培养基的制备和灭菌设备

实验五微生物培养基的配制和灭菌培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。

培养基为微生物的生长提供营养物质和生存空间。

它具有微生物正常生活所需的各种养料和适宜的环境条件；（1）适当组分和比例的营养物质；（2）适宜的pH值；（3）合适的渗透压；（4）保持无菌状态。

所以培养基是培养微生物所必需的最主要材料。

培养基的配制是微生物学工作者的主要技术操作之一。

培养基的种类：根据培养基的组成成分，可将培养基分为三类：合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。

半合成培养基：由一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。

天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成的。

从培养基的物理状态来分：液体培养基：不加凝固剂的液态状培养基。

固体培养基：在液体培养基中加入2％左右的凝固剂的固体状培养基或固体状农副产品培养基。

半固体培养基：在液体培养基中加入0.2％-0.5％凝固剂而成的半固体状培养基。

微生物最常用的凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。

它不是一种营养物质，只能被极少数种类的细菌分解利用。

琼脂是从海藻中（主要是石花菜）提取而制成的。

是一种多糖类化合物，主要成分是复杂的多糖硫酸酯钙盐，琼脂是一种可逆性胶体，在常规浓度下加热到96C以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到42℃以下，又凝固为固体。

一、目的要求l. 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。

2. 了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。

3. 熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。

二、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O等。

2. 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。

3. 其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养血、吸管、各种包装纸防水纸、绳索、棉花、标签等。

实验三：培养基的制备与灭菌一、实验目的与要求：（1）熟悉玻璃器皿的洗涤包装和灭菌前的准备工作。

（2）学习微生物培养基和无菌水的制备，了解培养基配方中各成分的作用、制备流程及各环节的操作技术与应用。

（3）学习并掌握培养基的高压蒸气灭菌原理、操作关键技术和灭菌技术。

二、实验原理培养基的制备原理培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组分的营养物质调制而成的营养基质。

人工制备培养基的目的，在于给微生物创造一个良好的营养条件。

把一定的培养基放入一定的器皿中，就提供了人工繁殖微生物的环境和场所。

自然界中，微生物种类繁多，由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究上的目的不同，所以培养基在组成原料上也各有差异。

但是，不同种类和不同组成的培养基中，均应含有满足微生物生长发育的水分、碳源、氮源、无机盐和生长素以及某些特需的微量元素等。

此外，培养基还应具有适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力及一定的氧化还原电位和合适的渗透压。

根据制备培养基对所选用的营养物质的来源，可将培养基分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基三类。

按照培养基的形态可将培养基分为液体培养基和固体培养基。

根据培养基使用目的，可将培养基分为选择培养基、加富培养基及鉴别培养基等。

培养基的类型和种类是多种多样的，必须根据不同的微生物和不同的目的进行选择配制，本实验分别配制常用培养细菌、放线菌和真菌的牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号合成培养基和马铃薯蔗糖培养基等固体培养基。

固体培养基是在液体培养基中添加凝固剂制成的，常用的凝固剂有琼脂、明胶和硅酸钠，其中以琼脂最为常用，其主要成份为多糖类物质，性质较稳定，一般微生物不能分解，故用凝固剂而不致引起化学成份变化。

琼脂在95℃的热水中才开始融化，融化后的琼脂冷却到45℃才重新凝固。

因此用琼脂制成的固体培养基在一般微生物的培养温度范围内(25℃-37℃)不会融化而保持固体状态。

高压蒸气灭菌原理高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。

发酵培养基的制备和实罐灭菌一、实验目的要求学生掌握通风发酵的基本原理及过程，掌握上罐操作技术，掌握流加补料控制技术。

（1）发酵罐及管路、空气过滤器灭菌操作及发酵罐系统管路的熟悉（2）实罐灭菌—培养基灭菌实验二、实验原理2.1 培养基组分的种类和作用：人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成各种代谢产物的营养物质。

主要包括：碳源、氮源、无机盐、生长因子、前体2.2 实罐灭菌原理保温温度（℃）加热保温冷却温度（℃）时间（min）三、实验仪器、设备和材料10升发酵罐（PH仪，培养液及酸碱液流加装置，蠕动泵），1台；淀粉水解糖液、尿素等原料。

四、实验内容与方法：酵母菌经扩大培养后，接入10升机械搅拌通风发酵罐培养，根据实际情况选用分批培养或分批补料培养，测定酵母浓度。

主要内容有：试管斜面培养基的配制、面包酵母种子扩大培养基配制、流加用培养基的配制及灭菌。

总流程：斜面培养基配制与灭菌所需仪器物品：灭菌锅、试管、棉塞、培养基原料、培养箱300毫升种子液、500ml三角瓶三只、装液100ml、培养基、培养摇瓶、纱布。

发酵培养基制备，灭菌。

面包酵母菌的培养基组成：酵母斜面培养基：10º麦芽汁固体斜面，PH5.0酵母摇瓶培养基：10º麦芽汁，PH5.0或葡萄糖10%，玉米浆1%，尿素0.2%，PH5.0酵母分批发酵培养基：玉米淀粉经液化、糖化，折合葡萄糖浓度为10%、玉米浆1%，尿素0.2%，PH5.5。

五、实验报告内容和数据处理实验设计原理；发酵系统的结构与操作方法；实罐灭菌工艺。

附：机械搅拌发酵系统介绍：1 技术指标1.1 概述具有温度、转速、氧气流量、空气流量、pH 、DO 、补料、消泡显示及控制功能，并配有机械消泡浆。

1.2指标1.2.1温度：自动控制范围：自来水温+5℃～ 50℃﹙±0.2 ℃﹚显示范围：0 ～150 ℃1.2.2搅拌转速：调速范围50 ～1000±5rpm1.2.3空气流量：显示控制范围0 ～ 10L/min1.2.4pH显示控制：2 ～12pH±0.05﹙酸碱双向﹚1.2.5溶解氧：0 ～150±2℅1.2.6补料、消泡蠕动泵各一台1.2.7 罐体总容积10L,设计压力2.0kg/c㎡、最高工作压力2.0kg/c ㎡,设计工作温度131 ℃1.2.8 灭菌方法:手动控制蒸汽消毒灭菌1.2.9 功率：主机：3kw, 单相220v1.2.10 气源：2 ～4kg/c㎡1.2.11 蒸汽： 2 ～4kg/c㎡2 管路说明该流程图中空气管路阀门的标号为“AXX”,蒸汽管路阀门的标号为“SXX”，冷却水管路阀门标号为“WXX”，冷凝水管路阀门标号为“VXX”，电磁阀标号为“CXX”，物料管路阀门标号为“PXX”,冷冻水管路标号为“CWX”，其它气体管路标号为“NXX”。

（生物科技行业）菌种保存和微生物常识菌种保存和微生物常识1、常用培养基的制备、灭菌与消毒营养：从外部环境摄取其生命活动所必需的能量和物质，满足生长和繁殖需要的一种生理过程。

是生命活动的物质基础，是生命活动的起点。

营养物：具有营养功能的物质。

也包括光能。

提供生物的结构物质、能量、代谢调节物质和良好的生理环境。

营养要素：碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水培养基：人工配制、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的混合养料。

要求：应具备6大营养要素；物质比例合适；必须灭菌。

2、选用和设计培养基的原则、方法及制备过程原则：目的明确、营养协调、经济节约物理化学条件适宜方法：生态模拟、查阅文献精心设计、试验比较步骤：称量、熔化、调PH、过滤、分装、加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查培养基种类：一、按成分的不同分天然培养基、合成培养基、半合成培养基二、按培养基的物理状态分固体培养基、液体培养基、半固体培养基三、按培养基用途基础培养基、选择培养基、加富培养基鉴别培养基消毒与灭菌：消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。

方法：一、物理的方法：加热、过滤、辐射二、化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。

主要破坏细菌代谢机能。

如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等。

加热法：（1）干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。

1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。

2、热空气灭菌利用高温干燥空气（160－170C）加热灭菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。

原理加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。

3、注意事项：1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；2）温度控制在<180°；3）物品不能太挤；4）温度降至70°时才开箱门。

（2）湿热法：原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。

培养基用什么方法灭菌在微生物实验中，培养基的制备是非常重要的一步。

而在制备培养基的过程中，灭菌是必不可少的环节。

灭菌的目的是杀灭培养基中的细菌、真菌和其他微生物，以确保培养基的纯净度，避免外源性微生物的污染。

那么，培养基用什么方法灭菌呢？下面将介绍几种常见的灭菌方法。

首先，常见的灭菌方法之一是高温灭菌。

高温灭菌是利用高温的热量来杀灭培养基中的微生物。

常用的高温灭菌设备有高压蒸汽灭菌器和干热灭菌箱。

高压蒸汽灭菌器利用高压蒸汽和高温来灭菌，能够在较短的时间内彻底灭菌。

而干热灭菌箱则是利用高温干热的方式进行灭菌。

这两种方法都能够有效地杀灭培养基中的微生物，确保培养基的纯净度。

其次，化学灭菌是另一种常见的灭菌方法。

化学灭菌利用化学药剂来杀灭微生物。

常用的化学灭菌药剂有酒精、过氧化氢、乙醛等。

这些化学药剂能够迅速杀灭培养基中的微生物，同时对培养基的影响较小。

但需要注意的是，使用化学灭菌药剂时要注意浓度和接触时间，以免对培养基产生不良影响。

另外，紫外线灭菌也是一种常用的灭菌方法。

紫外线能够破坏微生物的核酸，从而达到灭菌的效果。

紫外线灭菌设备通常是紫外线灭菌灯，将培养基暴露在紫外线下一定时间，即可达到灭菌的目的。

这种方法操作简单，无需化学药剂，对培养基的影响较小，但需要注意的是紫外线对皮肤和眼睛有一定的伤害，操作时要注意安全。

除了以上几种常见的灭菌方法外，还有一些新型的灭菌技术不断涌现，如微波灭菌、等离子体灭菌等。

这些新技术在灭菌效果、操作方便等方面都有一定的优势，但需要根据实际情况选择合适的灭菌方法。

总的来说，培养基的灭菌是培养基制备过程中非常重要的一环。

选择合适的灭菌方法能够有效地保证培养基的纯净度，避免实验过程中的污染问题。

因此，在实验室工作中，我们应该根据实际情况选择合适的灭菌方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保培养基的质量和实验结果的准确性。

培养基的制备与灭菌实验报告一、实验目的。

本实验旨在掌握培养基的制备方法和灭菌技术，为后续微生物培养提供基础支持。

二、实验原理。

1.培养基的制备。

培养基是微生物生长繁殖的基础，其主要成分包括碳源、氮源、矿物盐和生长因子。

按照微生物的需求，可以选择适当的培养基配方进行制备。

2.灭菌技术。

灭菌是指将培养基、培养器皿和其他实验用具中的微生物全部杀灭，以保证实验过程的纯净和结果的可靠性。

常用的灭菌方法包括高压蒸汽灭菌、紫外线灭菌和化学灭菌等。

三、实验材料。

1.所需培养基原料，葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物、琼脂等；2.灭菌设备，高压蒸汽灭菌器、紫外线灭菌仪等；3.实验用具，培养皿、试管、移液器等。

四、实验步骤。

1.培养基的制备。

（1）称取适量葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物等原料，按照配方比例加入蒸馏水中；（2）搅拌均匀，加热至溶解；（3）加入适量琼脂，再次搅拌均匀；（4）分装至培养皿或试管中，待凝固后即可使用。

2.灭菌实验。

（1）将制备好的培养基放入高压蒸汽灭菌器中，进行高压蒸汽灭菌；（2）将培养器皿等实验用具放入紫外线灭菌仪中，进行紫外线灭菌；（3）取出灭菌后的培养基和实验用具，进行后续的微生物培养实验。

五、实验结果与分析。

经过培养基的制备和灭菌实验后，观察到培养基无明显异物和霉菌生长，实验用具无细菌污染。

说明培养基制备和灭菌实验取得了成功。

六、实验总结。

通过本次实验，我们掌握了培养基的制备方法和灭菌技术，为后续微生物培养实验奠定了基础。

同时，也提醒大家在实验过程中要注意操作规范，保证实验结果的可靠性。

七、实验注意事项。

1.培养基制备过程中要注意原料的准确称取和比例的精确控制；2.灭菌实验中要严格按照灭菌方法和时间进行操作，确保实验用具的无菌状态；3.实验结束后要及时清理实验台面和设备，保持实验环境的整洁。

八、参考文献。

1. 《微生物实验技术手册》。

2. 《生物实验技术指南》。

以上就是本次培养基的制备与灭菌实验报告的全部内容，希望对大家有所帮助。

培养基的制备与灭菌实验报告实验目的，通过本次实验，掌握培养基的制备方法和灭菌技术，为后续微生物培养实验打下基础。

一、培养基的制备。

1.准备所需试剂和设备，蔗糖、蛋白胨、酵母提取物、琼脂、蒸馏水、培养皿、量筒、坩埚、移液器等。

2.称取适量蔗糖、蛋白胨、酵母提取物加入蒸馏水中，充分溶解后调节pH值至7.0。

3.加入适量琼脂，搅拌均匀。

4.分装至培养皿中，待凝固后进行灭菌处理。

二、培养基的灭菌。

1.将制备好的培养基装入培养皿中，封口。

2.将培养皿放入高压灭菌锅中，进行高压灭菌处理。

3.灭菌条件，121℃，压力为15psi，持续20分钟。

4.取出培养皿，放置在无菌工作台上待凉，避免细菌再次污染。

5.观察培养基表面是否有凝固不均匀或气泡，如有则说明灭菌不彻底，需重新处理。

三、实验结果。

1.经过灭菌处理的培养基表面平整，无气泡，无明显异物。

2.在无菌条件下打开培养皿，用无菌移液器移取适量微生物菌种接种于培养基表面。

3.将接种好的培养皿放入培养箱中，进行培养观察。

4.培养箱条件，温度控制在37℃，培养时间根据不同微生物而定。

四、实验结论。

本次实验通过制备培养基和灭菌处理，成功培养出微生物菌种，并观察到了微生物的生长情况。

培养基的制备和灭菌是微生物实验中非常重要的步骤，只有保证培养基的无菌，才能得到准确的实验结果。

通过本次实验的学习，相信对于今后的微生物实验有了更深入的认识和理解。

五、实验注意事项。

1.在制备培养基时，需注意称取试剂的准确性和加入顺序。

2.灭菌处理时，要确保培养基充分接受高压蒸汽的灭菌作用。

3.实验操作要在无菌条件下进行，避免外界污染。

4.培养箱的温度和培养时间要根据不同微生物的生长特性进行调整。

六、实验延伸。

在今后的实验中，可以尝试不同种类的培养基制备和灭菌处理，观察其对微生物生长的影响，进一步探索微生物的生长规律和特性。

总之，培养基的制备和灭菌是微生物实验中不可或缺的重要环节，只有掌握了这些基本技能，才能进行准确可靠的微生物实验。

培养基的制备与灭菌实验报告实验目的：掌握培养基制备的基本操作技巧，理解培养基的重要性以及灭菌操作的必要性。

实验原理：培养基是一种提供营养物质和环境条件的物质，用于微生物的培养和繁殖。

通常包括碳源、氮源、无机盐和其他必需营养物质等。

培养基的配制主要包括以下步骤：1.称取所需的化学试剂和溶质，按照一定比例称取固体试剂和溶液试剂。

2.将固体试剂加入蒸馏水中，溶解并搅拌均匀。

然后加入相应量的溶液试剂。

3.调节溶液的pH值，通常使用酸和碱进行调节，直至达到所需的pH 值。

4.将培养基溶液装入培养瓶或试管中，密封和标记。

灭菌操作是为了杀灭或去除试验中的微生物，以保证实验的可靠性和安全性。

常见的灭菌方法有高温热处理、高压灭菌和化学灭菌等。

实验材料和设备：1.培养基配制所需化学试剂和溶液。

2.培养瓶和试管。

3.电子天平、酸碱仪和pH计。

4.高压灭菌锅。

实验步骤：1.根据实验要求选择合适的培养基配方。

2.按照所需比例称取固体试剂和溶液试剂。

3.将固体试剂加入适量蒸馏水中，溶解并搅拌均匀。

4.加入相应量的溶液试剂。

5.使用酸和碱调节溶液的pH值，直至达到所需值。

6.将培养基溶液装入培养瓶或试管中，密封和标记。

7.准备好待灭菌的培养基样品和高压灭菌锅。

8.将培养基样品放入高压灭菌锅中，进行高压灭菌操作。

9.灭菌结束后取出培养基样品，观察样品的无菌性。

实验结果：制备完成的培养基溶液应该是透明且无悬浮物的。

经过高压灭菌处理后的培养基样品应该是无菌的，没有任何微生物的生长。

实验讨论：在实验中，我们使用了高压灭菌锅进行灭菌操作。

高压灭菌通常可以在较短时间内灭菌，且能够彻底杀灭微生物，保证培养基的无菌性。

然而，操作时需要注意灭菌锅的安全使用，并遵循相应的操作规程，确保操作人员的安全。

总结：通过本实验，我掌握了培养基制备的基本操作技巧，了解了培养基的重要性以及灭菌操作的必要性。

制备无菌培养基是微生物实验中的基础工作，对于后续实验的结果和判断具有重要影响。

培养基的制备过程一、引言培养基是细胞、微生物等生物体在实验室中进行研究和培养的必需品，其制备过程涉及到多个步骤和组分。

本文将详细介绍培养基的制备过程。

二、材料及设备1. 纯水2. 食品级明胶3. 葡萄糖4. 氯化钠5. 磷酸二氢钾6. 氨基酸混合物7. 维生素混合物8. 纯净乙醇9. 经过高温高压灭菌的玻璃烧杯、量筒、移液器等实验室常用设备。

三、制备步骤1. 制备明胶溶液将10g食品级明胶加入500ml纯水中，搅拌均匀后加热至溶解。

待溶解后降温至室温，静置1小时，将上清液倒入干净容器中备用。

2. 制备基础盐类溶液将8g氯化钠、0.2g磷酸二氢钾加入800ml纯水中，搅拌均匀后加热至溶解。

待溶解后降温至室温，静置1小时。

3. 制备氨基酸混合物将0.5g苏氨酸、0.5g丝氨酸、0.5g天冬氨酸、0.5g谷氨酸、0.5g精氨酸、0.5g赖氨酸、0.5g异亮氨酸、0.5g缬氨酸加入50ml纯水中，搅拌均匀后过滤，得到无菌的氨基酸混合物。

4. 制备维生素混合物将1mg生物素、1mg叶酸、1mg核黄素、1mg泛酸、1mg吡哆醇加入10ml纯水中，搅拌均匀后过滤，得到无菌的维生素混合物。

5. 制备完整培养基将基础盐类溶液和明胶溶液按照4:1的比例混合，并加入2ml氨基酸混合物和2ml维生素混合物，最终体积调整至1000ml。

搅拌均匀后过滤灭菌即可。

四、质量控制1. 培养基的pH值应控制在7.0左右。

2. 培养基的透明度应良好，无悬浮物和沉淀。

3. 培养基的灭菌应严格遵守规定，确保无菌状态。

五、结论本文介绍了培养基的制备过程，包括明胶溶液、基础盐类溶液、氨基酸混合物、维生素混合物以及完整培养基的制备步骤。

同时，还对培养基的质量控制进行了说明。

这些步骤和质量控制是保证培养基质量的关键因素。

培养基的制备与灭菌实验报告一、实验目的1、了解培养基的制备原理和方法。

2、掌握培养基的灭菌技术和操作流程。

3、熟悉无菌操作的基本要求和注意事项。

二、实验原理培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。

不同的微生物对营养物质的需求不同，因此需要根据培养目的和微生物的特点来选择和配制合适的培养基。

培养基的制备一般包括以下几个步骤：计算、称量、溶解、调节pH 值、分装、包扎。

灭菌是指用物理或化学方法杀死或去除物体上所有微生物（包括芽孢和孢子）的过程。

常用的灭菌方法有干热灭菌、高压蒸汽灭菌、过滤灭菌等。

本实验采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。

三、实验材料与设备1、实验材料牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂1mol/L NaOH 溶液1mol/L HCl 溶液蒸馏水2、实验设备电子天平高压蒸汽灭菌锅电炉移液管锥形瓶培养皿玻璃棒pH 试纸四、实验步骤1、培养基的制备计算：根据配方计算所需各种成分的用量。

称量：用电子天平准确称量各种成分。

溶解：将称量好的成分依次加入到一定量的蒸馏水中，在电炉上加热搅拌，使其完全溶解。

调节 pH 值：用 1mol/L NaOH 溶液或 1mol/L HCl 溶液调节培养基的 pH 值至所需值（本实验中为 72-74）。

分装：将配制好的培养基趁热分装到锥形瓶和培养皿中。

锥形瓶的装量一般不超过其容积的 2/3，培养皿的装量一般为 15-20ml。

包扎：在锥形瓶口和培养皿盖上包上牛皮纸或报纸，用绳子扎紧。

2、灭菌检查灭菌锅的水位和安全阀，确保正常。

将包扎好的培养基放入灭菌锅中，注意不要摆放过于紧密。

关闭灭菌锅的盖子，拧紧螺丝。

设定灭菌条件：一般为 121℃，15-20min。

启动灭菌锅，开始灭菌。

灭菌结束后，待压力降至零，打开灭菌锅的盖子，取出培养基。

3、无菌检查将灭菌后的培养基放置在 37℃的恒温培养箱中培养 24-48h，检查有无杂菌生长。

五、实验结果与分析1、培养基的制备成功按照配方配制出了所需的培养基，外观呈均匀的液体状态，无沉淀和浑浊现象。