Pbabe质粒说明书
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pFB-hrGFPpFB-hrGFP 逆病毒载体基本信息:载体名称:pFB-hrGFP 质粒类型: 逆病毒载体 高拷贝/低拷贝: 低拷贝 克隆方法: 限制性内切酶,多克隆位点启动子:-- 载体大小:5838 bp 5'测序引物及序列:-- 3' 测序引物及序列:-- 载体标签:-- 载体抗性: 氨苄青霉素 筛选标记: 无 克隆菌株: DH5α 等 宿主细胞(系): 常规细胞系(293、CV-1、CHO 等)备注:逆病毒载体pFB-hrGFP 组成型表达hrGFP 绿色荧光蛋白;hrGFP 细胞毒性低稳定性: 稳表达 组成型/诱导型: 组成型 病毒/非病毒: 逆转录病毒pFB-hrGFP 载体质粒图谱和多克隆位点信息:pFB-hrGFP载体简介:pFB-hrGFP载体限制性酶切位点pFB-hrGFP, 5838 bp version 013001Enzymes with 1-10 cleavage sites:#sites -- Bp position of recognition site --AatII 2 978, 5764Acc65I 3 647, 1846, 3364AccI 3 1967, 2057, 3724AflII 3 202, 1265, 2919AflIII 3 164, 2157, 3953AgeI 1 1840AhdI 6 687, 733, 1274, 3404, 3450 4841Alw44I 4 1054, 3769, 4267, 5513AlwNI 6 323, 398, 2084, 3040, 3115 4364ApaI 1 1238ApoI 3 87, 1128, 2063BanII 8 580, 593, 764, 1238, 2266 3297, 3310, 3481BbeI 4 615, 1656, 2234, 3332BbsI 3 2494, 2686, 5831BbvCI 2 453, 3170BciVI 5 656, 1986, 3373, 4162, 5689 BglI 1 4960BglII 1 1678BpmI 5 1799, 2135, 2681, 2867, 4931 Bpu10I 8 337, 412, 453, 1548, 2263 3054, 3129, 3170BsaAI 5 1816, 2000, 2156, 2693, 3705 BsaHI 7 615, 978, 1656, 2234, 3332 5382, 5764BsaI 10 694, 715, 782, 1414, 1802 2726, 3411, 3432, 3499, 4913 BsaWI 5 138, 1840, 4159, 4306, 5137 BseRI 6 718, 1068, 1561, 1600, 2426 3435BsgI 2 2213, 2774BsiEI 8 961, 1034, 1838, 2801, 3866 4290, 5213, 5362BsiHKAI 7 580, 1054, 3297, 3769, 4267 5428, 5513BsmBI 6 976, 1093, 1337, 1396, 1582Bsp120I 1 1238BspHI 4 2115, 4673, 5681, 5786BspLU11I 2 164, 3953BsrBI 5 1299, 2798, 2823, 3884, 5685 BsrDI 2 4900, 5082BsrGI 2 1541, 2532BssHII 2 563, 3280BssSI 5 2723, 2777, 4126, 5510, 5817 Bst1107I 1 3724BstAPI 5 322, 397, 3039, 3114, 3771 BstEII 1 1346Bsu36I 1 1276Cfr10I 5 1840, 2099, 2348, 2504, 4926 DraI 3 4710, 4729, 5421DraIII 1 1873DrdI 2 3642, 4055DsaI 4 151, 931, 2070, 2166EaeI 7 827, 961, 1368, 1389, 1668 2801, 5234EarI 5 1334, 1564, 2626, 3831, 5635 Ecl136II 2 580, 3297Eco52I 2 961, 2801Eco57I 3 2090, 4480, 5528Eco72I 2 2000, 2156EcoNI 2 1647, 2419EcoO109I 5 499, 1477, 1924, 3216, 5821 EcoRI 1 2063EcoRV 4 308, 383, 3025, 3100EheI 4 615, 1656, 2234, 3332FspI 2 2613, 5066HaeII 6 615, 1656, 2234, 3332, 3827 4197HgaI 6 889, 1166, 3659, 4055, 4633 5383HincII 2 2057, 5385HinfI 10 637, 1020, 1045, 1863, 2829 3354, 3853, 3928, 4324, 4841 KasI 4 615, 1656, 2234, 3332KpnI 3 647, 1846, 3364MscI 3 827, 1368, 1668MslI 6 159, 2068, 2617, 5094, 5253 5612MunI 2 11, 21NarI 4 615, 1656, 2234, 3332NcoI 2 2070, 2166NdeI 3 1664, 1672, 3775NgoMIV 1 2348NheI 5 6, 16, 26, 197, 2914 NotI 1 2800NspI 4 164, 2610, 3588, 3953PleI 9 637, 1020, 1045, 1863, 2829 3354, 3853, 4324, 4841PpuMI 4 499, 1477, 1924, 3216PshAI 1 1015Psp1406I 2 5071, 5444PstI 5 1178, 1360, 2105, 2510, 5087 PvuI 2 1034, 5213PvuII 7 286, 361, 2207, 2602, 2741 3003, 3078SacI 2 580, 3297SacII 1 151SalI 1 2057SapI 2 2626, 3830SbfI 1 2104ScaI 1 5324SchI 9 637, 1020, 1045, 1863, 2829 3354, 3853, 4324, 4841SexAI 1 1474SfcI 10 182, 1178, 1360, 2105, 2510 2599, 2899, 4218, 4409, 5087 SmaI 4 643, 1241, 2018, 3360SmlI 8 202, 1265, 2795, 2919, 4059 4321, 4598, 5466SpeI 1 897SrfI 1 1240SspI 1 5648StyI 8 496, 706, 1504, 2070, 2166 2229, 3213, 3423TatI 5 1541, 2451, 2532, 3759, 5324 TfiI 1 3928Tsp45I 7 1282, 1491, 2225, 3608, 3703 5103, 5314TspRI 10 1284, 1875, 3849, 4355, 4368 4639, 4788, 4893, 5240, 5267 Tth111I 4 633, 1473, 3350, 3697VspI 1 5017XbaI 3 464, 2036, 3181XcmI 1 2517XhoI 1 2795XhoII 10 1678, 2085, 2217, 2400, 4594 4605, 4691, 4703, 5471, 5488 XmaI 4 643, 1241, 2018, 3360XmnI 2 2644, 5441Enzymes that do NOT cut molecule:AccIII AscI BamHI BclI BlnI Bpu1102I BsaBI BsiWI BsmI BspMI BstBI BstXI ClaI Eco47III FseI HindIII HpaI MluI NruI NsiI PacI PmeI Ppu10I RsrII SanDI SfiI SgfI SgrAI SnaBI SphI StuI SwaI Van91IpFB-hrGFP载体序列。
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://BAC/PAC DNA KitBAC/PAC大型质粒提取试剂盒目录号:PL2001❖适用范围:适用于BAC/PAC/P1/Cosmid等大型质粒制备❖试剂盒组成、储存、稳定性:试剂盒组成保存20次RNaseA-20℃ 1.3ml(10mg/ml)溶液P1 4℃130ml溶液P2 室温100 ml溶液PⅢ室温110 ml杂质清除剂A 室温 3 ml杂质清除剂B 室温30 ml内毒素清除剂-20℃10 ml本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.第一次使用时,将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后(终浓度100μg /ml)置于4℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会混杂有微量RNA 残留,在溶液P1中补加RNase A即可。
2.内毒素清除剂在4℃可保存一个月,如果要长期保存,建议保存在-20℃!3.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。
4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
❖产品介绍:常规的离心柱型质粒抽提试剂盒并不适用于BAC/PAC/P1/Cosmid等大型质粒DNA的抽提。
这主要是因为大型质粒DNA分子量很大,常常会超过100kb而且一般拷贝数低产量低,使用常规的离心柱吸附膜吸附效率和产量很低而且过膜会打断这些大分子量的质粒DNA。
本试剂盒采用改进碱裂解法从培养菌中提取质粒DNA,采用独特的溶液配方和内毒素清除试剂,只需要几次简单离心去除蛋白质、多糖、内毒素、RNA等杂质,获得高质量的质粒DNA。
纯化DNA的OD260/280通常在1.8左右,得到的质粒可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的工作中。
纯化后期过程均在1.5ml离心管中操作,方法简单,不需特殊设备,无需过柱,不用酚氯仿抽提;基本可完全回收细菌裂解释放出的质粒,不必担心质粒DNA的丢失。
pet32a质粒说明书简介pet32a质粒是一种常用的表达载体,广泛应用于分子生物学研究领域。
它具有较高的复制稳定性和表达效率,使其成为表达重组蛋白的理想选择。
质粒构建pet32a质粒由大小为5363个碱基对的环状DNA组成,包含多个重要的功能模块。
1.杀菌素抗性基因:pet32a质粒表达菌株对氨苄青霉素具有抗性,使得在菌落筛选和培养过程中能够有效避免非转化的细菌的生长。
2.转录起始子(T7 promoter):pet32a质粒使用强大的T7启动子驱动目标基因的转录,确保高效的基因表达。
3.编码序列:pet32a质粒包含了一段编码His-Tag(组氨酸标签)的DNA序列,该序列位于目标基因的N端或C端。
His-Tag是一个短肽序列,方便了对重组蛋白的纯化和检测。
此外,pet32a质粒还包含了截短的thioredoxin(TRX)基因,其中TRX能够促进重组蛋白的正确折叠,并提高可溶性表达的效率。
4.栅和Poly-His标签:pet32a质粒利用T7栅的序列将目标基因与TRX基因连接,同时在目标基因和His-Tag之间引入了Gly-Gly-Gly-Gly-Ser的多肽链,方便了酶切和纯化操作。
5.逆向引物结构:pet32a质粒提供了一个逆向引物结构,用于在克隆过程中的序列检查。
应用pet32a质粒作为一种常用的表达载体,被广泛应用于研究领域的多个方面。
1.表达重组蛋白:pet32a质粒的使用可以高效表达目标基因,并通过His-Tag标签实现简便的纯化过程。
这使得研究人员能够快速获取高纯度的重组蛋白,并用于进一步的功能研究、晶体学分析等。
2.蛋白结构和功能研究:pet32a质粒的TRX基因提供了一个促进蛋白正确折叠的环境,对于蛋白结构和功能的研究非常有帮助。
通过pet32a质粒表达的蛋白可以更好地保持其天然构象,并具有更高的活性。
3.蛋白亲和纯化:利用pet32a质粒表达的重组蛋白上的His-Tag标签,可以通过亲和层析技术快速、高效地纯化目标蛋白。
pET-28a(+) 质粒说明书
产品信息:
货号名称产品形式规格储存VT0331-01 pET-28a(+) Plasmid 液体质粒20μl-20℃
使用说明:
淼灵质粒平台的各批次质粒菌株发货前均经过严格的多重验证,如存在质量问题,请在收到产品三个月内通知我司,收到质粒后请短暂离心,取1μl转化至对应感受态中,挑取单克隆重新提取质粒后使用。
基本信息:
启动子:T7/lac
复制子:pBR322 ori,F1 ori
终止子:T7 terminator
质粒分类:大肠杆菌载体;蛋白表达质粒
质粒大小:5369bp
质粒大小:N-6*His, N-Thrombin, N-T7, C-6×His
原核抗性:卡那霉素Kanamycin
克隆菌株:DH5α等大肠杆菌
培养条件:37℃,有氧,LB
表达宿主:BL21 (DE3) 等含DE3的大肠杆菌
培养条件:37℃,有氧,LB
诱导方式:IPTG或乳糖及其类似物
5' 测序引物:T7:TAA TACGACTCACTA TAGGG
3' 测序引物:T7-Ter:GCTAGTTA TTGCTCAGCGG
备注:可用镍柱来纯化带组氨酸的融合蛋白。
质粒简介:
质粒图谱:。
β丙氨酸技术说明书简介β丙氨酸是一种天然的氨基酸,是构成蛋白质的基本组成部分之一。
它具有许多重要的生物学功能,对人体健康具有重要影响。
本文将详细介绍β丙氨酸的性质、生产方法、应用领域和安全性等方面的内容。
一、β丙氨酸的性质1.1 化学性质•β丙氨酸的化学式为C3H7NO2,分子量为89.09g/mol。
•它是一种具有光旋性的晶体,可以存在两个对映异构体,分别为L-β丙氨酸和D-β丙氨酸。
•在中性和高温下具有良好的溶解性,易溶于水和一些有机溶剂。
1.2 生物学功能•β丙氨酸在生物体内参与多种代谢过程,是合成蛋白质和肌肉组织的重要组成部分。
•它还参与多种酶的催化作用,调节蛋白质的功能和稳定性。
•β丙氨酸还具有抗疲劳、增强免疫力、促进肌肉生长和修复等作用。
二、β丙氨酸的生产方法2.1 天然合成•β丙氨酸可以通过某些细菌和真菌自然合成,但产量较低,成本较高,不适合大规模工业生产。
2.2 微生物发酵法•利用工程菌通过微生物发酵法生产β丙氨酸是目前最主流的生产方法。
•选择高产β丙氨酸的菌株,并优化发酵条件,调整温度、pH、底物浓度等参数,以提高产量。
•进一步通过提取、纯化和结晶等工艺步骤,获得高纯度的β丙氨酸。
2.3 化学合成法•还可以利用化学方法合成β丙氨酸,但工艺复杂,成本较高,不常用于大规模生产。
三、β丙氨酸的应用领域3.1 营养补充剂•β丙氨酸可以作为营养补充剂添加到食品中,提供人体所需的氨基酸。
•它可以增强体力和耐力,改善运动表现,对运动员和健身人士有益。
3.2 医药领域•β丙氨酸在医药领域有广泛应用,可以用于治疗肝病、心脑血管疾病和免疫系统相关疾病。
•它还可以作为肌肉营养剂,用于治疗肌萎缩和肌肉损伤。
3.3 化妆品•β丙氨酸可以用于护肤品中,具有保湿、抗氧化和抗衰老等作用。
•它可以增强皮肤光泽,减少细纹和皱纹,提高皮肤的弹性和紧致度。
四、β丙氨酸的安全性4.1 食品安全•β丙氨酸作为食品添加剂使用安全,目前未见报道其对人体健康产生不良影响。
pET-3a(+)pET-3c-sumo pET-3d(+)pET-11a(+)pET-12a(+)pET-15b(+)pET-16b(+)pET-17b(+)pET-19b(+)pET-20b(+)pET-21a(+)pET-21b(+)pET-21d(+)pET-22b(+)pET-23a(+)pET-23b(+)pET-24a(+)pET-25b(+)pET-26b(+)pET-27b(+)pET-28a(+)pET-28b(+)pET-28c(+)pET-28a(+)-sumo pET-28a(+)-GFP pET-28a(+)-SMT3 pET-29a(+)pET-30a(+)pET-30c(+)pET-31b(+)pET-32a(+)pET-32a(+)pelB pET32a-LC3pET-32a(+)LicpET-35b(+)pET-38b(+)pET-39b(+)pET-40b(+)pET-41a(+)pET-42a(+)pET-43.1a(+)pET-44a(+)pET-49b(+)pET-50b(+)pET-52b(+)pMCSF1pMSCF3pRSFDuet1 pCDFduet1pColA duetE.coli EPI300Ecoli MC1061BL21BL21goldBL21(DE3)BL21(DE3)plysSBL21(DE3)GoldplysS BL21AIBL21SIBL21codonplusRIPL BL21codonplus(DE3) BL21TrxB(DE3)BL21(DE3)RDBL21Star(DE3)BL21RPBL21RILRosetta(DE3)Rosetta(DE5)Rosetta Blue(DE3) Rosetta(DE3)plysS Rosetta2(DE3)Rosetta2(DE3)plysS Rosetta-gami(DE3) Origami(DE3)Origami2(DE3) OrigamiB(DE3)Origami(DE3)plysS Rosetta-gami 2(DE3)placI Rosetta-gami 2(DE3)pLysS Rosetta-gami B(DE3)pLysS BLR(DE3)Novablue(DE3)B834(DE3)JM83AD494(DE3)HM174(DE3)HM174(DE3)plysSC41(DE3)C41(DE3)plysSC43(DE3)Turner(DE3)Turner(DE3)plysSJM101JM105JM109JM109(DE3)DH5aλpirK12MG1655XL1blueXL10 goldTop10Top10F’BM25.8BW23473SG1117TurboT1TG1TB1M15ER2566C2566ER2529ER2738HB2151S-17SM10JF1125BJ5183HB101K802C600JM110TH1AM1W3110DH10bacY1089Y1090Antarctic Express Antarctic Express(DE3) Antarctic Express(DE3)RP Antarctic Express(DE3)RILDH5αJM110TOP10XL2-Blue MRF’Mach1 T1OmniMAX2 T1 Phage-Resistant Cells EZ10DH10BSUREpubs 520DB3.1pCold IpCold IIpColdIIIpCold-sumopCold-TFpPin point xa1pPin point xa2pPin point xa3pPin point CATpMAL-c2xpMAL-p2xpMAL-p5xpMAL-c5xpMAL-c4xpMAL-p4xpMAL-p5epTWIN1pTWIN2pLLP-OmpApLLP-STIIpMBP-PpMBP-CpET-TrxpET-HispTrc-CKSpET-DsbApET-MBPpET32M3CpGEX-4T-3pGEX-5x-1pGEX-6p-1pGEX4T-1/Gst-His-HA pGEX3XpGEX-1λT-6His-GST-PP pGEX2tkpkk223-3pkk232-8pBV220pBV221pBV222pRsetApRsetBpRsetCpRsetB td Tomato pBBRMCS pBBRMCS2 pBBRMCS3 pBBRMCS4 pBBRMCS5pTrcHisApTrcHisBpTrcHisCpBADHis ApBADHis BpBADHis 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TightpTRE Tight Luciferase pCMV-Tet3GpTRE3GpTRE3G-LucpNI v2pNG v2pNN v2pHD v2pTALETF v2 (NN) pTALETF v2 (NG) pTALETF v2 (NI) pTALETF v2 (HD) pTALEN v2 (NI) pTALEN v2 (NG)pTALEN v2 (NN)pTALEN v2 (HD)pX335pX260pX320pShuttle-CMVpShuttlepAdTrack-CMVpAdTrackpAdEasy-1BJ5183AdEasy-1pAd/BLOCK-iT-DEST RNAi Gateway Vector pDC315pBHGloxdelE13crepShuttle-IRES-hrGFP2pAAV-MCSpAAV-RC2pAAV-RCpHelperpAAV-LacZpAAV-IRES-hrGFPpCMV-MCSRNAi-Ready pSIREN-RetroQRNAi-Ready pSIREN-RetroQ-DsRed-Express RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-ZsGreen pSilencer5.1-U6-RetropSilencer5.1-H1-RetropRetroX-IRES-ZsGreen1pRetroX-IRES-DsRed ExpresspLNCX2pQCXIHplvx-RNA1plvx-RNA2pMSCVpuropSuperpSuper retro GFP-neo pSupeior puropBabe puropCMV-Gag-polpCMV-VSV-GpCL AmphopSuper retro puropLVX-shRNA1pLVX-shRNA2pSicoRpSicoR pGK puro pLentilox 3.7pLKO.1 puroPLKO.1pLKO.3GpTet-PLKO-puro pPRIME-TET-GFP-FF3 pPRIME-TREX-GFP-FF3 pSIH1-H1-CoGFPpGIPZ emptypGIPZ controlpTRIPZ emptypTRIPZ controlpLVX-DsRed-Monomer-N1 pLVX-AcGFP1-N1pLVX-IRES-ZsGreen1 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Y-12968马其顿假丝酵母CICC 1765巴斯德假丝酵母 NRRL Y1603三角酵母(自己分离)南极假丝酵母NRRL Y-7954 Ash bya gossypii NRRL Y-1056酿酒酵母 CGMCC2.1多形汉逊酵母 NRRL Y-11170出芽短梗霉 CICC40333黑曲霉(自己分离)简青霉CGMCC3.4402热带假丝酵母 CICC 1272树干毕赤酵母 NRRL Y-11545光滑假丝酵母NRRL Y-65长娄德酵母CGMCC2.1589季也蒙毕赤酵母CGMCC2.1801克鲁维酵母K.aestuarii Y-5370出芽短梗霉 NRRL Y-2311-2出芽短梗霉(自己分离)出芽短梗霉 ATCC 62921美季假丝酵母CGMCC2.1919安格斯毕赤酵母 NRRL Y-2214德巴利汉逊酵母NRRL Y-2021解脂亚罗酵母 CICC1441白色假丝酵母CGMCC 2.538卡尔斯博厄酵母 CICC1746赭色掷孢酵母CGMCC2.2113赭色掷孢酵母NRRL Y-5483简青霉(自己分离)乳酸克鲁维酵母CICC1773近平滑假丝酵母 CGMCC2.1786构巢曲霉ATCC38163博伊丁假丝酵母 NRRL Y-2332-2荚膜毕赤酵母 NRRL Y-1842博伊丁假丝酵母 NRRL Y-2332安格斯毕赤酵母 NCYC 495绿色木霉 NRRL3652大毛霉 NRR3635黑曲霉 NRR566米根霉(自己分离)嗜热脂肪地衣芽孢杆菌 NRRL B-1102嗜热脂肪地衣芽孢杆菌 NRRL B-1172嗜热脂肪地衣芽孢杆菌 NRRL B-14316嗜热脂肪地衣芽孢杆菌 NRRL B-14318解淀粉芽孢杆菌 CGMCC1.1099地衣芽孢杆菌 ATCC33632巨大芽孢杆菌NRRL B-14308巨大芽孢杆菌CGMCC 1.223蜡状芽孢杆菌 NRRL B-3711嗜碱芽孢杆菌ATCC BAA-125蜡状芽孢杆菌 CICC10040地衣芽孢杆菌 ATCC 14580巨大芽孢杆菌 ATCC12872芽孢杆菌 NRRL B-11291紫红红球菌 NICMB 11216紫红红球菌DSM11097紫红红球菌DSM44541赤红红球菌 CGMCC4.1187红串红球菌 CGMCC 1.2362红串红球菌 DSM 43297紫红红球菌 CGMCC 1.2348紫红红球菌 DSM6263紫红红球菌 DSM46022紫红红球菌 DSM363紫红红球菌DSM43002嗜吡啶红球菌JCM10940恶臭假单胞菌 NRRL-18668荧光假单胞菌 DSM7155荧光假单胞菌CGMCC 1.758洋葱假单胞菌(自己分离)绿叶假单胞菌 CICC10216洋葱假单胞菌(自己分离)野油菜黄单胞菌 DSM3586丁香假单胞菌 ATCC BAA-978粪产碱杆菌CGMCC1.767粪产碱杆菌ATCC8750反硝化产碱杆菌N4谷氨酸棒杆菌ATCC13032金黄节杆菌ATCC BAA-1386藤黄节杆菌 CGMCC1.1525柠檬黄节杆菌CGMCC1.1893植物乳杆菌 NCIMB8826鲍曼不动杆菌 CICC22934鲍曼不动杆菌CICC22934醋酸钙不动杆菌NCIMB9871糖多孢菌 NRRL 2338四联球菌 NRRL B-108肺炎链球菌ATCC 49619肺炎克雷伯氏菌(自己分离)敏捷食酸菌72w睾丸酮丛毛单胞菌 ATCC55746运动发酵单胞菌 ZM4嗜水气单胞菌2(自己分离)嗜水气单胞菌1(自己分离)睾丸酮丛毛单胞菌 ACCC10192睾丸酮丛毛单胞菌 ATCC 55744聚团斯塔普氏菌JCM 20685耐辐射甲烷菌JCM2831四联球菌NRRL B-108金黄色葡萄球菌 ATCC 6538金黄色葡萄球菌ATCC29213臭鼻克雷氏菌CGMCC1.1734哈维氏弧菌ATCC33842河流弧菌CGMCC1.1608副溶血弧菌(自己分离)嗜热假诺卡氏菌CGMCC10280沉积物希瓦氏菌 DSM17055脆壁希瓦氏菌 NCIMB 400农杆菌 NRRL B-11291铅青链霉菌阿维链霉菌 NRRL 8165茎瘤固氮根瘤菌 DSM 5975放射根瘤菌ATCC 33970粪肠球菌ATCC29212粪肠球菌 ATCC 7080洋葱伯克霍尔德菌ACCC 10506根瘤菌ATCC BAA-1182结核分枝杆菌 JCM13017 Prosthecochloris vibrioformis DSM263 Oceanicola granulosus ATCC863质控标准菌株人伤寒沙门菌(自己分离)猪伤寒沙门菌(自己分离)大肠杆菌ETEC大肠杆菌EIEC大肠杆菌EHEC大肠杆菌EPEC苏云金芽孢杆菌ATCC10792枸橼酸杆菌CMCC48001小肠耶尔森菌ATCC23715黄色微球菌ATCC58166宋内志贺ATCC9290阴沟肠杆菌ATCC45031溶藻胶弧菌ATCC17749枯草芽孢杆菌ATCC63501白色葡萄球菌8032鲍曼不动杆菌ATCC19606肺炎克雷伯氏菌ATCC13883甲型副伤寒ATCC9250拟志弧菌ATCC33847河弧菌NCTC11218大肠杆菌ATCC25922创伤弧菌ATCC27526铜绿假单胞菌ATCC27853金黄色葡萄球菌ATCC25923鼠伤寒杆菌ATCC14028单增李斯特菌CMCC54002变形杆菌CMCC49027白色念珠菌ATCC10231副溶血弧菌ATCC17082福氏志贺菌ATCC12022鲍氏志贺菌ATCC9207蜡样芽孢杆菌ATCC11778阪琦肠杆菌ATCC51329表皮葡萄球菌ATCC12228粪链球菌CMCC3200马红球菌ATCC6939大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达宿主菌大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌报告基因质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌克隆质粒大肠杆菌克隆质粒大肠杆菌克隆质粒大肠杆菌克隆质粒大肠杆菌克隆质粒大肠杆菌克隆质粒大肠杆菌克隆质粒大肠杆菌克隆质粒大肠杆菌克隆质粒大肠杆菌克隆质粒大肠杆菌克隆质粒大肠杆菌克隆质粒分子伴侣分子伴侣分子伴侣分子伴侣分子伴侣大肠杆菌克隆质粒大肠杆菌表达质粒大肠杆菌表达质粒哺乳动物双杂交系统哺乳动物双杂交系统哺乳动物双杂交系统哺乳动物双杂交系统哺乳动物双杂交系统哺乳动物双杂交系统哺乳动物双杂交系统哺乳动物双杂交系统哺乳动物双杂交系统哺乳动物双杂交系统哺乳动物双杂交系统哺乳动物双杂交系统酿酒酵母双杂交系统酿酒酵母双杂交系统酿酒酵母双杂交系统酿酒酵母双杂交系统酿酒酵母双杂交系统酿酒酵母双杂交系统酿酒酵母双杂交系统酿酒酵母双杂交系统酿酒酵母双杂交系统酿酒酵母双杂交系统酿酒酵母双杂交系统酿酒酵母双杂交系统酿酒酵母单杂交系统酿酒酵母单杂交系统酿酒酵母单杂交系统酿酒酵母单杂交系统酿酒酵母单杂交系统酿酒酵母单杂交系统酿酒酵母单杂交系统酿酒酵母三杂交系统酿酒酵母三杂交系统酿酒酵母三杂交系统蜕皮激素诱导表达系统蜕皮激素诱导表达系统LacSwith II哺乳动物诱导表达系统LacSwith II哺乳动物诱导表达系统LacSwith II哺乳动物诱导表达系统GeneSwith 哺乳动物诱导系统GeneSwith 哺乳动物诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统四环素诱导系统Tale ToolBox kitTale ToolBox kitTale ToolBox kitTale ToolBox kitTale ToolBox kitTale ToolBox kitTale ToolBox kitTale ToolBox kitTale ToolBox kitTale ToolBox kitTale ToolBox kit Tale ToolBox kit CAS9系统CAS9系统CAS9系统腺病毒系统腺病毒系统腺病毒系统腺病毒系统腺病毒系统腺病毒系统腺病毒系统腺病毒系统腺病毒系统腺病毒系统腺病毒系统腺相关病毒系统腺相关病毒系统腺相关病毒系统腺相关病毒系统腺相关病毒系统腺相关病毒系统腺相关病毒系统逆病毒系统逆病毒系统逆病毒系统逆病毒系统逆病毒系统逆病毒系统逆病毒系统逆病毒系统逆病毒系统逆病毒系统逆病毒系统逆病毒系统逆病毒系统逆病毒系统逆病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统慢病毒系统PiggyBac转座子系统PiggyBac转座子系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统信号通路报告系统RNAi系统RNAi系统RNAi系统RNAi系统RNAi系统RNAi系统RNAi系统RNAi系统RNAi系统RNAi系统RNAi系统RNAi系统RNAi系统RNAi系统RNAi系统RNAi系统RNAi系统RNAi系统酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒酿酒酵母表达质粒。
Production of retroviruses using FuGENE-6
3/21/00
1) On the day before transfection, plate 0.5-1 x106 293T cells onto 6cm dishes in 4-5 ml
DME/10%IFS. The cells are ready for transfection after 18-20 hours, or when they are about 25-30% confluent. Plate slightly more cells when making VSV-G pseudotyped viruses. For 10 cm dishes, double the quantities given here.
2) Pipette 6µl FuGENE into serum-free medium (at room temperature) so that the final
volume after the addition of the DNA will be 100µl. DO NOT TOUCH THE TUBE WITH UNDILUTED FUGENE.
3) Add 2µg total DNA (in TE). For instance, if using pCL vectors (Ampho, 10A1, or Eco;
Naviaux (1996) J. Virol, vol 70, p 5701), use 1µg transfer vector (pBabe, pMSCV-IRES-GFP, etc.) and 1 µg of the pCL vector. For making VSV-G retroviruses by triple
transfection use 0.9µg gag/pol expression vector, 0.1 µg VSV-G expression vector, and 1 µg transfer vector.
4) Do not vortex; swirl to mix.
5) Incubate the FuGENE/medium/DNA solution at room temperature for 15 minutes.
6) Drip the mixture onto the 293T cells using a Pipetman.
7) Incubate overnight at 37 C.
8) On the day following transfection feed the cells with 3-4 ml fresh medium.
9) Harvest viral supernatants at 48 and 72 hours (or 36 and 60 hours). Ecotropic and
GaLV viral titers at 72 hours will be will be approximately 20-40% less than at 48 hours.
VSV-G viral titers are essentially the same at 48, 72, and 96 hours. Filter with a 45 uM syringe filter.
10) I n a typical viral infection protocol for adherent cells: use 3.5 ml of 36-48 hour viral sup,
with 8 ug/ml polybrene, to infect 1-2 x106 cells (20-30% confluent) on a 10 cm dish.
After 3 hours remove the sup and add fresh medium.
11) R epeat the infection 24 hours later with the 60-72 hour sup. 24 hours after the second
infection, split the cells; apply drug selection or sort the day following the split.
Although two infections are optimal, one infection is often enough.
12) Please occasionally take the time to sing happy songs about viruses.
Notes about using FuGENE to make retroviruses:
-Do not let FuGENE come into contact with any plastic surface without diluting first in serum free medium (do not aliquot; store in original polypropylene tubes).
-Antibiotics do not seem to impair the transfection or viral titers.
-Whether FuGENE or DNA is added first to the medium doesn't seem to matter. It's OK to add the two or three plasmids separately.
-For collecting VSV-G viruses, use medium buffered with 10-25 mM HEPES to limit pH-dependent cell killing by the VSV-G protein.
-With this protocol we have made ECO viruses with titers of 107/ml and VSV-G, 10A1, and AMPHO viruses with titers of 106/ml.
-FuGENE is made by Roche, formerly Boehringer Mannheim. Cat # 1 814 443, 1 ml, $275, about $1.65 per transfection.
Scott Dessain and Hua-yin Yu
Weinberg Lab。