高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉中氯霉素残留量

液相色谱-串联质谱法测定水产品中酰胺醇类药物及其代谢物残留

目的：基于标准GB31658.20-2022，优化液质测定水产品中酰胺醇类药物的前处理步骤，补充该标准的适用范围。方法：搅碎混匀的鱼肉试样，经过不同提取液、净化液以及定容液，得到18组实验结果，内标法定量，确定最佳组合，进行方法验证。结果：在优化前处理条件后氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的线性范围为0.10～100ng/mL，相关系数均大于0.998，方法的回收率为83.1%～103.6%，相对标准偏差在0.66%～4.89%。结论：本方法可为标准GB31658.20-2022的适用范围补充提供参考依据，适用于水产品中酰胺醇类药物及其代谢物残留量的测定。

关键词：酰胺醇类药物；液相色谱串联质谱；水产品；前处理优化

酰胺醇类药物又称氯霉素类抗生素，是一类在兽医临床上用于治疗畜禽以及水产动物细菌性疾病的广谱抗生素，主要包括氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考。氯霉素和甲砜霉素在兽医临床抗感染的治疗中发挥了重要作用，但近年来，随着公众对其潜在毒性，残留和耐药性的广泛关注，许多国家陆续禁止了它们在兽医临床上的使用，以及禁用于食源性动物，氟苯尼考逐渐成为氯霉素和甲砜霉素的替代品[1,2]。酰胺醇类药物常见的检验方法有ELISA，HPLC，GC，GC-MS[3]，LC-MS/MS等等，ELISA具有半定量，假阳性概率，LC，GC无法提供结构确证，干扰物质较多，定性不够准确，GC-MS，GC-MS/MS需衍生，前处理较繁琐，进样时间长，定量不够准确，LC-MS/MS快速，简便，定性定量准确，灵敏度高。

氟苯尼考在动物体内有多种代谢产物，但大部分以氟苯尼考和氟苯尼考胺的形式存在，因此部分国家规定氟苯尼考的标志残留物为氟苯尼考和氟苯尼考胺之和[4,5]。氟苯尼考胺是氟苯尼考在动物体内的代谢物，农业部235号公告将氟苯尼考胺作为标志残留物计算氟苯尼考残留量，氟苯尼考残留量是以氟苯尼考胺和氟苯尼考残留总量计在欧盟(EU)No37/2010号法规中也有规定，另外，氟苯尼考残留标志物在GB31650中规定为氟苯尼考和氟苯尼考胺之和。

第１０期　谢世红，等高效液相一串联质谱法同时测定水产品中孔雀石绿和氯霉素残留量　９　

腈、甲醇、正已烷、甲酸铵、乙酸、乙酸乙酯，均为色　谱纯。中性氧化铝柱，２　０００　ｍｓ／１０　ｍＬ，Ｄｙｎｅｃｈｅｍ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，使用前用５．０　ｍＬ乙腈进行活化。　１．２样品前处理　取水产品肌肉组织４００　ｇ，制成不大于（２．０×　２．０ｘ２．Ｏ）ｃｍ方块，高速匀浆机匀浆，制备成鱼糜样　品。　１．２．１样品提取称取鱼糜样品５．０　ｇ（精确到０．Ｏ１　ｇ）于５０　ｍＬ塑料离心管中，分别加入２０．０　ｎｇ孔雀　石绿、隐性孔雀石绿内标和１０．０　ｎｇ氯霉素内标，加　入１０．０　ｍＬ乙腈，超声提取２　ｍｉｎ，８　０００　ｄｍｉｎ匀浆　３０　ｓ，４　０００　ｒ／ｍｉｎ离心１０　ｍｉｎ，取上清液至另５０　ｍＬ　离心管中。加人１０．０　ｍＬ乙腈重复提取１次，合并提　取液，用乙腈定容至２５．０　ｍＬ，摇匀备用。　１．２．２样品净化移取５．Ｏ０　ｍＬ样品溶液加至已活　化的中性氧化铝柱上，用１５　ｍＬ离心管接收流出　液，加８．０　ｍＬ乙腈洗涤中性氧化铝柱，收集全部流　出液。流出液在５０℃下氮吹至干。残渣加入０．４０　ｍＬ乙腈，涡旋振荡３０　ｓ，超声溶解２　ｍｉｎ，加０．６０　ｍＬ蒸馏水，涡旋混匀。加入１．０　ｍＬ正已烷，涡旋混　匀。在４　０００　ｒ／ｍｉｎ离心３　ｍｉｎ，取下清液过０．２２　ｍ　有机滤膜后供液相色谱一串联质谱测定。　１．２．３基质加标工作曲线的制备称取６个均质　阴性样品５．０　ｇ（精确至０．０１　ｇ）置于５０　ｍＬ塑料离　心管中，分别准确移取一定体积的１００．０　ｎｇ／ｍＬ孑Ｌ　雀石绿、隐性孔雀石绿和氯霉素标准溶液，再全部　加入２０．０　ｎｇ孔雀石绿、隐性孔雀石绿内标和１０．０　ｎｇ氯霉素内标，按样品处理程序进行提取和净化、　浓缩，制备基质加标工作曲线，内标法定量。　１．３液相色谱一串联质谱条件　１．３．１色谱条件色谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ　ＺＯＲＢＡＸ　ＳＢ—　Ｃ１８柱，２．１　ｍｍｘ５０．０　ｍｍ，１．８　ｍ。柱温３５℃，进样　量１０．０　ＩｘＬ。氯霉素流动相：乙腈＋水：４０＋６０，流　速０．２　ｍＬ／ｍｉｎ。孑Ｌ雀石绿流动相：Ａ为乙腈，Ｂ为　ｌ０％甲醇１００．０　ｍＬ＋０．３％乙酸３．０　ｍＬ＋０．２％甲酸　铵（３．１５　ｇ甲酸铵溶于１０．０　ｍＬ　９０％甲醇水）２．０　ｍＬ　＋９００．０　ｍＬ超纯水。在１２　ｍｉｎ内梯度洗脱，梯度洗　脱程序见表１。　１．３．２质谱条件大气压电喷雾离子源（ＥＳＩ），正、　负离子模式。喷雾电压４　０００　ｖ。雾化器压力５０　ｐｓｉ。　辅助气流量３．０　Ｌ／ｍｉｎ。离子传输毛细管温度３００　℃。多反应监测（ＭＲＭ）扫描方式。选择反应监测母　离子、子离子、采集时间、去簇电压和碰撞能量见表　２。　表１孔雀石绿流动相梯度洗脱程序　

２０１３，４７（５）：３５—３８／孙雷，等　中国兽药杂志　・３５・　

猪肉中氯霉素残留量测定能力验证分析　

孙雷，毕言锋，李丹，李倩，徐秉恩，张聪敏，王鹤佳，徐士新　

（中国兽医药品监察所国家兽药残留基准实验室，北京１０００８１）　

［收稿日期］２０１２—１１—１３［文献标识码］Ａ［文章编号］１００２—１２８０（２０１３）０５—００３５—０４［中图分类号］￥８５９．８４　

［摘　要］　为了解我国食品检测实验室的氯霉素残留检测能力，ＣＮＡＳ于２０１２年委托中国兽医药　品监察所组织实施了猪肉中氯霉素残留量测定的能力验证工作。全国２１个省、市、自治区的６６家　

实验室参加了本次能力验证，采用的测试方法主要是液相色谱一串联质谱法和气相色谱一质谱法。　结果显示：参加实验室满意结果率为８０．３％，可疑结果率为９．０９％，不满意结果率为１０．６％，说明　

参加能力验证的绝大多数实验室可以准确检测猪肉中氯霉素残留情况。　

［关键词］　猪肉；氯霉素；残留；能力验证　

Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｐｒｏｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｔｅｓｔｉｎｇ　ｏｆ　Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｉ　

Ｒｅｓｉｄｕｅ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｐｉｇ　Ｍｕｓｃｌｅ　

ＳＵＮ　Ｌｅｉ，ＢＩ　ｒａｎ—ｆｅｎｇ，ＬＩ　Ｄａｎ，ＬＩ　Ｑｉａｎ，ｘｕ　Ｂｉｎｇ—ｅｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｃｏｎｇ—ｍｉｎ，ＷＡＮＧ　Ｈｅ—ｊｉａ，ＸＵ　Ｓｈｉ—ｘｉｎ　（Ｎａｔｉｏｎａ１　ｒｅｎｃｅ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｄｒｕｇｓ　Ｒｅｓｉｄｕｅｓ，Ｃｈｉｎａ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｂｅｌｔｉｎｇ　１０００８１，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ　ｔｈｅ　ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｆｏｏｄ　ｔｅｓｔｉｎｇ　ｌａｂｓ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ　ｆｏｒ　Ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ　ｔｅｓｔｉｎｇ，ｔｈｅ　ＣＮＡＳ　ｄｅｌｅｇａｔｅｄ　Ｃｈｉｎａ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｔｏ　ｏｒｇａｎｉｚｅ　ｔｈｅ　ｐｒｏｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｔｅｓｔｉｎｇ（ＰＴ）ｏｆ　ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ　

农业部公告第781号－－通过《动物源食品中氯霉素残留量的测定气相色谱－质谱法》等12项标准

文章属性

• 【制定机关】农业部(已撤销)

• 【公布日期】2006.12.16

• 【文 号】农业部公告第781号

• 【施行日期】2006.12.16

• 【效力等级】部门规范性文件

• 【时效性】现行有效

• 【主题分类】农业管理综合规定

正文

农业部公告

（第781号）

根据《兽药管理条例》的规定，《动物源食品中氯霉素残留量的测定气相色谱－质谱法》等12项标准业经专家会议审定通过，我部审查批准，现发布为中华人民共和国国家标准，自发布之日起实施。

特此公告

二〇〇六年十二月十六日

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│序 号 │ 标准名称 │

标准代号 │

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│ 1 │动物源食品中氯霉素残留量的测定气相色谱－质谱法 │农业部781号公告－1-2006 │

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│ 2 │动物源食品中氯霉素残留量的测定高效液相色谱－串联│农业部781号公告－2-2006 │

│ │质谱法 │

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│ 3 │动物源食品中3－甲基喹噁啉－2－羟酸和喹噁啉－2－ │农业部781号公告－3-2006 │

│ │羟酸残留量的测定 高效液相色谱法 │

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