下载文档原格式
标签蛋白融合技术概述：从分子生物学基础和生化基础到商用系统K. Terpe摘要： 随着蛋白质组学的迅猛发展，重组蛋白质的使用在近年来大大增加。
重组杂合体含有一个多肽融合担体也就是亲和标签可用于辅助目标蛋白的纯化，这已经被广泛使用。
许多不同的蛋白质，结构域或者肽类能与目标蛋白融合。
利用融合蛋白的有助于重组蛋白纯化和检测这个优点被广泛赞同。
然而，很难选择正确的纯化系统用于特定的目标蛋白。
本综述概述了使用最频繁的和有趣的系统：精氨酸标签（Arg－tag），钙调蛋白结合肽（calmodulin-binding peptide），纤维素结合结构域（cellulose-binding domain），DsbA，c-myc-tag，谷胱甘肽S －巯基转移梅（glutathione S-transferase）, FLAGtag,HAT-tag, His-tag, 麦芽糖结合蛋白（maltose-binding protein）, NusA, Stag,SBP-tag, Strep-tag,和硫氧还蛋白等。
引言生产高度纯化和性状确切的重组蛋白质已成为在医药工业工作的蛋白质化学家的主要任务，近年来，一些抗原表位的肽类和蛋白质已被用于大量生产重组蛋白质。
这些亲和标签系统具有以下特征：（a）一步的吸附纯化，（b）对三级结构和生物活性影响小，（c）可方便且专一的去除以产生天然蛋白质，（d）在纯化过程中重组蛋白的分析简便准确，（e）适用于大量的不同蛋白质。
然而，每一个亲和标签都在其特定的缓冲液条件下纯化得到（表1）。
因此有几种不同的策略用于大规模生产重组蛋白质。
其中一种办法是使用很小的肽标签，这些标签不会与融合的蛋白质发生干扰。
使用最为广泛的有多聚精氨酸，FLAG-，多聚组氨酸-, c-myc-, S-, and Strep II-tag. 对于某些应用，小标签无需去除。
这些标签不像大标签具有免疫原性，经常可以直接作为抗原用于产生抗体。
![一种促溶标签及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/891215cec9d376eeaeaad1f34693daef5ef7130a.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010341606.7(22)申请日 2020.04.27(71)申请人 武汉菲恩生物科技有限公司地址 430000 湖北省武汉市东湖高新技术开发区高新大道666号武汉国家生物产业基地项目B、C、D区研发楼B1栋(72)发明人 刘少华 戴琦 董垚 (74)专利代理机构 武汉红观专利代理事务所(普通合伙) 42247代理人 张文俊(51)Int.Cl.C07K 14/00(2006.01)C12N 15/11(2006.01)C12N 15/62(2006.01)C12N 15/70(2006.01)C07K 1/22(2006.01) (54)发明名称一种促溶标签及其应用(57)摘要本发明公开了一种促溶标签及其在蛋白质可溶性表达中的应用，具体地，该促溶标签的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示，其编码基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示。
将该促溶标签编码基因和凝血酶识别位点插入原核表达载体中，使得促溶标签与目的蛋白融合表达，可以显著促进所表达的目的蛋白的可溶性，纯化后得到重组蛋白，用凝血酶切除标签蛋白，进而得到高纯度的目的蛋白，提高了可溶性目的蛋白的回收效率，更有利于后续的蛋白结构功能研究。
权利要求书1页 说明书3页序列表2页 附图1页CN 111548392 A 2020.08.18C N 111548392A1.一种促溶标签，其特征在于：所述促溶标签的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。
2.如权利要求1所述的促溶标签，其特征在于：所述促溶标签的编码基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示。
3.权利要求1所述的促溶标签在蛋白质可溶性表达中的应用。
4.一种融合蛋白表达载体，包含目的蛋白编码基因和促溶标签的编码基因，其特征在于：所述促溶标签为权利要求1所述的促溶标签，所述促溶标签的编码基因位于所述目的蛋白编码基因的上游。
重组表达质粒的构建——原核表达载体选择质粒载体是重组蛋白表达的关键工具，其结构如下图。
重组蛋白表达，我们首先要将基因插入到表达载体上，插入的位置为多克隆位点。
质粒载体上有很多的功能元件，这些元件对于蛋白的表达都是至关重要的。
尽管我们经过系统的分析和预测，但是仍有很多蛋白不能顺利表达、表达量很低或者表达状态不好。
这个时候我们需要尝试构建不同的表达载体以期得到最好的效果，这些载体的主要区别是启动子和融合标签的差异。
蛋白表达优化主要工作也就是尝试构建不同融合表达标签，使用不同的宿主表达菌，测试不同的表达条件，筛选出最优表达体系。
常用的融合标签有GST、MBP、Trx、6His、SUMO等，这些标签主要功能是促表达、促可溶、信号标记或助纯化。
福因德生物可以提供以下系列载体以供科研表达研究。
1）促表达/促溶标签2）信标标签3）纯化标签我们选择表达载体的时候不但要考虑蛋白怎么表达成功，更要考虑蛋白怎么纯化出来，纯化的问题主要是考虑纯化标签和酶切位点的选择，下表我们列举了常见的纯化标签和酶切位点。
4）酶切位点以上为原核表达常用的标签和酶切位点,其性质也都作了简要的介绍，各专业网站或专业书籍已对此做详尽解释，科研工作者可根据具体实验设计方案，组合设计以上标签和酶切位点的使用。
特别值得注意的是，选用和设计蛋白酶切位点的时候首要考虑的是序列内部有没有蛋白酶位点，同时要考虑酶切的效率和蛋白酶试剂成本。
一般商业化载体，在标签蛋白与载体多克隆位点之间都设计有酶切位点。
标签可设计在N-端也可在C-端,设计在N-端的优势是,可通过标签高效翻译起始位点带动插入蛋白的表达,可溶性标签的高效表达更可促进蛋白的可溶性表达;同时,大部分的蛋白内切酶的切割位点在C-端,所以标签设计在N-端可将标签切割完全。
在设计标签序列与酶切位点的时候还要考虑N-端稳定性原则，也就是所谓宿主细胞的N-端规则（N-end rule）,这个要避免；同时，还应该检查是否引入了可与别的蛋白相互作用的序列或者蛋白酶切位点。
查看完整版本: [-- pET原核表达手册(中文版) --]西部药学论坛-> 生物制药 -> pET原核表达手册(中文版)[打印本页]登录 -> 注册 -> 回复主题 -> 发表主题红色法拉利2006-06-01 21:50原核表达手册(中文版)可以说是原核表达宝典级读物,MERCK公司产品,让你对原核表达有个更深的认识,不错的东东，推荐大家读读红色法拉利2006-06-01 21:57之所以首先介绍Novagen公司的产品是因为用过它的系列载体，感觉很好用。
Novagen的母公司是德国默克（Merck）公司，它是国际著名的化学及制药公司总部位于德国的Darm stadt，已有300多年的历史。
已在全世界55个主要国家设立了分公司，其中在28个国家建有62个生产基地。
Novagen公司出品的系列载体是目前应用最为广泛的原核表达系统，已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白。
系列载体是利用大肠杆菌T7噬菌体转录系统进行表达的载体，其表达原理见下图。
T7噬菌体具有一套专一性非常强的转录体系，利用这一体系中的元件为基础构建的表达系统称为T7表达系统。
T7噬菌体基因编码的T7RNA聚合酶选择性的激活T7噬菌体启动子的转录。
它是一种高活性的RNA聚合酶，其合成m RNA的速度比大肠杆菌RNA聚合酶快5倍左右。
并可以转录某些不能被大肠杆菌RNA聚合酶有效转录的序列。
在细胞中存在T7 RNA聚合酶和T7噬菌体启动子的情形下，大肠杆菌宿主本身基因的转录竞争不过T7噬菌体转录体系，最终受T7噬菌体启动子控制的基因的转录能达到很高的水平。
T7噬菌体启动子的转录完全依赖于T7 RNA聚合酶，因此T7 RNA聚合酶的转录调控模式就决定了表达系统的调控方式。
噬菌体DE3是λ噬菌体的衍生株，一段含有lacⅠ，lacUV5启动子和T7 RNA聚合酶基因的 DNA片段倍插入其int基因中，用噬菌体DE3的溶源菌，如BL21(DE3)、 HMS174(DE3)等作为表达载体的宿主菌，调控方式为化学信号诱导型，类似于Lac表达系统。
