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石蜡切片的主要步骤石蜡切片是一种常用的制备薄片的技术，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。
本文将介绍石蜡切片的主要步骤，并详细说明每个步骤的操作方法和注意事项。
1. 样品固定和处理在进行石蜡切片之前，首先需要对待切样品进行固定和处理。
固定样品的方法可以根据实验的需要选择，常用的有乙醛固定、冰醋酸固定和福尔马林固定等。
处理样品的方法也根据实验目的而定，可以包括染色、脱水、透明化等步骤，以便更好地观察和研究样品。
2. 包埋将处理好的样品包埋在石蜡中，以便进行切片。
首先，将样品放入石蜡溶液中，使其充分浸泡。
然后，将石蜡溶液转移到恒温水浴中，使其逐渐固化。
在固化过程中，要确保样品均匀分布在石蜡中，避免出现气泡和空洞。
3. 切片切片是石蜡切片过程中最关键的一步。
首先，将固化的石蜡块从模具中取出，并放置在切片机的夹持装置上。
然后，调整切片机的切片厚度和速度，根据需要选择合适的参数。
接下来，使用切片刀将石蜡块切割成薄片。
在切割过程中，要保持手稳定，避免切片厚度不均匀或出现断层。
4. 切片取片切片切割完成后，需要将切片从切片刀上取下。
首先，使用镊子将切片从切片刀上小心取下，避免损坏或弯曲切片。
然后，将切片放置在预先准备好的载玻片上。
在放置切片时，要注意避免气泡的产生，可以使用专门的工具如细管吸气来帮助排除气泡。
5. 去除石蜡和染色切片取片后，需要将切片上的石蜡去除，并进行染色处理。
首先，将切片放入去石蜡剂中，使其充分浸泡。
然后，将切片转移到浸泡染色剂中，进行染色处理。
在去石蜡和染色过程中，要注意时间控制和温度控制，以确保染色效果和切片质量。
6. 封片和封边染色完成后，需要将切片做成封片，以保护切片并便于保存。
首先，将切片用透明胶片或玻璃片覆盖。
然后，使用封片胶或封片胶带将切片和覆盖物固定在一起。
接下来，将切片的边缘进行封边处理，以避免切片脱落或污染。
7. 干燥和贴标封片完成后，需要将切片进行干燥处理，并进行贴标。
石蜡切片法的原理及应用1. 石蜡切片法的原理•石蜡切片法，也称为石蜡切片技术，是一种常用于生物组织切片和植物切片的方法。
它是将生物样本或植物材料浸泡在石蜡中，并使用切片机将其切割成薄片的技术。
石蜡切片法的原理基于石蜡的特性和切片机的工作原理。
•石蜡是一种固态蜡状物质，具有良好的可模塑性。
它的熔点较低，在55-60摄氏度范围内熔化，使得将样本浸泡在石蜡中能够快速固化和切割。
切片机通过旋转刀片和样本的移动来切割石蜡固化后的样本，从而得到薄片。
•石蜡切片法的原理包括以下几个步骤：–样本固定：将生物组织或植物材料固定在切片床上，通常通过福尔马林等化学物质进行固定。
–组织处理：将固定后的样本进行去水化和脱脂处理，以去除水分和脂肪等物质，使样本更易于渗透和固化。
–石蜡浸渍：将处理后的样本浸泡在石蜡中，使石蜡渗透到样本组织中，并使其固化。
–切片制备：将石蜡固化的样本放置在切片机上，通过旋转刀片和样本的移动来切割石蜡，得到薄片。
–切片染色：将薄片固定在载玻片上，并进行染色处理，以增强样本的可视化效果和对细胞结构的观察。
2. 石蜡切片法的应用•石蜡切片法在生物医学研究、临床医学和植物学等领域具有广泛的应用价值。
以下是石蜡切片法的一些主要应用：2.1 生物组织切片•生物组织切片是石蜡切片法最常见的应用之一。
通过石蜡切片法可以将生物组织固化并切割成薄片，用于观察和研究组织的结构和功能。
生物组织切片可用于研究疾病的病理学特征、细胞增殖和分化等过程。
2.2 病理分析•石蜡切片法在病理学方面具有重要的应用。
通过切割和染色石蜡切片，可以观察到细胞核、细胞质和细胞间质等组织成分的细微结构，实现对肿瘤、感染和其他疾病的病理分析和诊断。
2.3 细胞学研究•石蜡切片法可用于细胞学研究，通过切割和染色石蜡切片，可以观察细胞的形态、结构和功能等特征，对细胞的增殖、分化和凋亡等过程进行研究。
细胞学研究在癌症和其他疾病的研究中具有重要的意义。
石蜡切片法在显微镜下观察植物体内部的细微结构之前,必须根据植物材料的特性,采用不同的方法,对植物材料进行处理,把材料制成透明的玻片标本.根据材料的性质和制作法的不同,常用的植物显微制片技术可以分为切片法与非切片法两大类,前者常用的有徒手切片法,冰冻切片法,火棉胶切片法,石蜡切片法,冷冻切片法等,其中以石蜡切片法最为常用.后者包括整体封藏法,涂布法,压片法等.石蜡切片法石蜡切片法是以石蜡作包埋剂,用旋转切片机将材料切成薄片,经一系列处理制成永久制片的方法.在研究植物的细胞,组织,胚胎以及形态等方面石蜡切片法是最理想的制片方法.石蜡切片法的一般流程为:取材→固定→抽气→洗涤→脱水→透明→浸蜡→包埋→修块→切片→粘片→染色→封片.取材用锋利的刀片切取新鲜的植物材料,选定适宜的材料,立即固定.取材的注意事项如下:(1)取材料要新鲜.动作要迅速,以免挤压损坏组织;取病理材料时,应设置对照材料.(2)所取材料大小要适当:根和茎一般直径≤5mm,切取成5-10mm小段;叶片一般取过中脉处,切成2-5mm宽,5-8mm长.在切材料时,必须注意刀片与中轴成直角,两切面平行,否则制成的切片细胞是斜的.雌,雄蕊一般不需分割.(3)取材时间可根据切片要求有所区别.如:在进行植物发育的研究过程时,需要找到细胞分裂相,一般在晴天的早晨9:00-10:00时取材,此时植物细胞分裂活动较明显.(4)取材不易过老,否则制片有难度(过老的材料须在滑走切片机上进行);对纵切的材料适当多取材,如根尖,茎尖等,因为切到材料正中的概率较低.(二)固定将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积的固定液中.借助固定液的作用,使细胞的新陈代谢瞬时停止,并保持细胞或组织的形态构造及其内含物的状态不发生变化.从而达到使组织变硬从而便于切片,增强内含物的折光度,令细胞易于着色的目的,同时具有防腐作用.以新鲜配制固定液效果较好.固定的时间依材料的种类,性质,大小等而定.材料固定完毕,保存于加盖的容器内,贴上标签.良好的固定剂,应是穿透力强,使细胞立刻致死,原生质全部凝固;不发生任何变形,增强折光率,并且不妨碍染色.常用固定液:简单固定液以一种化学药品配制的固定液.⑴乙醇为凝固型固定剂.常用无水乙醇或95%乙醇.⑵甲醛为非凝固性固定剂.具强烈刺激性气味.纯净的甲醛为无色透明液体.固定用的浓度为4%-10%.⑶醋酸为凝固型固定剂.为无色透明的液体,刺激性极强,低温下凝结成冰,故又名冰醋酸.2.混合固定液:由几种试剂,适量配制而成.混合遵循原则:①优缺点互补;②膨胀与收缩相互平衡;③强氧化剂与还原剂应分别配置.常用混合固定液有下列几种:⑴FAA固定液(福尔马林-冰醋酸-乙醇)广泛适用于根,茎,叶,花药,子房的组织切片,所以又称为万能固定液.一般固定时间不低于24h.该固定液优点是在较低温度下(10℃左右)适用于材料的长期保存,可兼作保存液.并且固定的材料,不妨碍染色,但用于细胞学上的固定效果较差.⑵纳瓦兴(Navaschjn's)固定液1912年首创.适用于细胞学与组织学研究的切片观察.但渗透慢,不能长期保存;主要用于显示分裂相.(三)抽气植物材料内部多由于含有空气,导致固定液不能完全深入.材料投入固定液后需要立即抽气.以便让固定液有效透入材料组织中,并排除材料内气泡的干扰.一般抽气时间为20-30min.抽过气的材料在停止抽气,应沉入底部.(四)洗涤固定液中的成分有可能会妨碍染色或发生沉淀或结晶,影响观察;有的还会继续作用,使材料变质等.因此,在使用材料时,需根据固定液的种类,用水,缓冲液或70%乙醇洗去渗入细胞内部的固定液.如:用FAA固定的材料在脱水时用70%乙醇反复洗涤数次.如用水洗涤,可将材料自固定液中取出,放入指形管,加入半管水,用纱布将管口扎紧,置于水槽内,进行流水冲洗.流水冲洗时间一般为12-24h.(五)脱水材料经洗涤后含有部分水分,会使材料分解.而且透明剂与水是不相混合的,不利于材料的透明和包埋等后期处理.因此需用脱水剂逐渐除去材料中的水分,以便让石蜡渗透进细胞.所以,脱水是制片的关键环节.脱水剂要求能与水混合,而且能与其他有机溶剂互相替代.脱水必须在有盖的玻璃器皿中进行,防止吸收空气中的水分;在更换高一级的脱水剂时,最好不要移动材料,以免损坏材料.(六)透明透明剂要具有既能与脱水剂相混合又能和石蜡相混合的性质,可以将材料中的脱水剂置换出来,使石蜡能顺利进入材料中.二甲苯是目前应用最广的透明剂,作用迅速,但易使材料变脆..(七)浸蜡是指逐步清除材料中的透明剂,以使石蜡充分渗透于材料内部的过程.这样,材料的各部分都能保持原来的结构与位置,切片不致发生破裂或其他变形.浸蜡是一个渐进的过程,常用的正丁醇.每次浸蜡的时间,视材料大小而调节.(八)包埋材料经过足够时间的浸蜡后,需包入蜡块,以备切片.操作方法:根据切片材料大小,确定所需纸盒的尺寸,用表面光滑的磅纸预先叠好纸盒.(九)切片即将包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的切片带.(十)贴片是用黏贴剂把切片平铺贴在载玻片上,以便于染色和观察.常用的粘片剂有下列二种:(1)明胶黏片剂(2)蛋清黏片剂(十一)染色即根据植物细胞中不同的化学性质,用染料分别进行染色,以利于观察切片中细胞与组织的形态与构造及其内含物等.染色基本程序为脱蜡,染色,分色封片.染色方法可分为下列几类:①单染只用一种染料染色.②双重染色两种染料染色,如番红--固绿;苏木精---曙红.③多重染色多种染料染色,如番红—固绿—桔红G;酸性品红—苯胺蓝—桔红G等.(十二)封藏封藏于中性树胶中,使材料能在显微镜下清晰地显示出来,并能长期保存.方法:将含材料的载玻片放在吸水纸上(切片一面向上),迅速地在切片的中央滴一滴树胶(必须在二甲苯干燥前进行),用右手持小镊子轻轻地夹住盖玻片的右侧,稍微倾斜使其左侧与封藏剂接触,然后再缓慢地放下,避免产生气泡.补充：注意事项：１、制片是一个连续的操作过程，往往要连续几天才能完成，因此，事先一定要制订工作日程计划，应按顺序进行工作。
石蜡切片的具体步骤与做法？石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。
石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，因此用得最多，它有很多优点：比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片（4um以下），能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存。
缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好，容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。
制片时间太长。
石蜡切片的制作过程（一）材料与用具1．材料：鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。
2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
（二）实验内容与步骤1．取材及固定取动物体上的小块组织成为组织块。
组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。
切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。
组织块取下后，先用先用0.85％的生理盐水漂洗以戏曲血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时。
如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以保持其原有的结构。
不同的组织应选用适当的固定液。
固定液的用量与组织块体积之比一般在20：1。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。
组织块应用纱布包好，注名，放金属水洗网中用流水冲洗，甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时，Bouins固定液固定的组织水洗24小时。
AFA固定液则不需要水洗。
3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
怎样制作石蜡切片制作石蜡切片需要一系列的步骤和材料。
以下是一种常见的制作石蜡切片的方法：1.准备材料和设备：-石蜡块：石蜡是一种透明且易于切片的材料，可以在化学试剂供应商或实验室设备供应商处购买。
-刀片：使用一把锋利的微创刀片来切割石蜡。
确保刀片是干净的，滴一滴乙醇或其他清洁溶液在刀片上擦拭，然后用干净的纸巾擦干。
-切片盒：选择适合的切片盒来放置切割好的石蜡切片。
-石蜡模具：这是一个用于制作石蜡块的模具，可以在实验室设备供应商处购买。
2.制备石蜡块：-首先，将石蜡块加热至约60-70°C，直到完全融化。
-将石蜡块从加热器中取出，小心地倒入石蜡模具中。
-等待石蜡冷却和凝固。
你可以将石蜡模具放入冷却台上以加快冷却过程。
3.切割石蜡块：-将已冷却和凝固的石蜡块从模具中取出。
-使用清洁干燥的刀片将石蜡块切成适当的大小。
你可以根据实验需求来确定切割的尺寸。
4.制备石蜡切片：-准备一张玻璃载玻片。
-小心地将切割好的石蜡片放在玻璃载玻片上。
5.烘干石蜡切片：-将玻璃载玻片连同石蜡切片放入干燥炉。
-设置炉温为50-60°C，保持1个小时以消除任何残留的水分。
6.染色和封片：-如果需要，可以将石蜡切片进行染色以便更好地观察。
- 使用适当的染色剂，如伊红（Eosin）或伊红-兰红（Eosin-Methylene Blue）来染色石蜡切片。
-染色后，将石蜡切片放入一盒有封盖的容器中，以便保存和保护切片。
制作石蜡切片需要一定的实验室技巧和经验，同时注意安全，避免烫伤和刀片伤害。
在操作过程中，务必佩戴手套和护目镜，确保实验室处于通风良好的环境中进行操作。
2. 取材取材时，最好用徒手切片等方法，检查一下材料的内部结构是否适合需要，不理想时，再重新取材。
要点：（1）在符合观察要求的情况下，材料越小越好，体积尺寸一般不超过0.5cm。
（2）进行科研用的，材料样本数量要符合统计学的需要，并留有充分的余地。
（3）有特殊需要的材料，如茎尖纵切要看腋芽等结构的，要将材料作好标记——两侧削扁，切片时才有方向性。
（4）材料取下后要设法保持材料的新鲜。
材料取好后要立即固定。
3. 固定（FAA者可免）FAA固定液的配置：（50-70%乙醇90ml+冰醋酸5ml+37-40%甲醛（即福尔马林）5ml），常温下至少24hr或更长（视材料厚薄、大小而定）。
固定后一般的材料都可以在此液中于冰箱长期保存。
要点：①固定液的体积为材料体积的20-50倍；②固定液开始浸泡时，要对材料抽气，5. 脱水材料完成“冲洗”后，将材料上多余的水尽量除去，然后进入第一级脱水剂中。
脱水剂的浓度分为6-7级，从低到高逐级进行，每级脱水约2小时。
材料小和嫩的脱水时间可以缩短，材料大和硬（木质化程度高的）脱水的时间可以长一些，需要多总结经验。
脱水过程长，尤其是在高浓度脱水剂中的时间长，材料会变脆，不利于切片，见下表。
注意：用FAA固定的材料，因不经“冲洗”，可以直接从2级脱水剂开始脱水。
注意：脱水剂用量不少于材料体积的5倍。
叔丁醇脱水所要求的温度，以叔丁醇不凝固材料进入无水的脱水剂中后，若脱水剂变浑浊，说明材料中的水分未脱干净，必须回到7. 浸蜡（透蜡）材料从叔丁醇脱水后进入装有适量融化的叔丁醇（恒温箱最好从36-40度缓慢升到56-60℃，透蜡的效果才好）的蜡管中，在蜡管中逐渐多次加入碎蜡（熔点48-50℃），直至与叔丁醇等体积为止（每次加蜡后都将透明剂瓶盖上，以免透明剂过渡蒸发），然后在56-60℃温箱中4-8小时或过夜。
此时必须盖紧蜡管塞，以免叔丁醇蒸发。
浸蜡用石蜡的熔点应该低于包埋用石蜡的熔点、逐渐增加石蜡的浓度、逐渐增加透蜡的温度，才能使石蜡易于慢慢透入材料。
然后，打开瓶塞让透明剂蒸发干净。
之后，将材料移入装有溶化石蜡（熔点56-58℃）的小杯中（换容器的目的是便于下一步操作）（仍然在58-60度温箱中），2-4小时后换纯蜡一次，再2-4小时后（60℃恒温），即可包埋（时间长短与材料大小等因素有关）。
换蜡时可以在水浴加温情况下进行，以免蜡凝固。
说明：浸蜡（透蜡）的作用——用融化的石蜡代替材料中的透明剂。
最重要的是使融化的石蜡完全浸入到细胞的每个部分，并使石蜡紧密地贴在细胞壁的内外，这样切片时材料才不会切坏。
这是最重要的一步，如果透蜡不彻底，材料中有空洞，切片时会使材料切坏。
浸蜡要从低温至高温，从低浓度到高浓度，使石蜡慢慢渗入组织内，将透明剂替代出来。
操之过急，则石蜡浸入不彻底，影响切片。
注意：材料（如石蜡）、用具和操作，都必须无灰尘。
温箱的温度过高，会使材料变脆。
操作要特别小心，不要把材料弄碎。
切记要回收废蜡，并标明日期、蜡的熔点等内容。
8. 包埋事先用牛皮纸或较硬、光滑的纸折好小纸盒若干（不能用有蜡光的纸，气泡太多，牛皮纸最好）。
包埋时，不同的材料必须放在不同的纸盒中，每个纸盒通常装三个材料。
纸盒的体积约为1×1×6cm。
将小杯中融化的纯石蜡连同材料约3个乘热倒入小纸盒中，迅速用热的解剖针、镊子在材料周围轻轻搅动，以消除气泡等。
小杯中的蜡不够时，再加熔化好的同种蜡液。
视底部稍有凝固，将材料定位（注意材料纵、横切的不同放置要求，以及材料之间的距离），然后将纸盒快速、平稳轻放水面冷却，待面蜡发白，迅速将蜡盒沉入水中（最好在水中加入冰块、或冰铁块等）。
约12小时后（要加速可放入冰箱冷藏室），蜡充分凝固就可以修蜡块。
小纸盒上必须记录好材料的名称、切片的内容、日期等。
已经包埋好的材料如果暂时不能切片，可在包埋状态下长期保存。
注意：下一步修蜡块时通常每个小蜡块中只能有一个材料，特殊需要时可以有2个或更多个材料，这主要由包埋时材料和材料之间的距离来决定。
包埋材料时就要充分考虑到这一点。
否则，修蜡块时就难以弥补。
要点：①迅速冷却能使蜡的结晶颗粒细小，有利于切片。
冷却过慢，石蜡一旦形成结晶就无法切片②冬天切片用熔点较低的蜡（如54℃），夏天切片用溶点较高的蜡（如58-60℃）。
但低熔点的蜡易展平，高熔点的蜡不易展平。
③较硬的材料用熔点较高的蜡包埋。
包埋的蜡过软，切片时蜡片易后翻或卷曲，难以展平；包埋的蜡过硬，蜡片易被切碎。
9. 修蜡块和粘蜡块将包有材料的蜡块的横截面修为矩形，底座可稍大（梯形状），每边包材料一般不少于2-3mm，较小的材料边要留得更厚，使蜡块有较大面积，能牢固地粘在小木块上。
注意：蜡边过少，切片易碎。
而且，展片时由于蜡边少，没有足够的拉力把皱褶的材料展平，这样的制片质量不高或不能用。
要点：①蜡块不能有裂纹和孔隙；②材料要尽量位于蜡块中央；③修出的蜡块的几何形状要标准，粘蜡块时要粘得周正，才能切出理想的蜡带。
10. 切片事前将切片刀磨好，磨刀时要注意刀安置在磨刀机上的方向每次都要保持一样。
使用旋转切片机，切片厚6-12（16）微米（厚度视材料和需要而定，顺、反时针都可以）。
要点：安装切片刀的角度基本为5-8度，过大、过小都无法切片。
影响切片质量的因素：（1）蜡片卷曲：刀不锋利、角度不正确、切片太薄或太厚、材料硬、石蜡太软或太硬、蜡块中的材料不在中央。
（2）材料与蜡片分离：包埋时石蜡温度与材料温度不一致。
（3）蜡片破碎不成蜡带而吸附于切片刀上：材料过脆与刀口摩擦产生静电。
（4）髓部发达的茎段，在浸蜡时，蜡很难浸到中央髓部，因而髓部疏松，导致切片时髓部被切坏，成空心状态。
这种情况，可以重点切材料两端的部位，该部位浸蜡的程度比材料中部好！！！（5）蜡片不成蜡带：有时是因为刀切蜡块的一面的劈面不成平面（系磨刀不善造成），这时，可以将刀片的两面交换后再切。
11. 展片和粘片明胶粘贴剂配制：溶液甲：明胶（粉状）1g + 100ml(36℃)蒸馏水（明胶溶化后）+石炭酸（结晶）2g + 甘油15ml(溶化)，最后用滤纸过滤。
溶液乙：甲醛4ml+100ml 蒸馏水（即4%的福尔马林）将很少的溶液甲（约一小滴）涂抹在载玻片上（事先将洗干净的载玻片用干净的绸缎擦干，以免起毛。
涂抹时手一定要干净，否则会使胶不粘，导致今后材料脱片），待溶液甲基本干后，加大滴溶液乙，再放蜡带(借助于毛笔)，使其浮起，展片台展片(35-45℃)。
以蜡不溶化，充分展开没有皱折为宜。
展片不平时，可将温度调到50℃(55℃)左右，甲醛液多加一点，短时内迅速展平，以免蜡熔化。
注意：如果蜡熔化，将使后续的脱蜡难以进行。
（2004年10月的一组，因为大意，展片时的温度高达80度以上，蜡全融化了，继续做下去的结果，片子似乎还是正常的）然后干燥24小时(30℃温箱中或风干)，进入脱蜡阶段。
要点：①溶液甲不能多，而且要待其基本干透后再放溶液乙；②粘片时蜡带的背面(光亮面)自然朝下，才能粘得牢固。
12. 脱蜡、复水、染色和透明这是一系列不能分开的连续过程。
将材料已经干燥了的载玻片装于载玻片架上，以架为单位进行以下操作（一个载玻片架可以装载玻片20或30片）。
注：①0.5-1g番红+100ml 50%乙醇；②0.5g固绿+50ml丁香油（A液），1ml A液+乙醇25ml+二甲苯25ml][固绿的另一配法：0.5g固绿+50ml丁香油+50ml纯酒精]可以用亮绿代替固绿：配方1 亮绿0.2g + 95％酒精100ml，染20－30分钟配方2 亮绿1g + 丁香油100ml，染1分钟（丁香油价格昂贵）配方3 亮绿1g + 丁香油15ml ＋纯酒精25ml，染1分钟2004.10月（生计02班）年用改良的配方3（亮绿1g + 丁香油100ml ＋纯酒精300ml，染4－8分钟）效果还可以。
要点：①在这一过程中，必须时时知道材料位于载玻片的哪一面！②如番红染色过深，应在染缸中加1-2滴浓盐酸，分色或入酸性酒精中分色（醋酸1ml+70%酒精100ml）；也可在50%酒精中腿色至合适。
如材料木质化程度太低，番红难以染色，要延长染色时间。
③如果固绿染色过深，可延长在1/2二甲苯+1/2乙醇中的时间，腿色至合适，或者用橘红G丁香油饱和液复染，进行分色。
13. 封片从固绿出来，经二甲苯脱水和透明后，就可以用树胶封片。
将洗干净的盖玻片用干净的绸缎擦干，以免起毛。
在桌子上垫上干净的白纸（最好是滤纸）将载玻片从二甲苯中取出，务必使有材料的一面朝上。
（待二甲苯基本挥发时）迅速在材料上加适量封固剂，封固剂最好正正地滴在材料上（不能使二甲苯干很久后才封片）。
如封固剂有气泡，可迅速（！）将载玻片在酒精灯火焰上过几次，除去气泡。
用镊子持住盖片，初学者使盖片一端先与封固剂接触，然后缓缓抽去镊子，让盖片缓缓下降即可，这样便于操作，但是往往胶不均匀，即盖玻片下的胶一端厚、一端薄，甚至漏胶，影响观察。
最好的方法是，用镊子持住盖片，并用手在载玻片两侧挡住盖玻片，注意将盖玻片的中央对准材料及胶滴，然后使盖玻片水平地慢慢下降，这样胶的厚薄就均匀一致，有利于观察。
要点：①二甲苯极易挥发，载玻片从二甲苯中取出后要迅速滴胶，以免材料干燥、开裂或吸收空气中的水分而报废；②注意胶的浓度，太浓时，用适量二甲苯稀释；③胶的数量以刚好不溢出盖玻片为宜（约半滴或一小滴）。
④封片后，材料最好要位于盖玻片的中央，不要偏离太多，不便于观察，而且干固后材料容易漏胶。
14. 清洗和贴标签待制片干固后（约需20天），用毛笔和二甲苯清洗载玻片上多余的封片剂；在载玻片的右侧，贴上标签，注明切片的内容、切片的编号及日期等。
如制片不干固前贴标签，容易碰着盖玻片而移位，使载玻片上的材料变形而报废。
1 取材与固定工具：离心管：清洗后的1.5mL离心管多个，将离心管底剪去，在离心管盖做好样品标记大的塑料瓶：可考虑广口瓶、塑料试剂瓶、蓝盖液相瓶，用来装FAA固定液及样品小的矿泉水瓶330mL：用来装固定液，材料浸泡前赶走气泡用镊子、小刀、刀片、凿子、手套、保鲜膜、标签纸、笔、相机试剂：FAA固定液：50%乙醇或90%乙醇90mL冰醋酸5mL福尔马林（甲醛）5mL番红染料配制2 脱水透明叔丁醇无水乙醇3 浸蜡石蜡（熔点48-50℃）及石蜡（熔点56-58℃）小广口瓶4 包埋纸盒解剖针、镊子5 修整蜡块小木块、打火机、小刀6 切片磨刀机7 展片、粘片粘合剂：新鲜蛋白50mL甘油50mL石炭酸1g用玻璃棒搅匀，用消毒棉或纱布过滤后即可。
盖玻片、载玻片8 脱蜡、复水、染色、透明95%乙醇（100mL）：95mL乙醇+5mL蒸馏水85%乙醇（100mL）：85mL乙醇+15mL蒸馏水70%乙醇（100mL）：70mL乙醇+30mL蒸馏水50%乙醇（100mL）：50mL乙醇+50mL蒸馏水纯乙醇二甲苯9 封片镊子、加拿大树胶标签。
