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试管法RH血型鉴定1．目的规范RhD血型鉴定实验，确保RhD血型鉴定结果的准确。
2．职责此规程用于试管法RhD血型鉴定试验，血库工作人员应严格按照本操作规程进行检测。
3．适用范围本规程适用于本院紧急输血患者的红细胞RhD血型鉴定检测操作。
4．操作规程4.1器材和试剂4.1.1 器材：离心机、试管、滴管、生理盐水、记号笔，显微镜（OLYMPUS）,载玻片,移液器，一次性吸头。
4.1.2 试剂：RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体），生理盐水；4.1.3原理：利用红细胞凝集实验可鉴定是否存在相应的抗原。
Rh 血型系统常见的临床意义较大的C, c，E, e，D五种抗原中D抗原的临床意义最大，抗原性最强且出现频率高，故一般只进行RhD抗原的鉴定。
D抗原阳性者被称为Rh阳性，反之为Rh阴性。
4.2标本采集4.2.1 标本要求：抽取EDTA抗凝血2ml，3400转/分离心5分钟分离血浆，抗凝标本应无溶血，标签齐全。
4.2.2标本运输：室温运输。
4.2.3标本拒收标准：细菌污染，溶血标本，标签不齐全不能作测定。
4.3操作步骤4.3.1实验前准备：压积红细胞制备：供血者及受血者血标本离心后，取洁净试管加500ul生理盐水，加入25ul压积红细胞，混匀约为5％的红细胞悬液。
1）取洁净试管1支，标明RhD,用加样器加入50ul（或用试剂瓶吸管各加入1滴）RhD（IgM）分型试剂；2）加入50ul（或用一次性吸管加入1滴）5％被检者红细胞悬液；3）轻轻混匀，500g，离心1min（或1000g，离心15sec）；4）观察上清液是否存在溶血现象。
5）轻轻摇动试管，将试管底部的红细胞扣重新悬浮于上清液中。
6）以肉眼观察、分析并记录结果。
应观察是否有凝集或溶血现象；如有凝集，应描述凝集强度；如无凝集，应在低倍显微镜下观察；7）实验结果无凝集或弱凝集。
（应根据实验室现有试剂条件加做抗人球蛋白实验以确认是否为弱D表型，或外送检测确认）5.注意事项5.1常见导致假阳性的原因1）受检细胞被免疫球蛋白致敏2）高蛋白介质可能导致的缗钱状形成3）标本抗凝不当，纤维蛋白凝块的干扰4）存在意外抗体5）红细胞多凝集现象6）实验器材不洁净5. 2常见导致假阴性的原因1）红细胞与抗血清比例失调2）漏加或错加试剂血清3）试剂效价降低4）离心后摇动试管时用力过度。
Rh（抗D）血型鉴定标准操作程序文件1.【原理】Rh血型系统通过输血或妊娠可产生免疫性抗体，当遇有相应抗原，可致溶血反应或新生儿溶血病。
若误诊误治，可导致患者残废或死亡。
有条件者应作此检查。
目前，一般应用5种分型血清来检查红细胞抗原。
临床上，凡带有D抗原者，称为Rh阳性，不带D抗原者，称为Rh阴性。
2、【使用的标本种类和收集方法】2.1、受检者2-3％红细胞悬液红细胞悬液制备：采取受检者的红细胞，经盐水洗涤3次，取压积红细胞1滴加入生理盐水32滴（1.6ml）配成2-3％的红细胞悬液。
2.2、标本接收2.2.1、血型鉴定不接收临床送检标本（除外2.3.2规定内容）。
2.2.2、特殊急诊检验人员无法采血时，接收临床送检标本需登记采血护士姓名及送检护士姓名、并查对标本标签和检验单内容是否相符，如有不符可以拒收标本。
2.3、标本容器要求：洁净一次性塑料试管3. 【仪器和试剂】3.1、仪器型号：TL80-1型医用离心机3.2、仪器厂家：中国江苏姜岩是田里医疗器械有限公司3.3、许可证号：苏药管械（试）字2001第2030436号3.4、仪器使用具体要求见离心机使用维护程序3.5、Rh抗血清本科使用珠海贝索生物技术有限公司生产的Rh抗血清试剂产品注册号:国食药监械(准)字2004第3400398号4. 【操作】4.1 取小试管2支,用蜡笔标记，分别加上述Rh抗血清1滴,再加2-3%受检者红细胞盐水悬液2滴,混匀。
离心：3200-3400转/min,15--30秒4.2结果判断:轻摇试管，观察结果：如受检管凝集,即表示阳性；受检管不凝集,即表示阴性。
5、【注意事项】5.1、Rh抗血清质量应符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。
如出现混浊或变色则不能使用。
5.2、。
试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
5.3、操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。
5.4、离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。
Rh血型分型试管法试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面Rh血型系统C、c、D、E、e抗原表达情况，为输血相容性检测、Rh系统新生儿溶血病的诊断与预防等提供参考依据。
(二)检验原理Rh血型系统单克隆IgM类血型抗体可以使具有相应抗原的红细胞在盐水介质中发生肉眼可见的凝集，利用单克隆IgM血型抗体可以鉴定出红细胞表面的Rh抗原。
(三)适用范围适用于受检者(受者、供者)红细胞表面C、c、D、E、e 抗原鉴定试验。
(四)设备性能参数参见血清学专用离心机使用说明书。
(五)器材与试剂1.器材离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75m m×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂生理盐水、市售单克隆IgM抗C、抗c、抗D、抗E、抗e及IgM+IgG抗D标准血清。
IgM抗D用于临床样本(受者)RhD血型的常规检测，不能与DIV细胞反应，不能检测出弱D。
IgM+IgG用于供者样本RhD血型的常规检测及确证试验，能与DIV细胞反应，检测出弱D抗原。
10系或16系谱细胞用于阴阳性对照。
(六)样本要求1.患者样本EDTA-K2；或EDTA-K3抗凝全血≥3ml，经B600-A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血、无凝块及明显乳糜。
2.供者标本枸橼酸盐抗凝，全血量≥3ml，经B600-A 型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血、无凝块及明显乳糜。
(七)校准步骤参照KA-2200血清学专用离心机、B600-A型低速离心机使用说明书中的校准要求执行。
(八)操作程序1.悬浮红细胞的配制取受检者适量红细胞，经生理盐水洗涤3次，取压积红细胞配成3％～5％的红细胞盐水悬液。
2.加样取4支洁净硬质试管，分别标记为受检者、阴性对照、阳性对照、自身对照，前3支试管内分别加入抗C(或抗c、或抗D、或抗E、或抗e)各1滴，第4支加自身血清(或血浆)2滴，在每支试管中再加配制好待用的3％～5％受检者红细胞悬液1滴，混匀。
Rh血型定型操作规程1.原理1.1单克隆混合试剂测定法：根据凝集反应原理，当被检测行红细胞上有D抗原存在时，可与抗D混合型血型定型试剂产生特异性的抗原反应，出现红细胞凝集现象。
1.2酶介质测定法：当IgG类小分子特异性血型抗体与具有相应抗原的红细胞相遇时，虽能与红细胞上的特异性抗原结合，却因IgG分子间两个抗原决定簇的跨度小于红细胞间斥力而产生的距离（250nm），不能将相邻的红细胞彼此连接起来。
酶介质可破坏红细胞表面的唾液酸，降低红细胞表面负电荷，减少细胞间斥力，使红细胞间的距离缩小，有利于IgG类抗体在两个抗原位点间的连接，使抗原抗体间的反应成为肉眼可见的凝集。
2.操作步骤2.1玻片法（IgM+IgG型）2.1.1在玻片方格中加1滴抗D（IgM+IgG）混合试剂。
2.1.2再加2滴2%~5%红细胞生理盐水悬液于抗D混合试剂中。
2.1.3用干净的玻棒完全搅拌上述红细胞与抗D混合液。
2.1.4前后左右倾斜玻片且同时观察凝集现象。
2.1.5如出现凝集，则判断为Rh（D）阳性，反之为Rh（D）阴性。
2.2试管法（IgM+IgG型）2.2.1在试管中加1滴抗D混合试剂。
2.2.2再加1滴2%~5%红细胞生理盐水悬液于上述试管中，混匀。
2.2.3以3200~3400r/min离心15~30秒。
2.2.4轻轻振摇试管使红细胞重悬，肉眼或显微镜观察有无凝集现象。
2.2.5记录结果，凝集者为阳性反应，反之为阴性反应。
2.3微柱凝胶法：按ABO血型鉴定中微柱凝胶法进行检测，结果判断见ABO血型鉴定操作规程图3-1。
3.注意事项3.1 Rh血型系统的抗体多由免疫产生，血清中有很多天然抗体存在，故不需作反定型试验。
3.2阳性对照，取3人O型红细胞混合配血。
阴性对照不易得到，一般配置方法为正常人AB型血清1滴，5%RhD阳性红细胞悬液1滴和菠萝蛋白酶试剂1滴混匀，与受检管一同置于37℃水浴1小时。
3.3 Rh血型鉴定要严格控制温度与时间。
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。
(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。
2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。
(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。
(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。
血型鉴定与血液配型实验方法介绍在医学领域中，血型鉴定与血液配型是非常重要的实验方法，它们对于输血、器官移植以及疾病诊断等方面至关重要。
本文将介绍血型鉴定与血液配型的实验方法。
一、血型鉴定实验方法血型鉴定是指通过实验手段来确定一个人的血型类型，主要包括ABO血型和Rh血型。
1. ABO血型的鉴定方法ABO血型包括A型、B型、AB型和O型。
下面介绍几种常用的鉴定方法：(1) 滴定法：该方法主要利用抗血清对相应抗原进行滴定。
将被测血清稀释后与抗A、抗B、抗AB和抗O血清滴定反应，根据凝集程度来鉴定血型。
(2) 纸片凝集法：该方法是将试纸片吸附抗体，然后滴加被鉴定血液，根据试纸片上是否出现凝集来鉴定血型。
(3) 红细胞溶血法：该方法是将鉴定者的红细胞与ABO抗血清混合，根据红细胞的溶血情况判断血型。
2. Rh血型的鉴定方法Rh血型包括Rh阳性和Rh阴性。
下面介绍几种常用的鉴定方法：(1) 抗人球蛋白试验法：将被测血液与抗人球蛋白血清相混合，根据悬浮液的凝集程度鉴定Rh血型。
(2) 免疫胶体凝集法：本方法是将被测血液与含有相应抗原的胶体颗粒混合，当出现凝集时，可判定为Rh阳性。
以上是血型鉴定的常用实验方法，可以根据实际需要选择合适的方法进行鉴定。
二、血液配型实验方法血液配型是指将供者和受者的血液样本进行相互匹配，以确保输血或器官移植等过程的安全性和有效性。
目前常见的血液配型方法包括ABO血型配型和Rh血型配型。
1. ABO血型配型方法ABO血型配型是最基本的血液配型方法，其原理是将供者和受者的血清与相应的抗原进行反应，根据凝集的反应程度来确定合适的血液配型。
根据实际情况，可以选择滴定法、纸片凝集法等方法进行配型。
2. Rh血型配型方法Rh血型配型是根据供者和受者的Rh抗原是否相匹配来确定合适的血液配型。
可以通过抗人球蛋白试验法、免疫胶体凝集法等方法进行配型。
血液配型方法的选择取决于具体需求，各种方法各有优劣，医务人员在实际操作中应根据需要进行选择。
Rh血型测定一、检验目的：鉴定红细胞膜上Rh血型系统D抗原，为输血及输注血液成份、骨髓移植及器官移植配型作准备。
二、原理：根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能够出现凝集反应的原理，用已知类型特异性抗血清(抗D)与被检红细胞在盐水介质中反应（室温），若出现凝集现象，表明被检红细胞膜上有与血型抗体相对应的抗原(D抗原)，从而判断和鉴定被检者的Rh血型。
三、标本的采集：1.标本类型：静脉血或末梢血2.标本采集：见标本采集手册3.标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。
4.标本拒收状态：细菌污染，严重溶血标本不能作测定。
四、试剂1.试剂名称：RhD（IgM）血型定型试剂盒（单克隆抗体）。
2.试剂生产厂家：上海血液生物医药有限责任公司，批准文号：国药准字S2*******3.包装规格：10支/盒；10ml/支4.试剂盒组成：抗D标准血清1支5．效价：≥1：64（ccDeeO型）6．贮存：2-8℃保存，不可反复冻融。
五、仪器设备普通光学显微镜。
六、操作步骤1．标记试管：取小试管1支，标记为抗D。
2．加标准抗D血清：分加入抗D标准血清1滴于相应标记试管中。
3．加入红细胞悬液：加入被检者5%红细胞生理盐水悬液2滴于试管中混匀，以1000r/min离心1min。
4．观察结果：先观察上层液体有无溶血现象，再斜持试管轻轻摇动或轻弹动，使管底的红细胞慢慢浮起，肉眼观察有无凝集，如轻微凝集应将反应物倒于玻片上再以显微镜低倍镜下观察。
5．判断结果：（1）凝集判断标准●凝集：上清液体清亮，底部有红细胞凝块，轻弹试管凝块不散开。
●不凝集：上清液清亮，血细胞均匀沉于管底，边缘整齐，手轻弹试管，红细胞象一缕烟似的上长升，随即成为均匀的悬液。
（2）血型结果判断标准6．阴性结果需在37孵育15-30分钟，然后再离心观察结果，若仍呈阴性需进一步确认是否是弱D。
七、质量控制1、阴性对照显示为阴性；阳性对照显示为阳性。
什么叫Rh阳性性与Rh阴性?Rh血型如何鉴定?
1940年有人用恒河猴血的红细胞免疫豚鼠和家兔，所获得免疫血清，这种血清不但能够凝集叵河猴的红细胞，而且能凝集一分人的红细胞，因此，这些人的红细胞与恒河猴红细胞上有一共同的抗原，并从猴子Rhesus的字头，而称为Rh抗原。
凡红细胞上有此抗原的，称Rh性。
无此抗原的称Rh阴性，常用大写CDE代替替Rh阳性，小写cde代表Rh阴性，因为D抗原是引起Rh血型系统输血反应的主要抗原，临床上常以含D抗原的血型作为Rh阳性，无D抗原者作为Rh阴性。
Rh是一个独立血型系统。
抗原是由C、D、E、C、d、e、6个因子组成(其中的d因子尚未发现，仅为假设因子)，由于因子组合：不同而显出不同的血型。
鉴定Rh血型时，分别用抗C、抗c、抗D、抗d、抗E及抗e血清进行试验，然后再得出被检查的Rh血型的表现式。
Rh有完全抗体和不完全抗体之分，所以Rh血型系统不同于ABO血型系统鉴定。
除了用盐水凝集法外，还应用胶体介质法，木瓜酶，菠萝酶等方法检查。
白继文，王长印编,检验医学问答=Question and Answer of laboratory Technological Medicine,中华医学会检验学会吉林省辽源市分会,1983.04,第359页。
ABO和Rh (D）血型鉴定操作规程（盐水法）一．目的规范ABO/Rh （D) 血型鉴定的操作流程;保证临床用血的安全性及有效性。
二．职责血库技术人员负责ABO和Rh (D）血型鉴定。
三．适用范围适用于血库ABO和Rh（D）血型鉴定血标本。
四．所需材料和设备1。
材料抗—A、抗—B、抗—D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞、生理盐水、小试管、滴管、患者血标本。
2.设备普通离心机、显微镜、血型血清学专用离心机。
五．操作步骤1。
将标本2000r/分钟离心2分钟,使标本血浆/血清与红细胞分离，并吸取红细胞配制3％悬液。
2。
取小试管3支，分别标明-A、抗-B、抗-D，用滴管分别加抗—A、抗—B、抗—D试剂各2滴于试管底部,再以滴管分别加入受检者3％红细胞悬液1滴，混匀。
3.另取小试管3支,分别标明A、B、O细胞，用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部,再分别以滴管加入3% A、B、O型试剂红细胞悬液1滴，混匀.4。
以1000r/分钟离心1分钟.5。
将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象,如肉眼不见凝集,应将反应物倒在玻片上，再以显微镜检查。
6. ABO血型结果判定（见下表)：ABO血型结果判断分型试剂+受检者红细胞（正定型）受检者血清+试剂红细胞(反定型）抗-A 抗—B A细胞 B细胞 O细胞血型注:“＋" 凝集；“－" 不凝集7.Rh（D）血型判定: 红细胞与抗-D试剂凝集为Rh (D) 阳性无凝集为Rh阴性。
8.凝集强度判断标准：4+ 红细胞凝集成一大块，背景清晰透明；3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清晰；2+ 红细胞凝块分散成许多小块,背景可见到游离红细胞；1+ 肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞；±镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞；混合外观凝集(Mixed Field， MF）是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布;－（阴性）镜下未见凝集,红细胞均匀分布。
输血科Rh（D）血型鉴定1、实验原理红细胞与抗D抗体发生凝集反应表明该细胞有D抗原，反之，无凝集现象表明试验的红细胞缺少正常强度的D抗原。
2、标本收集和制备无菌操作收集血液标本,收集后尽可能立即进行实验。
如果不能立即实验,应将样品贮存于2-8C。
收集在ACD、CPD、CPD－2A 液中的血液标本,不超过21天仍可进行实验，但是加EDTA、肝素和凝集的血液标本，实验应在2天内进行。
3、仪器、试剂、校准品、质控品、培养基、以及其他所需物品：Rh(IgM)血型定型试剂（单克隆抗体）：4、操作步骤4.1 玻片法：4.1.1 干净玻片上加1滴抗D。
4.1.2 再加入1滴40%-50%的被检红细胞悬液。
该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞。
4.1.3 在圆形的玻片区域中混匀，前后缓慢摇晃玻片。
2分钟左右肉眼判读结果。
不要将试剂的干燥与凝集相混淆。
4.1.4 如果是阴性，需要试管法重做一遍实验。
4.2 盐水试管法4.2.1 加一滴抗D试剂于预先标记好的试管中4.2.2 再加1滴约3%—5%红细胞生理盐水悬液于试管中。
混匀。
4.2.3 离心，速度和时间可选择以下二种之一：转速1000rpm，时间一分钟1分钟或3400rpm，时间15秒。
4.2.4 检查是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，是细胞再悬浮起来。
4.2.5 观察凝集状况，并立即记录结果。
必要时可借助显微镜。
4.2.6 若是阴性结果，需在37℃孵育15分钟-30分钟，然后再离心观察结果。
结果若呈阴性需进一步确认是否是弱D。
4.3 微量板法（U型板）4.3.1 加一滴抗D试剂于U型底的微孔中。
4.3.2 再在微孔中一滴约3-5%的被检红细胞悬液，细胞悬液需事先制备于生理盐水中。
4.3.3 用机械的方法将U型板混匀。
4.3.4 用板式离心机离心：2000rpm,时间30 秒。
不同的离心机，不同的微量板所需要的离心条件有所区别，正确实验的结果需要适当的离心，使反应板产生清晰的细胞扣及透亮的上清液。
Rh血型鉴定1.原理根据与Rh血型系统中的D抗原发生的凝集反应，通过直接凝集法对Rh血型系统中的D抗原进行体外检测和鉴定。
2.试剂组成分泌抗DIgM 人/小鼠杂交瘤细胞培养上清液、EDTA、叠氮钠。
3.试剂保存和稳定性存放2℃—8℃，有效期内使用。
4.标本收集和制备无菌操作收集血液标本,收集后尽可能立即进行实验。
如果不能立即实验,应将样品贮存于2℃—8℃。
5.检验方法1.玻片法：干净玻片上加1滴抗D试剂，再加入1滴30%-45%的被检红细胞生理盐水悬液，缓慢摇动玻片；2-5分钟左右肉眼观察结果，可借助弥漫光源观察；如结果呈阴性，需用试管法重复做一次试验。
2.试管法：向试管中加1滴抗D试剂，再加入2%-3%的被检红细胞生理盐水悬液，混匀；3400rpm离心10秒；轻轻摇动试管以悬浮底部细胞，肉眼观察可见的凝集；如结果是阴性，需在37℃孵育15-30分钟，然后再离心观察结果，结果仍呈阴性请按有关规定做进一步的确认试验。
6.结果判断凝集=阳性检测结果无凝集=阴性检测结果7.质量控制与附注1.抗D诊断试剂开封后，及时贴上开封时间标签，在效期内使用。
2.由于人红细胞的D抗原往往表现较弱，故必要时进行显微镜镜检，以免错判结果，特别是阴性结果时。
3.Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体集反应凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。
4.对于结果可疑的，必须洗涤红细胞后重新检验。
5.其它附注参见ABO血型鉴定。
8. 参考文献中国人民共和国卫生部医政司编. 全国临床检验操作规程（第三版）.Rh血型鉴定[原理]红细胞与抗D抗体发生凝集反应表明该细胞有D抗原，反之，无凝集现象表明试验的红细胞缺少正常强度的D抗原。
[试剂组成] 抗D试剂广谱抗人球蛋白[试剂保存和稳定性]存放2—8℃，有效期内使用。
[标本收集和制备]无菌操作收集血液标本,收集后尽可能立即进行实验。
如果不能立即实验,应将样品贮存于2-8C。
Rh （D)血型鉴定（试管法）操作程序1、目的建立Rh(D)血型操作规程，确保血型鉴定准确性和规范性。
2、适用范围适用于试管法进行Rh(D)血型鉴定试验操作程序3、试剂3.1厂家： 上海血液生物医药有限公司3.2产品有限期：24个月3.3试剂规格： 10ml 支3.4试剂稳定性：试剂未开启：2-8℃避光保存，稳定至包装盒上的效期。
3.5试剂开启后请注明日期并签名，效期按厂家说明书要求。
4、质控操作按照《输血相容性检测室内质控操作程序》执行，质控通过后填写《血库IQC 检测反应记单》5、检测原理目前发现的人类红细胞上Rh 抗原有C 、c 、D 、E 、e5种，Rh 血型形成的天然性抗体极少，主要是免疫性抗体，已知有抗D 、抗E 、抗e 、抗C 、抗c 抗体等五种。
抗D 抗体是Rh 血型系统中最常见的抗体。
Rh 抗体有完全抗体和不完全抗体两种完全抗体在机体受到抗原刺激初期出现，一般属IgM 型，机体再次受抗原的刺激则产生不完全抗体，如果五种不完全抗体血清(抗D 、抗E 、抗e 、抗C 、抗c)做鉴定，可将Rh 血型系统分为18个型别，在临床上因D 抗原的抗原性最强，专业领域：血库 文件编号： Rh （D)血型鉴定（试管法） 操作规程 版本及修订后：启用日期： 编写者： 审批者：出现的频率高，临床意义较大，故一般只做D抗原的血型鉴定，如仅用抗D血清进行鉴定，则凡带有D抗原者称为Rh阳性，不带D抗原者称为Rh阴性。
6、标本处理6.1核对信息，将检查申请单信息与样本条码信息进行核对，信息一致方可进行下述操作。
6.2标本收集EDTA-K2抗凝血2ml6.2.2标本出现溶血、乳糜血，为不合格样品，不能用于检测。
6.3标本制备6.3.1EDTA抗凝血2ml,离心1000g/3min,分理出血球与血浆待用。
6.3.2制备5％红细胞悬液，取50ml血球+1000ul0.9％生理盐水。
7、操作步骤7.1取洁净试管一支，表明抗D用滴管滴加Rh(D)IgMh试剂50ul,并向管中滴加待检着5％红细胞悬液50ul,混匀：7.2摇匀后用血库专用离心机500g,离心60秒，观察结果：7.3将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象，如果肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以低倍镜观察结果。
Rh（D）血型鉴定一．原理：Rh抗原主要有5种：C、c、D、E、e。
抗D抗体是Rh血型系统中最常见的抗体。
Rh抗体主要是不完全抗体，如用5种不完全抗体的血清作鉴定，可将Rh血型系统分为18个型别。
在临床上，因D抗原的抗原性最强，出项频率高，故一般只做D抗原的血型鉴定。
凡带有D抗原者，称为Rh（D）阳性，不带有D抗原者，称为Rh（D）阴性。
二．试剂及标本1．单克隆Rh（D）诊断试剂（IgM），由上海生物技术有限公司提供。
2．被检者5％红细胞，洗涤1次3．5％Rh D阳性红细胞悬液三．操作步骤：1．将1滴盐水抗D试剂加入试管，再加5％受检红细胞悬液1滴，1000rpm，1分钟，观察凝集结果，根据凝集与否来确定相应的抗原。
2.对照试验：取试管2支，标明阳、阴标记，分别加入5％RhD阳性，阴性红细胞各1滴，各管再加抗D血清1滴，1000rpm，观察结果，如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，表明本试验成立。
3. 如发现抗D检测管不凝集，被检者可能为Rh阴性，需用不同批次的抗D 血清再进一步试验，并且用间接抗人球蛋白试验来鉴定是否有D抗原，还是弱D 型抗原。
受检红细胞与各批抗D 血清不凝集或只与其中一批或数批抗D血清凝集，但在间接抗球蛋白试验中都凝集者，都属弱D型细胞。
四. 结果判别：1.常规情况下，红细胞只作Rho （D）定型，根据反应格局报告为：Rho（D）阴性，Rho （D）阳性，Rho(D)弱阳性。
2.当有特殊情况时，如抗体筛选时有不规则抗体存在等情况下，才需做Rh 血型抗原全部表现型定型。
五．Rh血型鉴定试验中应注意的问题：1．Rh定型主要鉴定D抗原，定型时应按抗-D血清试剂的使用说明进行，并注意必须要有严格的对照试验，包括抗原的阴、阳性对照以及试剂对照试验。
2．根据美国AABB技术手册第12版（1996）规定：D u这个术语不再使用，携带弱的D抗原的红细胞仍被归类为D阳性，称为弱D（weak D）。
Rh血型鉴定试验方法
一、原理
盐水介质RhD抗血清为LgG变形或LgM抗体，此抗体为完全抗体性质的单克隆试剂和单克隆/多克隆混合的低蛋白试验，在盐水中即与红细胞上D抗原结合发生凝集反应。
二试剂
0.9%生理盐水抗-D试剂
三、操作
（1）取管一支加抗-D试剂1滴，同时滴加2%—5%，用生理盐水稀释的被检红细胞一滴。
（2）2000转/分离心一分钟观察。
四、结果
（1）凝集者为阳性
( 2) 不凝集者用三批不同批号的抗D血清确证是否为阴性（注意温育）。
五、注意事项
（1）试剂应随时储存于冰箱中，随用随取。
（2）更换试剂需要作阴性阳性对照。
（3）呈不凝者应用三批不同批号的抗D血清抗人球实验确证是否阴性，一批或二批出现凝集可能为Dn.
输血科质量管理方案
医疗质量管理医院管理工作的核心，管理工作中一切计划，措施、制度、职责、标准、要求等无不以医疗质量为中心，以提高医疗质量为目的，为实现质量管理目标，特制订质量管理方案。
一质量管理成员：郑立君刘友斌
二质量管理标准：
1 血液使用合格率100%，成分输血率75%以上。
2 三级考核合格率100%
3 各项登记准确，完整。
三质量控制和考核
严格按操作规称操作，定期开展质量教育。
提高全员质量意识，树立质量重于泰山的的思想，并把质量教育内容落实到实际工作中，提高业务水平。
四质量保证措施
1 按《临床输血技术规范》的要求严格执行。
2 对入库的血液逐项检查，验收，登记，核对无误方可放入冰箱储存。
3 要定时检查冰箱温度，严格控制在2-8度左右，血液轻拿轻放，防止认为血袋破损和溶血，血液存放期间要精心观察，如有异常情况必须及时报告进行处理。
4 发血时要两人核对，签字后才能发出。
5 保持冰箱的干燥，清洁，整齐，严禁在储血冰箱中存放其他物品，以防止污染和影响保存。
6 血液及血浆的报废，报损应按规定进行处理。
