时出现一色谱峰，即桔梗皂苷D的保留时间为14.23min.由图2可以看出，供试品溶液在14.24min时出现一色谱峰，表明供试品溶液中含有桔梗皂苷D.图1 对照品溶液色谱图Fig.1 HPLC chromatogram of standard solution图2 供试品溶液色谱图Fig.2 HPLC chromatogram of sample solution2.3 定量分析2.3.1 标准曲线的绘制将不同质量浓度的皂苷D对照品溶液进样，测其峰面积，以峰面积对质量浓度作图，绘制标准曲线，结果如图3所示.求得回归方程为y＝2.871 7x＋0.343 2，线性相关系数R2为0.999 6.图3 皂苷D的标准曲线图Fig.3 Standard curve for determination of platycodin D结果表明，皂苷D质量浓度在4.26～85.20 μg／mL范围具有良好的线性关系.2.3.2 样品的测定在试验的最佳条件下测定供试品溶液的峰面积，得样品峰面积分别为215.2，215.8，213.2，均值为214.7.计算得样品所对应的供试品溶液中皂苷D质量浓度为74.64μg／mL.2.3.3 检测结果的换算根据桔梗取样质量及样品处理过程中定容的体积，计算出桔梗样品中皂苷D的质量分数.计算公式为式中：X为样品中皂苷D的质量分数（mg／kg），C为样品测定液中查标准曲线得到的相当于标准的质量浓度（μg／mL），V 为样品定容体积（mL），m 为桔梗的取样量（g）.经计算得桔梗中皂苷D的质量分数为93.3mg／kg.2.4 精密度试验精密吸取“1.1”项下对照品溶液各20μL，连续进样6次，测其峰面积，计算RSD.得试验的相对标准偏差为0.15%，说明本方法精密度较好.2.5 稳定性试验精密吸取“1.1”项下供试品溶液20μL，于2，4，6，8，12，24h后测定，记录峰面积，计算 RSD.得试验的相对标准偏差为0.935%，表明本方法稳定性较好. 2.6 重复性试验精密称取6份桔梗粉末各4.000 0g，按“1.1”项下制备供试品溶液并稀释10倍，按“1.2”项下进样，测定，记录峰面积，计算RSD.得试验的相对标准偏差为2.12%，表明本试验方法重复性较好.2.7 加标回收率试验将已测定的样品精密称取3份，每份4.000 0 g，按“1.1”项下制备原供试品溶液，各取0.50mL，各精密加入适量的对照品溶液0.50mL，制成加标后的供试品溶液，按“1.2”项下进样，测定，记录峰面积，结果如表1所示.表1 加标回收率试验结果（n＝3）Table 1 Results of recovery tests（n＝3）样品编号本底值／（μg／mL）加入值／（μg／mL）测得值／（μg／mL）回收率／%平均回收率／%RSD／%1 37.32 10.65 47.45 95.12 2 37.32 21.30 57.10 92.86 94.18 1.20 3 37.32 42.60 77.60 94.55由以上结果可以看出，回收率为92.86%～95.12%，RSD为1.20%，说明本方法测定皂苷D的质量分数具有较高的准确度.3 结论（1）桔梗中皂苷D在高效液相色谱法下分离效率高，检测灵敏度好；本实验测得桔梗中皂苷D的质量分数为93.3mg／kg.（2）通过对桔梗中皂苷D稳定性的探讨，可以看出桔梗皂苷D在24h内基本无变化，说明其稳定性良好.（3）准确度试验和精密度试验结果均良好，表明本文对皂苷D的测量结果准确、稳定、可靠、简捷.建立了一种测定桔梗中皂苷D的液相色谱方法，可作为实验室测定桔梗皂苷D的方法.【相关文献】［1］杨壮.桔梗总皂苷的提取和纯化工艺研究［D］.杭州：浙江大学，2007.［2］舒娈，高山林.桔梗研究进展［J］.中国野生植物资源，2012，20（2）：4－6.［3］ CHOI C Y，KIM J Y，KIM Y S，et al.Augmentation of macrophage functions by an aqueous extract isolated from Platycodon grandiflorum ［J］.Cancer Leters，2001，166（1）：17－25.［4］周秀娟.桔梗的质量研究［D］.合肥：安徽中医药大学，2013.［5］ FU Wenwei，SHIMIZU N，DOU Deqiang，et al.Five new triterpenoid saponins from the roots of Platycodon grandiflorum［J］.Chemical and Pharmaceutical Bulletin，2006，54（4）：557－560.［6］付文卫，候文彬，窦德强.桔梗中远志酸型皂苷的化学研究［J］.药学学报，2006，41（4）：358－360.［7］ FU Wenwei，DOU Deqiang，SHIMIZU N，et al.Studies on the chemical constituents from the roots of Platycodon grandiflorum［J］.Journal of Natural Medicines，2006，60（1）：68－72.［8］ HE Zhendan，QIAO Chunfeng，HAN Quanbin，et al.New triterpenoid saponins from the roots of Platycodon grandiflorum［J］.Tetrahedron，2005，61（8）：2211－2215.［9］李伟.桔梗皂苷类化学成分及药理活性研究［D］.长春：吉林农业大学，2007.［10］贺红军.茅莓总皂苷提取及纯化工艺研究［D］.重庆：重庆医科大学，2011.［11］纵伟，李翠翠，赵光远，等.桔梗皂苷超声提取工艺优化研究［J］.江苏农业科学，2012，40（6）：244－247.［12］李喜凤，刘素梅，李振国.RP－HPLC法测定桔梗中桔梗皂苷D的含量［J］.中华中医药学刊，2008，26（2）：283－284.。

不同产地桔梗皂苷成分HPLC指纹图谱比较研究曾金祥;方香香;朱继孝;吴波;钟国跃;刘福青;李洪泽;韩风雨【摘要】目的：研究不同产地的桔梗药材皂苷指纹图谱，为桔梗的质量控制与生产提供参考依据。

方法：采用DB101大孔树脂纯化精制桔梗皂苷，应用HPLC-ELSD法测定全国9省市自治区39批桔梗样品皂苷类化学成分指纹图谱。

色谱条件：选用Agilent HC-C8（4.6 mm×250 mm，5μm）柱，流动相为乙腈-0.5%乙酸系统，梯度洗脱；进样量6μL；流速0.5 mL·min-1；漂移管温度90℃；氮气流速1.2 mL·min-1。

结果：以内蒙古赤峰产区牛家营子镇6批样品共有指纹图谱为参照，发现各产区桔梗药材品质存在较大差异，其品质与各地桔梗栽培用种种源不规范和生态环境差异及药材干燥、贮藏等初加工方式密切相关。

结论：在桔梗栽培生产中，应加强桔梗种源基地建设，规范用种，合理制定桔梗生产区划，规范桔梗产地加工。

%The HPLC fingerprint differences ofRadix Platycodonis from different origins were studied to provide references for their quality control and production. The total platycodins were purified by DB101 macroporous resin. HPLC-ELSD fingerprints of the total platycodins for 39 batches ofRadix Platycodonis samples from 9 provinces were performed on an Agilent HC-C8 column (4.6 mm x 250 mm, 5µm) with gradient elution. The mobile phase was acetonitrile-0.5% acetic acid. The injection volume was 6μL. The flow rate was 0.5 mL·min-1. The temperature of drift tube was set at 90℃. And the gas flow (N2) was set at 1.2 mL·min-1. The results showed that there were large differences in the quality ofRadix Platycodonis from different origins with the common fingerprints of 6 batches of samples fromChifeng in Inner Mongolia as references. Thequality ofRadix Platycodonis was closely related to the seeds, the ecological environment, the way of drying and storing and so on. It was concluded that it was important to strengthen the provenance base construction, standardization of the seeds, reasonable formulation of the regionalization, and standardization of the production processing for the cultivation and production ofRadix Platycodonis.【期刊名称】《世界科学技术-中医药现代化》【年(卷),期】2015(000)005【总页数】7页(P1000-1006)【关键词】桔梗;指纹图谱;皂苷;品质差异【作者】曾金祥;方香香;朱继孝;吴波;钟国跃;刘福青;李洪泽;韩风雨【作者单位】江西中医药大学中药资源与民族药研究中心南昌330004; 江西省中药种质资源工程技术研究中心南昌330004;江西中医药大学中药资源与民族药研究中心南昌330004;江西中医药大学中药资源与民族药研究中心南昌330004; 江西省中药种质资源工程技术研究中心南昌330004;江西中医药大学中药资源与民族药研究中心南昌330004; 江西省中药种质资源工程技术研究中心南昌330004;江西中医药大学中药资源与民族药研究中心南昌330004; 江西省中药种质资源工程技术研究中心南昌330004;内蒙古蒙吉药业科技有限责任公司赤峰024000;内蒙古天奇中蒙制药股份有限公司赤峰 024000;内蒙古天奇中蒙制药股份有限公司赤峰 024000【正文语种】中文【中图分类】R284.1桔梗为常用中药材，来源于桔梗科植物桔梗Platycodon grandiflorum（Jacq.）A. DC.的干燥根，具有宣肺、利咽、祛痰、排脓的功效，用于咳嗽痰多，胸闷不畅，咽痛音哑，肺痈吐脓[1]。

不同产地桔梗药材HPLC指纹图谱及桔梗皂苷D含量测定研
究
李喜凤;杜云锋;谢新年;刘素梅;郝哲
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2010(032)004
【摘要】目的:建立桔梗药材的HPLC指纹图谱并测定桔梗皂苷D的含量.方法:采用RP-HPLC法,以Hypersil C_(18)柱(250mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-0.05 mol/L H_3PO_4溶液进行梯度洗脱,流速0.5 mL/min,检测波长210 nm(桔梗皂苷D含量测定为206 nm),柱温30℃.结果:以桔梗皂苷D为参照物峰,确定了12个共有峰,建立了18批药材的共有图谱,并比较了样品中桔梗皂苷D的含量.结论:所建立的HPLC指纹图谱及含量分析方法均具有较好的重现性,两者结合为桔梗药材质量控制提供了新的方法.
【总页数】4页(P529-532)
【作者】李喜凤;杜云锋;谢新年;刘素梅;郝哲
【作者单位】河南中医学院,河南,郑州,450008
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.HPLC法测定不同产地桔梗的桔梗皂苷D含量 [J], 王新军;何念武;邓寒霜
2.山东省不同区域桔梗药材中桔梗皂苷D的测定 [J], 申茹;徐英辉;莫颖华;王立娟;
郭玉岩
3.不同产地桔梗中桔梗皂苷D及总多糖的含量比较 [J], 金传山;张伟;桂双英;彭代银;吴德玲;黄力;李保明
4.不同产地桔梗HPLC指纹图谱及化学模式识别研究 [J], 张迟;黄戎婕;曾金祥;钟国跃;韩风雨;于秀玲
5.HPLC法测定桔梗不同部位、不同产地药材中桔梗皂苷D含量 [J], 石俊英;王颖;巩丽丽;任霜亭
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第31卷第5期2010年9月西安交通大学学报(医学版)Jo ur nal of X i an Jiao to ng U niv ersity (M edical Scie nce s)V ol.31N o.5Sep.2010HPLC -ELSD 法测定桔梗中3种桔梗皂苷的含量叶 静1,肖美添1,2,汤须崇1,黄雅燕1(华侨大学:1.化工与制药工程系;2.制药工程研究所,福建厦门 361021)摘要:目的 建立测定桔梗药材中桔梗皂苷D 、D 3、E 含量的方法。

方法 采用高效液相色谱-蒸发光激光闪射检测器(H PL C -EL SD)法,H ypersil C 18柱(5 m,4.6mm 150mm),以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速1.0mL/min,EL SD 漂移管温度113 ,载气(N 2)流速3.0L /min 。

结果 桔梗皂苷D 、D 3、E 的线性范围分别为13.78~275.6 g /mL (r =0.9995)、8.40~168.0 g /mL (r =0.9997)、12.02~240.4 g/mL (r =0.9996),平均回收率(n =5)为98.3%、99.4%和101.3%。

结论 本法操作简便,结果准确可靠,可用于桔梗皂苷D 、D 3、E 含量的测定。

关键词:桔梗;桔梗皂苷;H PL C -ELSD中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1671-8259(2010)05-0640-03HPLC -ELS D for determining the content ofthree platycodins in Radix platy codoiYE Jing 1,XIAO M e -i tian 1,2,T ANG Xu -chong 1,H UA NG Ya -yan 1(1.Department of Chemical and Pharm aceutical Eng ineer ing,H uaqiao University,Xiamen 361021; 2.Institute of Pharm aceuticalEngineering ,H uaqiao U niv ersity,Xiamen 361021,China)ABSTRAC T:Objective T o establish a qua ntita tiv e metho d to de term ine the co ntent of platy codin D ,D 3and Ein Radix platycodi.Methods H igh pe rf or mance liquid chro mata gr aphy -ev apro r ative light scatter ing decto r(HP LC -EL SD)met hod was a do pted.Platy codin D ,D 3and E we re se pa ra ted by C 18(5 m,4.6mm 150m m)w ith aceto nitr ile -w ater as mo bile phase in a gr adient pr og ra m;f lo w rate was 1.0mL /min,the tem per at ure o f dr if t tube was set at 113 ,a nd the gas f lo w (N 2)wa s set at 3.0L /min.R esults T he linea r r anges o f platy codin D ,D 3andE w er e 13.78-275.6 g/m L (r =0.9995),8.40-168.0 g /mL (r =0.9997)a nd 12.02-240.4 g /mL (r =0.9996),respec tiv ely.T he a ver age reco ve ries (n =5)wer e 98.3%,99.4%and 101.3%,respec tiv ely.C onclusion T he metho d is co nvenient,accura te and r eliable,and can be used fo r the deter minatio n of platy codinD,D 3and E in Radix plat yco do i.KEY WORDS:Ra dix platycodoi ;pla tyco din;HP LC -EL SD 收稿日期:2009-09-02 修回日期:2009-12-07作者简介:叶静(1980-),女(汉族),讲师,硕士,主要从事中药及中药制剂质量分析研究.E -m ail:yejenny@h 中药桔梗(Radix p laty codi )为桔梗科植物桔梗Platy codon g randif lor um (Jacq.)A.DC.的干燥根,在我国药用历史悠久,具有宣肺、利咽、祛痰和排脓之效[1]。

HPLC—ELSD法测定桔梗中桔梗皂苷D的含量植物资源与环境2001,10(4):11—13JoMofP/antResourcesandEr~vlronmentHPLC—ELSD法测定桔梗中桔梗皂苷D的含量朱丹妮,舒娈,郅慧,高山林(中国药科大学,江苏南京210038)摘要:首次采用高效液相一蒸发光散射检测器色谱法测定桔梗[P/atycodonl朋卿1帅(Jacq.)A.Dcj中桔梗皂苷D吉量,c.a(5.um,46哪×250哪)为色谱拄,(乙腈):"水)=28:72为流动相,流速O7mI3min,ELSD-5~为检测器,外标法定量.结果表明:桔梗皂营D在O.3～2.4腭范厨内呈线性,回收率为99.57%(n=5),RSD为110%.对8种不同来源的桔梗材料和加个四倍体株系桔梗皂甙D含量的测定说明,此法是测定桔梗皂苷D的较佳方法,可作为我国桔梗质量控制和评价的一种可靠的技术.关键词:桔梗;桔梗皂甙D;高效液相一蒸发光散射中国分类号:$657.72;S:~i7.239;o946.83文献标识码:A文章编号:l0(2∞1)04-001I-03I)e~fionofpla留0曲D.m用哟m峨肋nⅢby珈PIⅡI地山0dZttUDan-ni,sHuh锄,丑ⅡHui,GAOshan—bn(ChinaPharmaceuticalUniversity,Naniing210o38,cna),J.P/o~aRe∞Ⅳ.&Er~ron.2cl01.10(4):11—13A晌ct:1kSp4perestabliBhedanHPLc-E|Dmeth0dtodeterminethe~,nlentofplatye0dinDin differentsampofPlacycodon曲%Ⅲ(Jaeq.)A.Dc.Allt~hC18Ilr|lrI(5,4.6mmX250mm) w鹊used,mobilepIIasew鹊(aeetonimle):(water)=28:72at0.7m[/n~,l即eed.Ⅱs】)-500deteemrwasUSedforqualitativeandqu~ltitativeanalysisinextemalstandardⅡIetll0d.Obrainedresultsindie~tedthatwithin0.3— 2.4pl0ayeodinDhadago0dlinearity.1heaveragerecoveryw舾99.57%(n=5)wi由RSD1.10%.Inordertoevaluatetllereliabilltyoftllisnewmethod.thecontentofplatye~linDin8eV elldifferent疵lals~np]esand20inducedtetraploidlinesintissuecultureweredetermined.11leobtainedres ultsindie~tedthatthisiSfirsttimetoreportanadvancedandeffectivem柚0dfortlleqltv~ntm]andevaluatiOnforrawmaterialsofP..Key删rds:Placycodo~姗回z叭m(J.)A.IX1.;p【a|yo0djnD;l~yploid;}删一ELsD 中药桔梗为桔梗科植物桔梗(im耐‰m(Jacq.)A.IX:.]的干燥根.在我国药用历史悠久,有宣肺,利咽,祛痰和排脓之教….桔梗皂苷为桔梗中主要有效成分,桔梗皂苷D是桔梗皂苷中的主要皂苷.中国药典中对桔梗总皂苷含量的测定用重量法…,无桔梗皂苷D含量测定方法的记录.韩国学者采用反相ttPLC测定桔梗皂苷D.测得韩国国内桔梗根中的皂苷D含量为0.050%～0.090%."l.日本学者用ttPLC法以'INK-GEL酰胺.8o为分析柱,以(乙腈):V(水):82:18为洗脱液,检测波长203nm,定量或定性分析桔梗皂苷D;我国学者许传莲等采用I/P-IfPLC法测定不同产地桔梗中皂苷D的含量,选择C,.柱为色谱分析柱,检测波长为210nm.由于桔梗皂苷D无C=C双键和共轭结构,无强的发色基团,末端吸收(203n/in,210nm)检测干扰较大.作者首次采用ttPLC.E1SD法测定桔梗皂苷D含量,旨在为控制桔梗药材质量提供科学的分析方法.l材料和方法1.1材料来源供试的桔梗药材购白安徽省毫州药材公司.经余伯阳教授鉴定;桔梗四倍体株系由中国药科大学遗传育种教研室经组织培养人工诱导培育;对照品桔梗皂苷D由吉林农业大学刘墨祥教授惠赠.1.2仪器与试剂Shin~lzu10A高效液相色谱仪(配备Shama~C—R6A数据处理机,NlteehELSD.500型蒸发光散射收藕日期:20Ol-O7—23作者简介:朱丹妮(1946一).女,上海市人.学士.副研究员,长期从事中药复方化学和物质基础研究.2植物资源与环境第1O卷检测器)乙腈(色谱纯1,水为二次重蒸水.1.3色谱条件色谱柱为c8柱(5,4.6mm×250ram):流动相:(乙腈):V(水)=28:72;流速0.7mLhnin;柱温为室温;进样量:2(】;ELSD检测器检测参数:漂移管温度l11;载气()流速2.75Um_ml_理论塔板数据按桔梗皂苷D峰计算,应不低于30C0.1.4供试品提取方法比较1.4.1回流提取精密称取干燥粉碎过5O日筛的桔梗药材200mg,加入5OrIlL甲醇于索氏提取器中四流提取4h,过滤,滤液回收至干,残渣加入25mL水溶解,以乙醚萃取3次.水液以水饱和正丁醇萃取5次,合并正丁醇液,LHj收至干,残渣以甲醇溶解并定容5mL作为供试品.1.42超声提取精密称取干燥粉碎过5O目筛的桔梗药材2OOmg,加入25mL甲醇超声提取30min, 过滤,滤渣再加入25mL甲醇超声提取30mln,过滤,用少量甲醇洗涤滤渣,合并2次滤液,回收甲醇至于,将残渣以甲醇溶解并定容于5mL容量瓶中. 以上2种供试液按上述色谱条件注入液相色谱仪,测定峰面积,试验表明两种方法制备的供试品中桔梗皂苷D的含量无显着性差异,因此以下供试品溶液的制备采用操作简便的超声提取法.l_5对照品溶液的制备精密称取桔梗皂苷D对照品1.2mg,置10mL容量瓶中加适量甲醇溶解,用流动相稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液(O.12rrrIlL).l_6测定方法按超声提取法制备供试品溶液精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20uL,注入液相色谱仪,按以上色谱条件测定峰面积,峰面积及浓度均取自然对数后用标准曲线计算桔梗皂苷D含量.1.7不同产地及桔梗多倍体样品桔梗皂苷D含■测定取河南,广西,安徽,山西,湖南,湖北和江苏产桔梗药材及2o个四倍体株系试管苗,依上法测定桔梗皂苷D含量2实验结果2.1桔梗皂苷D浓度和峰面积线性关系的考察分别取上述对照品溶液2.5,5,lO,l5和2ouL进样,按上述色谱条件测定峰面积,以色谱峰峰面积的自然对数为纵坐标,以桔梗皂苷D对照品进样量的自然对数为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程:l,=1.7858X+4.8797,r=0.9991,线性范围为0.3～2.4tzg表明线性关系良好2.2精密度试验精密吸取桔梗皂苷D对照品溶液2OuL,重复进样5次,测定其峰面积积分值分别为44191, 44980,44O69,44784和43806,平均44366,RSD为1.12%(n=5),表明进样精密度良好2.3稳定性试验将同一供试品溶液分别在0,2,4,6和8h进样.测得桔梗皂苷D的峰面积分别为24384,24775, 248o3,24773和24468,均值24641,ItSD为0.81%,表明样品溶液在8h内稳定2.4重现性试验取同一产地桔梗药材5份,按1.4.2项下制得供试品,按以上色谱条件测得桔梗皂苷D的含量分别为0.2470%,02442%,0.2475%,0.2427%和0.2447%,平均0.2452%,RSD=0.82%,表明用此方法测定桔梗皂苷D重现性较好.2.5回收率试验采取加样回收测定方法,精密称取已知含量同批药材粉末(其中含桔梗皂苷D0245%)5份,每份约100mg,加入对照品溶液2mL(含桔梗皂苷D 0.24mg),按1.4.2项下制备,进样2o止,测定桔梗皂苷D峰面积,计算回收率,结果见表l.可以看出5份样品的平均回收率为99.57%,表明此法的回收率较高.2.6不同产地桔梗药材中桔梗皂苷D含■采自河南,广西,安徽,山西,湖南,湖北和江苏的桔梗药材中桔梗皂苷D的含量(ng)分别为2.65,2.68,2.49,2_86,2.8o,2.68和2.78,变动于2.49Ⅱg～2.86mug(0.249%～0.286%)之间,但均显着高于采用反相HPLC法测得的韩国产桔梗根中的桔梗皂苷D含量(O050%～0.090%)3J.2.7桔梗多倍体样品桔梗皂苷D含■根据本研究建立的方法,以桔梗二倍体为对照测定了20个多倍体株系(称样量均为200mg)桔梗皂苷D含量,结果见表2.第4期朱丹妮等:HPLC—ELSD法测定桔梗中桔梗皂苷D的含量13 表1桔梗皂苷D加样回收覃试验结果Table1R咧惦0f呻叫哪r0fp咖_mD襄2桔梗四倍体株系殛亲奉二倍体试管苗桔梗皂苷Ⅱ音量2Tk蛳t0f曲哪∞d-ⅢD-mtet瑚p10柚删曲,l.id0f∞出嘞mⅢIJ日蚺.)A.Dc.表2表明:20个四倍体株系的桔梗皂苷D含量在2.02~ng/g～306IIg之问,有8个株系高于=:倍体,c.5株系含量最高达3.06lg,比二倍体高176%,余均与二倍体接近,桔梗四倍体,二倍体株系测得的桔梗皂苷D含量大多在2.5mg(0.25%)以上,与7省区采集的桔梗根的桔梗皂苷D含量相近四倍体的田问农艺性状及根部产量优于二倍体,因此为进一步选育产量高及皂甙含量高的优良桔梗品种展示了较好的前景3讨论蒸发光散射检测器ELSD是一种通用质量型检测器,流动相由热气流使之气化喷雾.再进人加热管,溶剂在此挥发,所得分析检测的物质颗粒通过狭窄光束散射,由光电倍增管收集,ELSD的响应取决于被分析物质颗粒的数量和大小,不受溶剂的干扰,已成功用于皂苷,生物碱,萜类内酯,氨基酸和糖类等分析,是分析无紫外吸收和紫外吸收弱成分的有力工具本实验的条件是经过反复实验后,综台评价而得出的.作者首次采用HPLC—ELSD法测定桔梗皂苷D的含量.并通过对7个不同来源的桔梗材料和20个四倍体株系桔梗皂苷D的含量测定,验证此方法用于桔梗皂苷D含量测定是可行的.供试样品溶液的制备采用2种方法.一种为超声提取法;另一种为传统提取法经过测定,得出两种方法制备的供试品中桔梗皂苷D的含量无显着性差异.因此选择采用步骤少,操作简便的超声提取法作为供试品的制备方法.2OOO年版中华人民共和国药典未收载桔梗皂苷D的含量测定方法,仅用重量法测定正丁醇部位的量,比较粗糙,HPLC—ELSD法的建立,为控制桔梗的质量和试管苗的早期筛选提供了新的方法.参考文献:[1]中华^民共和国药典委员会.中华^民共和国药典2∞0年版(一部)[M]北京:化学工业出版社.2∞02252]肖祟厚中药化学[川上海:上海科学技术出版社.1997,419—421.【3jKimTJ,LeeSjlsolati~anddetemfimai~ofplaty,zodlnD platyc,od~【J.~malSeiTedmol,1990.3(3):339～341.[4]小木曾弘尚桔梗皂苷的I-IPLC定量分析J].国外医学中医中药分册,1995.17(5):33[5]原田正敏繁用生药成分定量M],京:东京广JIJ书店,j989j20一j33[6]许传莲.杨睹虎,郁毅男,等应用RP.I-IPLC法测定不同产地中桔梗皂苷DJ].吉林农业大学.1999.21(4):35—38.7]舒娈.高山林.桔梗蛆鲤培养技术的研究[J]植物资掉与环境,2.00110(3):63—64(责任编辑:宗世贤)。