dart fish教程

FISH一．玻片预处理：玻片用热肥皂水洗刷，用自来水冲洗12-15次，蒸馏水冲洗3次，在1%稀盐酸中浸泡24h，自来水洗净，蒸馏水冲洗3次，双蒸水冲洗3次，121℃灭菌20min (160℃烘箱4h以上)，以去除玻片上可能有的核酸。

二．硅化处理：将上述处理的清洁玻片置于70%乙醇中洗1min，丙酮浸泡1min，2%APES/丙酮液浸泡10s（APE-S氨丙基三乙氧基硅烷），丙酮浸泡10s，双蒸水冲洗3次，50℃烘1h。

三．载片的包被：粘附剂：称取明胶1.0g溶于125-200ml双蒸水中，加热搅拌助溶，待明胶完全溶解后（很重要），加入明矾0.5g，溶解后稀释至250ml。

包埋玻片：明胶的温度保持在60℃左右，将准备好的玻片在粘附剂中上下浸蘸几下（浸蘸时务必整个玻片完全浸于液体中），分散开竖放在架子上，于空气自然干燥。

（用铝箔包好，避免污染，4℃备用）四．样品预处理：1)样品超声2mins，8000r/min离心3min，弃上清液，用PBS[1]将收集到的微生物冲洗一次。

12000r/min离心5min去上清，悬于200μl PBS。

2)加入3倍体积4%多聚甲醛[2]（600μl）4℃下过夜。

12000r/min离心5min去固定剂重悬于200μl PBS；（若样品需保存，可于-20℃条件下，储存于50%乙醇/PBS溶液中，杂交试验前，用PBS清洗2次，离心收集）五．制片，杂交，观察1)取10μl样品涂布于载玻片，自然干燥。

在玻片上加入200ul溶菌酶溶液（1mlPBS加20ul 20mg/L溶菌酶储备液）,加灭菌培养皿盖，避免风干，室温10min，除去酶液2)在玻片上加入200ul蛋白酶K（1mlPBS加20ul 20mg/L蛋白酶K储备液），放入生化培养箱中，37℃，30min，除去酶液3)分别用50%乙醇,80%乙醇,95%乙醇,100%乙醇各脱水3mins，风干备用4)双蒸水溶解原探针，使浓度50ng/mL左右，取探针10μL，杂交液[3]90μL混合（若有三个探针，则分别取10μL，杂交液为70μL），使最终探针浓度为5ng/mL的混合杂交液5)取经过预处理的样品涂于载片，充分干燥后，加20μL混合杂交液（样品与混合杂交液体积比为10μL：20μL）。

FISH（荧光原位杂交）技术全攻略荧光原位杂交技术（Fluorescence in situ hybridization，FISH）是一种应用非放射性荧光物质依靠核酸探针杂交原理在核中或染色体上显示核酸序列位置的方法。

该技术问世与70年代中期左右，其曾多于与染色体异常的研究，近年来随着FISH探针种类的不断增多，使得该技术逐步应用于各种领域。

该技术具有快速，安全，灵敏度高以及探针可长期保存等特点，目前已广泛应用于细胞遗传学，肿瘤生物学，基因定位，基因作图，基因扩增及分子诊断等领域。

1对于FISH操作来说，那些因素比较重要？在FISH中最重要的因素是温度、光照、湿度和各种试剂的PH值。

温度和湿度直接影响着探针和目标DNA的杂交效率；光照影响了荧光染料的强度，因此探针要避光保存，其已经杂交的片子可用防荧光淬灭剂封片且避光保存；各种试剂pH也要精确达到要求，这也直接关系到FISH的稳定性。

2 如何保证FISH操作中的温度？最佳的措施是使用一些FISH的专用仪器进行操作，如Vysis的Hybrit FISH杂交仪。

如果是手工操作，首先要对FISH操作过程中可能使用的一些仪器进行温控能力的检查，如水浴锅、孵箱，对其中不符合要求的要进行更换（疾病诊断中的探针要求温控精度在0.5度以内）。

其次，要尽可能地保持操作环境温度在20度以上，对于在冬季进行的FISH操作尤为重要。

此外对于需要预热以达到要求温度的试剂，在使用前必须使用温度计对其进行测温。

同时检测的样本最好不能超过4块。

操作中的行动一定要迅速。

操作者还往往忽视一些小部件的温度，诸如载玻片和盖玻片。

特别是在冬季，盖玻片本身温度就低，加之探针的量本就不多（10ul），因此事先没有预热的盖玻片会使得杂交液的温度急剧下降严重地影响了探针和目标DNA的杂交效率。

因此对上述小部件的要进行预热处理，不然会影响FISH 的杂交效果。

3 使用荧光显微镜观察结果时，最初有清晰而明亮的信号，但随后信号急剧衰减，几分钟后信号就消失了。

fishx用法一、安装与基本设置在Linux中安装Fishx是十分简单的一件事，只要按照系统提示一步步操作即可。

需要注意的是在安装的过程中选择合适的路径，以便于我们后续的操作。

Fishx安装完成后，我们就可以在终端中使用它了。

在终端中输入fishx，就可以看到Fishx的使用帮助信息。

二、基本用法1. 创建新的任务在终端中输入命令“fishx task new”就可以创建一个新的任务。

输入完毕后，按照提示输入任务名称即可。

需要注意的是在创建任务时需要指定相应的应用程序名称和应用程序的路径。

2. 运行任务在终端中输入命令“fishx task run”就可以运行我们刚刚创建的任务了。

输入完毕后，按照提示输入相应的任务名称即可。

3. 执行脚本在终端中输入命令“fishx script run”就可以执行我们指定的脚本了。

输入完毕后，按照提示输入脚本的路径即可。

需要注意的是，Fishx也支持在脚本中嵌入多个Fishx实例，这对于我们编写自动化脚本非常有用。

三、高级用法1. 变量与条件判断Fishx支持变量定义和条件判断，这对于编写复杂的自动化脚本非常有用。

在Fishx中，我们可以使用“set”命令来定义变量，使用“if”和“else”语句来进行条件判断。

例如，我们可以定义一个变量“$path”，表示当前路径，然后使用“if”语句来判断当前路径是否为根目录。

如果是根目录，则输出相应的提示信息；如果不是根目录，则输出另一条提示信息。

具体操作如下：（1）定义变量$path：set $path ~/；（2）判断当前路径是否为根目录：if test $($path) == / then echo "当前路径为根目录" else echo "当前路径不是根目录" fi；2. 定时任务Fishx支持创建定时任务，可以通过crontab命令来设置定时任务的时间表，以实现自动化运行的目的。

fish实验步骤及原理实验步骤：1.实验准备：准备好鱼的标本、鱼类解剖工具、显微镜等实验器材。

2.解剖鱼体：将鱼标本放在解剖台上，用解剖刀慢慢剖开鱼体。

首先从鱼的胸腔切入并延伸至腹腔，然后从尾部朝头部剖离开，同时切开鱼的鳃盖，进一步剖开鱼的颌骨以及头骨。

在解剖过程中需要注意保护好重要组织和器官。

3.淘洗标本：将解剖好的鱼体放入容器中，加入适量的水，反复淘洗以去除血液和杂质。

4.制作镜片：将鱼体中感兴趣的组织或器官取出，切成适当的大小，并用显微刀将其切薄。

5.涂片加热：将切好的组织片放在加热盖玻片上，用酒精灯进行加热，使组织片均匀贴附在盖玻片上。

6.组织固定：将加热过的盖玻片放入甲醛固定液或其他适合的固定液中进行固定，一般需要固定数小时或过夜。

7.去脂：将固定好的组织片放入脱脂溶液中，去除其中的脂肪。

8.染色：将去脂后的组织片放入染料溶液中，进行染色处理，以增强组织的显色度。

9.除脱水：将染色后的组织片放入乙醇中进行脱水处理，去除其中的水分。

10.透明：将脱水后的组织片放入透明溶液中，增加其透明度。

11.封片：将处理好的组织片放入玻璃片上，再加上另一块盖玻片，用封片胶固定好。

12.显微观察：将封好的组织片放在显微镜下进行观察，观察组织结构、细胞组成等细节。

实验原理：鱼的实验可以用于多个领域的研究，包括鱼类生理学研究、疾病模型建立、环境毒理学等。

以下列举一些常见的实验原理：1.解剖观察：通过解剖鱼体，可以观察到鱼的器官结构、组织分布等信息，进而研究其生理、解剖特征。

2.组织切片：将鱼体中的感兴趣组织切割成薄片后，可以用来观察组织的细胞结构、细胞形态、细胞内器官等。

3.染色技术：通过染色处理，可以使组织或细胞的特定部分显色，以便于观察和分析。

常见的染色方法包括荧光染色、核染色、酶标染色等。

4.应用于疾病研究：鱼类可以作为模型生物，研究各种疾病的发病机制和治疗方法。

例如，通过鱼类细菌感染模型可以研究感染病原体的致病机制和抗菌药物的疗效。

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FISH 初学者指南中国矿中国矿大大 力学力学小杨小杨小杨 QQ QQ QQ：：277502960 yhb20002000@ ，欢迎交流欢迎交流1.1.概述概述概述FISH是一门内植于UDEC的程序设计语言，它能让使用者定义新的变量和功能。

这些功能可以拓展UDEC的用途或者增加用户定义的功能。

例如，可以绘出或者打印新的变量，执行特殊的模拟，数值测试的随动控制，指定不寻常的属性分布和参数研究的自动化。

对使用Itasca软件现有程序结构做工程困难或者不能实现的用户来说，FISH语言发展响应了那些用户的需求. 与其在增加许多新的特殊功能到标准代码中，不如提供一种内置语言使用户能编写他们自己的模块。

一些实用FISH模块已经被写出了，UDEC项目提供一个有关此类的库（见FISH卷的第三节）。

对某些人来说，可能没有经验设计去编写简单的FISH模块或者修改现有的一些简单的模块。

4-2节为非程序员提供一个介绍性的指南。

然而，FISH语言和其他任何程序设计语言一样可以变得非常复杂。

要查阅更多细节，参考FISH卷的第二节。

类似所有规划任务，FISH功能可以被构造按增加的形式，在向前使用更复杂的代码前可以检查运行可行性。

相比较大多数编译器来说，FISH实行错误检测比较少，所以在实际应用它们之前，应该用些小的数据设置测试所有的功能。

FISH程序非常简洁的内植于正常UDEC数据文件，由关键词“DEFINE ”引入一个FISH函数，当遇到关键词“END ”时，该函数结束。

函数可以调用其它函数，被调用的函数又能继续调用其它函数，如此循环。

只要是在使用前都被定义了的，函数的调用次序可以任意（例如：由一个UDEC指令调用）。

FISH函数的编译形式储存在UDEC内存空间，指令“SAVE ”保存函数和各个相关变量当前值。

在第二篇FISH卷提供FISH语言规定的完全定义和内部函数。

它包含了有关语法，数据类型算法变量和函数的各种规范。

在第二篇FISH卷描述了所有FISH语言名，并且在“指令和指令和FISH FISH FISH参考概要参考概要”中提供这些名称的概要。

Fish语言学习笔记Fish语言学习笔记FISH 语言中的变量名以及函数名在整个程序中都有效，不管是在FISH 代码中还是在FLAC3D 命令行中。

如果变量名没有被赋值，则默认为0。

我们可以删除或重新定义FISH 函数，方法是用同名的新代码取而代之，如果在DEFINE 后直接跟END 行，那么也就删除了原定义的函数。

当函数被删除了，但原有变量依然存在，因为变量是全局性的，如同在其他位置一样。

控制语句EXIT，会使程序无条件跳到当前函数的结束处。

与节点参数有关命令：1.gp_near(x,y,z)：获得距坐标(x,y,z)最近的节点的指针2.ngp：节点总数。

3.gp_nearall(x, y, z) ：获得距坐标(x,y,z)最近的节点的指针，包括空单元节点在内。

4.gp_id(p_gp)：获得指针为p_gp的节点的id5.gp_head：第一个节点的指针6.gp_next(p_gp)：获得指针为p_gp的节点的下一节点的指针。

7.gp_xpos(p_gp)：获得指针为p-gp的节点的x坐标。

8.gp_xdisp(p_gp)：获得指针为p-gp的节点的x方向位移。

9.gp_xvel(p_gp)：获得指针为p-gp的节点的x方向变形速率。

10.find_gp(id)：获得id为id的节点的指针。

11.gp_extra(p_gp,ind)：获得指针为p_gp的节点的索引（编号）为ind的额外参数。

12.gp_yfunbal(p_gp)：获得指针为p-gp的节点的y方向节点不平衡力。

与单元参数有关命令：1.z_head：第一个单元的指针。

/doc/fa4590171.html,one：单元总数。

3.find_zone(id)：获得编号为id的单元的指针。

4.z_near(x, y, z)：得距坐标(x,y,z)最近的单元的指针。

5.z_nearall(x, y, z) ：获得距坐标(x,y,z)最近的单元的指针，包括空单元在内。

FISH以及免疫荧光的实验步骤FISH（Fluorescence In Situ Hybridization）是一种分子生物学技术，用于在细胞或组织中定位和检测特定的DNA序列。

免疫荧光是一种利用标记有荧光的抗体来检测特定抗原的方法。

以下是FISH和免疫荧光的基本实验步骤。

FISH实验步骤：1.样本准备：首先需要准备要研究的细胞或组织样本。

可以通过细胞培养、组织切片或细胞悬液来准备样本。

2.固定样本：将样本加入含有人工合成的固定剂（如4%的甲醛溶液）中进行固定处理。

固定可以保留细胞和组织的形态结构，并提高探针的渗透性。

3.消解：将样本进行胰蛋白酶等消解处理，以去除细胞或组织内的蛋白质，并增加探针的渗透性。

4.杂交：将探针与样本进行杂交反应。

探针是一段与目标DNA序列互补的DNA分子，通常通过荧光标记或酶标记来进行检测。

样本和探针在适当的温度和缓冲液中进行反应，以使探针与目标DNA序列结合。

5.洗涤：对样本进行一系列的洗涤步骤，以去除未结合的探针和其他非特异性结合物质，提高检测的特异性。

6.反应显色：对样本进行适当的显色反应，使探针的标记物可见。

常用的显色方法包括荧光显微镜、荧光素酶等。

7.观察和分析：用荧光显微镜观察样本，记录和分析目标DNA序列的位置和数量。

可以通过计算光强度或使用图像分析软件进行定量分析。

免疫荧光实验步骤：1.样本准备：准备要研究的细胞或组织样本。

可以通过培养细胞、组织切片或细胞悬液来准备样本。

2.固定样本：将样本加入含有人工合成的固定剂（如4%的甲醛溶液）中进行固定处理，以保留细胞和组织的形态结构。

3. 渗透处理：将样本进行渗透处理，以提高抗体对抗原的反应性。

通常使用非离子性洗涤剂（如Tris-buffered saline-Tween（TBST））或0.1%的Triton X-100等。

4.抗原修复：将样本进行抗原修复处理，以恢复抗原的一般形态，增强抗原的免疫反应。

可以使用高温加热、酶消化或化学处理等方法进行修复。