微生物实验 图片和说明

实验一微生物制片及形态观察一、显微镜油镜的使用显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一。

显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。

1. 结构光学显微镜是由光学放大系统和机械装置两部分组成。

光学系统一般包括目镜、物镜、聚光器、光源等；机械系统一般包括镜筒、物镜转换器、镜台、镜臂和底座等（图1－1）。

图1－1 光学显微镜结构图标本的放大主要由物镜完成，物镜放大倍数越大，它的焦距越短。

焦距越小，物镜的透镜和玻片间距离（工作距离）也小。

油镜的工作距离很短，使用时需格外注意。

目镜只起放大作用，不能提高分辨率，标准目镜的放大倍数是十倍。

聚光镜能使光线照射标本后进入物镜，形成一个大角度的锥形光柱，因而对提高物镜分辨率是很重要的。

聚光镜可以上下移动，以调节光的明暗，可变光栏可以调节入射光束的大小。

显微镜用光源，自然光和灯光都可以，以灯光较好，因光色和强度都容易控制。

一般的显微镜可用普通的灯光，质量高的显微镜要用显微镜灯，才能充分发挥其性能。

有些需要很强照明，如暗视野照明、摄影等，常常使用卤素灯作为光源。

2. 原理显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。

所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。

要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。

显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。

3. 使用方法1）低倍镜观察先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。

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（2）镜检：
• 菌丝体经制片后可用低倍或高倍镜观察。 在观察时要注意菌丝直径的大小，菌丝 体有无隔膜，营养菌丝有无假根，无性 繁殖或有性繁殖时形成的孢子种类及着 生方式。各种霉菌都有其特征性的特化 结构。
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注意事项
• 取菌丝或孢子等样品时应小心操作，尽量减少菌 丝断裂及形态破坏。
• 盖盖玻片时尽量避免产生气泡。 • 注意无菌操作，取样量不宜太大。 • 孢子数量巨大，请小心操作，皿盖敞开时间尽可
• 2）曲霉的分生孢子的形状、大小、顶囊 的形状、小梗排列、隔膜。
• 3）青霉的分生孢子的形状、大小、小梗 的排列方式，菌丝的隔膜。
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（三）制作霉菌装片并观察其 个体形态。
• 1.直接制片法观察 （1）制片：在干净的载玻片上加一滴乳 酸石炭酸棉蓝染液，用解剖针从菌落边缘
处取小量带有孢子的菌丝置于液体中， 再小心地把菌丝放开，去掉培养基，然 后用盖玻片盖上，注意不要产生气泡。 （省略酒精和水浸润，洗涤）
枯草杆菌吕氏美蓝 染色图片
枯草杆菌石炭酸复红 染色图片
1
实验 7 放线菌的形态观察 霉菌的 形态观察
2
一 实验目的
1、学习并掌握观察放线菌、霉菌形态 的基本方法
2、初步了解放线菌、霉菌的形态特征
3
4
一 实验目的
5
背景知识
• （一）放线菌的菌落形态 放线菌的菌落由菌丝体组成。放线菌菌丝纤细，
并根据下列要求对每种霉菌的菌落特征加以描述。 • 1.菌落的大小：局限生长或蔓延生长，菌落的直
径和高度。 • 2.菌落的颜色：正面和背面的颜色，培养基的颜
色变化。 • 3.菌落的形态：” 绒毛状”、”棉絮状”、”网
状”、疏松或紧密、同心轮纹、放线状的皱褶等。

器材与试剂的选用原则
03
如无菌操作、适用性、经济性等
02
细菌形态与结构观察
细菌培养及形态特征
01
02
03
细菌培养方法
包括需氧培养、厌氧培养 和兼性厌氧培养等，不同 种类的细菌需要不同的培 养条件。
细菌菌落特征
观察细菌在固体培养基上 形成的菌落，了解其形状、 大小、颜色、透明度等特 征。
细菌细胞形态
05
微生物代谢活性测定
生长曲线测定方法
直接计数法
通过显微镜直接观察并计数微生物数量，适用于较大微生物如细 菌、酵母菌等。
比浊法
利用微生物生长引起培养液浊度变化来测定生长曲线，操作简便 但易受杂质干扰。
平板菌落计数法
将待测样品稀释后涂布于固体培养基表面，培养后计数形成的菌 落数，适用于可形成菌落的微生物。
原理
病毒必须寄生在活细胞内才能增 殖，通过提供适宜的细胞环境， 使病毒在细胞内复制并产生子代
病毒。
病毒检测技术及应用
免疫学方法
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过酶联免疫吸附试验 （ELISA）、免疫荧光技术等检测病毒抗原或抗体。
分子生物学方法
基于病毒核酸的特异性，利用PCR、实时荧光定量PCR等技术扩增 并检测病毒核酸。
微生物学实验ppt课件
contents
目录
• 实验基础知识 • 细菌形态与结构观察 • 真菌形态与结构观察 • 病毒培养与检测技术 • 微生物代谢活性测定 • 微生物遗传与变异研究 • 微生物生态学及环境因子影响研究
01
实验基础知识
微生物学概述
类生活中的作用：如 生态平衡、发酵工业 等
生理生化鉴定
利用真菌的生理生化特性，如营养需 求、代谢产物等，进行进一步的分类 鉴定。

四、菌种衰退的原因
▪ 基因突变－－主要原因 ▪ 1、有关基因发生负突变导致菌种衰退 ▪ 2、表型延迟造成菌种衰退 ▪ 3、质粒脱落导致菌种衰退 ▪ 连续传代－－加速衰退 ▪ 不适宜的培养和保藏条件－－加速衰退
五、菌种衰退的防止
▪ 控制传代次数 ▪ 创造良好的培养条件 ▪ 利用不易衰退的细胞移种传代 ▪ 采用有效的菌种保藏方法 ▪ 讲究菌种选育技术 ▪ 定期进行分离纯化，测试性能
干燥或较干燥 小而紧密
丝状交织，紧密 细而均匀
干燥 大而疏松或大而致密
丝状交织 粗而分化
菌落透明度
菌落与培养 基结合程度
菌落颜色 参 考 菌落正反面 特 颜色的差别 征
菌落边缘
细胞生长速度
气味
透明或稍透明 不结合 多样 相同
一般看不到细胞 一般很快
一般有臭味
稍透明
不透明
不结合
牢固结合
单调，一般呈乳脂或矿 烛色，少数红色或黑色
实验四 微生物的菌落形态观察、 平板菌落计数及菌种保藏
目的要求
1、观察细菌、放线菌、霉菌的菌落形态 特征，并加以区分。
2、掌握平板菌落计数的原则和方法。 3、掌握三种类群微生物的单菌落挑取，
并接种于斜面，进一步加强无菌操作技 术。 4、了解菌种保藏的原理、重要性及常见 方法。
实验内容
▪ 微生物菌落形态观察及区分（细菌、放线菌、 霉菌、酵母菌——放在后面介绍）
做培养基的时间。主要用于细菌总数检测。 （4）其它：如Simplate即用胶，改良MPN产
品。
螺旋平板法
DWS螺旋平板接种仪
aColyte自动菌落计数仪
螺旋平板原理
接种针往外移
动同时自动将 样品稀释1000 倍。

微生物实验设计-产蛋白酶菌株的筛选产蛋白酶菌株的筛选级分离一、实验原理自能够产生胞外蛋白酶的菌株在牛奶平板上生长后，其菌落周围可形成明显的蛋白水解圈，水解圈与菌落直径的比值，常被作为判断该菌株蛋白酶产生能力的初筛依据。

将腐烂的大豆浸泡液中的细菌接种在含有酪素的培养基上进行培养。

由于产蛋白酶菌株能在干酪素的培养基上形成无色透明圈，因此能将产蛋白菌株分离出来，分离出来的菌株经再次培养，就可获得纯种产蛋白酶的菌株。

二、实验器材1.菌种：从大豆浸泡液中获得2.培养基:(1)PDA斜面培养基：马铃薯200g，蔗糖20g,琼脂20g,水1000ml.马铃薯去皮，切成块，煮沸半小时后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补水至1000ml，121℃灭菌30min备用。

（2）干酪素琼脂培养基：干酪素4.0g，用20ml 0.1mol/L NaOH溶液溶解后再加20g琼脂，加蒸馏水煮沸加水至1000ml 121℃灭菌30min备用。

3.试剂：无菌水。

4.仪器：天平，电磁炉，烧杯，无菌试管，无菌培养皿，高压灭菌锅，锥形瓶，接种环，涂布棒，酒精灯，恒温培养箱。

三、实验步骤1.将腐烂的大豆放入无菌水中浸泡，制成细菌悬浮液。

2.用涂布棒蘸取菌液接种于PAD培养基中，26℃培养48h。

3.倒置于酪素琼脂培养基平板上，37℃培养24h。

4.挑取培养好的菌落接种于平板上，28℃培养48h。

5.观察各菌落周围形成的透明圈的情况。

6.选取透明圈较大的三个菌落分别接种在干酪素琼脂培养基上，28℃培养48h。

7.观察受否为单菌落，若为单菌落且有透明圈，则为纯种产蛋白酶菌株。

若有杂菌，则需要重复步骤6，直到培养出纯菌为止。

参考文献[1]代玉梅.蛋白酶高产菌株的筛选鉴定及酶学性质研究[D].青岛:青岛大学,2008.[2]黄志强,林白雪,谢联辉.产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选与鉴定[J].福建农林大学学报:自然科学版,2006,35(4):416-420.。

微生物大小的测定实验报告
实验四、微生物大小的测定
一、目的
学习并掌握测定微生物大小的原理和方法
二、材料
1、仪器：显微镜、测微尺、挑针、装有蒸馏水的滴瓶
2、菌种：青霉、镰刀菌
三、步骤
1、目镜测微尺的标定
○
1放置目镜测微尺：取出目镜，将透镜旋下，把目镜测微尺放在目镜镜筒内，注意刻度面朝下，旋紧透镜，施加镜筒。

○
2放置镜台测微尺：将镜台测微尺放在载物台上，刻度面朝上，并对准聚光器。

○
3标定目镜测微尺：先用低倍镜（4×）调焦，看清镜台测微台刻度后，转动目镜，使其目尺刻度线与镜台尺的刻度线平行，用推进器调动镜台尺，使镜台尺与目尺的某一刻度重合。

然后找另外一条线重合线，分别数出并记录两者重合线间台尺与目尺各自的格数。

○
4计算：两重合线间目尺格数
两重合线间台尺格数目尺每格长度＝10 台尺每格10μm 用相同方法计算出不同倍数（4×,10×,40×）目尺每格代表的实际长度
2、微生物大小测定
标定好后，移去台尺，换上待测微生物玻片，分别在10倍和40倍镜下测出待测微生物的大小。

微生物实际大小＝所测格数×目尺每格代表长度
四、实训报告
表1 台尺校正表
物镜目镜格数台尺格数校正值（μm ／格）10×
40× 表2 微生物大小测定记录表放大倍数
微生物的实际大小=
五、思考题：为何当目镜不变，目镜测微尺也不变，而改变物镜后，目镜测微尺所测定的微生物长度不同？。

上次实验结果观察
平板划线分离及菌落观察
菌落形态观察： 菌落的色泽、大小; 表面光滑或粗糙、边缘整齐否; 隆起度、透明度等 不同形态菌落代表不同的细菌
斜面移种法及色素观察
观察细菌在斜面上所形成的菌苔。 绿脓杆菌产生水溶性色素，使整个培养基变绿。 金葡菌产生脂溶性色素，培养基不变色。
存在部位
细胞壁成分、细菌裂解释出
活菌分泌或细菌溶解散出
化学成分
脂多糖
蛋白质
稳定性
好、160℃ 2-4h 破坏
差、60-80℃ 30min 破坏
毒性作用
弱、各种内毒素作用大致相同，引起休克，发热，等
强、对机体组织器官有选择性， 引起特殊临床表现
抗原性
弱，能刺激机体形成抗体， 但无中和作用。 甲醛处理后不能形成类毒素
链球菌 G+链状 甲链 不完全溶血 条件致病菌 乙链 完全溶血 致病菌 丙链 不溶血 不致病
肺炎球菌 G+成双 不完全溶血 胆汁溶菌试验 胞外 、荚膜
镜下 培养 毒力及鉴别实验
脑膜炎 G-成双 巧克力平板 球菌 胞内 CO2
细菌生化反应结果分析
H2S产生试验 （史氏痢菌、乙型副伤寒）
硫酸亚铁半固体
乙型副伤寒
黑色沉淀物
细菌生化反应结果分析
葡萄糖发酵试验 乙型副伤寒（产酸产气） 培养基红→黄色，有气泡 史氏痢菌（产酸不产气） 培养基红→黄色，无气泡
细菌生化反应结果分析
吲哚试验 （史氏痢菌、乙型副伤寒）
内毒素检测方法——鲎试验
试剂：鲎试剂 内毒素、生理盐水 试验结果观察： 鲎试验(+)：出现凝固
外毒素的毒性作用
实验试剂：破伤风杆菌培养物 破伤风抗毒素 实验动物：小白鼠 试验结果观察： 细菌培养物→小鼠强直性痉挛

1、小吞噬细胞：即中性粒细胞。

胞内富含溶酶体酶等杀菌物质，是血液中数量最多、具有吞噬功能的细胞。

可随血流迅速动员至感染部位，在机体抗感染中发挥重要作用。

吞噬化脓球菌等。

革兰染色呈红色。

圆，体积小于单核细胞。

核呈分叶状，2、3叶居多。

2、大吞噬细胞：单核巨噬细胞。

包括大单核细胞和巨噬细胞。

吞噬病原体、凋亡的细胞和异物。

革兰染色呈蓝色。

圆，体积大，核偏大偏向一侧。

两图见于报告。

3、吞噬百分率：计数100个中性粒细胞中具有吞噬作用的细胞数。

即为吞噬百分率。

吞噬指数：观察100个中性粒细胞，计算被吞噬的细菌的总数，求平均每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为吞噬指数。

4、淋巴细胞转化实验原理：淋巴细胞在体外培养时，受到刺激物的刺激后可表现为体积增大、代谢物旺盛、蛋白质和核酸合成增加，即向淋巴母细胞转化和增殖。

此现象称为淋巴细胞的转化现象。

分型：小淋巴细胞、过渡型、淋巴母细胞、染色体型意义：淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的免疫水平，因此可作为测定机体细胞免疫状态的指标之一。

图见于报告。

5、E花环形成实验原理：T细胞表面有绵羊红细胞的受体，可在自然情况下于绵羊红细胞结合，形成E玫瑰花环。

结果判定：淋巴细胞呈蓝紫色或淡蓝色，绵羊红细胞不着色，凡结合3个绵羊红细胞或以上者为E花环形成细胞即是阳行反应。

计数200个淋巴细胞，求出E花环形成率(%)。

意义：根据花环形成的多少，可测知T细胞的数目，从而间接了解机体细胞免疫功能状态。

图见于报告6、血清学反应：是指相应的抗原和抗体在体外进行的结合反应。

由于抗体主要存在于血清中，进行这类反应时一般都要用含有抗体的血清作为实验材料，所以把体外的抗原、抗体反应称为血清学反应。

这类反应是根据抗原、抗体具有高度特异性的原理来进行实验的，即用已知的一方来检测另一方的存在。

特点：特异性、可逆性、可见性影响因素：浓度比例、电解质、温度、酸碱度。

分类：凝集反应、沉淀反应、补体结合试验、中和反应、免疫标记技术。

实验六、厌氧菌检验一、厌氧培养1、刨肉基法方法：将破伤风梭菌、产气荚膜梭菌分别接种在庖肉培养基中，35℃48h，观察结果。

2、厌氧罐法方法：将破伤风梭菌接种在高渗芽孢培养基中并放置于厌氧罐中；将破伤风梭菌、产气荚膜梭菌分别接种在血平板中并置于厌氧罐中，放厌氧袋，密闭，置35℃48h观察结果。

二、观察厌氧菌培养结果：1、庖肉基1）破伤风梭菌：肉汤混浊，部分消化，微变黑，有少量气体，有腐败性恶臭味。

2）产气荚膜梭菌：产生气体，肉渣呈粉红色，不被消化。

2、血平板1）破伤风梭菌：呈薄膜状生长，菌落半透明、灰白色、边缘疏松呈羽毛状，伴β溶血。

2）产气荚膜梭菌：多数菌株有双层溶血环，内环完全溶血，外环不完全溶血。

3、梭菌平板破伤风梭菌：形成直径1mm 以上不规则的菌落，中心紧密，周边疏松，似羽毛状。

三、涂片、革兰染色镜检：破伤风梭菌产气荚膜梭菌G-，细长，芽胞圆形，比菌体大，G+，粗短大杆菌，两端钝圆，单个或成双排列。

位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状芽胞椭圆形，位于菌体中央或次极端，芽胞直径不大于菌体四、芽孢染色：制片①5%孔雀绿加热3~5min，水洗甩干；②0.5%沙黄水溶液染色0.5~1.0min，水洗甩干干后镜检，如图所示：菌体呈红色，芽孢呈淡绿色。

破伤风梭菌产气荚膜梭菌五、汹涌发酵试验（试教）产气荚膜梭菌：分解乳糖产酸，使酪蛋白变性，同时产生大量气体，将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面上的凡土林层向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势凶猛，为“汹涌发酵”。

六、讨论：1、做生化试验时，有些细菌为致病菌，故实验时要保护好自己，且实验废弃物要妥善处理，以免发生有害菌的感染。

2、所有接种的菌株暴露于有氧环境中不得超过20min3、厌氧菌检验：可据厌氧菌的菌体形态、染色反应、菌落性状以及对某些抗生素的敏感性等作出初步鉴定。

最后鉴定则要进行生化反应及终末代谢产物等项检查。

4、破伤风梭菌微生物检验：根据破伤风的典型临床表现即可作出诊断，故一般不作细菌学检查。

姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物生理生化实验组别3【实验题目】微生物生理生化实验【实验目的】1.了解生理生化的意义。

2.掌握几种常用生理生化的实验方法。

【实验器材】1、菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，铜绿假单胞菌，变形杆菌，产气肠杆菌2、试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等3、仪器和用具：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等4、培养基淀粉培养基、油脂培养基（大分子物质水解实验）葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内附倒置的德汉氏小管）（糖发酵实验）蛋白胨水培养基（吲哚实验）葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红培养基）【实验原理】在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程。

具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶。

许多细菌产生胞外酶，这些酶从细胞中释放出来，以促进细胞外的化学反应。

各种微生物在代谢类型上表现出很大的差异，如表现在对大分子糖类和蛋白质的分解能力以及分解代谢的最终产物的不同，反映出他们具有不同的酶系和不同的生理特性，这些特性可被用作为细菌鉴定和分类的内容。

具体实验原理如下：一、大分子物质的水解实验原理姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物生理生化实验组别31、淀粉水解由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，所以必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。

胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内。

如淀粉酶将淀粉水解为小分子的糊精,双糖和单糖，能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉。

已知淀粉遇到碘会显现蓝色，因此可通过在淀粉培养基上滴加碘液来判断微生物是否能产生淀粉酶分解淀粉，菌落周围不呈蓝色，出现无色透明圈，则该菌种能够水解淀粉。

2、油脂水解脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸，而产生的脂肪酸可改变培养基的PH,因此在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后可通过观察菌苔的颜色判断菌种是否能够水解油脂，若出现红色斑点，则说明这种菌可产生分解油脂的酶。

➢大 ➢➢➢➢➢➢注 方 注 菌 方 培 菌 方种意 法 意 法 法种 养： ： ： ： ：：： 基接 平 接 穿 粘 斜：大种 板 种 刺 面乳肠试产前上前接划杆管碱在划在种线菌石平折平接菌或蕊板线板种或牛产底接底铜乳气部种部绿培肠作作假养杆记记单基菌号 号胞（；菌2支“）十”字不要太 ➢➢注 注意意：：观20察℃结培构养注意牛乳产酸、产碱、凝固、 胨化现象是连续出现的。
2、记录大肠杆菌及普通变形杆菌对葡萄糖和乳糖的 发酵试验结果。以“+”表示产酸或产气，“－” 表示不产酸或不产气。
3、记录大肠杆菌和产气杆菌的吲哚试验、甲基红试 验、伏-普试验、柠檬酸盐试验及硫化氢试验结果， 以“+”表示阳性反应。“－”表示阴性反应。
4、不利用碘液，你怎样证明淀粉水解的存在？
五、实验报告
一马当先，全员举绩，梅开二度，业 绩保底 。20.12. 1720.1 2.1708: 2308:23 :3808:2 3:38Dec-20
牢记安全之责，善谋安全之策，力务 安全之 实。202 0年12 月17日 星期四8 时23分 38秒T hursday, December 17, 2020
相信相信得力量。20.12.172020年12月 17日星 期四8 时23分3 8秒20. 12.17
试验名称
培养基名称
菌种名称 接种 接种 方式 管数
吲哚试验
蛋白胨水培养基 大肠杆菌和 液体 1
甲基红试验 葡萄糖蛋白胨培养基 产气肠杆菌 液体 1
伏普试验 葡萄糖蛋白胨培养基
液体 1
柠檬酸盐试验 柠檬酸盐培养基
斜面 1
五、实验报告
1、分别记录试验菌种对淀粉水解、脂肪水解、明胶 液化、石蕊牛奶及尿素试验的结果。以“＋”表示 阳性，“－”表示阴性。

FOR PERSONAL USE ONLY IN STUDY AND RESEARCH; NOT FOR COMMERCIAL USE微生物实验微生物实验细菌形态观察细菌分布消毒灭菌细菌形态观察一、实验目的1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护2.掌握细菌的三种形态3.掌握临床常见细菌的形态及染色4.掌握细菌的特殊结构5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、实验原理1. 普通光学显微镜（油镜）的使用1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰3. 根据需要调节显微镜亮度2. 普通光学显微镜的维护1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内4.做好使用记录3．微生物知识1．细菌按形态分类：球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等）杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等）螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等）2．细菌的基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体3．细菌的特殊结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。

如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。

原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体真核类：真菌、原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒5．真菌单细胞：圆形、芽生孢子。

如：酵母菌多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。

如：霉菌6．白假私酵母菌（白念）生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、CNS感染微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生孢子、假菌丝7．新型隐球菌生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜（比菌体大1-3倍）致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性三、实验材料记号笔：1支；大镊子：1支；火柴：1盒；蜡笔：1支；试管架：1个；酒精灯：1个；接种环：1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个四、实验内容1. 观察细菌三种形态1）球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌（子弹形）、脑膜炎双球菌（蚕豆形）、四联菌2）杆菌破伤风杆菌、白喉杆菌（异染颗粒）、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌3）螺形菌弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌2. 观察细菌的特殊结构芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌3. 绘图葡萄球菌(staphyloccocus)；肺炎双球菌(pneumo coccus)；脑膜炎球菌(meningococcus)；破伤风杆菌（Clostridium Tantenus）；霍乱弧菌（vibrio cholera)；芽胞(spore)；鞭毛（flagellum)；荚膜(capsule)；钩端螺旋体(leptospira)五、实验结果绘8幅细菌镜下图，已交。

手指上的微生物观察实验报告一、选题目的和意义家长和老师们都会催促我们在吃饭前好好洗手，说手上有很多细菌。

科学课上和科普书上也说细菌无处不在，尤其是脏手上藏着大量的病菌，甚至电视上会看到细菌被描绘成魔鬼一样的可怕面孔。

可我们从来没有看见过细菌！细菌的“庐山真面目”究竟是什么？我们怎样才能眼见为实？为此我们开展了一次手指上的微生物观察实验，来证明看似干净的手上的确存在着大量细菌，验证洗手可有效去除细菌。

通过实验促进同学们养成良好的卫生习惯，同时也能丰富同学们微生物知识。

二、实验原理细菌很小、只有约头发丝直径的百分之一，需借助显微镜才能看到。

如果给细菌提供充足的营养和合适的生长条件，短时间内细菌可大量生长，长出肉眼可见的细菌菌落。

不同的细菌可长出不同形状和大小，形态各异的菌落。

细菌生长所需要的营养物质称之为培养基，要在特定的灭菌锅中高温杀灭其中的微生物。

三、实验过程指导老师发给每个同学一个透明的塑料培养皿，里面预先铺了一层像“果冻”一样的培养基。

我们被要求先不能打开盖子闻“果冻”的味道。

实验时，我们在培养皿底部的中间划了一条黑线，然后打开盖子，用大拇指在右半面培养基上按一下。

盖上盖子后，用酒精棉球擦拭刚才按“果冻”的大拇指，接着在左半面培养基上再按一下。

有的同学还将头发放在培养皿里，将袖口在另外的培养皿里面按一按。

指导老师还让我们在教室的几个角落放了几块培养皿，打开盖子5分钟。

我们在培养皿底部写上名字和小组后，每个组将培养皿放在教室的一角。

我们每天观察培养皿里中发生的变化。

四、实验结果我们是星期三下午做的实验，星期四和星期五两天过去了，培养皿中没有什么变化。

星期天下午回学校上学，我们发现大多数培养皿中面长出了很多圆形的大小不一的斑点，颜色有白色、黄色和红色等，有的表面光滑，有的表面有皱褶。

有的还长出了细长、疏松的绒毛。

指导老师告诉我们长出来的斑点称为“菌落”。

圆形的较小的菌落是细菌；长着绒毛的菌落是霉菌。

微生物学实验实验一实验室环境和人体表面微生物的检查实验二油镜的使用和细菌的简单染色实验三细菌的革兰氏染色和芽孢染色实验四微生物大小的测定和酵母菌死活细胞的鉴定实验五培养基的配制与消毒灭菌实验六土壤微生物的分离纯化与鉴定实验七食品微生物检验 (一)细菌总数测定实验八食品微生物检验（二）大肠菌群数测定实验九大肠杆菌生长曲线的测定实验十IMViC与硫化氢试验实验一、实验室环境和人体表微生物的检查1.一、目的：1.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量与类型；2.观察不同类型微生物的菌落形态特征；3.体会无菌操作的重要性。

2.二、原理：1.微生物无孔不入，无处不在。

2.微生物→营养琼脂平板→菌落或菌苔。

（37 ℃倒置培养24 h）3.描述：菌落的大小、表面光滑或粗糙、干燥或湿润、隆起或扁平、边缘整齐或锯齿状、菌落透明或不透明、颜色以及质地均匀与否、疏松或紧密等，以便检查环境中细菌的类?秃褪 俊?4.细胞、放线菌、酵母菌和霉菌四大类型都可能存在，本实验重点观察细菌。

3.三、器材：1.培养基：营养琼脂平板（牛肉膏蛋白胨培养基）2.器具：无菌水、灭菌棉签、接种环（针）、酒精灯等。

4.四、步骤：1.标记。

组号/姓名、日期、样品来源。

2.接种。

3.倒置培养，37℃ 24 h4.观察结果。

5.五、结果6.样品来源菌落数菌落类型特征描写本实验室（流动空气30 min）1 大小形态干湿扁/隆透明度颜色边缘23接种室（不流动空气30min）洗手前洗手后头发屑指甲垢实验台门把1.六、思考题：1.人多的实验室与少人走动的实验室比较，平板上的菌落数和菌落类型有区别吗？试解释。

2.通过本实验，在防止培养物的污染和防止细菌的扩散方面，你有何体会？3.4.实验二油镜的使用和细菌的简单染色一、实验目的1、学习和掌握油镜的原理和使用技术。

2、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。

二、实验原理1．油镜使用原理：光镜的几种物镜中以油镜的放大倍数最大，尤其适用于微生物学研究。

如用菌悬液或液体培养物，可用接种环挑取1-2环 直接涂于载玻片上。
Notes: 1） 载玻片要洁净无油迹 2）滴生理盐水和取菌 不宜过多 3）涂片要涂抹均匀，不宜过厚。
2、干燥 室温自然干燥
操作步骤（continued）
3、固定
固定的目的：
1）使细胞质凝固，以固定细胞形态； 2）并使菌体牢固地附着在载玻片上。
Figure 2 - Gram stain of Gram –
E. coli cells
四 芽孢的染色
1、制备菌液：加2-4滴蒸馏水于小试管中，用接种环 从斜面挑取菌体2环于试管中充分混匀。 2、加染色液：加孔雀绿3滴于小试管中。
3、加热：沸水浴，15-20分钟。
4、涂片：用接种环从小试管中取一环菌涂于一干净载 玻片上，制成涂片。
态和结构。 6、水洗：用水洗至流出的水中无绿色为止。
当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 枯草芽孢杆菌1D培养物 枯草芽孢杆菌1D培养物 枯草芽孢杆菌1D培养物
常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红 2、加染色液：加孔雀绿3滴于小试管中。
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌（2 day培养物）
复染色法：用两种或两种以上染色液进行 染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称 鉴别染色法。常用的有： 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法 、荚膜染色法等。
革兰氏染色（stain）
1984年，丹麦医生Gram采用革兰氏染色法细菌细 胞壁区分为两种类型：革兰氏阴性（G+）和革兰氏
阳性（G ） 3）擦当油细镜菌镜分头解方糖法类：产分酸三使步培A养-）基先pH用下擦降镜时纸，揩细去菌镜所头带上正的电香荷柏增油加，B此）时从可双用层伊瓶红的、下酸层性沾复少红许或二刚甲果苯红滴等在酸另性一染片料擦染镜色纸。上 ，擦拭镜头；