单克隆抗体下游分离制备工艺手册
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单克隆抗体制备流程1.鼠标免疫:选择合适的抗原,并将其注射到小鼠或其他啮齿动物的体内。
这样可以激发小鼠体内的免疫系统产生特异性的抗原抗体。
2.细胞融合:在小鼠免疫周期结束后,收集其脾细胞,并将其与癌细胞(如骨髓瘤细胞)进行融合。
这一步骤将产生一组称为杂交瘤细胞的细胞群体,具有免疫系统的特异性。
3.筛选和扩增:将融合细胞在含有抗生素的培养基中进行筛选,以去除非融合细胞和未融合的B细胞。
然后,将融合细胞转移到含有较低抗生素浓度的培养基中,以扩增单克隆细胞株。
4.克隆:通过稀释稀释法或限稀稀释法,将单个细胞分离成单个细胞,并将其分别培养在微孔板中。
培养一段时间后,进行测序和酶联免疫吸附试验(ELISA)等测试,以筛选出产生特异性抗体的克隆。
5.生产和纯化:确定产生特异性抗体的克隆后,可以进行大规模的生产和纯化。
将克隆细胞移植到大容量培养器中,进行大规模培养。
然后,通过收集和离心等步骤收集细胞上清液,获取抗体。
6.特性和稳定性测试:对生产的抗体进行特性和稳定性测试,以确定其特异性、亲和力、稳定性和纯度等参数。
这些测试通常包括ELISA、Western blot、免疫组织化学(IHC)等。
7.应用:将制备好的单克隆抗体用于特定的应用,如免疫组化、免疫印迹、流式细胞术等。
根据需要,可能需要对抗体进行标记,如荧光标记或酶标记,以便在特定实验中进行检测。
总之,单克隆抗体制备流程是一个复杂而耗时的过程,需要经过多个步骤来获得特异性和高亲和力的抗体。
这些抗体可以用于研究、诊断和治疗等领域,对于科学研究和临床应用有着重要的意义。
单克隆抗体纯化工艺流程
单克隆抗体纯化工艺流程是一个复杂且精细的过程,主要涉及到细胞发酵培养后的处理以及后续的纯化步骤。
以下是对这一工艺流程的详细解释。
首先,在细胞发酵培养结束后,会采用深层过滤或连续流离心深层过滤的方法来去除发酵液中的细胞及细胞碎片。
这一步是至关重要的,因为它能有效地去除杂质,为后续纯化步骤提供高质量的上清液。
接着,上清液会进入纯化工艺。
整个纯化工艺主要包括ProteinA亲和色谱、低PH病毒灭活、阴/阳离子交换色谱(或复合模式色谱)、除病毒过滤、超滤浓缩换液以及除菌过滤等步骤。
在ProteinA亲和色谱步骤中,利用抗体结构中的Fc区域能特异性结合色谱填料偶联配基ProteinA蛋白的特性,进行色谱分离。
大部分杂蛋白等杂质因无法与色谱填料结合而流穿,而抗体则与ProteinA蛋白结合,随后以低PH溶液洗脱柱子,收集粗纯后的抗体,达到初步纯化的效果。
随后,阴离子交换色谱利用等电点的差异进行分离。
病毒、HCP、DNA等杂质因PI相对较低,呈酸性,在较高PH条件下与填料结合,而抗体PI一般相对较高,呈碱性,直接流穿,从而达到进一步分离去除杂质的效果。
除病毒过滤则采用特定规格的滤膜,如20nm左右的滤膜,进行纳滤,截留病毒颗粒,而蛋白则顺利流穿,从而实现病毒的去除。
最后,经过超滤浓缩换液和除菌过滤步骤,即可获得高质量的抗体原液。
这些步骤确保了抗体的纯度、活性和安全性,为后续的应用提供了保障。
整个单克隆抗体纯化工艺流程虽然复杂,但每一步都至关重要,不可或缺。
它充分展示了现代生物技术的精细和高效,为抗体药物的研发和生产提供了坚实的基础。
单克隆抗体技术手册一、什么是单克隆抗体技术单克隆抗体技术,简单来说,就是一种能够生产出大量高纯度、高特异性抗体的生物技术。
在生物医学领域,它就像是一把精准的钥匙,能够准确地打开特定疾病的“锁”。
抗体,大家都知道,是我们身体免疫系统产生的用来对抗病原体的“武器”。
但传统方法得到的抗体往往是混合物,纯度不高,特异性也有限。
而单克隆抗体技术则改变了这一局面。
二、单克隆抗体技术的原理要理解单克隆抗体技术,得先从免疫系统说起。
当我们的身体受到病原体入侵时,免疫系统中的 B 淋巴细胞会被激活,产生抗体来对抗病原体。
每个 B 淋巴细胞产生的抗体都略有不同。
单克隆抗体技术的核心就是要从众多的 B 淋巴细胞中,筛选出一个能够产生我们所需要的特定抗体的细胞。
这个过程就像是在大海里捞针。
首先,将抗原(比如某种疾病的蛋白质)注射到小鼠体内,让小鼠的免疫系统产生反应。
然后,从小鼠的脾脏中取出产生抗体的 B 淋巴细胞。
接下来,将这些 B 淋巴细胞与一种能够无限增殖的骨髓瘤细胞融合。
这一步非常关键,因为骨髓瘤细胞可以不停地分裂生长,而 B 淋巴细胞能够产生抗体。
融合后的细胞就兼具了两者的优点,既能产生抗体,又能无限增殖。
然后,通过特定的筛选方法,找出那些能够产生我们所需要的抗体的融合细胞。
这些细胞就是单克隆抗体的“源头”。
三、单克隆抗体技术的步骤1、免疫动物选择合适的动物(通常是小鼠),给它们注射特定的抗原,激发免疫系统产生抗体反应。
2、细胞融合将免疫后的动物脾脏细胞(包含产生抗体的 B 淋巴细胞)与骨髓瘤细胞在一定条件下进行融合。
3、筛选与克隆使用特定的培养基和检测方法,筛选出能够产生目标抗体的融合细胞。
然后对这些细胞进行克隆培养,得到大量相同的细胞。
4、抗体的提取与纯化从培养的细胞上清液或细胞内提取抗体,并通过一系列的纯化方法,去除杂质,得到高纯度的单克隆抗体。
四、单克隆抗体技术的应用1、疾病诊断单克隆抗体可以特异性地识别疾病相关的标志物,用于疾病的早期诊断。
单克隆抗体纯化工艺流程英文回答:Single clone antibody purification process is a crucial step in the production of monoclonal antibodies. Itinvolves several steps to ensure the isolation and purification of the desired antibody from the mixture of other proteins and contaminants.The first step in the purification process is toharvest the cells producing the monoclonal antibody. This can be done by centrifugation or filtration to separate the cells from the culture medium. Once the cells are separated, they are lysed to release the intracellular contents, including the antibody of interest.After cell lysis, the next step is to remove celldebris and insoluble components from the lysate. This canbe achieved through centrifugation or filtration methods. The clarified lysate is then subjected to a series ofchromatography steps to purify the antibody.One commonly used chromatography technique is protein A affinity chromatography. Protein A is a bacterial protein that has a high affinity for the Fc region of immunoglobulin G (IgG) antibodies. The lysate is passed through a column packed with protein A resin, and the antibody binds to the resin while other impurities are washed away. Elution of the antibody is then performedusing a low pH buffer or an IgG-specific elution buffer.Another purification step is ion exchange chromatography, which separates proteins based on their charge. The lysate is loaded onto an ion exchange column, and the antibody is selectively retained while otherproteins are washed away. Elution of the antibody is achieved by changing the pH or ionic strength of the buffer.Size exclusion chromatography is also employed to remove aggregates and further purify the antibody. This technique separates proteins based on their size, withlarger molecules eluting first. The antibody is collectedin the void volume while smaller impurities are separated.Finally, the purified antibody is subjected to a viral clearance step to ensure the removal of any potential viral contaminants. This can be achieved through viral filtration or other viral inactivation methods.Once the purification process is complete, the antibody is typically formulated into a suitable buffer for storage and further use. The purity and quality of the antibody are assessed using various analytical techniques, such as SDS-PAGE, HPLC, and ELISA.Overall, the single clone antibody purification process involves a series of steps, including cell harvesting, cell lysis, clarification, chromatography, viral clearance, and formulation. Each step is designed to isolate and purify the antibody of interest while removing impurities and contaminants.中文回答:单克隆抗体纯化工艺流程是单克隆抗体生产过程中的关键步骤。
一文扫尽单克隆抗体制备流程单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体,称为单克隆抗体。
通常采用杂交瘤技术来制备,杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的基础上,将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。
用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群,可制备针对一种抗原表位的特异性抗体即单克隆抗体。
目录1简介 2制备过程 3抗原准备 4动物免疫 5细胞融合 6杂交瘤细胞 7鉴定实验8克隆化方法 9细胞选择 10应用 11局限性 12研究进展简介1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交技术的基础上,创建立杂交瘤技术,他们把可在体外培养和大量增殖的小鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠B细胞融合,成为杂交细胞系,既具有瘤细胞易于在体外无限增殖的特性,又具有抗体形成细胞的合成和分泌特异性抗体的特点。
将这种杂交瘤作单个细胞培养,可形成单细胞系,即单克隆。
利用培养或小鼠腹腔接种的方法,便能得到大量的、高浓度的、非常均一的抗体,其结构、氨基酸顺序、特异性等都是一致的,而且在培养过程中,只要没有变异,不同时间所分泌的抗体都能保持同样的结构与机能。
这种单克隆抗体是用其他方法所不能得到的。
这项新技术从根本上解决了在抗体制备中长期存在的特异性和可重复性问题,可用于探讨①蛋白质的精细结构;②淋巴细胞亚群的表面新抗原;③组织相容性抗原;④激素和药物的放射免疫(或酶免疫)分析;⑤肿瘤的定位和分类;⑥纯化微生物和寄生虫抗原;⑦免疫治疗和与药物结合的免疫。
制备过程单克隆抗体制备流程1、免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。
一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。
抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。
单克隆抗体制备主要步骤包括:动物免疫、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选与单抗检测、杂交瘤细胞的克隆化、单抗的鉴定及制备等。
1 动物免疫根据抗原的特性选择合适的免疫方案,对于可溶性抗原免疫原性弱,一般要加佐剂。
常用佐剂为福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂。
要求抗原和佐剂等体积混合在一起,研磨成油包水的乳糜状。
(1)初次免疫,Ag50ug/只,加福氏完全佐剂皮下多点注射,一般1.5ml,间隔3周。
(2)第二次免疫,剂量途径同上,加福氏不完全佐剂,间隔3周。
(3)第三次免疫,剂量同上,不加佐剂,腹腔注射,7天后采血测其效价,检测免疫效果,间隔3周。
(4)加强免疫,剂量50ug,腹腔注射。
(5)3天后,取脾融合。
2细胞融合(1)饲养细胞的制备在细胞融合后选择性培养过程中,由于大量骨髓瘤细胞和脾细胞相继死亡,此时单个或少数分散的杂交瘤细胞多半不易存活,通常必须加入其他活细胞使之繁殖,这种被加入的活细胞称为饲养细胞小鼠腹腔巨噬细胞的准备:①用6-10 周龄的BALB/c小鼠。
②拉颈处死,浸泡于75%的酒精,消毒3min,用无菌剪刀剪开皮肤,暴露腹膜。
用吸管注入6ml培养液,反复冲洗,吸出冲洗液。
③放入10ml离心管,1200rpm离心5min.④用20%小牛血清的培养液混悬,调整细胞数为1*105/ml.加入96孔板,100ul/孔。
放入37度孵箱培养。
(2)骨髓瘤细胞的准备①于融合前48-36小时,将骨髓瘤细胞扩大培养②融合当天,用弯头滴管将细胞从瓶壁轻轻吹下,收集于50ml离心管或融合管内。
③1000r/min离心5-10分钟,弃去上清。
④加入30ml不完全培养基,离心洗涤一次。
然后将细胞重悬浮于10ml不完全培养基,混匀。
⑤取骨髓瘤细胞悬液,加0.4%台酚蓝染液作活细胞计数后备用。
(3)脾细胞的准备取已经免疫的BALB/c小鼠,摘除眼球采血,并分离血清作为抗体检测时的阳性对照血清。
同时通过颈脱位致死小鼠,浸泡于75%酒精中5分钟,于培养皿上固定后掀开左侧腹部皮肤,可看到脾脏,换眼科剪镊,在超净台中用无菌手术剪开腹膜,取出脾脏置于已盛有10ml 不完全培养基的平皿中,轻轻洗涤,并细心剥去周围结缔组织。
单克隆抗体纯化工艺流程英文回答:Single clone antibody purification process involves several steps to obtain a highly pure and concentrated antibody sample. Here, I will describe the general process in detail.1. Harvesting the cells: The first step in the purification process is to harvest the cells that produce the desired antibody. This can be done by culturing the cells in a suitable growth medium until they reach the desired density. Then, the cells are harvested by centrifugation or filtration.2. Cell lysis: Once the cells are harvested, they need to be lysed to release the intracellular components, including the antibody. This can be achieved by using detergents, sonication, or freeze-thaw cycles. The lysate is then clarified by centrifugation to remove cell debris.3. Affinity chromatography: The next step is to purify the antibody using affinity chromatography. This involves the use of a specific ligand that binds to the antibody with high affinity. For example, protein A or protein G can be used as ligands for purifying antibodies of different classes or species. The lysate is passed through a column containing the ligand, and the antibody binds to the ligand while other impurities are washed away. The bound antibody is then eluted using a low pH buffer or a competitive elution agent.4. Size exclusion chromatography: After affinity chromatography, the antibody sample may still contain some impurities such as aggregates or fragments. Size exclusion chromatography is used to separate these impurities based on their size. A gel filtration column is employed, and the antibody elutes in a separate peak while the impurities are excluded from the gel matrix.5. Concentration and buffer exchange: The purified antibody is typically in a low concentration and may be ina buffer that is not compatible with downstream applications. Therefore, concentration and buffer exchange steps are performed. This can be achieved by using centrifugal filter units or ultrafiltration devices. The concentrated antibody is then exchanged into a suitable buffer using dialysis or buffer exchange columns.6. Sterile filtration: To ensure the antibody is free from any microbial contamination, sterile filtration is performed. The purified antibody is passed through a sterilizing-grade filter with a pore size of 0.2 μm or smaller. This step is crucial for the final product to be used in therapeutic or diagnostic applications.7. Quality control: Finally, the purified antibody sample undergoes rigorous quality control testing to ensure its purity, potency, and stability. This includes assessing its binding affinity, specificity, and functionality. The sample is also tested for endotoxin levels and checked for any degradation or aggregation.中文回答:单克隆抗体纯化工艺流程涉及多个步骤,以获得高纯度和高浓度的抗体样品。
请详细阐述单克隆抗体的制备流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成,希望大家下载以后,能够帮助大家解决实际的问题。
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单克隆抗体制备工艺嘿,你知道吗?在医学和生物学的奇妙世界里,有一种超级厉害的东西叫单克隆抗体。
这单克隆抗体啊,就像是我们身体免疫系统派出的特种部队,专门精准打击那些入侵的坏家伙,像病菌啊、癌细胞之类的。
那这么厉害的单克隆抗体是怎么制备出来的呢?今天我就来给你好好讲讲这神奇的单克隆抗体制备工艺。
要想制备单克隆抗体,得先从免疫动物开始。
这就好比我们要训练一群士兵,首先得找一群有潜力的新兵蛋子。
科学家们会选择合适的动物,像小鼠啊,这小鼠就像是被选中的幸运儿,不过它可不知道自己即将要经历一场特殊的使命。
给小鼠注射特定的抗原,这抗原就像是敌军的标志,告诉小鼠的免疫系统:“嘿,有敌人来了,得想办法对付它。
”小鼠的免疫系统那也是很聪明的,就开始调动体内的B淋巴细胞,这些B淋巴细胞就像是一个个小小的兵工厂,开始生产针对这个特定抗原的抗体。
然后呢,就是细胞融合这一步了。
这一步可太关键了,就像一场神奇的魔法。
从免疫后的小鼠体内取出脾脏细胞,这里面就有很多产生抗体的B淋巴细胞。
再找一种骨髓瘤细胞,这骨髓瘤细胞就像是一种永生的细胞,有着超强的繁殖能力。
把这两种细胞放在一起,就像把两个不同的团队放在一起,想让它们合作。
通过特殊的化学试剂或者是电刺激等方法,让它们融合在一起。
这时候就产生了杂交瘤细胞。
这杂交瘤细胞啊,那可是集两家之长,既有B淋巴细胞产生特异性抗体的能力,又有骨髓瘤细胞无限繁殖的本事。
你说神奇不神奇?不过啊,这融合后的细胞可有点乱糟糟的,就像一群人挤在一起,有各种不同的组合。
得把我们想要的杂交瘤细胞筛选出来才行。
这时候就用到一种叫HAT培养基的东西。
在这个培养基里啊,只有杂交瘤细胞能够生长,那些没融合的骨髓瘤细胞因为缺乏一种酶,就像缺少了一把钥匙,在这个培养基里是没法活下去的。
而那些没融合的B淋巴细胞呢,寿命比较短,自己就慢慢死掉了。
这样一来,就像是在一堆沙子里挑出了金子,我们就得到了我们想要的杂交瘤细胞。
接下来就是克隆化培养了。
单克隆抗体制备规范操作融合准备工作:融合前3天小鼠追加免疫,用灭菌的2兆水稀释抗原,足掌免疫100微克抗原/鼠,50微克/脚,50微升/脚,注意追加免疫后3-6天内融合,因为此时抗体效价较高。
融合所有用到的实验材料和工具(剪过枪头和分装液体盒)进行高压灭菌,并对小鼠骨髓瘤细胞进行传代处理(要求传入新的培养瓶中,密度达到60-70%,并且选择不同的浓度梯度以确保第二天的融合时有最佳状态的细胞)。
融合操作步骤:实验前,将PEG和100ml R-1640培养液放入37℃水浴锅中孵育。
眼球采血处死小鼠(回收血液制备阳性血清用于下一步的ELISA筛选),75%的酒精浸泡消毒,取出小鼠股内侧沟淋巴结,随后把淋巴结放入4℃R-1640培养液(含2×双抗)(准备3个培养皿,一用来剪除淋巴结上的结缔和脂肪组织;二是用来清洗淋巴结;三是用来剪碎和撕碎淋巴结的,制备免疫小鼠的淋巴细胞)。
把含有淋巴细胞或脾细胞的悬液经过有棉花(好的脱脂棉)的吸管过滤,除去残渣,分离细胞。
过滤好的细胞2000r/min,10min。
制备足够多的骨髓瘤细胞(Ag8.8),1500r/min,10min,(每次用4℃R-1640培养液漂洗骨髓瘤细胞,洗3次以上,目的去除培养骨髓瘤细胞的培养液中的的血清,因为血清中的蛋白成分有抑制融合的作用)。
淋巴细胞和骨髓瘤细胞同时洗涤3次以上,要求2000r/min,10min,用10ml 4℃R-1640不完全培养液悬浮骨髓瘤细胞,第4次洗涤前全取淋巴细胞,按照淋巴细胞:骨髓瘤细胞=1:1的数量比(淋巴细胞:骨髓瘤细胞=1:5的体积比)取骨髓瘤细胞,将两种细胞混匀,加入37℃R-1640不完全培养液至50ml,2000r/min,5min,弃除上清液。
(注意:每次离心完毕要求尽量将上清液吸干净)加入预热的1ml PEG融合剂,加入过程中注意缓慢加入(速度:保持一滴一滴地滴入),并且边加边用吸管头轻轻拨动细胞团。
单克隆抗体制备简要流程
单克隆抗体制备是指由经过严格筛选的单一B淋巴细胞克隆所产生的免疫球蛋白。
与
多克隆抗体相比,单克隆抗体具有更高的特异性和亲和力,常用于临床诊断、治疗和生物
学研究等领域。
1. 免疫原制备
选择适当的免疫原,如蛋白质、多肽、糖类、细胞表面标志物等,制备纯度高的免疫原。
2. 动物免疫
将免疫原注射到小鼠、大鼠、兔子、山羊等动物体内,使其产生抗体。
多次免疫可提
高抗体产量。
3. 获得脾细胞
动物免疫一定时间后,取获得抗体最高的动物的脾脏,制备成脾细胞悬液。
4. 杂交瘤细胞的制备
将获得的脾细胞与哺乳动物体系中的恶性肿瘤细胞进行杂交并筛选得到杂交瘤细胞。
杂交细胞的特点是具有脾细胞的免疫能力和长时间的生长能力。
5. 筛选单克隆抗体
使用ELISA、免疫印迹等技术检测杂交瘤细胞是否产生抗体。
筛选出产生单一种抗体
的细胞克隆。
将筛选得到的细胞克隆大量培养,并收集其分泌的单克隆抗体。
通过某些纯化技术,
如蛋白A、蛋白G亲和层析,将单克隆抗体制备成较纯的制剂。
7. 鉴定和应用
对制备好的单克隆抗体进行活性和特异性的检测,鉴定其性质和效力。
通过结构修饰
或复合其他物质,制备具有更高效能和生物学适应性的单克隆抗体,用于临床诊断、治疗、疫苗开发和科学研究等领域。
以上就是单克隆抗体制备的主要流程,这一技术的发明与发展给医学和生物科技领域
带来了重大的推动和创新。
单克隆抗体制备的详细步骤1.抗原选择:首先,需要选择目标抗原,该抗原可以是蛋白质、多肽或糖等。
抗原的选择应基于其与研究对象或疾病的相关性。
3.免疫动物选择:选择适合的免疫动物进行免疫。
一般常见的选择包括小鼠、大鼠、兔子等。
选择免疫动物的主要考虑因素是抗原的大小、复杂性和保守性。
4.免疫程序:将免疫原与免疫佐剂混合,并注射到免疫动物体内。
免疫的数量和时间应根据具体情况进行优化,以产生充分的免疫应答。
5.细胞融合:在免疫过程完成后,从免疫动物中收集免疫细胞,如脾细胞或骨髓细胞。
然后与髓样细胞瘤(如骨髓瘤细胞线(SP2/0)或骨髓瘤细胞线(NS0)等)融合。
这些瘤细胞是与免疫细胞无限增殖的细胞系。
6.细胞选择:将融合细胞分装到多孔板上,并添加抗生素来抑制非融合细胞的生长。
通常使用杂交瘤选择培养基来选择单个细胞。
7.筛选抗体:通过酶联免疫吸附试验(ELISA)或流式细胞术等方法,筛选和鉴定产生的杂交瘤细胞,以确定其分泌的单克隆抗体。
8.单克隆抗体的扩增:分离和扩增产生单克隆抗体的杂交瘤细胞。
这可以通过种植细胞到体外培养中进行,或者通过移植至小鼠腹腔来提高抗体产量。
9.抗体纯化:从培养上清液或小鼠腹水中纯化单克隆抗体。
纯化方法可以包括蛋白质A/G亲和层析或亲和层析柱。
10.抗体验证:进行抗体验证以确认其特异性和亲和力。
常用方法包括免疫印迹分析、免疫组织化学分析、免疫荧光染色等。
11.抗体保存:最后,将抗体储存于适当的条件下,以确保其长期保存和稳定性。
总结:单克隆抗体制备涉及到抗原选择、免疫原制备、免疫程序、细胞融合、细胞选择、筛选抗体、单克隆抗体的扩增、抗体纯化、抗体验证和抗体保存等步骤。
这些步骤通常需要耗费时间和精力,但通过精心设计和优化,可以获得高质量和高特异性的单克隆抗体,从而在研究和临床应用中发挥重要作用。
单克隆抗体药物生产工艺流程单克隆抗体药物生产那可是个很有趣的事儿呢。
咱先说说细胞构建这一块。
这就像是搭积木的第一步,要找到合适的细胞来生产咱们想要的单克隆抗体。
得从一些特殊的细胞系开始,这些细胞系就像是一个个小小的工厂原料,经过各种基因工程的魔法,把生产抗体的基因给它整合进去。
比如说,把那些能编码特定抗体的基因放进细胞的基因组里,就像给这个小工厂安装上了专门生产某种产品的机器。
这个过程需要特别精细,就像给一个超级精密的手表装零件似的,稍微差一点都不行。
细胞构建好了,就到了细胞培养的阶段啦。
这时候的细胞就像是一个个小婴儿,得给它们提供特别舒服的环境才能茁壮成长。
要有合适的温度,就像我们人感觉最舒服的温度那样,大概是37摄氏度左右呢。
还要有合适的营养物质,这就好比是给小婴儿喂的各种奶粉、辅食之类的。
像葡萄糖、氨基酸这些都是细胞宝宝爱吃的东西。
而且呀,这个环境还得特别干净,一点点污染都不能有,就像咱们住的房子,要是到处是灰尘垃圾,肯定住着不舒服,细胞也是一样的道理。
再说说收获这个环节吧。
等细胞培养到一定的阶段,就像果子成熟了一样,可以收获了。
这时候要把细胞从培养的环境里弄出来,可不能太粗鲁了,得小心翼翼的。
就像摘花一样,要是太用力,花就被弄坏了。
收获后的细胞里就含有咱们想要的单克隆抗体啦。
然后就是纯化的过程。
这就像是从一堆宝藏里把最珍贵的那颗钻石挑出来。
细胞里有各种各样的东西,但是咱们只想要单克隆抗体。
纯化就是用各种高科技的方法,把抗体和其他的杂质分开。
比如说利用抗体和一些特殊物质的亲和力不一样,就像磁铁吸铁一样,把抗体吸附出来,把其他东西留在一边。
最后就是制剂这一步啦。
纯化好的单克隆抗体还不能直接用呢,得把它做成合适的剂型。
就像咱们把面粉做成面包、面条一样。
可以做成注射液之类的剂型,这样就能方便地给病人使用啦。
这个过程也要注意很多细节,像药物的稳定性、无菌性这些都是必须要保证的。
单抗制备技术手册一、单的概念是机体在抗原刺激下产生的能与该抗原特异性结合的免疫球蛋白。
常规的制备是通过动物免疫并搜集抗血清的方式产生的,因此抗血清通常含有针对其他无关抗原的抗体和血清中其他蛋白质成份。
一样的抗原分子大多含有多个不同的抗原决定簇,因此常规抗体也是针对多个不同抗原决定簇抗体的混合物。
即便是针对同一抗原决定簇的常规血清抗体,仍是由不同B细胞产生的异质的抗体组成。
因此,常规血清抗体又称多抗体(polyclonal antibody),简称多抗。
由于常规抗体的多性质,加上不同批次的抗体制剂质量不同专门大,使它在免疫化学实验等利用中带来许多麻烦。
因此,制备针对预定抗原的特异性均质的且能保证无穷量供给的抗体是免疫化学家长期梦寐以求的目标。
随着杂交瘤技术的诞生,这一目标得以实现。
1975年,Kohler和Milstein建立了淋巴细胞杂交瘤技术,他们把用预定抗原免疫的小鼠脾细胞与能在体外培养中无限制生长的骨髓瘤细胞融合,形成B细胞杂交瘤。
这种杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征,既像骨髓瘤细胞一样在体外培养中能无限地快速增殖且永生不死,又能像脾淋巴细胞那样合成和分泌特异性抗体。
通过克隆化可得到来自单个杂交瘤细胞的单克隆系,即杂交瘤细胞系,它所产生的抗体是针对同一抗原决定簇的高度同质的抗体,即所谓单克隆抗体(monoclonal antibody),简称单抗。
与多抗相比,单抗纯度高,专一性强、重复性好、且能持续地无限量供应。
单抗技术的问世,不仅带来了免疫学领域里的一次革命,而且它在生物医学科学的各个领域获得极广泛的应用,促进了众多学科的发展。
Kohler和Milstein两人由此杰出贡献而荣获1984年度诺贝尔生理学和医学奖。
杂交瘤技术的诞生淋巴细胞杂交瘤技术的诞生是几十年来免疫学在理论和技术两方面进展的必然结果,生成的选择学说、基因的研究、结构与生物合成和其多样性产生机制的揭露等,为杂交瘤技术提供了必要理论基础,同时,骨髓瘤细胞的体外培育、细胞融合与杂交细胞的挑选等提供了技术贮备。