第13章 精斑斑检验
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精斑预实验
精斑预实验
精斑预实验主要应用于刑侦法医上对精斑进行初步筛选，结果为阳性则说明可能含有精斑，不能确定含有精斑。
精斑预实验（也称精斑的初选）
1．紫外线检查
精斑在紫外线灯照射下呈银白色荧光，周围较深，带紫蓝色边缘。经水洗涤残留于布质纤维中的精斑，在紫外线灯照射下下仍可见点状荧光，借此可以发现精斑所在的部位。人体其他分泌物的斑痕，如汗液斑、尿斑、阴道分泌物、乳汁、鼻涕等，以及肥皂、浆糊斑、某些药物、化学纤维制品，在LP-365D紫外线灯照射下也可显现与精斑相类似的荧光。因此，在紫外线下出现银白色荧光，不是精斑的特异性反应，不能作为确定精斑的根据。
2．碘化碘钾结晶试验
精斑中卵磷脂逐渐析出胆碱，胆碱遇碘则形成过碘胆碱结晶。剪取可疑斑痕少许，置于玻片上，加试剂（碘化钾1．65克、碘2．54克、加水30毫升）1—2滴加盖玻片镜检，初见褐色颗粒，逐渐演变成针状结晶，然后则为褐色菱形结晶，结晶不稳定，于生成后1—3小时可消失。此结晶并非精斑特异性反应，凡含有胆碱的物质（阴道粘液、子宫分泌物、脓液、鼻涕、唾液以及肝、肾等脏器）也可形成结晶。因此，检见结晶只能推断是精斑的可能，而不能确定就是精斑。
精斑预实验的主要作用是对精斑进行初选，节省精斑试纸的使用，现在的精斑试纸价格大幅降低，已经无需再进行精斑的预实验。
精斑确证实验后最终再进行精斑的DNA鉴定，对比嫌疑人的样本，确定精斑所属个体。
这种方法具有简便、灵敏、迅速和不破坏检材的完整性等优点。但特异性较差，酸性磷酸酶除存在于前列腺外，还广泛分布在人体血液、阴道分泌物、唾液、尿液以及胰、脾等脏器内。利用精液所含酸性磷酸酶浓度显著高于其他体液的特点，还可作精液检验的确证试验，使用仪器设备，分离提纯酸性磷酸酶，绘制反应曲线，如果酸性磷酸酶浓度大于300单位／毫升，可推定为精斑，大于500单位／毫升，可靠性更大。因为女性在服用某些药物或者处于生理期，酸性磷酸酶含量会飙升，这些情况不能通过酸性磷酸酶进行含量确证。也需要特殊仪器设备，可靠性只是相对的。还有一点值得注意，就是很多药物和染料含有萘酚类基团，也会和精斑反应完全一样。
精斑预实验主要应用于刑侦法医上对精斑进行初步筛选，结果为阳性则说明可能含有精斑，不能确定含有精斑。
精斑预实验（也称精斑的初选）
1．紫外线检查
精斑在紫外线灯照射下呈银白色荧光，周围较深，带紫蓝色边缘。经水洗涤残留于布质纤维中的精斑，在紫外线灯照射下下仍可见点状荧光，借此可以发现精斑所在的部位。人体其他分泌物的斑痕，如汗液斑、尿斑、阴道分泌物、乳汁、鼻涕等，以及肥皂、浆糊斑、某些药物、化学纤维制品，在LP-365D紫外线灯照射下也可显现与精斑相类似的荧光。因此，在紫外线下出现银白色荧光，不是精斑的特异性反应，不能作为确定精斑的根据。
2．碘化碘钾结晶试验
精斑中卵磷脂逐渐析出胆碱，胆碱遇碘则形成过碘胆碱结晶。剪取可疑斑痕少许，置于玻片上，加试剂（碘化钾1．65克、碘2．54克、加水30毫升）1—2滴加盖玻片镜检，初见褐色颗粒，逐渐演变成针状结晶，然后则为褐色菱形结晶，结晶不稳定，于生成后1—3小时可消失。此结晶并非精斑特异性反应，凡含有胆碱的物质（阴道粘液、子宫分泌物、脓液、鼻涕、唾液以及肝、肾等脏器）也可形成结晶。因此，检见结晶只能推断是精斑的可能，而不能确定就是精斑。
精斑预实验的主要作用是对精斑进行初选，节省精斑试纸的使用，现在的精斑试纸价格大幅降低，已经无需再进行精斑的预实验。
精斑确证实验后最终再进行精斑的DNA鉴定，对比嫌疑人的样本，确定精斑所属个体。
这种方法具有简便、灵敏、迅速和不破坏检材的完整性等优点。但特异性较差，酸性磷酸酶除存在于前列腺外，还广泛分布在人体血液、阴道分泌物、唾液、尿液以及胰、脾等脏器内。利用精液所含酸性磷酸酶浓度显著高于其他体液的特点，还可作精液检验的确证试验，使用仪器设备，分离提纯酸性磷酸酶，绘制反应曲线，如果酸性磷酸酶浓度大于300单位／毫升，可推定为精斑，大于500单位／毫升，可靠性更大。因为女性在服用某些药物或者处于生理期，酸性磷酸酶含量会飙升，这些情况不能通过酸性磷酸酶进行含量确证。也需要特殊仪器设备，可靠性只是相对的。还有一点值得注意，就是很多药物和染料含有萘酚类基团，也会和精斑反应完全一样。
生物性检材的个人识别
其原始状态，切勿破坏原有生物性检材或添加无关痕迹或物品。
• 提取生物性检材的方法根据物品种类而异。
可参照《中华人民共和国公共安全行业标准——法医学物证检材的提 取、保存与送检》 GA/T 169—1997。
第13页，本讲稿共130页
检材的发现、采集、包装和送检 —检材的包装和送检
• 尽快送检； • 不能用福尔马林固定；
精斑
指示
精斑浸出液稀释倍数
编号 抗血清 红细胞 2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024 判型
种属鉴定—分子生物学方法
• PCR体系：50μl
20ng DNA
10×PCR缓冲液5μl
0.2μmol/ml引物
200μmol/L dNTP
1.5mmol/L MgCl2
0.45%Triton-100 1U Taq酶
PCR循环参数：
94℃变性5min
94℃ 30s
55℃ 30s
循环30次
PCR产物大小（bp）
X = 106
Y = 112
男性：Amel-X、Amel-Y
女性：Amel-X
问题：
用PCR仅仅分析Y或X一种染色体作血痕性别鉴定是危险的。因为缺乏内对照 ，扩增失败时可能会误将男性判为女性，或误将女性判为男性。如：男性 不育者常见Y-染色体微缺失，导致Amel-Y片段丢失。
第35页，本讲稿共130页
第38页，本讲稿共130页
精斑检验的一般过程
肉眼检查
确定精斑部位：
紫外灯下呈
银白色荧光
预实验
提示斑痕可能 是精斑：
酸性磷酸酶---
磷酸苯二钠试验
确证实验
确证精斑：
精子检出；
• 提取生物性检材的方法根据物品种类而异。
可参照《中华人民共和国公共安全行业标准——法医学物证检材的提 取、保存与送检》 GA/T 169—1997。
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检材的发现、采集、包装和送检 —检材的包装和送检
• 尽快送检； • 不能用福尔马林固定；
精斑
指示
精斑浸出液稀释倍数
编号 抗血清 红细胞 2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024 判型
种属鉴定—分子生物学方法
• PCR体系：50μl
20ng DNA
10×PCR缓冲液5μl
0.2μmol/ml引物
200μmol/L dNTP
1.5mmol/L MgCl2
0.45%Triton-100 1U Taq酶
PCR循环参数：
94℃变性5min
94℃ 30s
55℃ 30s
循环30次
PCR产物大小（bp）
X = 106
Y = 112
男性：Amel-X、Amel-Y
女性：Amel-X
问题：
用PCR仅仅分析Y或X一种染色体作血痕性别鉴定是危险的。因为缺乏内对照 ，扩增失败时可能会误将男性判为女性，或误将女性判为男性。如：男性 不育者常见Y-染色体微缺失，导致Amel-Y片段丢失。
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精斑检验的一般过程
肉眼检查
确定精斑部位：
紫外灯下呈
银白色荧光
预实验
提示斑痕可能 是精斑：
酸性磷酸酶---
磷酸苯二钠试验
确证实验
确证精斑：
精子检出；
法医物证教材唾液斑精班检验
时间ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ素
唾液斑的检验结果会随着时间 的推移而发生变化，因此采集 后应尽快进行检验。
其他因素
如采集者的操作方式、采集环 境等也可能对唾液斑检验造成 影响。
03
唾液斑的检测技术
化学检测法
联苯胺检测法
通过观察唾液中过氧化酶催化联苯胺氧化反应产生的颜色变化，判断是否存在 唾液斑。
酸性磷酸酶检测法
利用唾液中酸性磷酸酶催化对硝基苯磷酸酯生成有色产物，进行唾液斑的检测。
提高检验的准确性与可靠性
标准化操作流程
制定和完善唾液斑检验的标准化操作流 程，确保检验结果的可靠性和可重复性 。
VS
质量控制
加强实验室内部和外部的质量控制，定期 进行比对和校准，确保检验数据的准确性 和一致性。
拓展唾液斑检验的应用领域
疾病预测与预防
利用唾液斑检验的结果，预测个体患某种疾 病的风险，并为其提供针对性的预防措施和 建议。
唾液斑的特性
唾液斑通常呈淡黄色或白色，具有一定的黏稠度，容易干燥形成 薄膜。唾液斑的成分和性质受个体差异、饮食习惯、口腔卫生状 况等因素影响。
唾液斑在法医学中的应用
个体识别
由于唾液斑中含有个体的特异性成分，如DNA、蛋 白质等，可以通过检测这些成分进行个体识别，用 于身份确认和亲缘关系鉴定等。
毒品检测
免疫学检测法
抗人血红蛋白检测
利用抗原-抗体反应原理，通过检测唾液中是否存在人血红蛋 白，判断是否存在唾液斑。
抗精子抗体检测
通过检测唾液中是否存在抗精子抗体，判断是否存在精斑。
DNA检测法
STR分型检测
利用唾液中含有的口腔上皮细胞DNA进行STR分型检测，用于个体识别和亲子鉴 定。
精斑定性检验52例回顾分析
作者： 吕桂平
作者机构： 山东省公安厅刑警总队 济南250001
出版物刊名： 刑事技术
页码： 24-24页
主题词： 定性检验 回顾分析 沉淀环 精斑 抗人精血清 检验方法 涂片镜检 美蓝染色 Dot-ELISA 干扰因素
摘要： 在性犯8罪物证检验中,确认精斑存在与否是非常关键的.检验精斑的方法很多,如P30检验、抗人精血消沉淀环及琼脂糖扩散试验等,其特点各异.最近笔者以Dot-ELISA进行P30检验、抗人精血清沉淀环试验及沉渣涂片镜检精子3种不同的方法对52例性犯罪案件进行了检验并做了统计分析,报告如下1 检验方法(1)P30检验,以DO-ELIA直接法进行(HRP-P30购于公安部第二研究所)(2)沉淀环试验,所用抗人精血清效价为1:2000,分别购于公安部第二研究所及淮北市公安局(3)精子检验,沉渣涂片,用美蓝染色后直接镜检,一般可用化人精血清沉淀环试验后的沉渣涂片,不必干燥。
精斑鉴定试纸如何检测精斑
精斑鉴定试纸如何检测精斑【操作步骤】1、检材筛选精液是睾丸生成精子和精囊、前列腺和尿道球腺分泌液的混合物，具有特殊的气味，因附着物不同形态也不同。
精斑为精液干燥之后形成的。
精液一般遗留在阴道或避孕套内，受害人的直肠至肛门内，或口腔内。
精斑一般遗留在内裤衣物上、床单被罩等处，或案发现场的地面上或纸巾、避孕套等其他物体表面。
短时期内的精斑或精液有特殊气味，精斑手摸有硬物感。
1.检材处理2.1 处理方式一：剪取适量怀疑含有人精斑的检材或适量怀疑是人精液的检材；（适合可以破坏检材检验）处理方式二：在怀疑含有人精斑或精液的区域滴加适量精斑裂解液，将可疑精斑成分溶解出来，再使用干净的棉签、吸水纸或纸巾吸取，（裂解液一般滴加3-6滴，具体根据检材的大小和吸水程度增减）（适合不可以破坏检材检验）2.2 处理方式一：将剪取的检材或吸附可疑精斑成分的棉签、吸水纸或纸巾放入加液杯中（可用一次性塑料杯等容器代替），滴加裂解液5滴左右，再加入20ml-30ml纯净水或蒸馏水。
用玻璃棒或一次性滴管等搅拌震荡十分钟以上。
（适合案发现场检材保存较好或检材较多）处理方式二：去适量检材放入 1.5ml-2ml离心管中，加入适量纯水。
用泪囊穿刺针搅动检材，加速检材的溶解；或置于振荡器上振荡，浸泡约30分钟。
将此离心管置于高速离心机上，1300转/分钟离心5分钟。
离心后将上清液移入另一1.5ml-2ml离心管中。
（适合案发现场检材保存不好或检材较少）注：如果直接从阴道内用棉签提取可能含有精液成分或提取到液体状态的精液，可直接加纯水震荡，检测。
受害者大腿内侧等身体部位的可疑精斑或精液应妥善提取。
3、检测3.1 打开精斑鉴定试纸盒，取出精斑试纸条，将试纸条上带有MAX粗线标记一端插入检材浸泡液中并计时，或将适量检材浸泡液滴加到试纸条加样区。
或用性吸管吸取或棉签沾适量含有可疑斑痕的溶液，滴在试纸条加样区。
3.2约5分钟后取出试纸条，平放，5-10分钟观察结果。
成功检出22年前精斑DNA一例
180生物技术世界 BIOTECHWORLD1 简要案情1992年8月某日,尚某趁本村村民尚某某夫妇不在家中之际,窜至其家中,将其八岁的女儿强奸,此案在当地造成了恶劣的社会影响。
案发后,犯罪嫌疑人尚某外逃,直至2014年4月被办案单位抓获归案。
办案单位因案件审理需要,要求对22年前被害人所穿内裤上可疑斑迹进行DNA检验。
2 检验过程DNA技术人员检视被害人所穿内裤,仅在内裤臀部位置上发现一处直径约0.5cm的圆形可疑斑迹。
性侵案件中,经常需对被害人的内裤及阴道拭子进行精斑确证检验。
抗人精检测试剂条(PSA)是一步法检测精斑的快速、简便、定性的免疫图谱分析法。
该案中内裤上可疑斑迹经PSA试剂条检验呈阴性,将可疑斑迹涂片镜检,发现有与精细胞特征较相似但不典型的细胞,且几乎没有发现女性上皮细胞。
采用Chelex+PK+DTT法提取模板DNA,然后取上清液使用纯化试剂盒进行纯化。
纯化后的DNA模板分别用Identifiler Plus及miniflier试剂盒进行扩增,3130XL基因分析仪电泳,使用GeneMapperID V3.2软件分析,得到完整分型,该结果经比对与嫌疑人尚某一致。
3 讨论强奸案是法医DNA检验工作中经常遇到的刑事案件,精斑是强奸案件中常见的生物检材,通过检出精斑DNA从而认定犯罪嫌疑人已经成为侦破该类案件的最直接、最高效的手段。
在各类现场检材中,由于所处环境的温度、湿度、光、化学及生物等因素的作用,DNA会发生降解,或者掺入PCR抑制剂,存放时间越久,降解越严重。
本文案例中检材保存长达22年,对于此类检材的提取、扩增方法的选择十分关键。
本案中内裤上仅在臀部位置发现一处可疑斑迹,PSA试剂条检验阴性,可能是因为检材存放时间过长,前列腺上皮细胞中的糖蛋白已降解,出现了阴性的结果。
可疑斑迹涂片镜检观察到一些与精细胞类似的细胞,可能是因为检材存放时间过长,细胞的形态出现了一些的变型,不具有典型精细胞的特征。
第二章精液斑检验(Seminal stain inspection)
第二章精液斑检验(Chapter 2 Seminal stain inspection)第一节精液斑检验概述精液斑(seminal stain) 是法医常见物证检材，在强奸、猥亵等案件中往往涉及精液斑检验。
(Semen spots is a common forensic evidence samples , in cases of rape , indecent assault and other cases often involve semen spot test.)一、精液与精液斑的特点 (The characteristics of semen and seminal stain) (一)精液的特点 (The characteristics of semen)精液主要由精子(spermatozoa)及精浆(seminal plasma)组成，是一种含蛋白质、各种酶及果糖等多种成分的碱性乳白色胶状液体。
(Seminal mainly consist of spermatozoa and seminal plasma, a alkalinity contain protein, a variety of enzymes and fructose milky colloidal liquid.)除精子外，还有睾丸细胞、白细胞、脱落柱状上皮细胞、前列腺卵磷脂小体、玻璃小体、各种形状的精胺结晶、色素颗粒、脂肪球等。
正常精液白细胞数每高倍镜视野少于5个。
精浆是由男性各附属性腺分泌物所组成，其中精囊液约占 50%～80%、前列腺液占15%～30%、尿道球腺液、尿道旁腺液约占 5%。
精囊液呈碱性，含有两种主要成分：果糖和凝固酶。
前列腺液呈透明的酸性液体，含有高浓度的酸性磷酸酶、纤溶酶和中性蛋白酶。
(Prostate fluid is transparent acid liquid, contains high concentrations of acid phosphatase.)尿道球腺和旁腺液是一种呈浅灰白色的液体。
医药临床护理精液斑检验ppt课件
同学们
来学校和回家的路上要注意安全
同学们
来学校和回家的路上要注意安全
方法：酶联免疫吸附实验，胶体金法
3 生化学检验
乳酸脱氢酶-X：位于LDH3和4 之间，由精子 产生
亮氨酸氨肽酶：存在于精浆，滴加试剂呈粉 红色
五、精斑的个人识别 1 精斑的ABO血型检测 中和试验：原理 精斑中的水溶性ABH血型物质， 能特异地与相应的抗体结合，使抗体与指示红细胞 的凝集能力减低或消失。
化学组成
蛋白质 精浆蛋白浓度约为35~55mg/ml，
略低于血清蛋白的平均浓度（72mg/ml）
血清共同蛋白 Tf、PI、ORM、GC
精液特有蛋白
1966 γ— 精浆 蛋 白（γ—Sm ） 1967 β— 精浆 蛋 白（β—Sm ）
α2—精浆糖蛋白（α2—SGP） 1978 β— 微精浆蛋白（β—MSP） 1978 前列腺特异蛋白（P30）
蛋白酶
水解酶的含量最丰富 某些酶活性水平很高： 酸性磷酸酶等酶活性较其他组织酶活性高50~100 某些酶活性保持较久： 肌酸磷酸激酶(CPK)酸性磷酸酶(ACP)一年以上
二、精斑的肉眼检验
目 的：发现可疑精斑、确定所在位置及分布，以便准确取材， 提高阳性检出绿。
记 录：精斑的分布情况、数目、位置、形状、大小、颜色及光 泽等
适用范围：即使精液中没有精子，由于精液中含有少 量睾丸细胞、上皮细胞等都可应用。
分析方法：PCR技术----STR、VNTR
特殊应用：可以利用父系亲属的血样进行排除推测
不受女性成分的干扰，并可推测犯罪嫌疑 人的数目
结果评估：用于排除同一性，没有认定同一性的作用。
统计分析：Y染色体上的各基因座在遗传时是连锁的， 以单倍型遗传，不可独立计算。
精斑鉴定
竭诚为您提供优质文档/双击可除精斑鉴定篇一：犯罪现场公安法医如何用冰鉴精斑鉴定卡确定嫌犯犯罪现场公安法医如何用冰鉴精斑鉴定卡确定嫌犯最近热播的网剧法医秦明让不少花痴舔屏，其中有很多逼真的道具和现场还原让我们更加喜爱，今天为大家直接犯罪现场如果通过相关检测工具来确定嫌疑人。
精斑确认法1原理分析：在精斑检验中的应用：长期以来，用于公安办理强奸案件中，提取犯罪嫌疑人家中的精斑不能作为法律上的依据。
因现在人们物质生活水平的提高，精斑的检测不仅仅用于办案，还用于伴侣之间的外遇测试，以及精斑DnA 检测。
2提取样品：在现场我们需要对受害人进行相关的物证提取，尤其是衣物物品及被侵犯部位进行相关样品提取3检测样品：对提取的样品做溶解处理，这里我们要用到溶解剂。
让样品和被检测物品中的成分可以很好的溶于水种4判断结果及确定罪犯：用吸管吸取本分溶液滴在鉴定卡上根据结果来判断是否有精斑成分从而来确定嫌疑人是否有侵犯enD指纹确认法1碘蒸气法：用碘蒸气熏,由于碘能溶解在指纹印上的油脂之中,而能显示指纹.这种方法能检测出数月之前的指纹.2硝酸银溶液法：向指纹印上喷硝酸银溶液,指纹印上的氯化钠就会转化成氯化银不溶物.经过曰光照射,氯化银分解出银细粒,就会象照相馆片那样显示棕黑色的指纹,这是刑侦中常用方法.这种方法可检测出更长时间之前的指纹.3有机显色法：因指纹印中含有多种氨基酸成份,因此采用一种叫二氢茆三酮的试剂,利用它跟氨基酸反应产生紫色物质,就能检测出指纹.这种方法可检出一、二年前的指纹.篇二：人血斑、人精斑确证试验及sTR检验记录表1人血斑人精斑确证试验及sTR检验记录案件编号：检验鉴定人:、（签名）表1人血斑/人精斑确证试验及sTR检验记录填表说明1、人血斑、人精斑确证试验（hbpsA）检验结果栏内以“＋”或“－”表示检验结果阳性或阴性；2、DnA提取方法（chelex100法两步法磁珠法其它方法）栏内以“√”等表示所采用的DnA提取方法；3、确证及DnA提取时间指人血斑、人精斑确证试验及DnA提取的起始时间。
第十五章 精斑检验
第十五章 精液斑检验
NSMC XDD
1
精液（斑）检验是法医学鉴定实践中的一项重 要内容，与血痕检验占有同等重要地位，特别是 对有关性犯罪或有性犯罪嫌疑的案件，以及对死 亡性质不明的女尸检查，精液（斑）的检验尤为 重要。 精液（斑）的法医学鉴定，可为判断案件性质、 划定侦查范围、认定或排除犯罪嫌疑人提供重要 线索。在亲子鉴定或其它有关性功能鉴定中，有 时需对新鲜精液进行检验。
7
凝固酶（精囊腺）5min内凝固成较冻状 中性蛋白酶及纤溶酶（前列腺）20-30min内液化成稀薄 半流动体
精子产生过程
8
精斑检验的目的：
为案件侦查和审理提供线索和证据。
需解决的问题：
斑痕是否为精斑？若是精斑，确定精斑的个体来源。
精斑检验程序：
肉眼检验→预试验→确证试验→个人识别
9
第二节 精液斑的肉眼检查
12
尸体 上的 精斑
13
强奸杀人现场遗留纸团
14
紫外辅助检查：
原理： 精斑中的黄素在紫外线下呈银白色荧光，斑痕边缘呈浅紫蓝色 特点：
对检材无污损、无破坏，不影响进一步检验 特异性差（干扰物：阴道液、尿液、唾液、某些色素染料）
作用：仅能为进一步检验提供可疑部位 结果分析：
阳性仅表明可能是精斑，阴性不能轻易否定精斑
液）等也可形成类似结晶。同时，精液斑受到尿 液、血液等污染时，则不出现阳性反应。 结晶试验灵敏度低、特异性差，仅作为指向实验。
28
过碘胆碱 29
30
苦味酸结晶试验
原理：
精素分解产物与苦味酸生成精素苦味酸结晶
（青黄色有折光的十字、柱、星形结晶）
特点： 动物精液一般不出现阳性。
31
NSMC XDD
1
精液（斑）检验是法医学鉴定实践中的一项重 要内容，与血痕检验占有同等重要地位，特别是 对有关性犯罪或有性犯罪嫌疑的案件，以及对死 亡性质不明的女尸检查，精液（斑）的检验尤为 重要。 精液（斑）的法医学鉴定，可为判断案件性质、 划定侦查范围、认定或排除犯罪嫌疑人提供重要 线索。在亲子鉴定或其它有关性功能鉴定中，有 时需对新鲜精液进行检验。
7
凝固酶（精囊腺）5min内凝固成较冻状 中性蛋白酶及纤溶酶（前列腺）20-30min内液化成稀薄 半流动体
精子产生过程
8
精斑检验的目的：
为案件侦查和审理提供线索和证据。
需解决的问题：
斑痕是否为精斑？若是精斑，确定精斑的个体来源。
精斑检验程序：
肉眼检验→预试验→确证试验→个人识别
9
第二节 精液斑的肉眼检查
12
尸体 上的 精斑
13
强奸杀人现场遗留纸团
14
紫外辅助检查：
原理： 精斑中的黄素在紫外线下呈银白色荧光，斑痕边缘呈浅紫蓝色 特点：
对检材无污损、无破坏，不影响进一步检验 特异性差（干扰物：阴道液、尿液、唾液、某些色素染料）
作用：仅能为进一步检验提供可疑部位 结果分析：
阳性仅表明可能是精斑，阴性不能轻易否定精斑
液）等也可形成类似结晶。同时，精液斑受到尿 液、血液等污染时，则不出现阳性反应。 结晶试验灵敏度低、特异性差，仅作为指向实验。
28
过碘胆碱 29
30
苦味酸结晶试验
原理：
精素分解产物与苦味酸生成精素苦味酸结晶
（青黄色有折光的十字、柱、星形结晶）
特点： 动物精液一般不出现阳性。
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2. 精液斑（seminal stain）：简称精斑，精液 浸润或附着于基质上，干燥后形成的斑痕。
特点： 1）附着的部位或基质多样化； 2）阴道擦拭物（阴道拭子）是常见的重要的 精斑检材； 3）精斑没有固定的形态，外观常因附着物不 同而有差异。
2. 精浆组成（seminal plasma）
精浆是由男性各附属性腺分泌物所组成： 精囊液占50%-80% 呈碱性，含有两种主要成分： 果糖和凝固酶。 前列腺液占15％-30％，呈透明的酸性液体含有 高浓度的酸性磷酸酶，纤溶酶和中性水解酶。 尿道球腺液和尿道旁腺液约占5％，呈浅灰色的 液体。
第十三章 精斑检验 (test for seminal stain)
教学要求
掌握精斑的概念、特点；精斑的检验目的和 检验程序；精斑的肉眼观察、预试验（酸性 磷酸酶实验）、确证试验（精子检出法、前 列腺特异抗原P30检测）、个人识别（中和 法测定ABO血型、DNA分型）； 熟悉精斑的血清型检验和酶型检验； 了解精斑检验的其它检测方法。
还有精原细胞、睾丸细胞、白细胞、脱落 柱状上皮细胞； --对于没有检查到精子的精斑，仍可以采用 DNA分型； 前列腺卵磷脂小体、玻璃小体、各种形状 的精胺结晶、色素颗粒、脂肪球、胆碱、 丰富的微量元素等。 --特殊气味、精斑的确证试验等
三、精斑检验的目的与程序
1. 检验目的 1）可疑斑痕是否为精斑？ 2）若为精斑，确定精斑的个人来源。 2. 检验程序 1）肉眼观察; 2）预试验； 3）确证试验； 4）遗传标记的检测，进行个人识别。
苏木素伊红染色法（HE）
复染法 酸性品红亚甲栏染色法
3.注意事项
（1）精斑陈旧，取材部位不准或遇到少精子症者，涂片 上往往 仅见少量精子。但只要找到一个完整的典型精 子，即能确证人精斑。 （2）精斑在浸渍过程中，精子尾部断落，常只检见精子 头部。 应与阴道滴虫，酵母菌等鉴别。 （3）精子的检出期限与性交后精子在女性生殖道内存活 时间，被害人 的体位，活动情况及月经周期有关。 （4）在性犯罪案件调查中，取阴道拭子的时间越早越好。 精子检出率也与阴道拭子提取方法与部位有关。
β-微精蛋白、 β-精浆蛋白等。
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4.酶类
1）酸性磷酸酶－－精斑的预试验 2）乳酸脱氢酶：LDH-X －－精斑的确证试验 3）黄递酶（DIA3)、磷酸葡萄变位酶(PGM)、 γ-谷氨酰转肽酶、乙二醛酶等 －－多态性，用于个人识别 4）凝固酶、中性蛋白酶、纤溶酶等－－精液 在体外的形状
5.其它成分
1.酸性磷酸酶检验（acid phosphatase, ACP）
前列腺液含有大量的酸性磷酸酶，浓度为540～ 4000u/ml，较其他体液、分泌液及脏器的含量高100 倍以 上。 由于ACP来源于前列腺，故无精子的精液ACP试验也 呈阳性结果。 特点： ➢精斑中的ACP相当稳定，对腐败及高热有较强的 抵抗力。 ➢灵敏度高(1/2万倍），特异性不高； 其他组织、分泌液中有ACP；部分蔬菜、水果、某 些避孕药的ACP检测液呈弱阳性反应。
3. 蛋白成分ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
精液含蛋白浓度约为35～55mg/ml，
1）与人血清共有的蛋白成分：如白蛋白、维生素D结 合蛋白等－－具有多态性，用于个人识别；
2）精浆中特有的蛋白成分： 如前列腺特异性抗原 （prostate specific antigen， p30）---精斑的确证实验；
α2-精浆蛋白（α2-seminoglycoprotein,α2-SGP） -测定ABH抗原，个人识别；
显色液
磷酸苯二钠试验方法及结果判定
检材+缓冲液 37℃ ，30min
显色液
深红色
淡黄色
阳性,说明含有酸性 磷酸酶，可能是精斑
阴性,说明检材不是精斑 或精斑酸性磷酸酶被破坏
2）α-磷酸萘酚-固蓝B方法检测ACP
α-磷酸萘酚
ACP
α-萘酚
重氮试剂固蓝
红色偶氮化合物
2. 其他方法
•碘化碘甲结晶实验
胆碱+碘 或菱形结晶）
阴道拭子检测精子影响因素
（1）取的时间越早越好 活体：检出期限一般 1.5～2 天。24h后：阳 性率下降 50%，48h 阳性率仅 10%。 尸体：仰卧位，则检出期限较长，可达3周。 冰冻尸体：检出期限最长2个半月（宫颈涂片 偶能检出精子）。 （2）方法与部位有关 例如宫颈刮片和阴道后穹窿部擦拭物精子的检 出率较高。
碘胆碱结晶（褐红色针状
•苦味酸结晶实验 精素+苦味酸
精素苦味酸结晶
•锌的检出 • 精液中锌的含量最高
第四节
精斑的确证实验
目的：检验精液中特有的成分，阳性结果可 以确证精斑。
方法： 一、形态学检查 ：精子的检出 二、免疫学检验 三、生化检验
一、精子的检出—染色法
1. 方法：检材处理和染色
1）检材处理
1.酸性磷酸酶检验（Acp） 1）磷酸苯二钠试验（King-King试法） •原理 Acp 磷酸苯二钠 萘酚 + 氨基安替比林 •结果 铁氢化钾 红色醌类(阳性）
试剂
缓冲液 枸橼酸 1.4g 1N氢氧化钠 12.5ml 磷酸苯二钠 0.2g 4-甲基安替比林 0.6g 加蒸馏水至 100ml 1N氢氧化钠 碳酸氢钠 铁氰化钾 加蒸溜水至 17.7ml 1.4g 3.6g 100ml
第四节
精斑的确证实验
二、免疫学方法
1. 抗人精血清沉淀反应 2. 前列腺特异性抗原P30检测（抗P30血 清沉淀试验）
1.抗人精血清沉淀反应
3）结果判定： 阳性：是人精斑； 阴性：不是人精斑或者精斑已 破坏。 4）特点与优点 灵敏度高，特异性高； 既可以精斑的确证，亦可用于种属鉴定； 还用于确证输精管结扎术者和精子缺乏症患者。 5）注意事项 设立阳性和阴性对照
检材1.5cm×1.5cm，剪碎，置试管内，加 0.5ml NS浸渍，室温2h后4℃过夜； 陈旧检材：5～10％ 的氨液浸渍 全部浸液置另一试管内，2 500 rpm离心 5min； 上清液－－确证实验和中和试验； 沉渣－－涂片，染色，镜检精子。
2）染色方法
藻红染色法 单染法 亚甲基兰染色法
2.前列腺特异性抗原P30检测