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免疫组织化学法与荧光原位杂交技术检测乳腺癌HER-2状态一致性的对比研究张欢;罗洞波;赵兵【摘要】Objective To investigate HER-2/neu gene amplification by FISH in breast carcinoma tissue specimens and compared the results with that of immunohistochemical (IHC) analysis.Methods IHC and FISH were used to detect the expression of HER-2 protein and amplification of HER-2gene,respectively,in paraffin-embedded tissues from 1 032 patients with breast cancer,the conformity between the results obtained by IHC and FISH was studied.Results Among 1 032 cases of paraffin-embedded specimens of breast cancer patients,373 cases (36.1％) were positive by IHC,while 659 cases were negative (63.9％);HER-2 gene amplification was found in 325 patients (31.5％) by FISH,gene non-amplification in 707 cases (68.5％).In 373 patients whose HER-2 proteins were positive,HER-2 gene amplification was found in 293 cases,resulted in a coincidence of 78.6％(293/373).In 659 patients whose HER-2 proteins were negative,HER-2 gene non-amplification was found in 627 cases,resulted in a coincidence of 95.1％(627/659).The kappa test result showed that (Kappa=0.7581,P ＜0.000 1),there was good agreement between the two methods.Conclusion There were a high coincidence between the HER-2 gene examined by FISH and the HER-2 protein detected with IHC.%目的对比研究免疫组织化学法(IHC)与荧光原位杂交技术(FISH)检测乳腺癌人类表皮生长因子受体2(HER-2)蛋白表达和基因状态的一致性,并评价其临床意义.方法采用IHC法及FISH法分别检测1 032例乳腺癌患者术后石蜡包埋标本的HER-2蛋白表达和HER-2基因状态,并进行对比分析.结果 1 032例乳腺癌患者术后石蜡包埋标本,用IHC检测HER-2蛋白表达阳性者373例,占36.1％ (373/1 032);表达阴性者659例,占63.9％(659/1 032).FISH检测HER 2基因扩增325例,占31.5％ (325/1 032);基因非扩增707例,占68.5％(707/1 032).373例HER 2蛋白为阳性的患者中,HER-2基因扩增293例,符合率为78.6％(293/373);659例HER-2蛋白为阴性的患者中,HER-2基因非扩增627例,符合率为95.1％(627/659).2种方法检测结果比较一致性较好(Kappa=0.758 1,P＜0.000 1).结论 IHC检测乳腺癌HER 2蛋白与FISH检测HER-2基因结果一致性较高.【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2018(041)002【总页数】5页(P199-202,207)【关键词】乳腺肿瘤;HER-2基因;荧光原位杂交技术(FISH);免疫组织化学法(IHC)【作者】张欢;罗洞波;赵兵【作者单位】新疆医科大学,新疆医科大学附属肿瘤医院,乌鲁木齐830011;新疆医科大学附属肿瘤医院胸外科,乌鲁木齐830011;新疆医科大学附属肿瘤医院日间病房,乌鲁木齐830011【正文语种】中文【中图分类】R737.9在乳腺癌患者中，大约20%～30%存在人类表皮生长因子受体2(HER-2)基因的扩增或者过度表达，在临床实践中，对石蜡包埋组织HER-2/neu蛋白进行检测的有免疫组织化学法(immunohistochemistry，IHC)、Southern blot、逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)、原位杂交技术(CISH)和荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization，FISH),这些技术都可以用于评估HER-2基因扩增状态[1-2]。
免疫组化和原位杂交检测结果概述说明1. 引言1.1 概述本文旨在对免疫组化和原位杂交检测结果进行综合概述和解释。
免疫组化和原位杂交是两种常用的生物学实验技术，用于检测细胞或组织中特定蛋白质或核酸的表达情况。
通过对这两种技术的原理、方法、应用领域以及实验步骤和注意事项的介绍，可以使读者更好地理解并合理应用这些检测结果。
1.2 文章结构本文分为五个主要部分：引言、免疫组化检测结果、原位杂交检测结果、免疫组化与原位杂交比较分析以及结论。
在引言部分，我们将简要介绍本文的目的和文章结构，提供一个整体的框架来帮助读者理解后续内容。
1.3 目的本文旨在全面说明和讨论免疫组化和原位杂交检测结果，并对它们之间的异同进行比较分析。
通过了解免疫组化和原位杂交技术的基本原理、应用领域以及实验步骤等方面信息，读者可以更好地理解和解释这些检测结果，从而能够更科学地进行相关研究工作。
此外，我们将通过案例分析和发展趋势的讨论，对免疫组化和原位杂交技术在未来的应用进行展望，并提供一些建议。
2. 免疫组化检测结果：2.1 原理和方法：免疫组化是一种常用的实验技术，通过特异性抗体对目标分子进行检测。
该技术基于免疫学原理，利用抗体与相应的抗原结合来定位和可视化感兴趣的蛋白质或分子。
在免疫组化实验中，首先需要选择合适的抗体，该抗体可以是单克隆或多克隆抗体，并且需要与所需检测的目标分子有高度的特异性和亲和力。
然后，在样本处理过程中，对组织或细胞进行固定、包埋等步骤以保持其形态结构，并消除内源性酶活性。
接下来，将样本切片后进行染色处理，通常采用荧光标记物或酶标记物进行可视化显示。
最后，使用显微镜观察并记录结果。
2.2 应用领域：免疫组化技术广泛应用于生物医学研究领域。
它在肿瘤学、神经科学、器官发育等领域起着重要作用。
例如，在肿瘤学中，通过免疫组化可以检测肿瘤组织中的细胞分子标记，从而对肿瘤类型、分级和预后进行鉴定。
在神经科学领域，免疫组化可以帮助研究人员探索神经元的分布、表达和功能。
免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果观察1. 引言1.1 背景鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，其病因尚不完全清楚。
已有研究表明埃波斯坦-巴尔病毒（EB病毒）可能与鼻咽癌的发展密切相关。
EB病毒是一种常见的人类病毒，感染后可引起多种疾病，包括淋巴瘤和鼻咽癌等。
检测EB病毒在鼻咽癌中的存在对于该疾病的诊断和治疗具有重要意义。
当前，免疫组化技术和原位杂交技术被广泛应用于肿瘤诊断和研究中。
免疫组化技术可以通过检测特定抗原的表达水平来判断肿瘤的类型和分级，而原位杂交技术则可以检测病毒的核酸序列，从而确定病毒的存在。
双标记技术结合了免疫组化和原位杂交技术的优势，可以同时检测抗原和核酸，提高了诊断的准确性和可靠性。
本研究旨在通过免疫组化和原位杂交双标记技术检测EB病毒在鼻咽癌中的存在，探讨其在鼻咽癌诊断中的应用以及对该疾病的诊断和治疗的意义。
通过对免疫组化与原位杂交双标记技术的应用效果进行观察和分析，为鼻咽癌的早期诊断和治疗提供更准确的依据。
1.2 研究目的本研究的目的是探讨免疫组化与原位杂交双标记技术在诊断鼻咽癌中的应用效果。
鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，而EB病毒被认为是导致鼻咽癌发生的一个重要因素。
通过检测EB病毒在鼻咽组织中的存在情况，可以帮助早期诊断和治疗鼻咽癌。
免疫组化技术是一种通过特定抗体与靶分子结合的技术，可以帮助我们检测出EB病毒在组织中的表达情况。
而原位杂交技术则可以帮助我们检测出EB病毒的基因组在组织中的存在情况。
将两种技术结合起来进行双标记，不仅可以提高对EB病毒的检测灵敏度和准确性，同时也可以更加直观地观察病毒在组织中的分布情况。
通过本研究，我们旨在验证免疫组化与原位杂交双标记技术在鼻咽癌诊断中的准确性和可靠性，为临床提供更好的诊断方法，帮助医生更早地发现和治疗鼻咽癌，提高患者的生存率和生活质量。
1.3 意义鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，其发病率逐年增加，给患者的生活质量和健康造成了严重威胁。
免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果观察摘要：鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，其治疗和预后受到EB病毒感染的影响。
本研究旨在观察利用免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒在鼻咽癌诊断中的应用效果。
通过对100名鼻咽癌患者组织标本的检测发现，该方法能够准确、快速地检测EB病毒存在，并且结果具有较高的阳性率，为鼻咽癌的诊断提供了重要依据。
关键词：鼻咽癌；EB病毒；免疫组化；原位杂交；双标记技术1.引言鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，临床表现症状多样，如鼻塞、血涕、颈淋巴结肿大等。
目前，鼻咽癌的发病机制尚不完全清楚，但研究表明EB病毒感染与鼻咽癌的发生密切相关。
EB病毒是一种DNA病毒，它可以导致机体免疫功能的改变，促进肿瘤细胞的增殖与转移，从而影响鼻咽癌的治疗和预后。
对EB病毒的检测对鼻咽癌的诊断和治疗具有重要意义。
免疫组化与原位杂交双标记技术是一种常用的生物医学检测方法，它结合了免疫组化技术和原位杂交技术的优势，能够准确地检测病毒的存在及其在组织中的分布情况，适用于病毒性肿瘤的诊断及病理学研究。
本研究旨在探讨利用免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒在鼻咽癌诊断中的应用效果。
2.材料与方法2.1 研究对象选取2018年1月至2020年12月就诊于XX医院的100名确诊鼻咽癌患者为研究对象，所有患者均为初诊未接受过任何放化疗治疗的患者。
年龄范围为34-72岁，平均年龄为50岁。
患者组织标本采集涉及手术切除组织和穿刺组织活检。
2.2 标本处理收集鼻咽癌组织标本后，立即置于10%中性缓冲福尔马林固定24小时，然后进行脱水、透明、浸渍等处理，最终包埋成石蜡切片，切片厚度为4μm。
2.3 免疫组化染色采用免疫组化技术对组织切片进行EB病毒抗原的染色。
具体操作步骤为：脱脂、脱水后，用0.3%过氧化氢溶液在37°C下进行抗原修复；然后用10%牛血清阻断非特异性蛋白结合位点；接着滴加EB病毒抗原抗体，孵育于4°C下过夜；最后使用二抗和显色剂处理，并用甲苯封片。
荧光原位杂交技术操作的常见问题分析江冬瑞;王弦;吴强【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2015(031)012【总页数】2页(P1426-1427)【关键词】荧光原位杂交;免疫组织化学;临床病理;诊断【作者】江冬瑞;王弦;吴强【作者单位】安徽医科大学第二附属医院病理科,合肥230032;安徽医科大学第二附属医院病理科,合肥230032;安徽医科大学第二附属医院病理科,合肥230032【正文语种】中文【中图分类】R446江冬瑞，王弦，吴强目前，荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization，FISH)因具有灵敏度高、特异性强、定位明确及结果客观等优点［1］，在临床上已应用于产前染色体数目检测、肿瘤基因检测，如多发性骨髓瘤检测和慢性淋巴细胞性白血病等的检测，担负着辅助病理诊断和指导临床用药的重任。
日常病理诊断中，应用FISH技术检测乳腺癌HER-2和TOP2A基因扩增，可以判断预后，指导靶向治疗和辅助化疗;在非小细胞肺癌中检测EGFR基因突变，可以筛选靶向治疗的适用人群;检测TERC基因用来进行子宫颈病变临床分级和预测子宫颈癌的进展［2］;另外在淋巴瘤和前列腺癌等方面，还有一些探针可以用于辅助诊断。
虽然FISH检测技术具有安全、试验周期短、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点［3］，被临床病理工作者广泛认可，但该技术操作相对复杂，检测价格昂贵，目前各实验室的条件不一，FISH检测技术的标准化和质量控制就显得格外重要。
安徽医科大学第二附属医院病理科经过反复实验摸索，于2010年4月建立FISH技术平台以来，现已成功开展HER-2 FISH检测180例，在此将操作注意事项及常见问题作一小结，以便与大家一同交流。
建立FISH技术平台，除需要一间可以进行荧光实验操作和显微观察暗室外，还需要原位杂交仪、荧光显微镜、显微镜滤光片、水浴箱、漩涡混合器、普通离心机、移液器、FISH探针试剂盒、无水乙醇、二甲苯、去离子水、橡胶水泥、透明指甲油等设备和试剂。
试剂盒保存：试剂盒中所有试剂均需4度保存，请在6个月内使用完。
其中，FITC-tyramide、Catalyzer需避光保存，Blocker可分装-20度保存，避免反复冻融。
试剂盒使用须知：本试剂盒针对⽯蜡切片免疫荧光优化。
同时也适用于冰冻切片免疫荧光和铺片细胞免疫荧光。
对于冰冻切片免疫荧光，在切片⽔化，固定后从本试剂盒操作说明第4步加Blocker开始操作。
⽽对于铺片细胞免疫荧光，则在固定，通透后从本试剂盒操作说明第四步加Blocker开始操作。
与传统使用荧光基团偶联⼆抗的显⾊⽅法相比，使用我们的显⾊系统可以将免疫荧光检测的灵敏性提⾼100倍以上，能显著地提⾼信噪比。
使用本试剂盒操作时，Catalyzer和FITC-tyramide的使用均需新鲜配制。
使用本试剂盒，需自备以下试剂：PBSTx：PBS加0.3%的TritonX-100柠檬酸钠缓冲液（10mM柠檬酸钠，0.05% Tween 20， pH 6.0）：Trisodium citrate dihydrate 2.94g加双蒸⽔到1000 ml混匀⾄溶解，使用盐酸将pH调制6.0加⼊0.5 ml的Tween 20，混匀。
可4度长期保存。
操作步骤：1、⽯蜡切片脱蜡⾄⽔：（⽯蜡切片脱蜡前应置于60度30分钟）⼆甲苯I、II，各洗3分钟；⼆甲苯与酒精1：1、洗3分钟。
梯度酒精：100%I，3分钟；100%II，3分钟；95%，3分钟；70%，3分钟；50%，3分钟。
自来⽔洗5分钟。
2、抗原修复：将0.1M柠檬酸盐缓冲液（PH=0.6），用微波炉加热⾄沸腾，将脱完蜡及复⽔好的片⼦置于缓冲液中，持续煮沸20分钟。
注意此过程中，玻片上组织要⼀直浸没于缓冲液中，以保证组织的抗原修复效果。
20分钟后，将玻片立即放⼊自来⽔中10分钟。
主要不要烫伤。
为了节省试剂，使用疏⽔笔将组织圈出，后续的加样与液体置换操作对象为疏⽔圈，加样体积每张玻片100-200ul。
免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果观察摘要：鼻咽癌是一种较为常见的头颈部恶性肿瘤，其发病率呈上升趋势，并且常伴有EB病毒的感染。
本研究旨在探讨免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒在鼻咽癌诊断中的有效性和可行性，并观察其在临床应用中的效果。
关键词：免疫组化；原位杂交；EB病毒；鼻咽癌；诊断引言鼻咽癌是一种起源于鼻咽黏膜上皮细胞的恶性肿瘤，是头颈部最常见的恶性肿瘤之一。
据统计，鼻咽癌的发病率在全球范围内呈上升趋势，尤其在东南亚地区尤为突出。
鼻咽癌的早期症状不明显，多数患者在确诊时已经处于晚期，给治疗带来了一定的困难。
及早发现和诊断对于鼻咽癌患者的治疗和预后具有重要意义。
EB病毒是一种广泛存在于人类群体中的病毒，它可以感染和潜伏在人体内。
许多研究表明，EB病毒感染与鼻咽癌的发病密切相关。
检测EB病毒在鼻咽癌中的存在情况对于鼻咽癌的诊断具有一定的意义。
免疫组化和原位杂交技术是目前应用较为广泛的分子生物学检测方法，它们可以高效、敏感地检测特定的生物标志物，为癌症诊断提供重要的辅助信息。
材料与方法1. 研究对象本研究共选取了100例鼻咽癌患者的组织标本作为研究对象，其中包括60例男性和40例女性，年龄范围在40-70岁之间。
所有患者均在就诊时行了组织活检，并经病理确诊为鼻咽癌。
2. 标本处理所有病理标本均进行了组织学固定、包埋和切片处理，制备成厚度为4μm的石蜡切片。
切片分为两组，一组用于免疫组化染色，另一组用于原位杂交。
3. 免疫组化染色采用SP法进行免疫组化染色，使用抗EB病毒抗体进行免疫组化染色。
标本中的EB病毒抗原呈现为棕黄色颗粒。
4. 原位杂交采用原位杂交技术检测EB病毒的DNA存在情况。
我们使用专门设计的EB病毒DNA探针进行原位杂交反应，并通过显微镜观察标本中信号的出现。
5. 结果评价通过对免疫组化染色和原位杂交的结果进行综合分析，对标本中EB病毒的存在情况进行确定，并将结果与病理学标准进行比较。
