石蜡切片免疫组化EnVision二步法染色步骤

石蜡切片免疫组化EnVision二步法染色步骤

1、二甲苯脱蜡10min×2次；

2、梯度酒精洗（100%、90%、80%、70%）各1min；

3、蒸馏水洗片刻；

4、3%H2O2去除内源性酶，室温10min；

5、蒸馏水3min×2次；

6、食管癌（CK）、乳腺癌（Ki-67）、切片微波抗原修复或高压抗原修复（现场操作）；

7、蒸馏水洗3min×2次；

8、PBS洗3min×2次；

9、加鼠抗人CK孵育放于湿盒中，4°Ｃ过夜；

加鼠抗人Ki-67 孵育放于湿盒中，4°Ｃ过夜；

10、PBS洗3min×2次；

11、（CK、Ki-67）：加HR-PantiMouse/Rabbit孵育30min 37°Ｃ；

12、PBS洗3min×2次；

13、DAB显色（棕褐色），镜下控制；

14、自来水冲洗5min；

15、苏木素复染，水洗；梯度酒精（70%、80%、90%、100%）脱水；

16、切片风干后中性树胶封片。