Agilent1100高效液相色谱仪使用与维护操作规程
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Agilent1100 高效液相色谱仪使用与维护操作规程
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1 目的
制定 Agilent1100 高效液相色谱仪使用与维护操作规程，确保操作人员能正确标准地操作，维护液相色谱仪。
2 适用范围
适用于Agilent1100 高效液相色谱仪的使用，维护。
3 编写依据
Agilent1100 高效液相色谱仪使用说明书
4 职责
QC 相关检验人员对本仪器操作规程的实施负责。
5 内容
5.1 安全留意事项
本仪器应良好接地，以防止触电及释放静电；本仪器常常处于高浓度的有机蒸汽环境中，故应通风良好，制止消灭电火花；配制流淌相或接触有机溶剂时应戴橡胶手套及其它防护用品。
5.2 仪器组成
本仪器由 LC-10ATVP 泵、7725 手动进样器、柱温箱、Agilent1100 紫外-可见光检测器、色谱工作站(N2023 或其它工作站)。
5.3 日常使用操作步骤
5.3.1 开机
翻开计算机，进入 Windows 系统，CAG Bootp Server 程序将自动运行。翻开 HPLC 1100 各模块电源，等仪器自检通过，并且与计算机通讯成功〔约 1～2min〕后，进入 Online 工作站。
5.3.2 系统初始化〔主要目的：排解系统中的气泡〕
5.3.2.1 翻开Purge 阀
5.3.2.2 加大泵流量并开启泵，快速冲洗试验通道，至无气泡从废液管排出。降低流量及溶剂比例成试验初始条件，并单击OK 确认执行；
5.3.2.3 关闭Purge 阀，完成系统初始化。
5.3.3 系统平衡〔主要目的：平衡、稳定色谱柱、柱温以及灯的能量〕
调出本次试验所需方法，保持泵连续工作，以试验初始的流淌相冲洗、平衡柱子一段时间。〔一般约 30min，可自己依据本人的仪器配置状况计算，要求至少以色谱柱几何体积 5～10 倍体积的流淌相冲洗、平衡系统。〕
5.3.4 在适当时间，开启柱温箱和检测器，使得柱温稳定，检测器灯的能量稳定。〔一般灯需要 20min 左右的稳定时间。〕点击 System On 图标，可以同时翻开柱温箱和检测器。翻开
View 菜单下的Online Signal 窗口，单击Change 键，选择需要监测的色谱信号并设定适宜的 X、Y 轴范围，观测色谱基线。
5.3.4 基线稳定后可以进样分析〔阅历上，基线波动1～2mAU〔常规分析〕或 1～0.5mAU 起草部门
分发部门 质检部
质检部 被替代文件 文件 发放编号：
〔痕量分析〕就可算是基线稳定。〕填写 Sample Information
5.3.5 手动打针进样并切换进样阀
5.3.6 泵的操作步骤及旧流淌相的更换
5.4 流速的设定
在初始画面，按 func 键，光标在“flow”的输入位置闪耀,设定所需流速，按 Enter 键确认。连续按func 键，设置压力上限和下限，按 Enter 键确认；连续按 Func 键至消灭Set System
Param，输入 1 为双泵各自单独掌握，输入 2 为双泵联动，且为主泵。
5.4.1 当使用简洁的二元线性高压梯度洗脱时，下面举例说明编写时间程序的步骤〔在主
泵上编写〕：
时间(min)
流淌相A(%，V/V)
流淌相B(%，V/V)
0 85 15
30 0 100
45 0 100
50 85 15
55 STOP
5.4.1.1 初始设定
通过专用光纤将两个输液泵连接起来，输液管路连接完毕后，设定主泵〔A 泵〕的System Param 参数为 2, 设定从泵〔B 泵〕的System Param 参数为 1；设定两泵的ADRS 参数为 85；设定 Local 参数为 1〔本地掌握〕；设定每台泵的凹凸压限。A 泵设定的值只对 A泵有效，B 泵设定的值只对B 泵有效，设定后，只能用A 泵掌握B 泵。
5.4.1.2 设定初始条件
在初始屏幕，按Func 键，设定泵A 与泵 B 流速之和；按conc 键，设定流淌相B 的浓度 15%，流淌相A 的浓度为 100%-流淌相B 的浓度%=85%
5.4.1.3 编写程序
a 按 CE 键，返回初始屏幕，按 Edit 键，屏幕显示已经设定的程序步数和剩余的程序步数；
b 按 Enter 键，显示参数设定屏幕，光标在 Time 区闪耀，输入时间数值 30 分钟，按 Enter
键。
c 重复按Func 键，直到显示 BCNC，使用数字键输入浓度 100%〔相应地，流淌相A 的相对浓度为 0%〕，并且按 Enter 键确认。
d 按 Enter 键，光标在Time 区闪耀，输入时间数值 45 分钟，按Enter 键。
e 重复按Func 键，直到显示 BCNC，使用数字键输入浓度 100%〔相应地，流淌相A 的相对浓度为 0%〕，并且按 Enter 键确认。
f 按 Enter 键，光标在Time 区闪耀，输入时间数值 50 分钟，按Enter 键。
g 重复按Func 键，直到显示BCNC，使用数字键输入浓度 15%〔相应地，流淌相A 的相对浓度为 85%〕，并且按 Enter 键确认。
h 按 Enter 键，光标在Time 区闪耀，输入时间数值 55 分钟，按Enter 键。i 重复按Func 键，直到显示STOP，按 Enter 键确认。
j 按 CE 键完毕编程，再按CE 键返回初始屏幕。
k 在编程过程或完毕后，如觉察有错，按 BACK 键 或 Enter 键显示至出错的步骤按Shift+Ce(del)键即可删除。
5.4.1.4 执行时间程序
a 按下A 泵的Run 键，启动时间程序；
b 再按下Run 键强制停顿时间程序，或程序中插入Stop 命令。
只是 B 泵的流速由A 泵掌握；B 泵的其他设定参数都是有效的；B 泵的 Pump 键是有效的，它可以在任何时间启动或停顿 B 泵，即使是在执行时间程序时也一样，当 B 泵停顿时， B
泵的 Pump 键可以执行 B 泵的冲洗操作。留意不要按下B 泵的 Run 键，否则会执行B 泵的时间程序，引起不正确的操作。
5.4.1.5 排液
当更换流淌相或仪器数天未使用再次使用时，泵内可能会产生气泡，引起不能输液或压力不稳，这时均应进展排液。具体操作如下：把吸滤器浸入流淌相中，将排液阀旋钮逆时针旋转180℃(排液阀旋转不要大于 180℃,否则空气将进入排液阀,最终导致空气进入流淌相),按purge 键,进入吸滤器至泵的冲洗操作,约 5 分钟后，再按一下purge，停顿冲洗，关闭排液阀〔将排液阀旋钮顺时针方向留神旋转到底〕。
当用排液的方法仍不能排解气泡时,可翻开排液阀,拔掉吸滤头,用注射器配上专用针头将 10-20mL 流淌相或纯化水强行从吸液管注入泵内自排液管流出,再装上吸滤头,重排液,即可排解故障.
5.4.1.6 流淌相的更换
依据旧流淌相是否互溶及旧流淌相是否为缓冲液选择更换流淌相的方法 ,如同时也更换色谱柱，则在更换流淌相前应卸下色谱柱。
a 更换互溶的流淌相
在 200mL 大烧杯中参加大约 100mL 流淌相；从储放旧流淌相的储液瓶中取出吸滤器，并将其放入装有流淌相的烧杯中，边摇动边清洗吸滤器以混匀流淌相；翻开排液阀， 启动
Purge 键进展排液，旧流淌相将由排液管自管路中完全排出，停顿排液；将流淌相倒入储液瓶中，并放入吸滤器；从手动进样器的出口端卸下色谱柱，并且将管子放入废液瓶中， 关闭排液阀；设定流速2～3mL/min；按Pump 启动泵，以更换手动进样器中的流淌相；连接色谱柱及检测器检测池，设定流速 1-2mL/min，按Pump 启动泵，以洗净整个管路。
b 更换不相溶的流淌相
预备一种能与旧流淌相相互溶解的中间清洗液，如异丙醇；首先换成中间清洗液， 再把中间清洗液换成的流淌相，每次的更换挨次都依据“A 更换互溶的流淌相”中的步骤进展。
c 更换缓冲液流淌相
在旧流淌相的任一方，或双方均含有缓冲液时，预备过滤纯化水做为中间清洗液，首先用过滤纯化水置换整个管路，然后更换成的流淌相。这样可以防止缓冲液中的盐析出。
5.5 色谱柱的安装
色谱柱与进样器及其出口端与检测器之间应为无死体积连接，以免试样集中影响分别；安装色谱柱时应留意流向,以免安错；使用柱支架时，柱出口应向上。
柱或被污染柱用适当溶剂冲洗时，应将其出口端与检测器脱开，避开污染。压力表无压力 显示或压力波动时不能进展分析，应检查泵中气泡是否已排解，各连结处有无漏液，排解故 障前方能进展操作。如压力上升，甚至自动停泵，应从流路各段逐步检查柱端有无污染堵塞， 流路是否堵塞。
5.6 紫外检测器的操作步骤
5.6.1 按 power 键翻开电源,检测器开头自检,将显示初始屏幕。
5.6.2 波长的设定
例如:将测量波长变为 230nm:首先按CE 键。显示初始屏幕。按一下func 键后,屏幕显示[LAMBDA](设定测量波长)*波长参数输入区闪耀,提示输入波长值。输入 2,3,0 并且按enter 键。完成设定。
5.6.3 测量量程的设定:
将AUX RANGE 设为 3(或其它适宜量程，其意义见 AGILENT1100 高效液相色谱仪使用与维护操作规程)，按 CE 键返回初始屏幕；按数次func 键后,屏幕显示[AUX RANGE] 输入3，按enter 键，完成设定。按CE 键返回初始屏幕。
5.7 器启动后(等待稳定时)的检查
将流速调整至分析用流速，按Pump 键启动泵，对色谱柱进展平衡大约30 分钟，
5.8 漏液检查
用枯燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏 ,否则,要把漏液处紧固或更换零
件。
5.9 泵的压力检查
输液泵的压力依据需要的压力和流淌相种类的不同有所差异 ,但变动的幅度应在0.5Mpa 以内。在压力变动大时,再清洗一次,如还是不行,则应考虑单向阀内部、管路及色谱柱是否污染或堵塞，应以异丙醇清洗管路或请有阅历的修理人员拆开管路予以修理。
5.10 基线检验
待泵压力及基线稳定后，可开头分析测试操作，如为线性梯度洗脱，用初始比例的流淌相对色谱柱进展平衡。
5.10 N2023 色谱工作站操作
5.10.1 翻开色谱数据工作站后，选择相应的串行口和通道。
5.10.2 在各相应通道内，按“方法”键，选择各相关功能键，依据需要设定参数，按“承受”键确认。
5.10.3 按“试验信息”填写有关试验信息。
5.10.4 按“数据采集”进入分析实时显示图框,即可查看基线。待基线稳定后,便可进展分析测试。
5.11 测定操作
检测器按zero 键,回复零点。并将色谱工作站实时采集对话框进展基线校零，进样，按采集数据,洗脱完毕后,按停顿采集。完毕记录色谱图。
六通阀式进样器进样方法 把进样器手柄放在载样位置〔load〕；用供试溶液清洗配套的注射器，再抽取适量，如用定量环载样，则注射器抽取量应不少于定量环容积的5 倍，用微量注射器定容进样时，进样量不得多于环容积的50%，在排解气泡前方能向进样器中注入供试品溶液；把注射器的平头针直插至进样器的底部,注入供试品溶液，除另有规定外，注射器不应取下。把手柄转至注样位置〔inject〕，定量环内供试溶液即被流淌相带入流路。
