微生物实验 图片和说明

实验一微生物制片及形态观察一、显微镜油镜的使用显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一。

显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。

1. 结构光学显微镜是由光学放大系统和机械装置两部分组成。

光学系统一般包括目镜、物镜、聚光器、光源等；机械系统一般包括镜筒、物镜转换器、镜台、镜臂和底座等（图1－1）。

图1－1 光学显微镜结构图标本的放大主要由物镜完成，物镜放大倍数越大，它的焦距越短。

焦距越小，物镜的透镜和玻片间距离（工作距离）也小。

油镜的工作距离很短，使用时需格外注意。

目镜只起放大作用，不能提高分辨率，标准目镜的放大倍数是十倍。

聚光镜能使光线照射标本后进入物镜，形成一个大角度的锥形光柱，因而对提高物镜分辨率是很重要的。

聚光镜可以上下移动，以调节光的明暗，可变光栏可以调节入射光束的大小。

显微镜用光源，自然光和灯光都可以，以灯光较好，因光色和强度都容易控制。

一般的显微镜可用普通的灯光，质量高的显微镜要用显微镜灯，才能充分发挥其性能。

有些需要很强照明，如暗视野照明、摄影等，常常使用卤素灯作为光源。

2. 原理显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。

所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。

要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。

显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。

3. 使用方法1）低倍镜观察先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。

微生物实验设计-产蛋白酶菌株的筛选产蛋白酶菌株的筛选级分离一、实验原理自能够产生胞外蛋白酶的菌株在牛奶平板上生长后，其菌落周围可形成明显的蛋白水解圈，水解圈与菌落直径的比值，常被作为判断该菌株蛋白酶产生能力的初筛依据。

将腐烂的大豆浸泡液中的细菌接种在含有酪素的培养基上进行培养。

由于产蛋白酶菌株能在干酪素的培养基上形成无色透明圈，因此能将产蛋白菌株分离出来，分离出来的菌株经再次培养，就可获得纯种产蛋白酶的菌株。

二、实验器材1.菌种：从大豆浸泡液中获得2.培养基:(1)PDA斜面培养基：马铃薯200g，蔗糖20g,琼脂20g,水1000ml.马铃薯去皮，切成块，煮沸半小时后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补水至1000ml，121℃灭菌30min备用。

（2）干酪素琼脂培养基：干酪素4.0g，用20ml 0.1mol/L NaOH溶液溶解后再加20g琼脂，加蒸馏水煮沸加水至1000ml 121℃灭菌30min备用。

3.试剂：无菌水。

4.仪器：天平，电磁炉，烧杯，无菌试管，无菌培养皿，高压灭菌锅，锥形瓶，接种环，涂布棒，酒精灯，恒温培养箱。

三、实验步骤1.将腐烂的大豆放入无菌水中浸泡，制成细菌悬浮液。

2.用涂布棒蘸取菌液接种于PAD培养基中，26℃培养48h。

3.倒置于酪素琼脂培养基平板上，37℃培养24h。

4.挑取培养好的菌落接种于平板上，28℃培养48h。

5.观察各菌落周围形成的透明圈的情况。

6.选取透明圈较大的三个菌落分别接种在干酪素琼脂培养基上，28℃培养48h。

7.观察受否为单菌落，若为单菌落且有透明圈，则为纯种产蛋白酶菌株。

若有杂菌，则需要重复步骤6，直到培养出纯菌为止。

参考文献[1]代玉梅.蛋白酶高产菌株的筛选鉴定及酶学性质研究[D].青岛:青岛大学,2008.[2]黄志强,林白雪,谢联辉.产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选与鉴定[J].福建农林大学学报:自然科学版,2006,35(4):416-420.。

微生物大小的测定实验报告
实验四、微生物大小的测定
一、目的
学习并掌握测定微生物大小的原理和方法
二、材料
1、仪器：显微镜、测微尺、挑针、装有蒸馏水的滴瓶
2、菌种：青霉、镰刀菌
三、步骤
1、目镜测微尺的标定
○
1放置目镜测微尺：取出目镜，将透镜旋下，把目镜测微尺放在目镜镜筒内，注意刻度面朝下，旋紧透镜，施加镜筒。

○
2放置镜台测微尺：将镜台测微尺放在载物台上，刻度面朝上，并对准聚光器。

○
3标定目镜测微尺：先用低倍镜（4×）调焦，看清镜台测微台刻度后，转动目镜，使其目尺刻度线与镜台尺的刻度线平行，用推进器调动镜台尺，使镜台尺与目尺的某一刻度重合。

然后找另外一条线重合线，分别数出并记录两者重合线间台尺与目尺各自的格数。

○
4计算：两重合线间目尺格数
两重合线间台尺格数目尺每格长度＝10 台尺每格10μm 用相同方法计算出不同倍数（4×,10×,40×）目尺每格代表的实际长度
2、微生物大小测定
标定好后，移去台尺，换上待测微生物玻片，分别在10倍和40倍镜下测出待测微生物的大小。

微生物实际大小＝所测格数×目尺每格代表长度
四、实训报告
表1 台尺校正表
物镜目镜格数台尺格数校正值（μm ／格）10×
40× 表2 微生物大小测定记录表放大倍数
微生物的实际大小=
五、思考题：为何当目镜不变，目镜测微尺也不变，而改变物镜后，目镜测微尺所测定的微生物长度不同？。

1、小吞噬细胞：即中性粒细胞。

胞内富含溶酶体酶等杀菌物质，是血液中数量最多、具有吞噬功能的细胞。

可随血流迅速动员至感染部位，在机体抗感染中发挥重要作用。

吞噬化脓球菌等。

革兰染色呈红色。

圆，体积小于单核细胞。

核呈分叶状，2、3叶居多。

2、大吞噬细胞：单核巨噬细胞。

包括大单核细胞和巨噬细胞。

吞噬病原体、凋亡的细胞和异物。

革兰染色呈蓝色。

圆，体积大，核偏大偏向一侧。

两图见于报告。

3、吞噬百分率：计数100个中性粒细胞中具有吞噬作用的细胞数。

即为吞噬百分率。

吞噬指数：观察100个中性粒细胞，计算被吞噬的细菌的总数，求平均每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为吞噬指数。

4、淋巴细胞转化实验原理：淋巴细胞在体外培养时，受到刺激物的刺激后可表现为体积增大、代谢物旺盛、蛋白质和核酸合成增加，即向淋巴母细胞转化和增殖。

此现象称为淋巴细胞的转化现象。

分型：小淋巴细胞、过渡型、淋巴母细胞、染色体型意义：淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的免疫水平，因此可作为测定机体细胞免疫状态的指标之一。

图见于报告。

5、E花环形成实验原理：T细胞表面有绵羊红细胞的受体，可在自然情况下于绵羊红细胞结合，形成E玫瑰花环。

结果判定：淋巴细胞呈蓝紫色或淡蓝色，绵羊红细胞不着色，凡结合3个绵羊红细胞或以上者为E花环形成细胞即是阳行反应。

计数200个淋巴细胞，求出E花环形成率(%)。

意义：根据花环形成的多少，可测知T细胞的数目，从而间接了解机体细胞免疫功能状态。

图见于报告6、血清学反应：是指相应的抗原和抗体在体外进行的结合反应。

由于抗体主要存在于血清中，进行这类反应时一般都要用含有抗体的血清作为实验材料，所以把体外的抗原、抗体反应称为血清学反应。

这类反应是根据抗原、抗体具有高度特异性的原理来进行实验的，即用已知的一方来检测另一方的存在。

特点：特异性、可逆性、可见性影响因素：浓度比例、电解质、温度、酸碱度。

分类：凝集反应、沉淀反应、补体结合试验、中和反应、免疫标记技术。

实验六、厌氧菌检验一、厌氧培养1、刨肉基法方法：将破伤风梭菌、产气荚膜梭菌分别接种在庖肉培养基中，35℃48h，观察结果。

2、厌氧罐法方法：将破伤风梭菌接种在高渗芽孢培养基中并放置于厌氧罐中；将破伤风梭菌、产气荚膜梭菌分别接种在血平板中并置于厌氧罐中，放厌氧袋，密闭，置35℃48h观察结果。

二、观察厌氧菌培养结果：1、庖肉基1）破伤风梭菌：肉汤混浊，部分消化，微变黑，有少量气体，有腐败性恶臭味。

2）产气荚膜梭菌：产生气体，肉渣呈粉红色，不被消化。

2、血平板1）破伤风梭菌：呈薄膜状生长，菌落半透明、灰白色、边缘疏松呈羽毛状，伴β溶血。

2）产气荚膜梭菌：多数菌株有双层溶血环，内环完全溶血，外环不完全溶血。

3、梭菌平板破伤风梭菌：形成直径1mm 以上不规则的菌落，中心紧密，周边疏松，似羽毛状。

三、涂片、革兰染色镜检：破伤风梭菌产气荚膜梭菌G-，细长，芽胞圆形，比菌体大，G+，粗短大杆菌，两端钝圆，单个或成双排列。

位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状芽胞椭圆形，位于菌体中央或次极端，芽胞直径不大于菌体四、芽孢染色：制片①5%孔雀绿加热3~5min，水洗甩干；②0.5%沙黄水溶液染色0.5~1.0min，水洗甩干干后镜检，如图所示：菌体呈红色，芽孢呈淡绿色。

破伤风梭菌产气荚膜梭菌五、汹涌发酵试验（试教）产气荚膜梭菌：分解乳糖产酸，使酪蛋白变性，同时产生大量气体，将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面上的凡土林层向上推挤，甚至冲开管口棉塞，气势凶猛，为“汹涌发酵”。

六、讨论：1、做生化试验时，有些细菌为致病菌，故实验时要保护好自己，且实验废弃物要妥善处理，以免发生有害菌的感染。

2、所有接种的菌株暴露于有氧环境中不得超过20min3、厌氧菌检验：可据厌氧菌的菌体形态、染色反应、菌落性状以及对某些抗生素的敏感性等作出初步鉴定。

最后鉴定则要进行生化反应及终末代谢产物等项检查。

4、破伤风梭菌微生物检验：根据破伤风的典型临床表现即可作出诊断，故一般不作细菌学检查。

姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物生理生化实验组别3【实验题目】微生物生理生化实验【实验目的】1.了解生理生化的意义。

2.掌握几种常用生理生化的实验方法。

【实验器材】1、菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，铜绿假单胞菌，变形杆菌，产气肠杆菌2、试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等3、仪器和用具：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等4、培养基淀粉培养基、油脂培养基（大分子物质水解实验）葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内附倒置的德汉氏小管）（糖发酵实验）蛋白胨水培养基（吲哚实验）葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红培养基）【实验原理】在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程。

具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶。

许多细菌产生胞外酶，这些酶从细胞中释放出来，以促进细胞外的化学反应。

各种微生物在代谢类型上表现出很大的差异，如表现在对大分子糖类和蛋白质的分解能力以及分解代谢的最终产物的不同，反映出他们具有不同的酶系和不同的生理特性，这些特性可被用作为细菌鉴定和分类的内容。

具体实验原理如下：一、大分子物质的水解实验原理姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物生理生化实验组别31、淀粉水解由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，所以必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。

胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内。

如淀粉酶将淀粉水解为小分子的糊精,双糖和单糖，能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉。

已知淀粉遇到碘会显现蓝色，因此可通过在淀粉培养基上滴加碘液来判断微生物是否能产生淀粉酶分解淀粉，菌落周围不呈蓝色，出现无色透明圈，则该菌种能够水解淀粉。

2、油脂水解脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸，而产生的脂肪酸可改变培养基的PH,因此在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后可通过观察菌苔的颜色判断菌种是否能够水解油脂，若出现红色斑点，则说明这种菌可产生分解油脂的酶。