支原体

支原体的性状特点以及标本的采集

2010-05-14 00:00

来源： 点击次数： 318 关键词： 支原体

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支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。

支原体是在1898年发现的，是一种简单的原核生物。其大小介于细菌和病毒之间。支原体结构也比较简单，多数成球形，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜，故具有较大的可变性。支原体可以在特殊的培养基上接种生长，用此法配合临床进行诊断。

一、性状

形态与结构

支原体的大小为0.2～0.3um,可通过滤菌器，常给细胞培养工作带来污染的麻烦。无细胞壁，不能维持固定的形态而呈现多形性。革兰氏染色不易着色，故常用Giemsa染色法将其染成淡紫色。细胞膜中胆固醇含量较多，约占36%，对保持细胞膜的完整性具有一定作用。凡能作用于胆固醇的物质（如二性霉素B、皂素等）均可引起支原体膜的破坏而使支原体死亡。

支原体结构 支原体基因组为一环状以双链DNA，分子量小（仅有大肠杆菌的五分之一），合成与代谢很有限。

肺炎支原体的一端有一种特殊的末端结构（terminal structure），能使支原体粘附于呼吸道粘膜上皮细胞表面，与致病性有关。

培养特性

营养要求比一般细菌高，除基础营养物质外还需加入10～20%人或动物血清以提供支原体所需的胆固醇。最适pH7.8～8.0之间，低于7.0则死亡，但解脲脲原体最适pH6.0～6.5。

大多数兼性厌氧，有些菌株在初分离时加入5%CO2生长更好。生长缓慢，在琼脂含量较少的固体培养基上孵育2～3天出现典型的“荷包蛋样”菌落：圆形（直径10～16um），核心部分较厚，向下长入培养基，周边为一层薄的透明颗粒区。此外，支原体还能在鸡胚绒毛尿囊膜或培养细胞中生长。

繁殖方式多样，主要为二分裂繁殖，还有断裂、分枝、出芽等方式，盖因缺乏细胞壁造成分裂时二个子细胞大小均所致。同时，支原体分裂和其DNA复制不同步，可形成多核长丝体。

生化反应与分型

一般能分解葡萄糖的支原体则不能利用精氨酸，能利用精氨酸的则不能分解葡萄糖，据此可将支原体分为两类。解脲脲原体不能利用葡萄糖或精氨酸，但可利用尿素作能源。

各种支原体都有特异的表面抗原结构，很少有交叉反应，具有型特异性。应用生长抑制试验（Growth inhibition test,GIT）、代谢抑制试验(Metabolic inhibition test,MIT)等可鉴定支原抗原，进行分型。

抵抗力

支原体对热的抵抗力与细菌相似。对环境渗透压敏感，渗透压的突变可致细胞破裂。对重金属盐、石炭酸、来苏尔和一些表面活性剂较细菌敏感，但对醋酸铊、结晶紫和亚锑酸盐的抵抗力比细菌大。对影响壁合成的抗生素如青霉素不敏感，但红霉素、四环素、链霉素及氯霉素等作用于支原体核蛋白体的抗生素，可抑制或影响蛋白质合成，有杀灭支原体的作用。

致病性与免疫性

支原体不侵入机体组织与血液，而是在呼吸道或泌尿生殖道上皮细胞粘附并定居后，通过不同机制引起细胞损伤，如获取细胞膜上的脂质与胆固醇造成膜的损伤，释放神经（外）毒素、磷酸酶及过氧化氢等。

巨噬细胞、lgG 及 lgM 对支原体均有一定的杀伤作用。呼吸道粘膜产生的SlgA抗体已证明有阻止支原体吸附的作用。在儿童中，致敏淋巴细胞可增强机体对肺炎支原体的抵抗力。

二、特点

支原体是目前所能发现的能在无生命培基中生长繁殖的最小的微生物。支原体体形多样，基本为球形，亦可呈球杆状或丝状，其菌落呈针尖大小，故又称之为微小支原体。能引起人类泌尿系感染的是解脲支原体和人型支原体。主要通过性接触传染，少数也可间接传染。泌尿系统是它的易感细胞。

由于它没有细胞壁，因此对影响细胞壁合成的抗生素，如青霉素等不敏感，红霉素、四环素、卡那霉素、链霉素、氯霉素等作用于核蛋白体的抗生素，可抑制或影响支原体的蛋白质合成，有抑制支原体作用，但不能根治，不能使机体对其产生免疫抗体，容易反复，目前采用中药治疗可弥补这方面的缺陷。

支原体是最小最简单的独立生活的原核生物。它没有固定形态，形态随环境而变化，在液体中可呈球形、环形和丝状；它没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜。解脲支原体（惟一确认的一种)具有尿素酶活性，能分解尿素。感染人体后，通过黏附于宿主细胞的受体上，引起细胞膜损伤，其代谢产物产生毒性作用。衣原体除可引起尿道炎、眼结膜炎外，还可引起附睾炎、前列腺炎、宫颈炎、阴道炎、输卵管炎及盆腔炎等。新生儿通过产道可被感染发生眼结膜炎、肺炎。男性同性恋者，可患直肠炎及咽炎。 三、支原体标本采集：

1．标本采集：

男性：用无菌棉拭子插入尿道约2cm处旋转，静止数秒钟后取材。女性：支原体标本抹去宫颈口粘液，用无菌拭子插入宫颈管l－2cm旋转取材。尚可用前列腺液、精液、尿液离心沉淀物作标本。

支原体标本

2．接种：将标本洗入Uu或Mh液体培养基，或用滤菌器过滤接种。

3. 培养：置370C恒温箱孵育1～3天，每日观察培养基颜色变化。

培养结果：液体培养基由黄色变红色，清亮透明可初步判断为Uu或Mh阳性。

支原体培养技术

2008-06-05 00:00 来源：丁香园 点击次数： 311 关键词： 支原体 培养技术

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支原体又称霉形体，是很小的原核细胞，完全没有细胞壁．菌体形态多变，具高度多形性，球形、梨形、分枝的或螺旋的丝状等。营养要求苛刻，在高血清量的复杂培养基上生长，在固体培养基上菌落呈油煎荷包蛋样特征性外观。

培养基：牛心汤复合培养基等。分离培养：无菌采取肺、肝、脾、肾组织，直接剪成小块放在固体培养基上划一直线，再用无菌铂耳环在与其垂直方向划线，或者将组织块剪碎磨成匀桨，经液体培养基连续系列稀释后培养．若当液体材料为牛乳、排泄物、胎液等，可直接取0.2ML接种于液体培养基或取0.1ML接种于固体培养基。固体琼脂平板置37摄氏度潮湿需氧条件或在５％二氧化碳下培养48-96h,用斜射光或放大25-40倍的立体显微镜检查,若有特异菌落出现,应选取散在的单个菌落用无菌解剖刀切下小琼脂块,用巴氏吸管小心地将菌落和周围琼脂吸入,再将其移入盛有2-3ML的液体肉汤培养管培养48h,将其培养物通过0.45微升孔径大小的滤膜过滤后作1:10和1:100稀释,每一个稀释液取0.05ML涂布于几个琼脂平板,即可得到纯的支原体培养物。

牛心汤复合培养基：

牛心汤1000ml

蛋白胨10g

氯化钠5ml

酵母提取液10ml

无菌马血清200ml

1.25%醋酸铊溶液20ml

青霉素200IU/ml

实验 支MP 肺炎支原体培养实验 一、标本采集

支原体常侵及人和动物的粘膜表面，一般可用棉花拭子涂抹取样后放入2~3ml支原体液体培养基的小管中，或取其分泌液，若标本是组织块，可在灭菌乳钵或玻璃匀浆后接种，取样后应尽快接种培养。

二、分离培养

1、支原体固体培养基接种法 转动拭子将标本液体尽量挤出，用无菌滴管吸1~2滴接种在平皿上盖好，用L棒涂抹或倾斜转动平皿使标本均匀分布，置37℃孵育。

2、支原体半固体培养基接种法 混种法：在制备半固体培养基时，培养基加热溶化，温度降至50℃时，添加动物血清、酵母浸液及青霉素后混匀，待冷却至37~40℃时，用无菌滴管吸取标本0.5~1ml加入培养基中，充分混匀，凝固后置37℃孵育。

3、穿刺接种法：方法同细菌接种法。

三、结果观察

绝大多数支原体为兼性厌氧，少数在含10% CO2和相对湿度80~90%的大气环境中生长良好。支原体生长缓慢，多数于3~4d长出菌落，少数于1~2w方长出典型菌落，在平皿固体培养基上生长的菌落呈"油煎蛋"状，边缘不整齐。

四、附录

糖酵解培养基（肺炎支原体培养基）

基础培养基 70ml

马（或牛血清） 20ml

25%酵母浸液 10ml

0.4%酚红 0.5ml 1%醋酸铊 2.5ml

青霉素10000IU/ml 5.0ml

调pH 7.8

肺炎支原体培养很简单的，特别是液体培养，不需要防护！

配方上面的有点复杂而模糊，简单：

PPLO 21g（商品化买）

酵母粉 6g（OXIDE）

马血清 200ml（没有的话用小牛血清代替）

L－半胱氨酸 0.3g

葡萄糖 10g

1%酚红 4ml

AMP 若干（0.1－0.2g，多加点不影响，但醋酸铊有毒性的，我不加）

这些够了，我有时还加SMZ和TMP！

ph要调的，大概在7.5－7.6之间吧！

酚红可以高压的！

支原体培养

2008-06-05 00:00 来源：丁香园 点击次数： 657 关键词： 支原体 培养

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 开心网 支原体常用培养基为PPLO,很多公司都有出售.但血清（常用马血清或猪血清）和抗生素(醋酸跎)你要自己加.你可以查查.还有改良的Frey's培养基，常用的微生物实验技术书上都可以查到的。可以自己配制的。在液体培养基中通常要加入酚红做指示剂的，当培养基由红色变为黄色时，即可判定支原体的生长程度。要强调一点，支原体的分离可能不太容易，那么要多盲传几代。液体培养基变黄后，在固体培养基上单克隆，以纯化分离的菌。

据丁香园网友 xwfxwf401 所有解脲，人型，肺炎，生殖道支原体培养基，均为液态，不知道homiao要分离哪种支原体，需要哪种支原体？

1、培养：支原体的培养37℃即可，当然，初次培养37℃，5％－10％co2效果更好。其中，解脲支原体生长比较快，用我所培养基，接种量104－ 105ccu，培养16－18h即可达到对数生长期。人型，肺炎，24－48h即可达到对数生长期。

2、鉴定：主要靠菌落染色、生化反应及特异性生长抑制试验等.

（1）Dienes菌落染色

Dienes染色液：

美蓝 2.5g

天青－Ⅱ 1.5g

麦芽糖 10g

碳酸钠 0.5g

蒸馏水 100ml

染色时，直接吸染色液覆盖菌落，1min后，用生理盐水洗去染色液，低倍镜下可见支原体菌落呈蓝色，而其他菌菌落不着色。