光合细菌的分离、培养及应用

光合细菌培养及使用方法光合细菌，是20世纪70年代始用于水产养殖业而近年热用起来的，适用于绿色健康养殖的一大类有益微生物菌群，其绿色功能体现在作用广、效果显著、无残留、无毒副作用等特征，适用于鱼、虾、蟹、观赏鱼等各种水产动物。

现将其功用及特点介绍如下。

一、光合细菌在水产养殖中的功用光合细菌是一大类在厌氧条件下进行不放氧光合作用的细菌的总称。

光合细菌属红螺菌目，分属于红螺菌科、着色菌科、绿杆菌科、绿色丝状菌科，共4科23属80余种。

应用较多的为紫色非硫菌。

光合细菌具有多种功能：固氮、脱氮、固碳、硫化物氧化等，与水体中的氮、磷、硫循环密切相关，在水体的自净过程中扮演着重要角色，从不同方面看，光合细菌在水产养殖中具有以下六大功效。

1.水质净化剂。

随着养殖水体日趋严重的污染和富营养化，氨氮、硫化氢等有害物质已严重影响到养殖动物的生长发育，如饲料转化率低、病害多、产量低等等。

光合细菌在水底层缺氧的情况下，能将有害物质吸收，成就自体生长进而形成优势种群并释放出大量的抑菌酵素，可使其他的病原菌生长受阻，从而起到了水质净化剂的作用。

大连水产学院的养虾试验结果表明，使用光合细菌提高单产23.1%。

2.饲料添加剂。

将光合细菌的菌液以3%～5%的量添加到饲料中,可降低饲料系数、增强水产动物机体抗病能力，促进其生长，大幅度提高养殖产量。

试验表明，添加菌液优于添加干燥的菌体。

3.鱼虾苗种培育的保护神。

光合细菌应用于鱼虾蟹贝的育苗中，可促进幼体生长、变态，提高成活率。

光合细菌可通过净化水质来改善幼体的发育环境，也可直接被幼体作为适口饵料而增加营养源。

4.营养丰富的饵料。

光合细菌菌群可直接被鱼虾滤食，更是浮游动物的好饵料，而浮游动物则是虾、第1月 下半月刊蟹、鱼类苗种及鳙鱼等成鱼的直接食料。

5.预防鱼病。

（1）光合细菌通过对有害物质的作用，起到净化水质，减少疾病发生的作用。

（2）通过降解鱼药及污水的有害物质，改善鱼类的生长环境，增强鱼体体质。

光合细菌的培养及其在畜枚业上的应用摘要光合细菌广泛分布于自然界,在pH值6.5~7.5、光照1000~2000lx、温度10一35C条件T,可以分离出菌种,经进一步扩大培养,即可生产出大圣光合细菌。

光合细菌在畜牡业上用作饲料添加荆,可增加畜禽血清中免疫球蛋白的含童,提高增重和产蛋率;处理皮水,度水有机物去除率可达到国家排放要求.关键词光合细菌，培养，畜牡业应用光合细菌简称PSB,是一群能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用有机物作供氧体兼碳源,进行不放氧光合作用的细菌.由于其含有丰富而又较全面的营养成分和具有较强的净化水质的作用,因此光合细菌已经广泛地应用于畜牧业生产中,成为目前很有发展前景的生物饲料添加剂之一1光合细菌的培养1.1菌种光合细菌广泛分布于水田、江河、湖沼、土壤、活性污泥中,菌种可以从采集的池塘底泥中重复富集,分离纯化获得.若利用保存下来的菌种,在培养前必须提纯复壮才能有效地进行扩大培养.1.2培养基光合细菌在生长繁殖过程中需要一定的营养物质,把所需营养物质按一定比例可配成适合于菌体生长的培养基,基本配方为:氯化钱0.1%,碳酸氢钠。

.1%、醋酸钠0.3%、磷酸二氢钾。

.03%、硫酸镁0.01写、酵母膏0.05%、蛋白陈。

.05%、微量元素母液0.1%,加水至100%.L3培养条件1.3.1pH值:光合细菌适宜pH值为6.5~7.5,在培养过程中要定时测定培养液的pH值变化.1.3.2光照:可用25~60W白炽灯作光源,光照强度一般为1000~2ooolx,培养物不能离光源太近.1.3.3温度:光合细菌适宜生长的温度为10一35C,最适温度为25~28C.L4培养方法光合细菌的生产性培养一般采用三级培养法.1·4.1一级培养:采用试管,其生长培养基要先经高压灭菌,然后在无菌条件下,按规程进行接种,接种量为10%~2。

%,接种后在适宜温度与光照条件下进行培养.1.4.2二级培养:采用5000一20000ml玻璃瓶,生湖南畜牧兽医1997年第3期长培养基要经过煮沸消毒.待冷却到25C左右接种,接种量为10%~2。

光合细菌的分离培养光合细菌（Photosynthetic Bacteria，略作PSB）是一大类能进行光合作用的原核生物的总称。

除蓝细菌外，都能在厌氧光照条件下进行不产氧的光合作用。

研究与应用的实践表明，光合细菌在高浓度有机废水处理与资源化、水产养殖的水质调控与促进健康生长、在农业生产中作为高效活性菌肥等方面，发挥着十分有益的和令人瞩目的作用。

关于光合细菌的类群、形态与生理特征、在生态系统中的地位和作用等内容，请参考有关文献与专著。

这里仅就光合细菌的分离、培养方法作一介绍。

1光合细菌的富集培养的一般方法①分离源光合细菌四个科-红螺菌科(Rhodospirillaceae)、着色菌科(Chromatiaceae)、绿菌科(Chlorobiaceae)、绿色丝状菌科(Chloroflexaceae)的各种菌，广泛分布于地球生物圈的各处。

作为光合细菌的分离源，一般可从富营养化的湖泊、池沼、海滩、以及水田、硫黄泉、灌水土壤、和污水厂活性污泥、畜牧场水沟等厌氧或缺氧环境采样。

在较深的水体，可使用采水器采取厌氧层的水。

在较浅的地方，可直接用吸管吸取带底泥的水。

采样的同时记录水温、pH、有无H2S气味等项内容。

将采集到的水样或泥样放在厌氧、低温条件下，带回实验室进行分离。

②光合细菌富集培养基用于光合细菌富集培养用的培养基有许多配方，这里仅介绍日本星野氏推荐的基本培养基I和基本培养基II。

前者适合于红螺菌科的光合细菌，后者适用于着色菌科和绿菌科的菌。

基本培养基I：KH2PO4 0.5g K2HPO4 0.6g (NH4)2SO4 1.0g MgSO4·7H2O 0.2gNaCl 0.2g CaCl2·2H2O 0.05g酵母浸出汁 0.1g微量元素溶液（见后）1mL 生长因子溶液（见后）1mL蒸馏水1000ml以上配制成的培养基pH值约6.7根据需要，可在上述培养基中添加一些成分，如富集的是缺少同化型硫酸还原系的菌种，则可在基本培养基I中加入0.01%硫代硫酸钠；如是海洋性菌种，可加入3%NaCl等等。

光合细菌的分离培养与应用初探‘摘要光合细菌在无一氛条件下能分解利用氛、亚峭酸、硫化氮等有害物质,使养疽水休净化,同时能降低水质底质的生化耗氛号,从而间接提高溶解氧;光合细菌还可以门于欲虾经贝及禽言的养痊,对农作物与人体保健的应用亦有广阔的开发前景。

关健词光合细菌,分离,培养,应用.光合细菌(P三B)是一种f贻以光作为能源,以C02或有机物作为碳源而进行生长繁殖的微生物.它能利用氨、亚硝峻和琉化氢等有害物质,故在有机质丰富的水体中可大量繁殖,使污水的BOD下降,在净化水质中起到了独特的作用.PSB菌体又是一种含蛋白质(滩%)、脂肪(8%)、大量胡萝卜索、B族维生素和辅酶Q及活性促生长抗病因子的特殊细菌.PSB的作用已引起水产养殖界和环境保护界的重视.PSB亦可作为鱼虾贝类和禽畜的饵(饲)料,对水稻、蔬菜均有增产作用.我们于1993年2月开始对PSB进行分离培养,并在生产上作应用试验,现将初步结果报道如下.1分离与培养1.1材料的采集分离材料采集于宁德市某豆腐作坊灼排水沟,附着于石头上呈橙黄色或乳白色的沉积物。

1.2分离培养基的配制KZHpo‘0.69KHZpO;0.59(NH‘):50‘1.09Mgso‘0.29NaC10.29Na:S:0:0.19NaAeo.5~1.09pH6.7酵母膏0.19CaC工20.29蒸馏水lo00m18磅蒸压灭菌20分钟1。

3分离方法称取沉积物19,加无菌水5ml充分振荡打散,制成悬浊菌液,然后悬浊菌液与液体培养按1:5比例装入40x18omm的大试管中,在液面上加一层灭菌的液体石蜡形成厌氧,置温度28~30OC,光照强度为800oLox进行厌氧培养,三天后培养液明显呈深红色.尔后,以培养液进行琼脂平扳划线分离、纯化,平扳培养基成份如下NH‘Cl1.09工交。

HPO‘0.59MgCI:0.29NaCI2.09酵母膏0.19琼月旨l主一:·09水”01川劫戈份济解后,以1洲旁压力灭菌20分钟,然后无菌操作,加入(1)经过滤灭菌的收稿「J期:飞394年1月1994夕卜第6游第1户l阮少江光合务U菌的分离培养与应用初探3一!NaHCO35.o/6oml水;(2)沁ml经过滤灭菌的乙醇或戊醇或4%丙氨酸,用过滤灭菌的o.INH。

光合细菌的培养及应⽤技术光合细菌的培养及应⽤技术1 引⾔光合细菌（photosynthetic bacteria,简称PSB）是⼀群能在厌氧光照或好氧⿊暗条件下利⽤有机物作供氧体兼碳源，进⾏不放氧光合作⽤的细菌，⼴泛分布于⽔⽥、湖沼、江河、海洋、活性污泥和⼟壤中，依据《伯杰细菌鉴定⼿册》（第九版）可分为6 个类群，27 个属。

不产氧光合作⽤的红螺菌⽬分为紫细菌（purple bacteria）、绿细菌（Greenbacteria）和⽇光杆菌属（Heliobacteria）、红⾊杆菌属（Erybrobacter）。

其中紫细菌中包含有红螺菌科（Rhodolspirillaceae）、着⾊菌科（Chromatiaceae）、外硫红螺菌科（Eceothiorhodospiraceae），包含16属49种。

其中在⽣产上有意义的红螺菌科包括红螺菌属、红假单胞菌属和红微菌属[1]。

PSB 均为⾰兰⽒阴性细菌，⼀般为球型、卵形、杆形、弧形、螺旋形、环形、半环形丝形，也可随培养条件和⽣长阶段⽽改变，⼤部分单个存在。

PSB的⼀般菌体组成及营养成分见表1[2].表1 光合细菌菌体的组成与⼩球藻等⽐较Tab. 1 Components comparison betweenphotosynthetic bacteria and ChlorellaP S B 含有较⾼的优良蛋⽩质，粗蛋⽩含量为65.45%，含有17 种氨基酸⽽且消化率较⾼；粗脂肪约7%；可溶性糖类约20%；粗纤维约3%[1]；维⽣素B12 含量是酵母的200 倍、⼩球藻的4 倍[2]，⽣物素含量也⽐较丰富；菌体的脂类成份含有⼤量的叶绿素、类胡萝⼘素和辅酶Q(泛醌),迄今已从PSB中分离出80 种以上的类胡萝⼘素。

叶绿素和类胡萝⼘素对养殖⽣物的健康⽣长，增强对疾病的抵抗⼒有很⼤的益处。

辅酶Q4 是与⽣命活动有重⼤关系的⽣理活性物质，PSB 中的含量特⾼，是酵母的13 倍。

光合细菌的培养及其在水产养殖中的应用光合细菌简称, 是一群能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用有机物作供氧体兼碳源, 进行不放氧光合作用的细菌, 广泛分布于水田、湖沼、江河、海洋、活性污泥和土壤中近年来, 光合细菌应用于水产养殖业并取得显著效果。

我所自年开始光合细菌的培养与应用研究, 在对虾和中华鳌养殖、对虾和泥蜡人工育苗中试用, 均取得较好的效果。

本文根据我们的研究实践, 综合国内外有关文献, 概述光合细菌的培养技术及其在水产养殖中的应用状况。

1. 光合细菌的培养1.1 菌种菌种可从采集的池塘底泥中重复富集、分离纯化获得如用保存下来的菌种, 在培养前必须提纯复壮, 才能有效地进行扩大培养。

目前养殖中使用的光合细菌多为红螺菌科和一部分着色菌科的复合菌株, 因为复合型菌株能利用多种碳源, 易于培养, 能更为广泛有效降解水中低分子有机物。

1.2 培养基光合细菌培养中除碳、氮、磷等主要营养元素外, 还需要一定的镁、钙、钠及有关微量元素, 将所需的营养元素按一定的比例配成适于菌体生长繁殖的培养基。

基本配方为氯化铵0.2%、碳酸氢钠0.1%、醋酸钠0.3%、磷酸二氢钾0.03%、硫酸镁0.01%、酵母膏0.05%、蛋白胨0.05%、微量元素母液0.1%。

如制固体培养基再加20%琼脂。

1.3 培养生态条件1.3.1 pH值：光合细菌生长的酸碱度范围为微酸性到中性, pH值在6.5一7.5, 在培养过程中, 需要定时测定培养液的pH值变化。

1.3.2 光照室内用25一60W白炽灯作光源, 注意培养物不能离灯泡太近。

光强度一般为1000-2000Lux。

1.3.3 温度光合细菌适温为10一35℃ , 最适25一28℃。

据我们观察, 光合细菌能耐较高温度, 在40一42℃时仍生长正常。

1.4 培养方法光合细菌的生产性培养一般采用三级培养法。

一级培养采用试管或小型盐水瓶, 其生长培养基需先经高压灭菌（温度121℃、压力15磅、时间20分钟）, 然后在无菌条件下, 按规程进行接种, 接种量10%一20%, 接种后于适宜温度与光照条件下进行培养。

光合细菌的培养及应用方法光合细菌(简称PSB)是地球上最早出现具有原始光能合成体系的原核生物，是一大类在厌氧条件下进行不放氧光合作用的细菌的总称，广泛存在于地球生物圈的各处。

光合细菌在水产养殖上的应用主要有以下五个方面：作为养殖水质净化剂；作为饲料添加剂；用于鱼、虾、贝幼体的培育；作为动物性生物饵料的饵料；防治鱼病。

一、培养工具的消毒方法1．加热消毒法：利用高温杀死微生物的方法。

（1）直接灼烧：此法可直接把微生物烧死，灭菌彻底，但只适用于小型金属或玻璃工具的消毒。

（2）煮沸消毒：一般煮沸5～10分钟，适用于小型容器、工具的消毒。

（3）烘干箱消毒：亦称为恒温干燥箱消毒法。

2．化学药品消毒法：适用在批量培养中，大型容器、工具、玻璃钢水槽和水泥池中。

（1）酒精：浓度为70％的酒精常用于中、小型容器的消毒。

用纱布蘸酒精在容器、工具的表面涂抹，10分钟后，用消毒水冲洗两次即可。

（2）高锰酸钾：按300ppm配成高锰酸钾溶液，把洗刷洁净的容器、工具放在溶液中浸泡5分钟，取出，再用消毒水冲洗2次～3次即可。

二、光合细菌的培养条件1、营养条件光合细菌细胞体构成元素主要有：碳、氢、氧、氮、磷、钾、钠、镁、钙、硫和一些微量元素等，它们也是所有生物细胞构成的主要物质。

一般情况下，比重：水占80％-90％、无机盐1％-1.5％、蛋白质7％-10％、脂肪1％-2％、糖类和其它有机物1％-1.5％。

其中干细胞含碳45％-55％、氢5％-10％、氧20％-30％、氮5％-13％、磷3％-5％、其它矿物元素3％-5％。

光合细菌的细胞膜具有半透性，能选择性地让营养成分按一定需要进细胞内，在酶的作用下合成自己的细胞组分并促进分裂新的个体。

营养元素的全面合理的搭配,是培养高产光合细菌的关键。

根据这一要求,郑州@@@@生物材料公司选用多种光合细菌生长必需的原料，科学配方，经特殊加工而成的"光合细菌发生剂（培养基）"，基本符合光合细菌生长繁殖所需的营养要求，无毒无副作用，使用安全，固状结晶体便于包装和运输，而且有2年的保质期。

光合细菌的分离、培养和鉴定摘要：从南湾水库大坝下层水域取水样获得一株光合细菌。

采用多种培养基分离方法分离出纯培养物。

进行了菌落形态学观察和亚显微观察。

于不同条件下培养后分别测定光密度和生长曲线。

实验证实分离到的菌种为沼泽红假单胞菌。

关键词：生长曲线；沼泽红假单胞菌；光合细菌The separation and culture and identified of photosynthetic bacteria Abstract:A strain sample of photosynthetic bacteria was got from the lower water in South Bay Reservoir. using a variety of separation methods to get pure cultures. It was cultured with various medium to culture the pure strains. Transmission election micrographs and microscope were observed of the strain. The optical density (OD) and the growth curve were measured under different conditions. The results suggested that the strain was Rhodopseudomonas palustris.Keywords:Colony and cell; Growth curve; Rhodopseudomonas palustris; Photosynthetic bacteria引言光合细菌由于碳、氮代谢途径和光合作用机制的独特性和其生理类群的多样性, 而被大量关注。

多年来, 光合细菌一直被作为研究光合作用以及生物固氮作用机理的重要材料。

光合细菌简易富集培养及在北方养鱼中的应用光合细菌是一类能够通过光合作用进行自养的微生物。

它们能够利用阳光进行能量转化，并将二氧化碳转化为有机物质。

光合细菌的应用十分广泛，其中在北方养鱼中的应用尤为重要。

本文主要介绍光合细菌的简易富集培养方法以及北方养鱼中的应用。

光合细菌的富集培养是为了提高其在水体中的浓度，使其能够更好地发挥养鱼中的作用。

以下是一种简易的富集培养方法：1. 采集水样：选择富含光合细菌的水样进行采集，可以选择自然水体，如湖泊、河流等。

2. 培养基制备：制备光合细菌的专用培养基。

光合细菌主要是通过光合作用进行能量转化，因此在培养基中需要添加适当的光源，如日光灯或光合作用产生的荧光素。

培养基的成分可以根据光合细菌的种类进行调整。

3. 富集培养：将采集的水样倒入培养基中，适当调整pH值和温度，然后进行培养。

培养时间一般为2-4周，期间需定期观察培养液的变化。

光合细菌会在培养液中形成绿色或蓝绿色的光合膜。

4. 纯化培养：通过稀释法将富集到的光合细菌进行分离纯化，以获得纯种菌株，提高其在养鱼中的应用效果。

光合细菌在北方养鱼中有着重要的应用，主要体现在以下几个方面：1. 水质净化：光合细菌能够通过光合作用将二氧化碳转化为有机物质，并释放氧气。

在养鱼过程中，鱼类排泄的氨氮会导致水体富营养化，光合细菌通过吸收氨氮和有机废物，减少水体中的营养物质，帮助水质净化。

2. 水体富氧：光合细菌能够产生大量的氧气，为鱼类提供充足的氧气供应。

在北方养鱼中，由于水温较低，水体中的溶解氧含量较低，光合细菌的应用可以提高水体中的氧气含量，改善鱼类的生活环境。

3. 水质稳定：光合细菌能够与一些有害细菌竞争营养物质，减少有害细菌的生长。

同时，光合细菌还能够分解一些有机废物，减少水体中有机物的积累，保持水体的稳定。

4. 提高养殖效益：光合细菌在养鱼中的应用可以提高鱼类的生长速度和养殖效益。

光合细菌能够提供光合作用产生的有机物质，提供鱼类所需的能量和养分，促进鱼类的正常生长发育。

光合细菌的培养与应用的开题报告光合细菌是一类能够通过光合作用合成有机物质的细菌，它们具有重要的生态和应用价值。

本文将从培养和应用两个方面论述光合细菌的研究进展。

一、光合细菌的培养光合细菌的培养是研究其生理生化特性和应用价值的基础。

目前，常规细菌培养方法已经能够满足光合细菌的培养需求，但是由于光合细菌对光照的要求较高，因此需要有特殊的培养方法。

1. 常规培养基法常规培养基法是指在含有各类富足营养物质的培养基中培养光合细菌。

这种方法在光照条件下较容易使细菌生长，适用于常见的光合细菌。

2. 光合杯法光合杯法是在培养基表面上方安装一只半球形玻璃杯，杯内装有光合细菌和培养基，并且杯顶开孔可以供光线进入。

这种方法可以满足光合作用的需求，但是操作比较繁琐。

3. 固态培养法固态培养法是将培养基加热后冷却成固态，然后在上面插入光合细菌的菌液，进行培养。

这种方法可以使光合细菌在培养基上生长，但是操作较为复杂。

二、光合细菌的应用光合细菌具有多种应用价值，如生物能源、废水处理和环境修复等方面。

以下是其中几个典型的应用：1. 生物能源光合细菌可以通过光合作用合成有机物质，其产生的氢气和甲烷等可以作为生物能源使用。

因此，利用光合细菌制备生物能源已经成为一种新的环保能源技术。

2. 废水处理光合细菌可以将废水中的有机物质和氮、磷等营养物转化为无害物质，降低废水的污染程度。

因此，通过利用光合细菌处理废水，可以起到净化水环境的作用。

3. 环境修复光合细菌可以利用光能合成生长所需的有机物质，在环境修复中可以应用于污染土壤和水体的修复。

其利用光合作用将有机物质转化为有机废物，并利用有机废物作为营养来源，抑制有毒元素对细菌的污染。

总之，光合细菌的研究和应用具有重要的科学价值和实际应用价值。

未来，将继续深入研究光合细菌的生理与代谢过程，并探寻其在环境保护、能源开发和食品工业等领域的更多应用。

光合细菌分离筛选与培养着色菌属或称红硫菌属的分离与纯化培养，着色细菌与绿菌属一样也是光合细菌，但它们除了含有叶绿素外，还含有胡罗卜素，而且后者占优势。

其细胞除球形外．有柱状，偶有弯曲有荚膜及极生鞭毛，能运动，细胞团块呈深浅不一的红色或紫红色。

在有硫化氢条件下生长时，能氧化硫化氢与硫，累积硫于细胞内，而绿色硫细菌却沉硫于细胞外。

分布在有腐烂藻类植物的海泥和淡水泥中。

1 分离培养基成分及其配制，由于此种完全培养基的有些成分不能在高压灭菌．或在高温下不相容必须先制备好基础培养基，然后把其他成分的无菌溶液加到冷基础培养基中。

（1）基础培养基：NH4Cl 0.1 克 KH2PO40.1 克 MgCl20.05克 NaCl海生种30 克淡水种10克琼脂 20克水 925毫升，溶解以上无机盐于水中，加入琼脂，加热至121℃ 15分钟，使琼脂溶解，分装于试管或螺旋口瓶里．121 ℃蒸汽下灭菌15分钟。

不加琼脂可作为液体培养基。

（2）无菌碳酸氛钠溶液：将NaHCO3 5克加水至100 毫升，在121℃蒸汽下灭菌15 分钟。

（3）无菌硫化钠溶液：此液既作为HS-的来源，又起脱氧剂作用，若是预先配制，必须把它保存在没有氧的密闭容器里，否则应在临用前配制。

取Na2S·9H2O 5克加水至100 毫升，在121 ℃蒸汽下灭菌15分钟．（4）完全培养基：基础培养基（融化冷至45 ℃） 10毫升 NaHCO3溶液 0.4毫升 Na2S9H2O 0.2毫升，依次无菌地如到基础培养基中，混匀后可用。

2.分离与纯化培养（1）分离培养：在广口玻璃瓶底放一层0.5-1厘米厚的混有腐烂海藻的海泥，用海水覆盖，暴露于光下。

直至培养器最靠近光源的壁上长出红色菌为止。

这些红色生长物通常含有着色菌．它的生长决定于泥中硫酸盐的还原，和随后释放的H2S。

（2）纯化培养①深层试管法：a 、选取具有着色菌特征的红色生长物（已用显微镜检查过细胞形态），放于一定量的完全培养液中，混匀。

光合细菌的培养操作教程光合细菌是一类能够利用光合作用合成有机物质的生物，其在环境中起到重要的生态作用。

为了深入研究这类生物的生理特性以及应用价值，需要对其进行培养和研究。

下面是一份光合细菌培养的操作教程，供参考。

材料和试剂：1. 光合细菌试样2. 培养基：根据需要选择不同的培养基，如MB、BG、YL等3. 去离子水4. 凝胶化试剂：如琼脂、墨汁5. 细菌菌液6. 磷酸盐缓冲液（PBS）器材:1. 烧杯和滤器2. 细胞计数器或显微镜3. 热水浴4. 紫外线灯或白炽灯注意事项：1. 操作过程需要在洁净实验室或高洁净级别的实验室中进行，保证实验的干净和安全。

2. 实验员应佩戴手套、口罩、防护服等个人防护设备。

3. 操作过程需要注意细菌的无菌处理，避免外界的污染。

4. 实验中使用的设备和材料需要经过高温等严格消毒处理。

5. 实验结束后需要进行装置、试剂以及实验室的彻底清洁，遵守相关的实验室管理规定。

步骤：1. 准备培养基：根据需要选择不同的培养基，如MB、BG、YL等，按照规定的配方和使用方法进行制备。

最终制得无菌培养液需要经过高温杀菌处理。

使用前需要恢复至常温。

2. 分离培养：将光合细菌试样转移到培养基中，利用滤器进行分离培养，避免外界污染。

将分离后的培养基倒入烧杯中，利用自然光照射，同时对照组也要放置同一消光程度的无菌水。

为了防止过长时间的光照对培养的影响，适当的自然光和人工灯光交替使用。

3. 凝胶化试剂制备: 凝胶化是通过琼脂或墨汁等材料调制的粘稠液体用于生物器官或细胞等所附着于表面的固定试剂。

4. 菌落观察：观察所得菌落的孔菌荚和菌色等方面是否符合典型的光合细菌特征。

通过显微镜或细胞计数器进行定量观察，以获得更为精确的数据。

5. 细胞处理：将光合细菌移至洁净的烧杯中，利用PBS等缓冲液冲洗菌液，次数视要求而定。

遵循无菌操作流程，避免污染。

6. 细胞计数：将处理好的细胞盛放在细胞计数器中进行计数，获取培养菌液的分散度和生长情况，以及对营养和修饰剂的作用情况的反应展示。

实验二光合细菌的分离与纯化(红螺菌科细菌的富集培养、分离及纯化)一、目的要求学习并掌握从高浓度有机废水或污泥中采样、富集培养、分离、纯化红螺菌科细菌。

了解培养兼性光能异养型细菌的培养基和培养方法。

二、实验材料(一) 菌源高浓度有机废水污染的污泥。

(二)培养基红螺菌科细菌分离和增殖培养基(三)仪器厌氧光合培养装置。

(四)其他物品玻璃圆桶标本缸、稀释分离用的无菌水、无菌培养皿、移液管、玻璃涂棒等。

三、实验内容(一)采样红螺菌科细菌广泛分布于高浓度有机废水中，可在柠檬酸发酵厂、味精厂、抗生素发酵厂、豆腐工场、洗羊毛工场等地任选择一处废水直接排放口，用无菌铲子直接取生长有光合细菌的底泥50—l00g，装入透明的玻璃圆捅标本缸内，再取上述有机废水l00m1，加入本缸内，带回实验室。

采样时记录地点、日期、水温、pH、有否H2S等气味。

(二)富集培养利用生理特性上的差异，选择性地使所需光合细菌生长，而抑制另一类光合细菌增殖。

我们使自然水域厌气层中发生的生态学现象重现圆桶玻璃标本缸里。

将200 m1红螺菌科细菌培养液倒入缸中，与底泥、污水搅拌均匀，然后在标本缸上层液面小心加入液体石蜡以隔绝空气，在25℃－35℃下用5000-10000 lx的光照强度进行光照培养2－8周(最好用白炽灯，40-60 w，圆桶玻璃标本缸应放在离电灯15－50 cm处，见图6－3－1)。

数周后，圆桶玻璃标本缸内各种微生物均生长起来，由于发酵性细菌、硫酸盐还原细菌增殖，水层中积累了CO2和H 2S，满足了光合细菌的营养来源，造成厌气状态，于是光合细菌大量繁殖，由于厌氧、光照条件控制．标本缸玻璃壁上出现红色菌落状菌团。

图6-3-1 光合细菌的富集培养法然后用无菌滴管自光合细菌生长良好的圆桶玻璃标本缸内壁处，吸取红色细菌和污水汁l—2滴，移植到另一圆桶玻璃标本缸中或试剂瓶中，加灭过菌的红螺菌富集培养液，培养液加至瓶中，试剂瓶加盖橡皮塞，用胶布封口，造成厌氧状态，继续光照、厌氧培养时保持28℃，圆桶玻璃标本缸或试剂瓶中菌的颜色逐渐改变，培养物的颜色因菌种不同而界，可变为红色、紫色或茶色。

光合细菌的培养及其在水产养殖中的应用光合细菌简称, 是一群能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用有机物作供氧体兼碳源, 进行不放氧光合作用的细菌, 广泛分布于水田、湖沼、江河、海洋、活性污泥和土壤中近年来, 光合细菌应用于水产养殖业并取得显著效果。

我所自年开始光合细菌的培养与应用研究, 在对虾和中华鳌养殖、对虾和泥蜡人工育苗中试用, 均取得较好的效果。

本文根据我们的研究实践, 综合国内外有关文献, 概述光合细菌的培养技术及其在水产养殖中的应用状况。

1. 光合细菌的培养1.1 菌种菌种可从采集的池塘底泥中重复富集、分离纯化获得如用保存下来的菌种, 在培养前必须提纯复壮, 才能有效地进行扩大培养。

目前养殖中使用的光合细菌多为红螺菌科和一部分着色菌科的复合菌株, 因为复合型菌株能利用多种碳源, 易于培养, 能更为广泛有效降解水中低分子有机物。

1.2 培养基光合细菌培养中除碳、氮、磷等主要营养元素外, 还需要一定的镁、钙、钠及有关微量元素, 将所需的营养元素按一定的比例配成适于菌体生长繁殖的培养基。

基本配方为氯化铵0.2%、碳酸氢钠0.1%、醋酸钠0.3%、磷酸二氢钾0.03%、硫酸镁0.01%、酵母膏0.05%、蛋白胨0.05%、微量元素母液0.1%。

如制固体培养基再加20%琼脂。

1.3 培养生态条件1.3.1 pH值：光合细菌生长的酸碱度范围为微酸性到中性, pH值在6.5一7.5, 在培养过程中, 需要定时测定培养液的pH值变化。

1.3.2 光照室内用25一60W白炽灯作光源, 注意培养物不能离灯泡太近。

光强度一般为1000-2000Lux。

1.3.3 温度光合细菌适温为10一35℃ , 最适25一28℃。

据我们观察, 光合细菌能耐较高温度, 在40一42℃时仍生长正常。

1.4 培养方法光合细菌的生产性培养一般采用三级培养法。

一级培养采用试管或小型盐水瓶, 其生长培养基需先经高压灭菌（温度121℃、压力15磅、时间20分钟）, 然后在无菌条件下, 按规程进行接种, 接种量10%一20%, 接种后于适宜温度与光照条件下进行培养。

光合细菌的培养及应用方法光合细菌是一类能够进行光合作用的细菌，通过光合作用将光能转化为化学能并合成有机物质。

尽管光合细菌的数量和种类相对较少，但它们在生态系统的功能和应用方面具有重要作用。

光合细菌在环境修复、生物能源产生、食品工业以及医学领域中都存在重要应用。

为了进行对光合细菌的有效培养和应用，下面介绍光合细菌的培养及应用方法。

一、光合细菌的培养方法1. 培养基选择和制备：光合细菌可以使用富含碳源、氮源和无机盐的培养基进行培养。

例如，常用的培养基可以包括Gao's培养基和Harrison培养基。

培养基的pH应在6.5-7.0之间，温度应保持在适宜的生长温度范围内。

2.培养条件的调节：培养条件对光合细菌的生长和光合作用非常重要。

光合细菌需要光照以进行光合作用，所以需要提供适当的光照条件。

一般来说，白天至少需要12小时的光照，光照强度一般在1000-2000勒克斯之间。

此外，还需要调节培养基的气体成分，保持适当的氧气和二氧化碳浓度。

3.培养方法的选择：光合细菌可以选择液体培养和固体培养两种方法。

液体培养适合大规模培养和实验目的，而固体培养适合用于分离和纯化光合细菌。

4.培养物的处理：在培养过程中，需要定期检查培养物的生长情况和纯度。

如果发现有杂菌污染，需要进行分离和纯化处理。

5.培养物的保存：光合细菌的保存可以使用冻存法或冻干法。

冷冻保存的方法可以将光合细菌保存在-80℃以下，而冻干法则需要先将培养物冷冻，然后在真空下去除冷冻水。

二、光合细菌的应用方法1.环境修复：光合细菌具有分解有毒物质和污染物质的能力，可以通过光合作用将有害物质转化为无害的物质。

因此，光合细菌可以应用于环境修复领域，例如处理废水和土壤修复。

2.生物能源产生：光合细菌可以利用太阳能合成有机物质，并产生氢气或甲烷等能源物质。

这些能源物质可以应用于生物能源产生领域，为可再生能源的开发提供新的途径。

3.食品工业：光合细菌可以产生一些有益的物质，例如胶体、营养酵素等，可以应用于食品工业中。