《HIV检测技术》PPT课件

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艾滋病抗体检测技术ppt课件

Organization of the HIV-1 Virion
p24 Core Ag p ro te a s e
p31 integrase
p17 M atrix p 7 -g a g p 9 -g a g
学习交流PPT
6
Human immunodeficiency virus
HIV
HIV-1 （有A～J，O1～O4 多个亚型）
（7）负责对开展自愿咨询检测工作的艾滋病检测实验室的技术支持
和指导。
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16
艾滋病确证实验室职能
（1）承担当地卫生行政部门指定的艾滋病病毒抗体确证、抗体筛查和其他艾滋病检测工作。
• 7、组织全国艾滋病检测相关业务培训，组织制定和修改与艾滋病检测工作有关的技术规范和指南。
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15
艾滋病确证中心实验室职能
（1）负责职责范围内艾滋病检测实验室网络建设的业务技术指导和评价，组织艾滋病检测实验室人员技术培训。
（2）建立艾滋病检测实验室质量控制体系，组织省级实验室能力验证和艾滋病诊断试剂的临床质量评估。
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10
HIV感染以后的血清学动态
急性期 HIV RNA
Anti-Ag
潜伏期 Anti-Ab
艾滋病期
Anti-gp41/120 (anti-gp36)1周 2周 3周 4周………………….1年 2年 3年…………….10年………..
窗口期
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11
窗口期: 从机体感染HIV到产生相应抗体的
Ø 1986年国际微生物学会和病毒分类学会将HTLV-Ⅲ和 LAV统称为人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus 简称HIV)

HIV实验室检测ppt课件

0.04(NEG )
/
P24 (不确定)
134 P24 0.01(NEG HIV RNA 02 2011/12/1 / 4.49(POS) (不确定 ) (NEG) 2 Combi 试剂2次均出现阳性结果，P24抗原也均出现条带，但 ) • 罗氏HIV HIV-RNA分析病毒为阴性，最终报告为阴性，该患者实为淋巴瘤，分析时注意干扰因素
WB P24 (不确定)
01
/
p24,p31 105 ，p51, 302.7(POS 11.09 1.8X105 02 2012/05/2 / p66, ) (POS) (POS) 5 gp120， gp160 • 该患者第1次检测罗氏HIV Combi PT和HIV Combi均为阳性、 ELISA为阴性、 HIVAg检测阳性，患者不同意做确证实验，在105天后第2次采血，罗氏HIV Combi PT 和国产ELISA法检出阳性，WB分析检出较多抗原亚类，实验室作HIV- RNA高精分析
•
淋巴瘤患者、孕妇、肿瘤病人、透析患者4种病人都可能出现HIV初筛阳
性，需特别对待
23
Case分享
• 华西案例分析 CASE 2 HIV Combi (COI) 2.59 (POS) ELISA (S/CO) 0.04 (NEG) HIV RNA （高精分析）
WUXX Men Days since HIV Combi 30 Y first bleed PT (COI) 0 2012/02/1 0 51.15 (POS)
7
HIV实验室指标
初筛试验+确证试验备注
筛查试验：ELISA, CIA, ECLIA 确证试验：WB, RIBA 仅测抗体早期灵敏度更高
血清学检测

HIV检测技术教学课件ppt

hiv检测技术的发展历程
初筛试验的出现
20世纪80年代初，出现了以酶联免疫法为代表的hiv初筛试验，大大提高了检测的灵敏度和特异性。
确认试验的建立
随着免疫印迹技术和质谱分析技术的发展，确认试验逐渐建立并得到广泛应用，以鉴别病毒株和判断病程进展。
快速检测技术
近年来，随着生物技术的不断发展，出现了以胶体金法为代表的快速检测技术，操作简便、检测时间短、适用于现场快速检测。
化学发光法
原理
化学发光法是一种通过化学反应产生光信号的检测方法。在反应过程中，HIV抗原或抗体与特异性抗体结合，形成免疫复合物，加入化学发光底物，产生光信号。通过测量光信号的强度，确定待测样本中 HIV抗原或抗体的量。
VS
用途
化学发光法具有高灵敏度、高特异性和试剂稳定性好的优点，适用于HIV确证实验和病毒载量检测。
02
hiv检测技术种类
酶联免疫法
原理
酶联免疫法（ELISA）是一种基于抗原抗体反应的检测方法，将HIV抗原或抗体包被在固相载体上，加入待测样本，通过抗原抗体反应形成复合物，加入底物显色，通过颜色深浅判断待测样本中HIV抗原或抗体的量。
用途
酶联免疫法广泛应用于HIV初筛实验，因其操作简便、检测成本低廉、试剂稳定性好等优点，成为最常用的HIV检测方法之一。
防治策略
针对HIV感染的防治策略包括疫苗研发、抗病毒治疗、行为干预等。
监测与控制
通过监测HIV感染的流行病学数据，制定有效的防控措施，控制HIV感染的传播。
05
hiv检测技术的优缺点及注意事项
hiv检测技术的优点
早期发现
hiv检测技术可以尽早发现hiv感染，为治疗和预防提供及时帮助。

HIV检测技术ppt课件

临床治疗和预后的判断疗效观察和耐药性监测核酸检测hiv核酸定性检测hivrna定量测定筛查实验方法elisa胶体金硒pa法斑点eia唾液尿液检测卡化学发光免疫分析确认实验方法免疫印迹法条带免疫法放免法间接免疫荧光试验其他cd4cd8cell计数等病毒感染后病毒rna和血清标记水平102030405060708090病毒rna抗原或抗体水平hiv1rnaabhiv1p24ag酶联免疫吸附法elisa最早出现发展最快至今仍普遍使用很高的灵敏度和特异性适合对大量样品的检测可以进行很方便的质控工作因此是目前临床最常用的筛查检测方法目前主要使用第三代抗hiv抗体12试剂即双抗原夹心法第四代elisa试剂可同时检测p24抗原和抗hiv12抗体
HIV抗体不确定（±）出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性。
免疫印迹法（WB）
38
WB不确定结果

WB的敏感性和特异性均较高。其假阳性率低于1/2万，假阴性率约为1/25万。其较高的特异性主要基于HIV不同抗原组分的分离以及浓缩和纯化。由于能够同时检测多种抗体以及对阳性判定的要求必须有两条以上的条带出现，因而能够用WB方法鉴别初筛试验的假阳性结果。不过该方法比较昂贵，技术要求高，影响因素多，操作不当和误判带型的假阳性率>2%。另外，文献报道大约4%～20%的样品经过HIV初筛复检阳性后，WB结果为“不确定”。 WB不确定结果的出现确实给临床诊断带来困难，需要更多的时间和实验进一步确认，也会对受试者造成额外的心理负担。从另一方面而言，WB不确定结果确是受试者真实的血清学反应。
22
免疫胶体金（或胶体硒）快速试验结果判断
反应区和质控区均出现红色条带为阳性，质控区有条带反应区无条带为阴性，
反应区和质控区均无条带则实验无效。

艾滋病检测技术要点PPT课件

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2021/4/8
预测疾病进程 HIV感染后疾病进程与病毒载量的关系十分密
切，观察HIV感染者病毒RNA水平可大致预测其发病的可能。病毒载量与6年发病率的关系为： <500c/ml时5.4%;5013，000c/ml时16.6%;3， 00110 ， 000c/ml 时 31.7%;10 ， 00130 ， 000c/ml时55.2%;>30，000c/ml时则为80%。当HIV感染者CD4+T细胞计数＜200/μl时，病毒载量与36个月发展至AIDS的危险为：＜10， 000c/ml 为 4.9%;10 ， 00029 ， 999c/ml 为 12.7%;30，00099，990c/ml为17.7%;＞100， 000c/ml为22.4%。在CD4+ 细胞数相同的情况下，年纪大的比年轻患者发展至 AIDS 的危险更大（AIDS 2004；18：51-58.）。
➢ 包装：三层包装，不需要危险品申报单。 ➢ 运输专用名称为诊断标本或临床标本（B类
生物物质）。
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2021/4/8
B类感染性物质包装要求
➢ 次级容器
61
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B类感染性物质包装要求
➢ 外包装
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A类、B类包装的异同点
63
2021/4/8
病原微生物菌（毒）种的运输
陆路、水路： ➢ 高致病性病原微生物样品应由2人护送，护送
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2021/4/8 39
2021/4/8
HIV P24抗原的检测
• （1）适用范围： • HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断。 • HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断。 • 第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反应，

HIV核酸检测技术2014医学PPT课件

－20℃以下，进行病毒RNA检测的样品如长期（3个月以上）保存应置于－80℃或液氮里。
样品的运送
病毒载量测定的样品应为血浆，样品应置于
带螺旋盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。随样品应附有送检单，送检单应与标本分开，不能混放。在冷冻条件下运送，每一包装的体积不得超过50ml。
HIV核酸检测及婴幼儿诊断
HIV核酸检测的意义
早期诊断
婴儿的早期诊断：HIV感染母亲所生小于 18个月龄
的婴儿，不同时间的两次HIV核酸检测均为阳性即可作出诊断。18个月龄以上儿童诊断与成人相同：有急性HIV感染综合症或流行病学史，且不同时间的两次HIV核酸检测结果均为阳性，即可诊断。也可使用多样品集合的方法，对采供血机构的原料血浆以及HIV抗体阴性的高危人群样品进行集合核酸检测，及时发现窗口期感染，降低“残余危险度”，减少二代传播。
遗传变异监测
可用于HIV分子流行病学监测，包括HIV-1
和HIV-2感染的鉴别诊断、HIV感染传播链的分析、HIV基因亚型和重组病毒的鉴定和分析以及人群HIV遗传变异趋势的监测
耐药性监测
可用于HIV耐药检测和监测，指导公共卫生
医生了解耐药性病毒株流行的态势和指导临床医生判断抗病毒治疗效果和修改抗病毒治疗方案。
样本采集原则
样品恰当的采集、保存和运送是所有检测需
要考虑的很重要的一部分。样品的采集和保存时，要使用无菌技术，包括消毒管、吸头和试剂及工作环境都要防止样品污染。
样品的采集
艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、
血浆和全血。病毒载量通常不使用全血。血清的检测结果大约是血浆的50％（30～80 ％），可能是因为HIV病毒颗粒被包裹在纤维蛋白网络中

hiv抗体检测技术 ppt课件

注意:不同厂家、不同方法临界值计算公式不同 cutoff=NC+0.1 cutoff=NC*2.1
四代艾滋病酶联免疫试剂比较
solid phase
第一代病毒裂解液
HIV-1
conjugate -IgG抗体
specific detection of
IgG 抗体 HIV-1
method 间接
病毒裂解液
病毒裂解液重组抗原合成肽
HIV-1 / -2 / -O anti-p24 抗体
IgM / IgG 抗体
HIV-1 / -2 / -O p24 抗原
夹心
酶联免疫吸附试验（ELISA）
优点：准确性高、价格低廉、
判断结果标准客观、
结果便于记录和保存
用途：流行病学监测及临床大量标本的检测
(2)化学发光或免疫荧光试验
急
诊检测。不需专门设备,
人员培训简单,一般可在10～30分钟内得出结
果。
缺点:肉眼判断较主观、价格较贵、结果不易
保存。
HIV快速检测试剂按原理不同，分为以下三类：
1 免疫渗滤试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点状固定在膜上。加待检样品后，阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。有效试验质控点必须显色。
HIV抗体检测
行业标准:
《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》WS298-2008
技术规范:
《全国艾滋病检测技术规范》（ 2009年修订版）
HIV抗体检测程序
筛查试验
– 初筛 – 复检
确证试验
筛查试验
筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，其中酶联免疫试剂应批批检合格。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。 HIV抗体筛查样品血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液。

HIV检测技术 ppt课件

复检试验
对初筛呈阳性反应的样品，应使用原有试剂和另外一种不同原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行复检试验。
如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。
艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样品，确证实验室可以直接进行确证试验。
原有试剂＋另一种原理初筛试剂
（3）快速检测（RT）及其它检测试验
优点:试验简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测。不需专门设备和人员培训,一般可在 10～30分钟内得出结果。
缺点:肉眼判断较主观、价格较贵、结果不易保存。
快速诊断试剂
（1）明胶颗粒凝集试验（PA）将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作
用，混匀后保温（一般为室温）。当待检样品含有 HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。
加样温育洗板显色
标准化操作及流程
试剂准备、标本收集、测定方法和仪器操作写出正确的“标准操作程序”(SOP)，所有的实验技术人员在进行相关测定时，必须严格按相应的SOP进行操作。
ELISA法结果判断
临界值概念: 将检测的阳性和（或）阴性对照的 OD值代入计算公式计算出来的判断阳性和阴性结果的界值
吸附－穿入－脱壳－生物合成－组装成熟和释放
HIV-1通过gp120与靶细胞表面CD4分子和趋化因子受体结合
HIV感染后的血清学改变
HIV抗体检测目的
诊断：确定个体HIV感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。
监测：了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。

HIV检测技术教学课件精品课件.

HIV检测技术教学课件精品课件.一、教学内容本节课我们将学习教材第十章“病毒检测技术”中的第三节“HIV 检测技术”。

详细内容包括HIV病毒的基本知识、HIV检测方法的分类、原理及其在实际应用中的优缺点。

二、教学目标1. 了解HIV病毒的基本知识，掌握HIV检测技术的分类和原理。

2. 学会分析不同HIV检测方法的优缺点，并能根据实际需求选择合适的检测方法。

3. 培养学生的实践操作能力，使其能够独立完成HIV检测实验。

三、教学难点与重点重点：HIV检测技术的分类、原理及其在实际应用中的优缺点。

难点：不同HIV检测方法的比较分析，以及实验操作中的注意事项。

四、教具与学具准备1. 教具：PPT课件、实验操作视频、HIV检测实验试剂和仪器。

五、教学过程1. 导入：通过展示HIV病毒感染数据，引出HIV检测的重要性。

2. 理论讲解：（1）HIV病毒基本知识。

（2）HIV检测技术分类、原理及其优缺点。

3. 实践操作：（1）观看实验操作视频。

（2）学生分组讨论实验操作步骤及注意事项。

（3）学生进行HIV检测实验。

4. 例题讲解：讲解一道关于HIV检测方法选择的例题，引导学生运用所学知识解决实际问题。

5. 随堂练习：针对本节课所学内容，设计练习题，巩固学生对HIV检测技术的理解。

六、板书设计1. 板书HIV检测技术2. 板书内容：（1）HIV病毒基本知识（2）HIV检测技术分类、原理、优缺点（3）实验操作步骤及注意事项七、作业设计1. 作业题目：（1）简述HIV病毒的基本知识。

（2）列举并比较三种不同的HIV检测方法。

（3）根据实际需求，选择合适的HIV检测方法。

2. 答案：（1）HIV病毒的基本知识包括病毒结构、感染途径、病毒生命周期等。

（2）常见的HIV检测方法有：ELISA、Western blot、PCR等。

各种方法的具体优缺点见教材。

（3）根据实际需求，如检测目的、样本类型、检测灵敏度等，选择合适的HIV检测方法。

HIV检测技术课件PPT

YOYO
YOYO
1981.6
美国发现首例病史
1982
1985
正式将此病命名为艾滋病
我国发现首例艾滋病
1985-至今
我国已有病例过万人
YOYO
关于艾滋你知道多少
你知道艾滋病通过什么途径传染的吗？
YOYO
恐惧绝望
YOYO
用我们的爱心关注
艾滋病患者正确对待艾滋病
从我们开始
YOYO
对抗AIDS 我们需要你
药物预防+剖腹产+人工喂养——降至2%。
YOYO
为共同创造一个有利于艾滋病预防控制的社会氛围而努力
YOYO
对抗AIDS 我们需要你谢谢观看
自觉地对学生进行思想教育。
如何通过历史教学对学生进行历史唯物主义教育如
何突破高中学生数学思维的障碍-数学论文-
所谓高中学生数学思维,是指学生在对高中数学感性认识的基础
YOYO
上,运用比较、分析、综合、归纳、演绎等思维的基本方法,理解并掌握高中数学内容而且能对具体的数学问题进行推论与判断,从而获得对高中数学知识本质和规律的认识能力。然而,在学习高中数学过程中,我们经常听到学生反映上课听老师讲课,听得很“明白”,但到自己解题时,总感到困难重重,无从入手;有时,在课堂上待我们把某一问题分析完时,常常看到学生拍脑袋:“唉,我怎么会想不到这样做呢?” 事实上,有不少问题的解答,同学发生困难,并不是因为这些问题的解答太难以致学生无法解决,而是其思维形式或结果与具体问题的解决存在着
表示在临床症状方面，由于免疫缺陷导致的各个系统的机会性感染、肿瘤而出现的复杂症状群。
AIDS
什么是AIDS？
YOYO 1

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精选课件ppt
8
酶联免疫试验 ( ELISA )
➢ 最早用于检测血清中HIV抗体的有效筛检方法
➢ 很高的敏感性和特异性
➢ 根据检测方法，可分成4类间接法、双抗原夹心法、竞争法和捕获法
➢ HIV抗体检测试剂根据其抗原的来源和检测方式可分为四代
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9
筛查试验
筛查试剂
经国家食品药品监督管理局注册批准在试剂有效期内酶联免疫试剂应批批检合格临床质量评估敏感性和特异性高
HIV检测技术
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1
艾滋病实验诊断技术
HIV抗体测定
抗原测定
核酸测定
病毒分离
CD4淋巴细胞计数
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2
HIV感染以后的血清学动态
急性期 HIV RNA
Anti-Ag
潜伏期 Anti-Ab
艾滋病期
Anti-gp41/120 (anti-gp36)
Anti-P24 浓度
4
以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。
以监测为目的的检测是为了解不同人群 HIV感染率及其变化趋势，包括各类高危人群、重点人群和一般人群。
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5
初筛实验室设备条件
独立实验室用房，建筑设备和仪器
要符合要求II级生物安全实验室
酶标仪，洗板机，精确移夜管，专用冰箱，离心机，水浴箱，温箱等
16
筛查样品
HIV抗体筛查可采用血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液样品。
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17
唾液检测试剂
➢ 在硝酸纤维膜上包被人工合成的 HIVgp41/gp36蛋白抗原，可以同时检测HIV－1/HIV－2抗体，原理为酶免间接法。
➢ ELISA、免疫印迹法（WB）已经美国 FDA批准
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➢ 优点：重组抗原可消除HLA（人类白细胞抗原）所致的抗体假阳性，生产成本低，不使用HIV病毒颗粒，较为安全，敏感性特异性较高
➢ 缺点：仍有一定的假阳性
➢ 1990年，FDA批准第一个重组抗原筛
选试剂
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12
第三代ELISA试剂
➢ 包被抗原：重组抗原加合成多肽
➢ 合成多肽抗原是抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高
➢ 窗口期：3星期左右
➢ 优点：可检测所有不同种类的抗体，增加了试剂的敏感性和特异性
➢ 1994年发展了双抗原夹心法，酶标物由抗人 IgG改变为特异性HIV抗原
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13
第四代ELISA试剂
➢ 包被物：重组或多肽抗原+重组抗体 ➢ 窗口期：2星期左右 ➢ 优点：同时检测HIV抗原抗体，缩短窗
15
Closing the window
HIV antigen
IgM ab
4th gen 3rd gen
IgG ab 1st-2nd gen
Detection limit
<= window =>
=>
=>
第一/二代试剂检测IgG抗体，第三代试剂检测IgG 、IgM抗体,
第四代试剂同时检测IgG、 IgM抗精体选课和件ppPt 24抗原使窗口期缩短。
消毒和污染处理设施
安全防护设施
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6
艾滋病检测方法的意义
HIV抗体筛查检测
HIV/AIDS的筛查，但初筛阳性结果不能做为艾滋病诊断依据，需将该标本送确证实验室进行确证。
HIV抗体确认检测（免疫印迹试验）
--- HIV/AIDS诊断的唯一依据 ---艾滋病确认实验室负责
HIV核酸检测
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10
第一代ELISA试剂
➢ 包被抗原：全病毒裂解抗原 ➢ 窗口期：6-8星期 ➢ 优点：灵敏度高，可检出各种抗体 ➢ 缺点：制备麻烦，成本高，假阳性
➢ 1985年，FDA批准第一个HIV抗体试剂
➢ 包被抗原：重组抗原、合成多肽
➢ 窗口期：4-5星期
21
酶联酶联免疫吸附－－ELISA方法
口期 ➢ 注意：抗原检测敏感性低于单独抗原试
剂 (50~70pg/ml,5~10pg/ml)
➢ 1998年第四代试精剂选课件首ppt 次上市
14
HIV抗体试剂盒进展
代次
抗原
1
全病毒
2
重组或多肽
3
重组+多肽
4
抗原+抗体
方法间接间接夹心
夹心
检测时间 > 2个月 3-4 周 2-3 周
2周左右
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• 指导治疗方案及疗效测定。
• 预测疾病进程。
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7
抗体检测
➢ 根据检测HIV感染后产生的HIV抗体的间接指标而发展起来的血清学诊断技术，分为初筛试验和确认
试验。
➢ 初筛试验用于对检测对象感染情况的初步筛查，检测结果可能
会有假阳性，不能发抗体阳性报告
➢ 确认试验确定检测对象是否有HIV抗体，可发抗体阳性报告
感染 1周 2周 3周 4周………………….1年 2年 3年…………….10年………..
窗口期
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3
HIV抗体检测的目的和要点
HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。
以诊断为目的的检测是为了确定个体 HIV感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、根据特殊需要进行的体检等。
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18
➢ 优点:
1. 样品稳定,各种温度下稳定性大于三周
2. 敏感性和特异性与标准的血清学实验相当
➢ 缺点:
1. 预处理复杂，重复性较差
2. 会出现不同于血清抗体的种类和滴度
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19
尿液检测试剂
➢ 适用对象：静脉吸毒人群，其他高危人群的大面积流调、监测
➢ 优点： 1. 采集、处理费用低，较血液标本安全 2. HIV抗体在尿中十分稳定，尿液中IgG与
血液相当 ➢ 缺点：
1. 检测时间长 2. 精确性低于血、唾液，阳性者需作血清学检测
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20
筛查方法
酶联免疫吸附试验（ELISA）化学发光或免疫荧光试验快速检测（RT）
明胶颗粒凝集试验（PA）免疫渗滤试验：斑点ELISA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验免疫层析试验
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• 辅助诊断：在特殊情况下，如出现某些非典型的抗体反应，特别是不确定反应时，RNA的测定可提供有用的证据。
• 感染早期：在HIV感染的窗口期，无法使用抗体检测进行诊断，此时 RNA的测定具有特殊的意义，提示是否有感染的可能，但仍需追踪检测HIV抗体，最终根据抗体的检测情况做出诊断。
• 病程监控：帮助确定疾病发展的阶段。