发酵来源的化学药物的菌种鉴别

酸奶菌种的分离及鉴定（5篇）第一篇：酸奶菌种的分离及鉴定酸奶菌种的分离及鉴定乳酸菌是指一群通过发酵糖类，产生大量乳酸的细菌总称。

乳酸从形态上可分为球菌和杆菌，并且均为革兰氏染色阳性、在缺少氧气的环境中生长良好的兼性厌氧性或厌氧性细菌。

目前，对乳酸菌的应用研究，着重于食品（如发酵乳制品、发酵肉制品和泡菜）和医药工业等人类生活密切相关的领域。

目前市售的各种酸奶制品中, 作为发酵剂的乳酸菌, 通常为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌这两株菌。

用嗜热链球菌和保加利亚乳酸杆菌混合培养发酵的乳酸饮品能补充人体肠道内的有益菌，维持肠道的微生态平衡，且含有易于吸收的营养素，具有抑制腐败菌、提高消化率、防癌及预防一些传染病等功效，并能为食品提供芳香风味，使食品拥有良好的质地。

保加利亚乳杆菌（L.Bulgarius）:长杆形，直径1-3mm左右,能产生大量的乳酸。

酸碱度方面,为耐酸或嗜酸性,因低pH能防止一些微生物的生长;温度方面,为嗜温至少许嗜热,最适生长温度在37-45℃之间,对低温非常敏感。

嗜热链球菌（S.thermophilus）：卵圆形，直径0.7－0.9微米，呈对或链状排列，无运动性。

为健康人肠道正常菌群，可在人体肠道中生长、繁殖。

可直接补充人体正常生理细菌，调整肠道菌群平衡，抑制并清除肠道中对人具有潜在危害的细菌。

本研究对市售主要品牌酸奶中（河南花花乳业生产的酸奶）乳酸菌进行了分离鉴定，并进一步探讨制备酸奶条件（温度、时间等），以达到最佳的天然酸奶质量效果。

一、实验内容（1）乳酸菌的分离纯化1．无菌操作倒平板、十倍稀释、划线分离，恒温培养2．菌落观察与镜检 3．筛选生产用菌株（2）优化酸奶制作条件1．制备发酵液2．不同条件下，接种发酵菌剂并发酵生产 3．观察发酵情况4．品尝发酵产品，进行质量评价 5．记录结果二、实验器材1）菌种：新鲜乳酸饮料（标记只含有保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌）2）试剂：脱脂奶粉、蔗糖、1.6%溴甲酚绿乙醇溶液(溴甲酚绿、无水乙醇)、酵母膏、琼脂、革兰氏染液（结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、沙黄）、75%乙醇、香柏油、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、碳酸钙；0.4gNaOH固体、4.2ml浓HCL(分析纯)、20gCaCO3固体、酵母膏20g、琼脂30g香柏油、脱脂奶粉100g、蔗糖10g；3）仪器：高压蒸汽灭菌锅、恒压干热灭菌箱、超净工作台、光学显微镜、培养箱、pH试纸、酸乳瓶、培养皿（φ9或φ12）、试管、300ml三角瓶（带玻珠）、移液管、天平、牛角匙、电炉、量筒、漏斗、漏斗架、玻璃棒、棉塞、吸管、线绳、标签、500ml锥形瓶、250ml锥形瓶、250ml烧杯、酒精灯、石棉网、接种针（环）、擦镜纸四、实验方法4.1乳酸菌的分离纯化 4.1.1分离(1)配制BCG牛乳培养基，分装三角瓶，包扎，灭菌备用。

菌种鉴定方法及步骤菌种鉴定是指通过对菌株样本进行系统学、形态学、生理学和生化学等各方面的观察与检测，以确定其属、种分类地位的过程。

菌种鉴定方法及步骤如下：2.制备纯培养物：分离并得到纯培养菌株，避免混杂的现象。

3.形态学观察：观察菌株的形态特征，包括菌落形态、菌落颜色、菌丝生长特征等。

4.微观形态学观察：观察菌株的细胞形态、孢子形态、菌丝形态等。

5.分类地位确定：通过对菌株的形态特征进行比对和研究，确定其属、种分类的地位。

1.生长条件观察：观察菌株在不同的生理因素（如温度、pH值、氧气含量等）下的生长情况。

2.营养需求观察：观察菌株在不同营养物质（如碳源、氮源等）的利用情况，以及对不同抗生素和化学物质的敏感性。

3.生化特征检测：进行生化试验，如氧化酶试验、氧化发酵试验、内酯酶试验等，以检测菌株的生化特征。

4.产物检测：检测菌株的代谢产物，如抗生素、酶等，以判断其代谢途径和功能。

1.提取菌株基因组DNA：通过细菌培养物提取菌株的基因组DNA。

2.PCR扩增：使用特异性引物进行PCR扩增，选择适当的靶基因进行扩增。

3.DNA测序及分析：对扩增的DNA产物进行测序，利用生物信息学方法对测序结果进行分析和比对。

4.基因序列比对：将测序结果与数据库中已知菌种的基因序列进行比对，以确定菌株的分类地位。

四、传统鉴定方法的优缺点1.优点：传统鉴定方法操作简单，成本低廉；不需要复杂设备，适用于一般实验室进行菌株鉴定。

2.缺点：传统鉴定方法对菌株鉴定仅限于形态学、生理学和生化学等方面的观察，鉴定结果存在一定的主观性和局限性；需要较长的时间才能得到鉴定结果。

五、分子生物学鉴定方法的优势1.高精确性：分子生物学鉴定方法通过对菌株的基因序列进行比对，可得到较高的精确性，减少了主观性和局限性。

2.快速性：分子生物学鉴定方法在提取DNA和PCR扩增等步骤后，可以迅速得到鉴定结果，节省了时间。

3.可靠性：分子生物学鉴定方法的结果具有较高的可靠性，有助于解决传统鉴定方法在分类地位判断方面的困难。

菌种鉴定标准操作规程目的：建立菌种鉴定标准操作规程范围：适用于******鉴定标准操作职责：内容：1整体操作步骤1.1纯化、分离待鉴定菌用接种环挑取待鉴定菌落或少许含菌溶液到相应的培养基上（如TSA），划线分离，以出现微生物单菌落为止。

1.2挑取纯化后的单菌落，进行革兰染色、镜检，以确定待鉴定菌的革兰属性。

1.3如镜检结果为革兰阴性杆菌，则先进行发酵实验。

如发酵实验结果为阴性，则选用API20NE试剂条进行鉴定；如发酵实验结果为阳性，则在经过细胞色素氧化酶实验后选用API20E试剂条进行鉴定。

1.4如镜检结果为革兰阳性球菌，则先进行过氧化氢酶实验。

如实验结果为阴性则选用API Strep试剂条进行鉴定，如实验结果为阳性则选用API Staph试剂条进行鉴定。

1.5假如镜检结果为革兰阳性杆菌并且有内生芽胞，则选用API 50CHB试剂条进行鉴定；否则，根据运动性实验和过氧化氢酶实验结果选用API Coryne或其他试剂条进行鉴定。

1.6选定正确的试剂条以后，根据不同的API试剂条的标准操作规程准备接种物，进行接种、培养等操作并将结果形成数码，用API鉴定软件鉴定或查询待检菌的名称均可。

鉴定结果应记录，必要时，给出相应解释。

2革兰氏染色2.1染色剂的配制2.1.1结晶紫染色液：甲液：结晶紫 1.0g95%的酒精20ml乙液：草酸铵0.8g水80ml将甲液和乙液混合均匀，静置48h使用，置密闭棕色瓶中储存。

2.1.2碘液：碘 1.0g碘化钾 2.0g水300ml配制时先用3～5ml水将碘化钾溶解，再加入碘，用力摇匀，使之全部溶解后，再加水稀释至300ml，摇匀，分装在棕色瓶中储存。

2.1.3稀石碳酸红溶液:碱性品红 1.0g石碳酸 5.0ml95%乙醇10.0ml配制时用乙醇溶解碱性品红，然后加入石碳酸溶液，使用时加水稀释至100ml，摇匀。

2.2操作:2.2.1涂片：用接种环挑取液体培养物中菌体在载玻片上涂成薄层，固体培养物则先在载玻片上滴一滴蒸馏水或生理盐水，用接种环挑取少量菌体在载玻片上涂成薄层。

发酵大肠杆菌染杂菌鉴定方法（原创实用版3篇）《发酵大肠杆菌染杂菌鉴定方法》篇1发酵大肠杆菌染杂菌的鉴定方法通常包括以下步骤：1. 采集样本：采集发酵大肠杆菌染杂菌的样本，例如发酵液或菌落，进行检测。

2. 分离和纯化：将样本中的杂菌分离出来，并进行纯化培养，得到单个菌落。

3. 鉴定菌种：通过菌落形态、生长特性、生化反应等方法，对分离出来的单个菌落进行鉴定，确定其菌种。

4. 检测发酵大肠杆菌的活性：通过检测发酵大肠杆菌的代谢产物、酶活性等指标，确定其活性是否受到杂菌的影响。

常用的检测方法包括微生物学检测方法、分子生物学检测方法等。

《发酵大肠杆菌染杂菌鉴定方法》篇2发酵大肠杆菌染杂菌的鉴定方法通常包括以下步骤：1. 菌落形态观察：将发酵大肠杆菌染杂菌样本涂布在含有伊红美蓝指示剂的培养基上，菌落呈深紫色，并有金属光泽。

2. 涂片镜检：将发酵大肠杆菌染杂菌样本涂片，用荧光显微镜观察，可以看到菌体周围有弯曲的菌毛和鞭毛。

3. 培养特性检测：将发酵大肠杆菌染杂菌样本分别接种在含不同糖类的培养基上，观察其生长情况。

发酵大肠杆菌能在含有乳糖、蔗糖、麦芽糖等糖类的培养基上生长，而其他细菌则不能。

4. 生化反应测试：将发酵大肠杆菌染杂菌样本分别进行糖类发酵试验、靛基质试验、脲酶试验等生化反应测试，根据反应结果进行鉴定。

5. 16S rRNA 基因序列分析：对于难以通过上述方法鉴定的菌株，可以进行16S rRNA 基因序列分析，通过比对序列确定其属于哪一类菌株。

《发酵大肠杆菌染杂菌鉴定方法》篇3发酵大肠杆菌染杂菌的鉴定方法通常包括以下步骤：1. 菌落形态观察：将发酵大肠杆菌样品涂布在含有伊红美蓝指示剂的培养基上，菌落呈深紫色，并有金属光泽。

而杂菌菌落则呈淡紫色或无色，无金属光泽。

2. 涂片镜检：将发酵大肠杆菌样品涂布在载玻片上，加入适量的生理盐水，盖上盖玻片，在显微镜下观察。

发酵大肠杆菌的细胞呈短杆状，两端钝圆，单个存在。

发酵食品中乳酸菌的菌种鉴定与优化发酵食品已经成为人们餐桌上不可缺少的一部分，而乳酸菌作为发酵的关键成分，在其中发挥着重要的作用。

乳酸菌不仅可以增加食品的口感和风味，还能提供人体所需的益生菌，对于维持肠道健康和促进免疫系统功能有益处。

因此，对发酵食品中乳酸菌的菌种鉴定与优化显得尤为重要。

菌种鉴定是发酵食品生产中必不可少的一环。

通过准确鉴定乳酸菌的菌种，可以确保产品的质量和安全性。

传统的菌种鉴定方法主要依赖于形态学和生理学特征，如形状、色素、生长温度等。

然而，这些方法存在一定的局限性，不仅需要耗费大量时间和人力，而且对技术要求较高。

因此，现代的分子生物学方法逐渐被应用到菌种鉴定中。

PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学技术，可以准确鉴定乳酸菌的菌种。

通过设计特异性引物，可以从菌落或食品样品中扩增目标DNA片段，并利用电泳技术测定DNA的迁移速率，从而确定乳酸菌的菌种。

此外，最近兴起的高通量测序技术也为菌种鉴定带来了革命性的突破。

通过对乳酸菌样品进行DNA提取、测序，再与已知菌种的DNA序列进行比对，就可以快速准确地鉴定乳酸菌的菌种。

除了鉴定菌种，优化乳酸菌的生长条件也是提高发酵食品品质的重要环节。

乳酸菌对温度、pH值等环境因素敏感，不同菌种对环境的适应性也不同，因此合理的生长条件可以促进乳酸菌的生长和代谢产物的形成。

目前，常用的优化方法主要包括传统的单因素实验和统计学方法。

传统的单因素实验通过改变一个因素，如温度或酸碱度，来观察其对乳酸菌生长的影响。

这种方法简单直观，容易掌握，但繁琐且耗时。

与之相对的是统计学方法，如响应面法和正交试验设计。

这种方法能够同时考虑多个因素之间的相互作用和影响程度，从而找到最优条件。

通过这些方法，可以优化乳酸菌的生长条件，提高其存活率和代谢产物的质量。

发酵食品中乳酸菌的菌种鉴定与优化是一个综合性的过程，需要借助于多种技术和方法。

通过科学合理的菌种鉴定和生长条件优化，可以提高发酵食品的质量和产品的市场竞争力。

发酵工程设计菌种筛选方案第一步：确定目标产物在菌种筛选之前，首先需要确定目标产物是什么。

这个产物可以是食品添加剂、药物、化学品等。

确定目标产物后，可以确定需要的菌种类型，例如革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌等。

此外，还需要确定产物的生产条件，例如温度、pH值、氧气需求等。

第二步：收集菌种资源在进行菌种筛选之前，需要先收集各种潜在的菌种资源。

这些资源可以通过从自然环境中进行采集、从已有的菌种库中获取或者通过其他方式获取。

一般来说，我们需要收集大量的菌株资源，以便进行后续的筛选工作。

第三步：菌种初步筛选在收集到菌株资源后，需要进行初步的筛选。

这一阶段的目标是快速地排除那些不太可能产生目标产物的菌株。

菌株的筛选可以通过观察菌落形态、生长速度、色素产生等方法进行。

第四步：菌种培养条件的优化在进行初步筛选后，我们需要对筛选出来的菌株进行培养条件的优化。

这包括温度、pH 值、培养基成分等。

通过优化培养条件，可以进一步筛选出对目标产物生产更为适合的菌种。

第五步：菌种产量的筛选在确定了合适的菌种后，需要进行产量的筛选工作。

这一阶段的目标是确定哪些菌株在相同的培养条件下可以产生最高的目标产物产量。

这一步通常需要进行大规模的培养实验。

第六步：菌种稳定性的筛选最后，需要对筛选出来的菌株进行稳定性的评估。

确定哪个菌株在不同培养条件下都能稳定地产生目标产物。

这一步通常需要进行长期的培养实验。

综上所述，菌种的筛选是一个复杂而又关键的工作。

通过以上的步骤，可以有效地筛选出适合生产目标产物的菌株，为发酵工程的成功提供保障。

246 2007, Vol. 28, No. 06 食品科学※生物工程臭豆腐发酵菌种的筛选与鉴定卢义伯，潘超*，祝义亮(南京雨润集团技术中心，江苏南京 210041)摘要：采用定性培养和定量培养的方法，从臭豆腐发酵乳液中分离筛选出优势菌种，并采用菌种鉴别试纸条进行鉴定。

分析表明，荧光假单孢菌是臭豆腐发酵过程中的优势菌种，霉菌在臭豆腐发酵乳液中数量远小于细菌，实验结果为臭豆腐的工业化生产提供了理论依据。

关键词：臭豆腐；菌群筛选；鉴定Bacterium Screening and Identifying from Stinky TofuLU Yi-bo，PAN Chao*，ZHU Yi-liang(Technical Center of Nanjing Yurun Group, Nanjing 210041, China)Abstract：Dominant bacterium is separated from stinky tofu qualitatively and quantitatively, identified with indicator paper.It was concluded that pseudomonas (PS.fluo./putida) is the dominant bacterium but amount of mould is relatively small. This assayaffords the theoretical basics for industrial production of stinky tofu.Key words：stinky tofu；bacterium screening；identification中图分类号：Q93-331 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2007)06-0246-04臭豆腐是南京秦淮特色风味小吃，同时也是中国人臭豆腐发酵乳液取自农家制作的臭豆腐发酵乳民的传统美食，受到广大青少年的青睐。

乳酸菌的鉴定吲哚试验1）.试管标记：取装有蛋白胨水培养基的试管2支，分别标记乳酸菌和空白对照。

2）.接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔到标记乳酸菌的试管中，标记有空白对照的不接种，置37摄氏度恒温箱中培养24~48小时。

3）.观察记录：在培养基中加入乙醚1~2 ml ,经充分振荡，使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5~10滴吲哚试剂，如有吲哚存在，乙醚层呈玫瑰色，此为吲哚试验阳性反应，否则为阴性反应。

糖发酵试验1）.试管标记：取分别装有葡萄糖，蔗糖发酵培养液试管各2支，每种糖发酵试管中分别标记乳酸菌和空白对照。

2）.接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养液的空白对照均不接菌。

将装有培养液的杜氏小管倒置试管中，置37摄氏度恒温培养箱中培养24小时，观察结果。

3）.观察记录：与对照管比较，若接种培养液保持原由颜色，其反映结果为阴性；如果培养液呈黄色，反映结果为阳性。

培养液中的杜氏小管内有气泡为阳性反应，杜氏小管内没有气泡为阴性反应。

1.2.3 乳酸的检测选用已经分离的菌种做小型发酵实验，取发酵液的上清液约10 ml于试管中，加入10%硫酸1 ml ,再加2%高锰酸钾 1 ml ,此时乳酸转化为乙醛，把事先在含氨的硝酸银溶液中侵泡的滤纸条搭在试管口中，微火加热试管至沸，观察滤纸变化。

1.结果和分析2.1 乳酸菌的分离提纯在平板上出现了圆形稍扁平的黄色菌落，周围培养基变为黄色，初步定为乳酸菌⑴，取出少量在显微镜下观察到了链球状和杆状两种形状（如图一2.2乳酸菌的鉴定该菌种的菌落为圆形稍扁平的黄色菌落，有杆状和链球状两种形状。

在吲哚试验中，加入菌种的试管无任何变化，证明为阴性反应（如图二）。

说明该菌不具有分解色氨酸产生吲哚的能力。

也说明此菌种不是大肠杆菌，因为大肠杆菌的吲哚试验证明为阳性。

在糖发酵试验中，在加入葡萄糖的发酵培养液中加入菌种后，培养液变为黄色，反应结果为阳性，且杜氏小管内无气泡（如图三）；加入蔗糖的发酵培养液中加入菌种后的反应结果也为阳性且杜氏小管内无气泡（如图四）。