种牛冻精保存和使用
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精液冷冻保存是将精液进行特殊处理,保存在超低温下,以达到长期保存的目的。
通常采用液氮(—196℃)和干冰(—79℃)保存。
其最大优点是可长期保存,使用不受时间、地域以及种用雄性动物寿命的限制。
可充分提高公牛的利用率。
现将冷冻精液保存起来和怎样进行解冻及给母牛输精的有关技术操作介绍如下,供参考。
一、稀释液的配方:12%的蔗糖液75毫升、甘油5毫升、卵黄液20毫升。
二、稀释方法:将经过检查合格的精液(活力0•6以上、精子密度中等)按1:2—5倍稀释液进行稀释,其稀释原则应保证每个颗粒精液中所含精子数不少于3000—4000万个,解冻后呈直线前进运行的精子不少于1500万个。
三、冷冻:在装有液氮的容器上置一铜纱网,距液氮面2厘米左右,使温度维持在—80℃至—100℃。
将平衡后的精液用滴管按一定量(0•1毫升)滴于铜纱网、滴完最后一滴停3—5分钟后,当精液颗粒颜色变白时,立即浸入液氮,并将全部颗粒取下,收集于贮精瓶或纱网布袋内,并做好标记,然后立即移入液氮罐中贮存。
四、解冻:将预先配制好的2•9%柠檬酸的溶液1毫升,放入干净的小试管中,再置于40℃左右的温水杯中,迅速取颗粒冷冻精液1粒放入试管。
轻轻摇动至化冻时,从水杯中取出试管,接着检查精液活力,不低于0•3即为合格品。
五、重视保精、快速解冻与镜检1、根据液氮罐的性能要求,定期添加液氮罐内盛装冻精的提筒不能露在液氮面外。
2、取精时,尽可能用长镊子,切勿将提筒或纱布袋提到临界线以上处(罐顶10厘米左右)。
3、从液氮中取出细管冻精时,要轻轻甩1—2下,将塑料细管的棉塞端放入35—40℃的温水中,把封口端留在水外1—1•3厘米外,待管内精液融化一半时,立即取出备用。
4、解冻后的精液镜检时,精子的活力不低于0•3方可用于输精,才能确保正常受精。
种公牛冷冻精液的生产技术要点一、采集和保存精液:选择健康、繁殖性能好的公牛进行采精,采精前进行适当的饲养管理以提高精液的质量。
采集精液的方法主要有人工采精和电刺激采精。
采集后的精液要先进行初步的质量检测,包括测定精液的外观、颜色和排量等。
然后将精液放入离心管中,使用低温保存方法,比如3-5℃的冷藏保存。
二、精液的净化和稀释:将冷藏的精液进行净化处理,去除不良精子、污染物和其他杂质。
常用的净化方法有磷酸盐缓冲液和优质凝胶管等。
净化后的精液需要进行适当的稀释,以增加其使用寿命和受孕能力。
一般使用生理盐水、乳酸盐缓冲液或高浓度的葡萄糖溶液稀释精液。
三、冷冻过程控制:冷冻是公牛冷冻精液生产中重要的一个环节。
在冷冻过程中,应该控制好冷冻速率和温度,以确保精液的质量。
一般采用半自动或全自动的冷冻设备,设定合适的冷冻速率和温度曲线。
常见的冷冻方法有单层管冷冻法、玻璃精液器冷冻法和薄膜袋冷冻法等。
四、冷冻精液的质量检测和评估:冷冻精液的质量检测和评估是公牛冷冻精液生产中必不可少的一步。
主要包括检验精液的精活率、活动度、存活时间和留液率等指标。
检测方法一般有显微镜检测法、显微镜活力评价法和睾丸分类法等。
五、冷冻精液的保存和配送:冷冻精液的保存和配送是确保公牛冷冻精液质量的重要环节。
保存时,将冷冻精液放置在液氮罐中,保持温度在-196℃以下。
配送时,使用专用的冷冻精液运输容器,保持温度稳定,避免温度震荡和冷冻精液的泛化和过冷现象。
六、冻精的使用:冷冻精液在使用前需要经过解冻处理,一般采用暖水解冻法或暖空气解冻法。
解冻后的精液要经过活力恢复处理,使用添加剂和改良剂等,以提高受孕能力和存活时间。
然后将精液精确地注入母牛或其他接受者的生殖道中,进行人工授精或人工受孕。
七、监测和追踪:公牛冷冻精液的生产过程中需要进行监测和追踪,以确保产品质量和追溯精液来源。
监测包括食品安全监测和药物残留监测等。
追踪包括生产者的信息、精液的来源、采集时间和精液的配方等。
肉牛细管冻精配种实用操作技术细管冻精是用直径小、管壁薄的无毒塑料管盛装精液后冷冻而成。
由法式凯苏输精枪输精。
与颗粒冻精比较,具有冷冻时受冻均匀、解冻时受热一致、解冻方便、输精时不易污染、避免精液和液氮的直接接触、精子活力好,受胎率高的优点。
一、适用范围:黄牛改良人工授精站(点)。
二、输精枪的消毒:⑴先用"洗涤剂"洗涤,然后用清水冲洗数次,再用38-40℃的蒸馏水冲洗。
⑵塑料制品用75%的酒精棉球擦试消毒,金属制品用煮沸消毒或高压灭菌消毒。
⑶消毒完毕后,用消毒纱布包好,放在无菌消毒槽中备用。
三、细管冻精的保存及使用1、细管冻精装在指形塑料管内,指形管装在贮精罐提筒内,贮精罐提筒务必浸在液氮中。
2、取冻精时,根据标牌、标号用镊子从指形管中夹出所需种牛冻精,不得将盛放冻精的提筒或指形管提到液氮罐外面,只能提到液氮罐颈下的10厘米处,若经6秒钟仍不能取出冻精时,应迅速将提筒放入液氮中浸泡,稍后再取。
四、解冻与装枪1、取出细管冻精迅速放入38±2℃水中直接浸泡,或用镊子夹着轻轻摆动,经15秒钟后提出,用无菌纱布擦干细管表面,用消毒过的专用剪刀剪去封口端。
2、左手持输精枪,右手将推进器杆向外拉出约13厘米,把细管有棉塞的一端放入枪膛内,或将细管有棉塞的一端套在输精枪推杆头上,用手将细管推入输精枪膛。
3、把塑料套管套入输精枪枪管上,用塑料套管固定圈将塑料套管固定在输精枪把手上。
五、输精:⑴用直肠把握子宫颈法。
慢插、轻注、缓出。
⑵每头发情母牛每次输精应用一支细管(解冻后呈直线前进的精子数1000万个以上),每一情期可在第一次输精后12小时再输精1次,假若判断正确,每一情期可输精1次。
⑶若连续输精,每次输精都应更换消毒过的塑料套管。
六、用后器械处理:⑴输精完毕,先取下塑料套管固定圈,再取下塑料套管。
⑵已顶在塑料套管头部的绿色密封塞,可用细铁丝从塑料套管头部孔中顶下来。
(注意细铁丝直径应大于密封塞头部的小孔直径)。
冻精冷配改良当地黄牛技术要点
冻精冷配是现代畜牧业的一项重要技术。
黄牛育种也需要采用这项技术,以提高黄牛品种的纯度和优良性状。
对于冻精冷配技术的改良,下面介绍一些具体要点。
1. 精液采集
精液采集是冻精冷配的第一步。
为了采集到高质量的精液,应该先预备好采集场所,以确保场所的环境干净卫生,避免精液污染。
同时,要确保黄牛身体健康,精液产出量正常,以便获得高质量的精液。
2. 精液保鲜
采集到的精液需要进行保鲜处理,一般主要有两种方法,一种是直接使用冰块进行冷却,另一种是使用特殊的保鲜液体,将精液放入液体中保持湿润,避免精液脱水。
在保鲜过程中,应该将精液放置在适当的温度和湿度条件下,以确保它保鲜效果。
3. 精液冻存
精液冻存是冻精冷配技术中非常重要的一步。
为了冻存精液,应该使用专用的冻存仪器,并选择正确的冻存方法。
在冻存时,应该确保精液的存储温度为-196℃,并且使用专门研制的保护剂,以保护精液的完整性并减少精液冰冻对精子的损害。
4. 精液快速解冻
在冻精冷配过程中,解冻精液必不可少。
为了快速解冻精液,在解冻过程中,应该避免直接用热水解冻,因为这样容易破坏精子细胞质,并影响黄牛受孕的效果。
解冻采用逐步解冻法,即先将精液从-196℃放入液氮中,冷却10秒钟左右,然后移入-25℃的恒温水中,以逐步增加温度,解冻时间在1分钟左右,以保证精液恢复活力。
以上就是冻精冷配技术改良在黄牛饲养中的一些主要要点,冻精冷配技术的使用不仅可以提高黄牛品种的纯度和性状,还可以增加环境质量和生产效益,提高饲养者的收益。
牧场的繁殖方式以人工授精为主。
冷冻精液是牧场繁殖后代的重要遗传物质,其质量的好坏会直接影响人工授精的成功率。
牧场为提高群体生产性能,通常会采购优质种公畜冻精,甚至引进纯种公畜冻精。
加强冻精的保存和合理使用冻精是做好牧场繁殖工作的重要环节。
1冻精保存
1.1存放冻精的液氮罐应放在平整、干燥、防腐
蚀的地方,并避免阳光直射。
1.2存放冻精的液氮罐应保持稳定,避免过多地移动或振荡。
1.3定期检查液氮罐,确保罐体、塞子密闭性完好,防止液氮泄露。
1.4定期加注液氮,确保液氮罐罐体内的液面在冻精袋以上。
2
冻精使用2.1分装冻精时,一个冻精袋内只装一个冻精号的冻精,确保取用冻精时一次到位。
2.2
为液氮罐制订库存管理清单,列出罐内每个
冻精袋中的冻精号及数量,有冻精进出液氮罐
时,及时更新清单上的冻精号及数量。
2.3取用冻精时,冻精袋提升高度不要超过液氮罐颈部,防止温度变化影响冻精的活力及繁殖
力。
2.4
取用冻精做到快速、准确,避免冻精长时间暴露在空气中。
冻精袋暴露在空气中的时间不应超过10s ,若超过10s 冻精还未取出,应将冻精袋浸入液氮20s 后再取。
对液氮罐和冻精的每一步操作都会影响冻精的活力和繁殖力,即使操作方法正确,也会造成不良影响,而错误的操作,对冻精活力和繁殖力的影响更大。
■庞权,李健,杨彪
(四川省阳平种牛场,四川洪雅623060)
中图分类号:S814.3文献标识码:C 文章编号:1001-8964(2019)09-0040-01
收稿日期:
2019-07-29
40。
冻精冷配改良当地黄牛技术要点随着畜牧业的发展,提高黄牛品种的产量和质量已成为农户和养殖户关注的重点。
冻精冷配改良当地黄牛技术是一种有效的提高黄牛品种的方法,通过使用冷冻精液进行人工受精,可以有效地提高黄牛的遗传质量,增加优良品种的繁殖率,并对黄牛的育种工作起到重要的推动作用。
本文将重点介绍冻精冷配改良当地黄牛的技术要点。
一、选择优质种源在冻精冷配改良当地黄牛的过程中,首先要选择优质的种源。
优质种源主要包括种公牛和母牛,其中种公牛的选育尤为重要。
种公牛应有良好的遗传背景、良好的生长性能、适应性强、产精能力强等特点。
母牛也要选择外形饱满、产量高、乳质好、易于育种等品种。
二、科学管理对于种公牛和母牛的管理也要科学规范。
在饲养过程中,要合理配置饲料,保证蛋白质、矿物质等营养物质的摄入,使其生长发育良好。
要加强对种牛的疾病防治工作,确保种牛的身体健康,提高受精成功率。
三、冷冻精液的采集和保存在冻精冷配改良当地黄牛的技术中,冷冻精液的采集和保存至关重要。
在精液采集过程中,要选择健康的种公牛,采用无菌操作,避免细菌的污染。
采集后要迅速进行处理,将精液进行分装并加入冻精剂,通过逐步降温的方法将精液冷冻保存起来。
冷冻精液的保存要在科学的条件下进行,确保精液的存活率和质量。
四、人工受精操作在进行人工受精操作时,要注意以下几点:首先是要选择受精窗,精液要在最佳的时间进行注入。
其次是注入精液的技术,要进行专业的操作,确保精液能够被子宫颈内膜吸收。
最后是要进行观察,及时检查受精情况,如果发现有问题要及时处理。
五、及时饲养和管理在冻精冷配改良当地黄牛的整个饲养和管理过程中,决定了黄牛后代的品质和数量。
在受精成功后,要加强对母牛的照料和管理,保证母牛在怀孕期间的营养和保健。
在产后,要注意母牛和黄牛的饲养和照料,确保幼崽的健康成长。
六、遗传改良在冻精冷配改良当地黄牛的技术中,要不断地进行遗传改良工作。
要根据黄牛的生产性能和遗传特点,选择出优秀的后代,逐步改良黄牛的品种,提高黄牛的产量和质量。
冻精冷配改良当地黄牛技术要点近年来,随着畜牧业的发展和科技的进步,人们对于畜牧业的需求也越来越高。
特别是对于黄牛的养殖,更是受到了人们的关注。
为了提高当地黄牛的产量和质量,冻精冷配技术得到了广泛的应用,取得了较好的效果。
下面我们就来介绍一下冻精冷配改良当地黄牛的技术要点。
一、选用优质种牛在进行冻精冷配改良当地黄牛的过程中,选用优质的种牛是非常重要的一步。
种牛的选择是决定整个养殖效果的重要因素之一。
优质的种牛不仅可以提高黄牛的育种效果,还可以保证后代黄牛的产量和质量。
在选择种牛时,一定要选择品种规范、健康状况良好、生产性能优越的优质种牛,以确保后代黄牛具有较高的生产力和繁殖力。
二、科学冷冻精液的储存和使用冷冻精液的储存和使用是冻精冷配技术中非常重要的一个环节。
在储存和使用过程中,需要严格按照科学的标准操作,以确保冷冻精液的质量和存活率。
要选择正规的冷冻精液供应商,确保精液的来源和质量。
在储存过程中,要控制好温度和湿度,避免精液受到污染和变质。
在使用过程中,要按照标准的操作程序进行,确保精液的存活率。
三、合理的配种计划在进行冷配改良当地黄牛的过程中,制定合理的配种计划是非常重要的。
合理的配种计划可以提高黄牛的繁殖效率,减少养殖成本,提高养殖效益。
配种计划应该根据种牛的生产性能和黄牛的繁殖情况进行制定,比如在黄牛繁殖旺盛的季节增加配种次数,在繁殖不活跃的季节适当减少配种次数,以确保黄牛的繁殖效果和生产力。
四、科学的饲养管理在进行冷配改良当地黄牛的过程中,科学的饲养管理是至关重要的一环。
科学的饲养管理可以提高黄牛的生产性能,减少疾病发生率,提高养殖效益。
要根据黄牛的生长发育情况和繁殖状态,合理配制饲料,确保黄牛的营养需求。
要定期进行健康检查,及时发现和治疗疾病,保障黄牛的健康。
要保持合理的饮水和通风条件,创造良好的生活环境,促进黄牛的生长和发育。
五、定期监测评估在进行冷配改良当地黄牛的过程中,定期监测评估是非常重要的一步。
冻精冷配改良当地黄牛技术要点冻精冷配是一种新型的牛种改良技术,其主要用于提高当地牛种的优质品种的遗传基础。
其主要技术要点包括以下几点:1. 冻精的采集和保存:冻精的采集需要选取优质、具有良好遗传特性的种公牛进行人工授精。
采集完成后,需要进行冻精处理。
冻精的保存需要进行特殊条件下的低温保存,通常使用液氮进行冷冻保存。
冻精的保存条件要求极为苛刻,需要保持低温、无氧、无菌的环境,以确保精子的生存和遗传物质的完整性。
2. 人工授精:冻精可以使用人工授精的方式进行。
在人工授精过程中,需注意保持合适的温度和环境湿度,以确保冻精的活力和存活率。
要注意授精时间、授精部位和授精方法等因素的选择,以提高授精成功率。
3. 冷配的选择:冷配是指使用冻精进行自然交配。
在冷配前,需要对母牛进行检查,确保其身体健康、发情正常,并且没有其他疾病。
需要根据冻精的特性和质量,选择合适的冷配比例,以达到配种的效果。
4. 冻精的解冻和质检:冷配前,需要对冻精进行解冻处理。
解冻的过程需要逐渐回温,同时要避免冷冻过程中可能引起的损伤。
解冻完成后,需要对冻精进行质检,以评估精子的存活率、活力和遗传物质的完整性。
5. 人工控制配种周期:为了更好地控制冷配的效果,在冷配前后,可以通过人工的方式对配种周期进行控制。
通过调节母牛发情期的表现和控制配种的时间,可以提高冷配的成功率,并减少配种周期的时间。
冻精冷配改良当地牛种的技术要点包括冻精的采集和保存、人工授精和冷配的选择、冻精的解冻和质检以及人工控制配种周期等。
这些要点的正确操作可以提高冷配的成功率,最终达到牛种改良的目的。
种公牛冷冻精液的生产技术要点种公牛冷冻精液的生产技术要点主要包括收集精液、处理精液、冷冻保存和质量控制等环节。
下面将对其进行详细阐述。
1.收集精液:精液采集是种公牛冷冻精液生产的首要环节。
常用的采集方法包括人工采精和自然射精。
人工采精是通过人工刺激公牛阴茎来收集精液,而自然射精则是让公牛与母牛进行配种,收集由自然射精获得的精液。
无论是采用哪种采集方式,都需要保持环境清洁、公牛精神愉快,以确保采集到的精液质量良好。
2.处理精液:处理精液的目的是去除掉精液中的杂质和无生殖活力的精子,以提高精液质量。
需要对采集到的精液进行初步检验,检查精液的颜色、液体透明度、精子浓度和活力等指标。
然后,将精液进行离心分离,将液体和固体部分分离,获得纯净的精液液体。
使用特殊的器具对精液进行过滤,去除掉其中的杂质,使精液更加纯净。
3.冷冻保存:冷冻是种公牛精液保存的常用方法。
在进行冷冻之前,需要将精液进行稀释,将其稀释成冷冻保护剂浓度适宜的液体。
然后,将稀释后的精液按照一定的容量装入小瓶中,每个瓶子装入一定数量的精液,并标明公牛的相关信息。
接下来,将装有精液的小瓶放入冷冻容器中,降低温度到-196℃,进行快速冷冻。
快速冷冻可防止冰晶的形成,以保持精子的完整性。
4.质量控制:种公牛冷冻精液的质量控制是保障精液质量的关键环节。
常用的质量控制方法包括观察精液外观、检测精液液体透明度和pH值、测定精子浓度和活力、鉴定精液中的细菌和病毒等。
只有通过严格的质量控制,才能保障种公牛冷冻精液的质量稳定和安全性。
种公牛冷冻精液的生产技术要点包括收集精液、处理精液、冷冻保存和质量控制等环节。
只有通过合理的操作和科学的管理,才能生产出高质量的种公牛冷冻精液,为牛群繁殖提供良好的基因资源。
冻精冷配改良当地黄牛技术要点冻精冷配是一种较为先进的人工授精技术,它可以有效地提高牛群的繁殖效益。
当地黄牛技术的改良,主要包括改进冷藏冷冻精液的保存和配种操作的提升。
以下是其中的要点。
1. 冷藏冷冻精液的保存:- 选择合适的冷冻精液保存器,确保温度和湿度的控制稳定。
- 在保存过程中,及时监测和调整保存器的温度和湿度,确保精液品质的稳定。
- 定期检查冷藏冷冻精液的保存器,确保设备正常工作。
- 加强对冷冻精液保存的管理和记录,包括入库时间、出库时间、品质评估等。
2. 配种操作的提升:- 在配种前,对母牛进行快速排尿清洁和外阴消毒,减少细菌污染。
- 选择适宜的配种时间,即在母牛发情高峰期进行配种,提高受胎率。
- 使用合适的人工授精枪、套管和手套等工具,确保操作的卫生和安全。
- 控制进入母牛体内的精液量,一般为0.15-0.25ml,确保精液的有效利用。
- 迅速取出人工授精枪,防止精液的反流和破坏。
3. 加强配种技术培训:- 对参与冷冻精液保存和配种操作的人员进行培训,包括理论知识和实际操作。
- 强化对基本知识和技巧的掌握,包括动物解剖学、生殖生理学和人工授精操作等。
- 培养人员的实际操作经验,通过模拟训练和实际配种操作,提高技术水平。
- 定期组织技术交流和培训会议,分享经验和解决问题,促进技术的进一步发展。
4. 加强配种管理的监测:- 根据牛群的繁殖目标和需求,设定合理的配种管理指标,包括受胎率、配种间隔、产仔率等。
- 对每次配种进行记录和统计,包括配种时间、配种方法、配种精液来源等。
- 定期对配种数据和产仔情况进行分析和评估,及时发现问题,并提出相应的改进方案。
- 加强对配种管理的监测和考核,对技术人员的工作进行奖励和激励,提高工作质量和效率。
如此,通过改良冷精冷配技术和提升当地黄牛技术,可以更好地利用人工授精技术提高牛群的繁殖效益,促进牧业的发展。
精液冷冻保存是将精液进行特殊处理,保存在超低温下,以达到长期保存的目的。
通常采用液氮(—196℃)和干冰(—79℃)保存。
其最大优点是可长期保存,使用不受时间、地域以及种用雄性动物寿命的限制。
可充分提高公牛的利用率。
现将冷冻精液保存起来和怎样进行解冻及给母牛输精的有关技术操作介绍如下,供参考。
一、稀释液的配方:12%的蔗糖液75毫升、甘油5毫升、卵黄液20毫升。
二、稀释方法:将经过检查合格的精液(活力0•6以上、精子密度中等)按1:2—5倍稀释液进行稀释,其稀释原则应保证每个颗粒精液中所含精子数不少于3000—4000万个,解冻后呈直线前进运行的精子不少于1500万个。
三、冷冻:在装有液氮的容器上置一铜纱网,距液氮面2厘米左右,使温度维持在—80℃至—100℃。
将平衡后的精液用滴管按一定量(0•1毫升)滴于铜纱网、滴完最后一滴停3—5分钟后,当精液颗粒颜色变白时,立即浸入液氮,并将全部颗粒取下,收集于贮精瓶或纱网布袋内,并做好标记,然后立即移入液氮罐中贮存。
四、解冻:将预先配制好的2•9%柠檬酸的溶液1毫升,放入干净的小试管中,再置于40℃左右的温水杯中,迅速取颗粒冷冻精液1粒放入试管。
轻轻摇动至化冻时,从水杯中取出试管,接着检查精液活力,不低于0•3即为合格品。
五、重视保精、快速解冻与镜检1、根据液氮罐的性能要求,定期添加液氮罐内盛装冻精的提筒不能露在液氮面外。
2、取精时,尽可能用长镊子,切勿将提筒或纱布袋提到临界线以上处(罐顶10厘米左右)。
3、从液氮中取出细管冻精时,要轻轻甩1—2下,将塑料细管的棉塞端放入35—40℃的温水中,把封口端留在水外1—1•3厘米外,待管内精液融化一半时,立即取出备用。
4、解冻后的精液镜检时,精子的活力不低于0•3方可用于输精,才能确保正常受精。
5、解冻后的精液应立即输配,不宜停放时间过长,应做到现解冻、现输精。
六、适时输精母牛正常排卵是在发情结束后6—12小时,精子在母牛生殖道的存活时间为12—20小时,且还需要4—6小时的获能过程,才能与卵子结合受精。
精子15分钟就会到达输卵管受精部位,因此,让精子早于卵子到达输卵管受精部位是提高受胎率的先决条件。
1、适宜的输精时间:是在母牛的发情后期。
此时母牛表现:精神平稳,外阴部肿胀消失,阴道不再流出透明液体。
直肠检查卵泡胀大,表面紧张,有一触即破之感。
此时为最佳输精时机。
2、适宜的输精部位:是在子宫颈内口1厘米处即子宫体基部,过浅易导致精液外流,过深易损伤子宫内粘膜。
3、适宜的输精方法:直肠把握子宫颈输精法。
将母牛保定,左手插入母牛直肠轻轻握住子宫颈后端,右手将输精器自阴门向斜上方缓慢插入5—10厘米(以避开尿道口)再改为平插送到子宫颈口,缓慢越过子宫颈管中的皱壁,到达子宫颈基部,徐徐注入精液后,缓缓抽出输精器。
4、适宜的输精次数:以1—2次为宜。
可在发情母牛发情高潮后,黄牛在发情高潮后6—12小时,水牛在发情高潮后18—20小时进行第一次输精,前后间隔8—12小时再进行第二次输精。
B1 抽样B1.1样品的收集抽样:从受检单位精液库中抽取样品。
送样:将样品送至检验机构。
B1.2抽样方法B1.2.1正常检查一次抽样方案各品种投产公牛按牛号顺序排列,由抽样人员现场随机确定取样牛号。
B1.2.1.1各品种公牛抽样头数,按照GB2828-87中2.1.29条有关标准的规定。
B1.2.2全部取样对已投产的公牛每头取样。
B1.2.3样品的抽取凡确定取样的公牛,从其精液贮藏罐中随机抽取一个包装量的精液(不得少于Zo份)。
B1.2.4样品的保存B1.2.4.1存放冷冻精液的低温容器质量应符合GB5458规定,使用前经过清洗后加入新鲜液氮。
B1.2.4.2取放样品时空中暴露时间不得超过5秒。
B1.2.4.3由专人保管样品,不能脱离液氮,抽样报告单随样品行。
B1.2.4.4样品包装、标记应保持原样。
B2 剂量检查主要器材天平(精度木低于干分之一)、小烧杯、剪刀。
B2.1细管取三支细管冻精,解冻后剪去超声波封口端,把精液挤入小烧杯内(小烧杯的重量应事先称取或事先去掉烧杯重),用天平准确称取精液的重量(W),精液的比重(D=1.04)。
每支细管冻精的剂量=W/3D。
B2.2颗粒取三粒颗粒冻精,直接放入小烧杯内用天平准确称取精液的重量(W),每颗颗粒冻精的剂量=W/3D。
B3 精子活力的检查主要仪器和器材显微镜或显微电视装置、恒温水浴箱、5.0mL试管、载玻片或精液性状板、盖玻片(18×1 8)、显微镜保温箱或恒温装置、滴管、2.9%柠檬酸钠溶液。
B3.1解冻细管直接置于37℃水浴中解冻;颗粒冻精置预先预热至38℃的内有1.0mL柠檬酸钠解冻液的试管中,水浴解冻,适当摇动,使冻精融化。
B3.2检查取解冻后精液50μL(微升)置于载玻片上加盖被片立即在200-400倍显微镜下观察活力,环境温度或载物台温度保持38℃;也可通过电视显微装置在荧光屏上观察活力。
每样品观察3个视野,注意不同液层内的精子运动状态,进行全面评定。
B4 每一剂量呈直线前进运动的精子数主要器材血球计数板、血色素管、lmL吸管、小试管、计数器、显微镜或电视显微装置、滴管、3.0%氯化钠溶液。
B4.1检查方法颗粒冻精用血色素管准确吸取10微升干解冻的精液,注入盛有0.99mL的3.0%氯化钠溶液的试管内,混匀,使之成为100倍稀释的稀释精液;细管精液用血色素管准确吸取20微升干解冻精液,注入盛有0.98mL的3.0%氯化钠溶液的试管内,混匀,使之成为50倍稀释的稀释精液。
将备好的血球计数板用血盖片将计数室盖好,用小吸管吸取一滴稀释精液于血盖片边缘,使精液自行流入计数室,均匀充满不能有气泡或厚度过大,然后在显微镜下或电视荧光屏上观察计数。
B4.2计算公式a.每剂量中精子数=5个中方格中的精子数(即计数室个中方格的总精子数)×10(l立方毫米内的精子数)×1000(每毫升精液的精子数)×100(颗粒稀释倍数)或 50(细管稀释倍数)×剂量值。
上式可简化为每剂量中精子数=5个中方格精子数×500万(颗粒)或 250万(细管)×剂量值b.每样品观察上下两个计数室,取平均值,如二个计数室计数结果误差超过5%,则应重检。
c.每剂量中呈直线前进运动精子数=每剂量中精子数×活力(%)B5 精子存活率的检查主要器材显微镜、恒温箱、吸管、载玻片、盖玻片。
B5.1解冻方法按照B2.1,精子活力的检查按照B2.2。
B5.2存活率的评定冻精解冻后置37℃恒温箱中,保存4h检查活力。
2、细管冻精的解冻技术和解冻方法在使用细管精液过程中,首先必须按照冷冻精液的规程操作,虽然细管冻精不易受外界环境污染,但标准化、规范化的技术操作也是确保受胎率,避免生殖系统感染病菌的重要措施。
具体操作步骤为:⑴ 检查细管体细管冻精从液氮中取出后,首先检查细管体是否有裂纹和封口不严的现象,如发现有裂纹者,该支细管冻精应弃之不用,如属封口不严,则解冻时可封口不严的一端朝上放入40℃左右的恒温水中进行解冻,尽量避免因解冻方法不当而导致解冻后精子活力不强乃至死亡的人为因素。
⑵ 解冻首先准备40℃左右的恒温水,恒温容器的准备与颗粒冻精解冻法介绍的相同,细管冻精从液氮中取出后,手拿细管上端(封装精液后封口),立即放入恒温水中并轻缓游动,以保持其管壁受热均衡。
经20~30秒钟后即可解冻完毕。
目前全国各地较为普遍使用此种解冻方法的解冻效果好且受胎率高,除此种方法外,也有其它几种方法可供参考,但不提倡广泛使用。
如搓解冻法——将细管冻精放在两手掌间来回反复搓动升温,以达到解冻目的;自然解冻法——将细管冻精放在室内常温下,让其自然升温,以达到解冻的目的;人体体温解冻法——将细管冻精放在人体贴身衣袋内使其升温,以达到解冻的目的,另外,也有将细管冻精不经过人工解冻过程,而是将冻精装在输精枪上直接输精,靠母牛阴道及子宫颈温度来解冻。
除了40℃恒温水解冻方法外,无论其它任何一种解冻方法,它们完成解冻的时间都较长,违反了快速解冻的原则,所以,不提倡在生产中应用,只宜用于研究解冻方法的对比试验。
解冻后的精液如需异地输精,且间隔时间在2小时以上的情况下,其解冻后的精液一定要放在保温杯中方能保存运输。
其操作方法是:将解冻后的精液用脱脂棉或卫生纸包好放入塑料袋内置入保温杯中,盖好杯盖即可。
⑶ 细管剪口冻精解冻后,一定要用消毒纱布抹干细管外围水分,再用细管剪口专用剪刀去人工粉装封口或机械封口一端,切切注意,剪口要正,断面要平整,严禁剪口呈偏斜状,否则输精时会发生精液逆流而影响输精效果。
⑷ 细管精液装枪将细管输精枪的管嘴拧下,把推杆退到与细管长度大约相等的位置,将细管剪口的一端朝管嘴前端放入管嘴内,一手握细管,一手握管嘴,两手同时稍用力将细管的管嘴内旋转一周,使细管剪口端与管嘴前端内壁充分吻合,以防输精时精液倒流至输精枪管嘴内,然后将细管有栓塞的一端套在推杆上,拧紧管嘴即可输精。
B6精子顶体完整率的检查主要器材和材料显微镜、载玻片、血球分类计数器、小吸管、蒸馏水、姬姆萨染料、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、甲醛、甲醇、甘油、所用试剂为ARB6.1试剂配制a.已磷酸盐缓冲液磷酸二氢销(NaH2PO4·2H2O) 0.55g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2 O) 2.25 g双蒸馏水定容至100mL。
b.中性福尔马林固定液40%甲醛HCHO(使用前经碳酸镁中和过滤) 8.0mL磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O) 0.55g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2 O) 2.25 g用0.89%氯化钠约50.0mL溶解后加入8.0mL中和后的甲醛,再加 0. 89%氯化钠溶液定容至100.0mL。
c.姬姆萨原液姬姆萨染料 1.0g甘油(C3H5(OH)3) 66.0mL甲醇(CH3OH) 66.0mL姬姆萨染料放入研钵中加少量甘油充分研磨至无颗粒为止,然后将甘油全部倒入并放人恒温箱中保温继续溶解4h,再加甲醇充分溶解混匀,过滤后贮于棕色瓶中待用,贮存时间越久染色效果越好。
d.姬姆萨染液姬姆萨原液 2.0mL磷酸盐缓冲液 3.0mL蒸馏水 5.0mL现配现用B6.2制片染色a.抹片取解冻后精液一滴滴于载玻片一端,用另一边缘光滑的载玻片与有样品的载玻片呈35°夹角,将样品均匀地拖布于载玻片上,自然风干(约5min)。
b.固定在已风干的抹片上滴上l-2mL中性福尔马林,固定15min后用清水缓缓冲去固定液,吹干或自然风干。