微生物实验心得体会
这学期的微生物实验已经结束，这是我第一次接触到微生物的世界中，以前也只是在书本中学习，但是真正走进它们的世界中是通过这个课程开始的。在开始微生物实验之前我是以为这个实验不会很难，但是通过本学期的学习发现这个课程真的很难。你不仅需要理论知识作为铺垫，你还需要有严谨的实验精神。
第一节课老师给我们介绍了我们本学期微生物实验的几个实验和报告的要求，也让我们了解了微生物实验和以往其他实验的不同。实验步骤虽然很简单，但是往往一个微小的细节处理不当也会导致你整个实验结果的失败。这个我真的深有体会，我们小组的实验结果都很不理想。实验步骤说难也不难，其实无非是先对配置培养液，然后对清洗干净的试管、培养皿以及配置好的培养液进行灭菌，等灭菌完了就放入无菌室进行细菌的接种，最后将接种好细菌和培养液的培养皿放进恒温培养箱进行培养。看似很简单的操作过程我却状况百出。我总结了几点导致这么多次实验失败的地方。第一是操作不够规范，在培养皿中倒入培养液后没有摇匀导致培养基边缘开裂，未等琼脂培养液凝固就倒置导致培养基分布不均匀。第二是理论知识欠缺，没有等培养液冷却至40到50摄氏度就倒入培养基然后马上就接种了细菌，导致细菌已经被烫死。
好在值得欣慰的是最后一个自主实验还是比较成功的。试验以环境对微生物生长的影响为题设计实验，我们小组通过PH值，温度，紫外线照射三个方面进行研究，结果很满意，很明显。大肠杆菌在PH值为7时生长最适，在温度为37℃时生长最佳，紫外线会抑制其生长。
不得不承认，通过这次实验的学习，我们学到了很多，得到了很多，有些是书本上学不到的，只有自己参与了，操作了，才会知道。也要感谢老师对我们的照顾。
底泥中的细菌数量和抗Cu的细菌分离提纯及其菌落形态观察
2013年10月
底泥中的细菌数量和抗Cu的细菌分离
提纯及其菌落形态观察
一、 实验目的
1、熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的方法。
2、了解配制微生物培养基的基本原理，掌握常规的配制、分装培养基的方法。
3、学会各类物品的包装、配制（稀释水等）和灭菌技术。
4、从污泥中分离、纯化和培养微生物，掌握常用的分离和纯化微生物的方法。
5、学会几种接种技术。
6、观察分离出来的几种细菌相应的菌落形态特征。
7、通过观察和比较细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的菌落特征，达到初步鉴别上述微生物的能力。
9、学会细菌菌落总数的测定。
二、实验原理
1、培养基原理
培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，由碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、钠、钙、镁、铁及微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。调整合适的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。本实验配制固体培养基，固体培养基的成分与液体相同，仅在液体培养基中加入凝固剂使呈固态。通常加入质量浓度15-20g∕L的琼脂为固体培养基，加入质量浓度为3-5g/L的琼脂为半固体培养基。
2、灭菌原理
本次实验采取加压蒸汽灭菌法。加压蒸汽灭菌器是能耐一定压力的密闭金属锅，加压灭菌的原理在于提高灭菌器内的蒸汽温度来达到灭菌的目的。包括干热空气灭菌和火焰灼烧灭菌等以干热方法杀死细菌达到灭菌的目的。
3、分离纯化原理
在自然界和污水生物处理中，细菌和其他微生物杂居在一起。为了获得纯种就必须从混杂的微生物群体中分离出来。本实验使用的平板划线法和浇注平板法。平板划线法是指把混杂在一起的微生物不同种的不同个体或同一种的不同细胞，通过带菌的接种环在培养基表面做多次划线的稀释法，能得到较多的独立分布的单个细胞，经培养后即成单菌落，通常把这种菌落当作待分离微生物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可以得到细胞菌落的克隆纯种。浇注平板法是将菌液和培养基混合后培养出单菌落，此方法也常用于细菌菌落总数的测定。
微生物学实验
实验一
培养基的制备和灭菌
一、目的要求
学习和掌握各种培养基的制备方法，其中
包括培养基的配制，包扎及灭菌技术。
二、基本原理
➢培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法
配制而成的营养基质。其中含有碳源、氮源、无机盐、生长因子以及
水分等。微生物在培养基上生长繁殖还必须在最适酸碱度范围内才能
表现它们最大生命力，因此不同种类的微生物应将培养基调到一定pH
值范围。培养基种类很多，不同的微生物所需培养基不同。按其组成
可分合成培养基和天然培养基。按其物理状态可分固体培养基，液体
培养基和半固体培养基。按其特殊用途可分加富培养基，选择培养基、
鉴别培养基。
➢培养基配制后还必须进行灭菌。灭菌和消毒是二个不同含义的名词。
消毒是指消灭病原菌或有害微生物，而灭菌则是杀死或消灭一定环境
中的所有微生物。
➢消毒与灭菌的方法很多，但总的可分为物理法与化学法两大类。
物理法包括加热灭菌（干热灭菌与湿热灭菌），过滤灭菌、紫外线
灭菌等。化学方法主要是利用有机或无机的化学药品对实验室用具
和其它物体表面进行灭菌与消毒。
三、实验材料
每组同学需要准备以下材料（2人/组）：
小试管：12支（15*150mm）
培养皿：12套（ф9cm）
吸管：3支（1ml）
三角玻扒：2支
烧杯：1套（50ml，100ml，250ml，500ml）
量筒：1个（100ml）
玻棒：1支
分液漏斗：1套
药匙：2把
剪刀：1把
铁丝：数支
标签贴纸：1张
铅笔：1支
10ML玻璃吸管：1支
四、实验内容
（一）、培养基的配制：
同学们先将试管贴好标签。注明培养基名称，组别，日期。标签粘
贴位置在离管口1/3管身处。
注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。
操作图示：
培养基配方：四、实验内容
肉汤培养基：营养肉汁1g 自来水50ml PH7.2
麦芽汁培养基：麦芽汁5g 自来水50ml 自然PH
固体培养基：由液体培养基加2％琼脂
1．配制肉汤斜面培养基50 mL
・８４・ 中国民族民间医药 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｅｔｈｎｏｐｈａｍａｃｙ 学术探讨 Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｓｔｕｄｙ 微生物实验教学与微生物实验绿色化 冯桂香王娅朱明磊 郧阳医学院，湖北十堰４４２０００ 【关键词】：微生物实验教学；微生物实验绿色化 【中图分类号】Ｒ３７ 【文献标识码】Ａ 【文章编号】１００７—８５１７（２０１０）０６—０８４一ｌ 随着社会的不断发展，人们对环境污染、生态安全问 题越来越重视。其中有一种环境污染就是人为的污染—— 微生物实验的污染。以前人们对环境污染的理解更多地是 指工业、农业、生活等过程中的化学污染。微生物实验作 为一门实验性学科，离不开实验的验证和检验，因此在实验 过程中免不了会产生大量的废弃物，这些废弃物不同于生活 垃圾，如果不经处理任意排放，势必会对人体造成伤害， 对周边环境造成污染。因此，微生物实验过程中产生的污 染问题必须引起我们的高度重视。 １ 微生物实验教学对环境污染的特点 微生物是一个庞大的微观世界生物群体的总称。它们 是自然界里肉眼看不见，必须借助光学显微镜或电子显微镜 放大几百倍、几千倍、乃至几万倍才能观察到的微小生物， 称之为微生物（ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ）。在分类学上，微生物可 分为细菌、病毒、真菌和原虫等。微生物的个体一般都是单 细胞，简单多细胞或非细胞的，通常都是单倍体，繁殖快、 数量多和与外界环境直接接触．故具有易变异的特点，如 大肠杆菌在适宜的条件下２０ｍｉｎｆｌ￣可繁殖一代，且易变异。 微生物实验教学引起的环境污染，主要是实验过程中产生的 含细菌废弃物以及细菌、病毒等病原体的污染。实验准备 和实验操作中不小心泼洒或滴落到实验台面及地面上的细 菌、病毒如伤寒杆菌、痢疾杆菌、传染性肝炎等病原菌， 如不加处理直接被倾倒、丢弃，就会引起传染病的暴发流 行。一般的实验室都没有专门的处理设施，简单的方法就 是混于生活废弃物中随意排放。 ２微生物实验污染对人体的影响及特点 与工业生产排放的废弃物相比，微生物实验教学中 产生的废弃物量不是很大，但由于微生物实验课面对的一 般是活的病原体，而初学者无菌观念不强，自我防范意识 弱，人为的失误和不规范的操作极易发生实验室物品的污 染和差错等事故。而含致病微生物的培养液、培养基，如 未经适当的灭菌处理而直接外排，也会造成严重后果。另 外在微生物实验教学过程中，实验人员难免会接触到各种 各样的细菌、培养液、病毒等，其中有些是致病性很强的细 菌或病毒（如：结核杆菌）。尤其是实验指导教师经常在被 部分空气污染的实验室工作，又长期接触化学试剂（如：二 甲苯）或有毒细菌，危险更大，可能导致细菌感染或化学 试剂中毒。然而，微生物实验教学对环境污染和对人体的 影响却是一种长期低剂量的污染过程，由细菌和化学实验 污染引起的中毒往往是慢性或亚急性中毒，不易引起人们 的重视和关注，其隐患更大。 ３微生物实验净化环境途径 自然界的某些微生物具有净化环境的作用。众所周 知，污染物质排到江河之中，随着流途的延长，污染物质 会“自然”地发生分解、转化，使污染程度减弱，甚至完 全消失，这就是通常所说的自然净化作用。其实，自然净 化的本身正是微生物的作用。在很多污染环境中，微生物 都是起着修复作用的最活跃的生物因子，特别是一些特殊 微生物在特定条件下的作用更是十分显著。例如，有的特 殊菌种能将甲基汞、乙基汞、醋酸汞、硝酸汞和硫酸汞等 多种汞化合物还原成金属汞，并使汞从细胞中挥发掉。其 他各种污染物如酚类、氰化物、有机氯和有机磷农药等， 也都能被相应的微生物加以降解及转化，消除毒害。利用 绿色自然界的微生物和原则并将其贯穿于整个微生物实验 中，可减少或从源头上消除实验教学的污染，同时也有助 于培养学生的绿色净化环境意识，更是对学生进行环境保 护教育的好方式。 ４在微生物实验中实现实验绿色化 严格规范操作，养成良好的实验习惯。细菌瓶必须及 时加盖，避免长时间打开细菌瓶；严格控制细菌的取用量， 避免过量取用；规范实验操作，避免细菌泼洒；同时加强 微生物实验过程的有效管理，加强对细菌、有毒试剂的管 理，改善细菌、病毒的保存环境，建立严格的领用制度。 实验中要严格按规定操作，对实验中产生的废液、废气、 废渣应回收处理，避免对环境造成二次污染，为实现微生 物实验绿色化打下基础。 ５计算机辅助制作多媒体仿真实验，实现微生物实验绿色化 实验中用到的某些有毒、有害的细菌，易对环境造成 极大的污染，更会危及实验师生的身体健康。利用计算机 辅助制作多媒体仿真实验及图片，完全可以把仿真实验中 的变化过程和图片清晰地呈现在屏幕上，且形象生动，这 样配合理论教学更有助于学生对细菌、有毒试剂的了解及 掌握；对于一些较为复杂的探索性实验，可以通过计算机 辅助设计对比和判断实验的合理性和可行性，从而减少实 验过程并开发出对环境无污染的微生物实验。随着人们环 境保护意识的提高及环境保护各项工作的深入，实验教学 中的环境保护问题应引起高度重视。因此，微生物工作者 不仅要避免工作中的微生物污染，同时还担当着治理环境污 染的重任，要培养学生热爱环境、保护环境、改善环境、建 设环境。这样才能使微生物实验教学工作更安全、更有意义。 参考文献 ［１］周德庆．微生物学教程［伽．北京：高等教育出版社，１９９３． ［２］棣向阳，等．环境与防治［Ｊ］．１９９０，５． ［３］杨如璞，尚洁华，李珂，等．加强实验室污染物对环境污染的管理［Ｊ】．现 代康复，１９９８，ｌＯ（２）：１ｏ９一ｕ３． ｒ４］鞠晓红，时文艳，陈爽．高等院校病原微生物实验室的管理与安全防护 ［Ｊ］．中国病原生物学杂志，２００７，２（４）：３１７—３１８． ［５］病原微生物实验室的生物安全管理［『］．福建医药杂志，２００８，１０（５）．
