色谱柱清洗及保存方法

液相色谱柱维护保养及仪器冲洗注意：每个色谱柱使用之前都要阅读一下使用说明书;色谱柱维护保养是很重要的,关系到色谱柱的使用寿命和检测结果的准确性,所以任何人用过色谱柱之后,一定要对色谱柱进行保养,管理人员和使用者互相监督;总的原则是色谱柱要轻拿轻放,避免损坏填料；另外没有使用的情况下,一定要保证两端的堵头封好;对于具体的色谱柱,下面列出常用色谱柱维护保养的具体方法和注意事项,以便使用者参考;min缓慢升高到min不接检测器冲洗色谱柱30分钟后,将色谱柱与检测器连上,流速调为ml/min冲洗色谱柱60分钟,然后不断降低有机相的比例如80%、50%、10%甲醇或乙腈各冲洗至少30分钟;若色谱柱暂时不用,则将色谱柱保存在高比例有机相中如80%甲醇或乙腈,或者参考该色谱柱使用说明书中建议的溶剂中；色谱柱使用时应用与分析流动相相同比例的有机溶剂将缓冲盐溶液换成水冲洗色谱柱15分钟,然后再换成流动相进行样品分析;样品分析完后,色谱柱维护与保养方法：流动相中若含酸、碱、盐类物质,则要先用10%甲醇或乙腈冲洗,min的流速冲洗至少30min,再用80%甲醇或乙腈冲洗至少30min,柱子保存在80%甲醇或乙腈里具体问题具体分析,洗脱程序可以是梯度洗脱程序,注意如果最后色谱柱保存的是高有机相,第二天用之前一定要用高水相过渡一下,再换成流动相;如柱子长时间未用,则柱子保存在100%的甲醇或乙腈里;对于含有离子对试剂的流动相如庚烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等,柱子应采用梯度洗脱,一般用乙腈-水系统水：90-10；乙腈：10-90冲洗时间要稍长些,然后保存于90%乙腈;需要特别强调的是,目前所有的C18柱均不能用纯水进行长时间1小时以上冲洗,除非有专门耐水的专用柱,否则,用纯水长时间冲洗色谱柱,会导致色谱柱的固定相流失和相塌陷,损坏色谱柱;大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2~8,有的pH稳定范围会宽,具体pH稳定范围参照色谱柱说明书,当分析条件的pH值偏小或偏大时,可选择pH稳定范围宽的柱子进行分析,否则,会损坏色谱柱;在每次进行样品分析时,要保证流动相包括盐、缓冲盐、酸等与色谱系统及柱内的保存液要互溶,如不能互溶,则需要用一定比例的有机溶剂不低于10%或与分析流动相相当的有机溶剂对柱子进行过渡,否则,流动相中的盐会在系统与柱内析出,影响样品分析或损坏柱子;硅胶柱、正相手性色谱柱包括AS-H、AD-H、OD-H系列,5DMB、5TBB系列,OA 系列如OA-3100、OA-3300对于未启用的新的色谱柱,在保证系统是正相的情况下,可先用异丙醇小流速流速为~min冲洗色谱柱约15分钟,然后换上正相流动相平衡进行色谱分析;硅胶柱及正相手性柱不能过水相对于sepax系列的硅胶柱,可以过低比例的水相有机相不低于50%,接上色谱柱之前要保证液相色谱系统中的所有管路为正相流动相如是不含盐的反相溶液如水/乙腈；水/甲醇,先用异丙醇冲洗所有管路,然后用正相流动相冲洗所有管路,最后再接上色谱柱；若反相流动相中含有缓冲盐如缓冲盐/乙腈；缓冲盐/甲醇,先用纯水冲洗HPLC系统,然后用异丙醇冲洗所有管路,最后用正相流动相冲洗,再接上色谱柱;使用结束后,先用异丙醇冲洗色谱系统与色谱柱,再用色谱级的正己烷冲洗色谱柱,或者直接用正己烷－异丙醇90：10冲洗,并保存在正己烷－异丙醇90：10中;如长时间未用,则保存在正己烷中;需要特别强调的是,冲洗硅胶柱时,不能用纯水或含水的有机溶剂或缓冲盐体系冲洗色谱柱,只能用纯有机溶剂冲洗色谱柱对于sepax系列的硅胶柱可以用不低于50%有机相冲洗色谱柱,最后保存在纯的有机溶剂中;在进行样品分析前,一定要保证流动相与色谱系统及色谱柱柱内的保存液要互溶,如不互溶,则需要用异丙醇过度,否则,会影响色谱系统与损坏柱子;反相手性色谱柱如：CHIRALCEL OZ-3R：同C18柱阴离子柱和阳离子柱：目前常见的阴子柱有waters IC-Pak TM anion,阳离子柱有磺酸基阳离子柱与waters阳离子交换柱钙型;对于waters IC-Pak TM anion 和waters阳离子交换柱钙型,新柱子使用前用高纯水小流速min缓慢升高到min冲洗约30分钟,然后再换成流动相平衡色谱柱;在冲洗色谱柱之前,要保证整个色谱系统为纯水相;对于磺酸基阳离子柱含有硅胶基柱的,使用前用甲醇或乙腈小流速冲洗30分钟,然后高纯水替换系统冲洗,然后接上色谱柱;分析完样品后,对于waters IC-Pak TM anion和waters阳离子交换柱钙型用高纯水冲洗色谱柱,色谱柱最后保存在纯化水中;对于磺酸基阳离子柱,用50%的乙腈或甲醇冲洗色谱柱30分钟,最后保存在甲醇或乙腈中参照柱子说明书;冲洗所用流速根据柱子耐压情况进行调整;需要特别强调的是waters IC-Pak TM anion和waters阳离子交换柱钙型是不能过有机相纯有机溶剂或有机溶液,否则会损坏色谱柱;氨基柱、氰基柱、苯基柱及C8柱目前所使用的氨基柱、氰基柱、苯基柱及C8柱基本都是使用反相系统,其操作方法与维护保养与C18相同;对于新碰到的别的型号的色谱柱,如本规程没有说明时,要参照色谱柱说明书具体问题具体分析;液相仪器的冲洗1、冲洗色谱系统具体情况具体分析,可针对缓冲盐浓度较高的流动相一般做完试验冲洗完色谱柱后,换上两通,将各通道放于10%乙腈中冲洗至少30分钟若原色谱系统中流动相含盐,则用高纯水有时候用温水效果更好冲洗至少30分钟后再用10%乙腈冲洗;若仪器长时间不用,则将仪器保存于80%乙腈中; 2、清洗进样针、柱塞杆洗针液应选择能较好溶解样品的溶剂如该样品在70%甲醇中溶解,则洗针液应选择70%甲醇或更高比例的甲醇；清洗柱塞杆的溶剂为了清洗流动相中析出的盐,一般选择低比例的有机相,如10%甲醇或乙腈;3、仪器的钝化色谱泵溶剂过滤头、进出口阀及管路包括进样器和检测池若被污染,系统应做清洗和钝化处理;一般采用30%磷酸水溶液作为清洗剂,用6mol/L硝酸作为钝化剂,先清洗再钝化;清洗的目的是去除不锈钢管路及系统内的污垢;钝化的目的是使不锈钢管路的内表面形成光滑均匀的氧化膜;30%磷酸水溶液制备：取85%浓磷酸35ml与65ml水混匀;6mol/L硝酸的制备：取浓硝酸40ml与60ml水混匀;方法：将色谱柱取下,用两通连接进样器和检测器,将所有吸滤头放入高纯水中,以min流速过渡至少30分钟,待管路中有机溶剂洗脱干净；再换用30%磷酸清洗系统约45分钟,再换高纯水冲洗,直至出口水pH值约为6～7用pH试纸测试,清洗完成；然后换用6mol/L硝酸冲洗系统约45分钟,再换高纯水冲洗,直至出口水pH值约为6～7,钝化完成;用纯甲醇过渡,浸润泵头及管路,备用;。

色谱柱需要定期清洗的原因及清洗方法介绍在液相色谱仪检测分析过程中，硅胶色谱柱上被吸附的样品成分累积到一定程度时，就开始形成新的固定相。

新的检测物质能与残留杂质作用形成一定的分离机理，从而导致保留时间波动，出现拖尾现象。

随着时间的积累，色谱柱的反压就会超过泵所能承受的最大压力，使色谱柱无法工作以及在堵塞处产生空体积。

清洗色谱柱的频率主要看有多少强保留物质流经色谱柱，因为反相柱有时候在分辨率消失或者鬼峰出现前能承受很大的污染，使用者经常会等到出现了异常情况才开始注意。

然而，污染物过多的累积会导致清洗柱子的难度加大。

所以，经常用杂质较多的样品上样时，应当有规律地清洗柱子。

再生被污染的液相色谱柱的关键是了解污染物的性质并且找到适当的溶剂来清除。

如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的，可用90～100%较强的溶剂冲洗20个体积可以清除污染物。

例如，柱子中残留的脂质就能用非水溶剂如甲醇、乙晴、四氢呋喃。

如果使用的是缓冲液系统，不要直接切换到强溶剂，突然转换到高浓度有机溶剂可能会使HPLC流动体系中的缓冲液沉淀，这样会导致更大的问题如柱头堵塞、管道堵塞、泵泄漏、活塞损伤或进样阀转轴失灵。

应该先用无缓冲流动相(即把缓冲液换成水)冲洗5～10个体积以后才更换强溶剂。

有时候，强溶剂也没法把残留在色谱柱上的污染物洗掉。

那么就需要使用更强的溶剂或者多重溶剂来清洗柱子。

一般来说，所有的清洗方法都有类似的形式。

所用的溶剂都是随溶剂强度增加，经常最后一个溶剂是非常疏水的(如醋酸乙酯)，可以用来溶解非极性物质如脂质和油类。

在使用多重溶剂时，须保证每个溶剂都能与下一个溶剂互混。

清洗过程要结束时，必须借助一个中等强度能互混的溶剂而回到原始溶剂系统。

例如，异丙醇是一个非常好的作为中间步骤的溶剂，因为它能与正己烷或二氯甲烷互溶又能与水相溶剂互溶。

但是异丙醇粘度非常大，必须确保较低的流速以免使泵压过高。

当然，如果使用紫外检测器的话，避免溶剂在紫外区域有吸收，要不然需使用大量的溶剂冲洗才能使基线平稳。

离子色谱柱存放
色谱柱的保存色谱柱填充料的不同，其保存方法也各异。

一般而言，大多数阴离子分离柱在碱性条件下保存，阳离子分离柱在酸性条件下保存。

需长时间保存时（30天以上），先按要求向柱内泵入保存液，然后将柱子从仪器上取下，用无孔接头将柱子两端堵死后放在低温处保存。

短时间不用，每周应至少开机一次，让仪器运行1-2h。

色谱柱的清洗清洗色谱柱注意事项：清洗前，应将分离柱与系统分离，让废液直接排出。

另外，每次清洗后应用去离子水冲洗10min 以上，再用淋洗液平衡系统。

清洗时的流速不宜过快，在1ml/min以下。

无机离子的玷污离子半径较大的无机离子与交换基团结合，影响正常的交换分离。

首先应考虑用组分相同且浓10倍的淋洗液清洗色谱柱。

清洗阴离子分离柱上的金属离子（如Fe3+）使用0.1mol/L草酸。

清洗阳离子分离柱上的某些金属（如Al3+）可使用1-3mol/L HCl。

有机物玷污清洗色谱柱内的有机物常用甲醇或乙腈，但对带有羧基的阳离子分离柱需要避免使用甲醇。

低交联度的离子交换树脂填充的色谱柱（交联度小于5%）清洗液中有机溶剂的浓度不宜超过5%。

C18色谱柱的冲洗方法1.初次使用前的冲洗：在初次使用C18色谱柱之前，需要对其进行特定的冲洗步骤。

首先，将纯水通过柱底部注入柱中，使得柱内充满水。

然后，将纯水缓慢通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。

接下来，使用有机溶剂（如甲醇或乙腈）进行冲洗。

首先，缓慢注入有机溶剂，使其通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。

然后，重复此步骤两次以确保彻底冲洗。

2.样品前的冲洗：在每次分析之前，都需要对C18色谱柱进行样品前的冲洗。

首先，使用纯水进行冲洗。

将纯水通过柱底部注入柱中，使其充满整个柱。

然后，将纯水缓慢通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。

接下来，使用有机溶剂进行冲洗。

缓慢注入有机溶剂，使其通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。

最后，使用移液枪或注射器将样品注入柱中进行分析。

3.淋洗液的冲洗：在一些情况下，可能需要对C18色谱柱进行淋洗液的冲洗。

淋洗液是指用于去除吸附在色谱柱上的杂质或其他有机溶剂的溶液。

常用的淋洗液包括醋酸、甲醇、乙腈等。

将淋洗液通过柱底部注入柱中，使其充满整个柱，然后缓慢通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。

根据需要，可以进行多次淋洗液冲洗，以确保柱的性能。

4.结束使用后的冲洗：在每次使用C18色谱柱之后，都需要进行结束使用后的冲洗。

首先，使用纯水进行冲洗。

将纯水通过柱底部注入柱中，使其充满整个柱。

然后，将纯水缓慢通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。

接下来，使用有机溶剂进行冲洗。

缓慢注入有机溶剂，使其通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。

最后，将柱封口或存放在适当的溶剂中，以保护柱的性能。

总之，C18色谱柱的冲洗方法包括初次使用前的冲洗、样品前的冲洗、淋洗液的冲洗以及结束使用后的冲洗。

通过正确的冲洗方法，可以保证C18色谱柱的性能，提高分析的准确性和可靠性。

正相色谱柱冲洗和保存
（1）使用高纯度水或纯化的有机溶剂进行柱洗，以彻底清洗色
谱柱中的杂质和残留物。

（2）使用专门的柱洗剂进行柱洗，以帮助去除附着于柱子表面的杂质和有机物。

（3）使用有机溶剂进行柱洗，以去除附着于柱子表面的脂类和氧化物。

2. 保存方法：
（1）储存柱子应放在干燥、避光、温度稳定的地方，以保证柱子不受湿气和光照的影响。

（2）避免柱子长时间存放在高温或低温环境中，以避免柱子变形或破裂。

（3）在储存柱子之前，必须将其完全冲洗干净，并确保柱子内不含任何溶液或残留物。

（4）在柱子存放期间，定期检查柱子状态，以确保其没有发生变形或磨损。

以上是正相色谱柱冲洗和保存的相关内容，希望能对您有所帮助。

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1.色谱柱的活化30个柱体积，然后用甲醇/乙腈：水（50:50）冲洗10个柱体积，然后再用流动相平衡30柱体积。

=9：1冲洗30倍柱体积，再流动相平衡30个柱体积。

100%甲醇或乙腈冲洗30个柱体积，然后转换到流动相平衡。

用于反相色谱时，先用异丙醇或乙醇冲洗色谱柱50-100个柱体积，然后用甲醇/乙腈：水（50:50）冲洗10个柱体积，然后再用流动相平衡30柱体积。

50倍柱体积50/50乙腈/水活化平衡，然后再用流动相平衡30柱体积。

2.色谱柱的清洗保存和再生清洗：如使用缓冲盐，先用高比例水相冲洗30个柱体积，然后再转换到80%有机相冲洗30个柱体积。

再生：用95%水，甲醇，异丙醇，甲醇，95%水分别冲洗30个柱体积，在第一次用95%水时，进样10次100 μL DMSO。

清洗：100%乙醇0.3ml/min 3h，再用正己烷：异丙醇=9：1冲洗30倍柱体积并保存。

再生：根据不同类型正相柱选择。

[常规正己烷/异丙醇的柱子，乙醇（0.1%三氟乙酸）0.3ml/min 3h，乙醇0.3ml/min 3h，乙醇（0.1%二乙胺）0.3ml/min 3h，乙醇0.3ml/min 3h，正己烷：异丙醇=9：1冲洗30倍柱体积]清洗：用100%水冲洗30个柱体积去除盐，然后用100%甲醇或乙腈冲洗30个柱体积后保存在50%甲醇或乙腈中。

再生：先用高浓度盐的缓冲液清洗（浓度可以是5-10倍，不超过1M），然后再用100%水洗，50%乙腈或甲醇保存。

清洗：反相使用时同反相C18色谱柱，如短期不用，可用95%甲醇或乙腈保存;长期不用时需用异丙醇置换，最后用正己烷保存。

再生: NH2柱用于反相条件时，NH2键会水解，先用含1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗30个柱体积，乙腈-水(50:50)冲洗30个柱体积，95%水/5%乙腈冲洗30个柱体积，异丙醇冲洗30个柱体积，95%乙腈/5%水冲洗30个柱体积并保存。

实验室的工作人员如果有长时间不在实验室的行程，那么他们是需要把色谱柱保存起来的，那该用什么办法能比较好的保存色谱柱呢？今天小编就带大家一起来了解一下，涨涨知识吧！一、气相毛细管柱保存方法:气相色谱柱的保存相对比较简单，具体步骤可以参考如下：1、将毛细管柱从气相色谱仪上取下来；2、将毛细管柱的柱两端分别用废旧的隔垫进行密封；3、将两端封好后的色谱柱放置于原包装盒内，气相色谱柱的保存就完成了。

二、液相色谱柱的保存方法液相色谱柱的保存不像气相柱那么简单，它往往需要保存在特定的溶剂中，正确的保存溶剂可以有效的提高柱子的寿命。

保存时间的长短和色谱柱基质的类型都会影响到保存溶剂的正确选择。

（一）保存时间色谱柱根据保存时间的长短可分为短期保存和长期保存。

①短期保存：一般不超过72小时即可视为短期保存，此时色谱柱可以直接保存在方法流动相中，但含有缓冲盐流动相的要保存在不含缓冲盐的过渡流动相中，如流动相是乙酸铵-甲醇（95-5），保存溶剂是水-甲醇（95-5）。

②长期保存：如色谱柱暂时不用，需要长时间保存，必须经清洗后存于合适的溶剂下。

长期保存条件下，合适溶剂的选择就需要依据色谱柱的基质类型来确定了。

下面就从不同的基质类型角度谈一谈色谱柱的正确保存。

（二）基质类型按照基质类型，色谱柱可以分为硅胶基质和聚合物基质，这两种基质溶剂的选择是不一样的。

无论哪种基质类型，色谱柱的清洗是色谱柱保存关键的第一步，要旨就是将色谱柱的溶剂逐步替换成保存溶剂。

三、硅胶基质色谱柱保存方法常见硅胶基质色谱柱的保存溶剂：备注：氨基柱、氰基柱可以反相使用，也可以正相使用，保存方法参考其使用方式，正相方法使用就参考正相柱保存方法，反相方法使用就参考反相柱方法保存。

1、清洗保存步骤反相：乙腈-水（95-5）10倍冲洗柱体积，梯度过渡到纯乙腈10倍柱体积。

如果没有梯度程序，可中间增加水-乙腈（50-50）过渡。

正相：用20-30 倍柱体积的异丙醇清洗，因异丙醇粘度较大可适当放低流速，再用正己烷冲洗10倍柱体积保存。

月旭液相色谱柱安全操作及保养规程月旭液相色谱柱是一种常见的实验室仪器，它广泛应用于药物分析、生命科学和环境保护等领域。

在使用月旭液相色谱柱时，正确的操作和保养至关重要，这不仅可以提高实验结果的准确性和可靠性，还可以延长液相色谱柱的使用寿命。

本文将介绍月旭液相色谱柱的安全操作和保养规程。

安全操作1. 压力限制液相色谱柱在操作时会产生高压，因此必须确保操作过程中压力始终处于安全范围内。

不同型号的液相色谱柱压力限制不同，应严格按照仪器使用说明书上的指示进行操作，不得超过压力限制值。

此外，当压力突然升高时，应立即停止操作并进行检查。

2. 操作前检查在操作前，应检查柱子和接头的密封性。

如果柱子和接头的密封不良，将导致流体泄漏和柱子的破裂，从而对操作人员和仪器造成伤害。

因此，应定期检查柱子和接头的密封性，并在发现问题时及时更换。

3. 操作时的防护措施在使用月旭液相色谱柱时，应遵守实验室的安全操作规程。

操作人员应正确穿戴实验室安全防护用品，如实验室大衣、护目镜、手套等。

4. 操作结束后的处理操作结束后，应按照实验室的废物处理规程处理废液和废料。

同时，应关闭色谱柱，并按照操作手册上的指示进行保养。

保养规程1. 柱子储存月旭液相色谱柱应在常温下储存，并保存在干燥通风的地方。

柱子不得存放在高温和高湿的环境中。

2. 定期检查和保养在使用液相色谱柱过程中，应定期进行检查和保养。

首先，检查并清洗柱子表面，以确保表面的洁净和光滑。

其次，检查紫外可见检测器和泵的运行情况，确认设备的正常运行。

如果发现设备不正常，则应立即停止使用并进行维护。

3. 液相色谱柱的清洗清洗液相色谱柱的方法主要包括用纯水冲洗、以及使用醇、甲醛等溶液进行反向冲洗。

清洗时应避免使用强酸或强碱。

清洗后，应将色谱柱空转数小时，以便将水分和其他残留物完全清除。

4. 更换液相色谱柱液相色谱柱随着使用时间的增加和寿命的结束，应定期更换。

在更换柱子时，应按照操作手册上的指示进行操作。

C18色谱柱的冲洗方法
C18色谱柱是一种常用的反相色谱柱，广泛应用于分离和纯化生物大分子、有机化合物等物质。

为了保证色谱柱的稳定性和使用寿命，有必要进行适当的冲洗。

以下是C18色谱柱的冲洗方法：
1. 使用纯水预洗：首先使用高纯度的水（如去离子水）预洗色谱柱，既可清除杂质，也可减少游离硅胶的溶解。

预洗时间一般为30分钟至1小时。

2. 醇洗法：使用有机溶剂如甲醇、乙醇等进行洗脱，可清除游离硅胶表面的疏水杂质与氧化物。

洗涤方法是按照以下顺序，首先使用甲醇洗脱5-10柱体积，随后使用水甲醇（95:5）混合液洗脱5柱体积。

最后用纯水洗脱2-3柱体积，以消除杂质和有机残留。

3. 酸洗法：使用pH值为2-3的酸溶液进行洗脱，可清除碱金属离子、氧化物等硅胶上的杂质和污染。

一般使用的酸为1%三氟乙酸（TFA）或1%醋酸溶液。

洗脱顺序为先使用甲醇洗脱5柱体积，然后使用酸溶液洗脱5柱体积，最后用酸性水洗脱2-3柱体积。

请根据具体情况选择合适的冲洗方法，尽量避免出现对色谱柱产生伤害的情况。

c18色谱柱冲洗方法C18色谱柱是一种常用的反相色谱柱，用于分离和分析各种有机物。

在使用过程中，由于样品的复杂性和柱子的不同寿命，需要进行定期的冲洗和维护，以保持色谱柱的性能和延长使用寿命。

C18色谱柱的冲洗方法主要包括前冲洗和后冲洗。

1.前冲洗：在使用新的C18色谱柱之前，首先需要进行前冲洗以清除潜在的杂质和柱子中的空隙。

前冲洗一般使用有机溶剂和水的混合物。

以下是一种常用的前冲洗方法：a.使用无机盐和有机溶剂制备一个50%的有机溶剂溶液。

常用的有机溶剂包括乙腈和甲醇等。

b.使用前述有机溶剂溶液和水制备50%的有机溶剂和50%的水的混合物。

c. 运行液相色谱系统，将50%有机溶液和50%的水的混合物以1mL/min的流速通过C18色谱柱进行前冲洗。

冲洗时间通常为15-30分钟。

2.后冲洗：后冲洗是指在使用C18色谱柱一段时间后，柱子表面可能会附着样品残留物，需要进行清洗以恢复柱子表面的性能。

以下是一种常用的后冲洗方法：a.使用90%甲醇和10%水的有机溶剂制备后冲洗溶液。

b. 运行液相色谱系统，将后冲洗溶液以1mL/min的流速通过C18色谱柱进行后冲洗。

后冲洗时间通常为30-60分钟。

3.再生：如果C18色谱柱因样品残留物和其他污染物而导致性能下降，可以考虑进行柱子的再生。

以下是一种常用的再生方法：a.使用90%甲醇和10%水的有机溶剂制备再生溶液。

b. 运行液相色谱系统，将再生溶液以1mL/min的流速通过C18色谱柱进行再生。

再生时间可以根据实际情况进行调整，通常为30-60分钟。

c.再生后，使用前述的前冲洗方法进行前冲洗，以确保柱子完全清洁。

值得注意的是，柱子的冲洗方法应该根据具体实验条件和样品的特性来确定。

在冲洗过程中，也要注意保持流速稳定，避免超过柱子的最大压力，以免对柱子造成损害。

总之，C18色谱柱的冲洗方法是保持色谱柱性能和延长使用寿命的重要步骤。

通过定期的前冲洗、后冲洗和再生，可以有效地清除样品残留物和污染物，使色谱柱保持良好的分离效果和稳定性能。