2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

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第六节土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(二)

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（二）

主讲：黄冈中学优秀生物教师王小敏

一、研究思路

（一）筛选菌株；

（二）统计菌落数目；

（三）设置对照。

二、实验的具体操作

（一）土壤取样

从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。

取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。

（二）制备培养基

制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。

（三）样品的稀释

1、应在火焰旁称取土壤10g。

2、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。

3、分离不同的微生物采用不同的稀释度。

原因：土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。

所以，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。

（四）取样涂布

实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。

如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。

（五）微生物的培养与观察 ◆培养不同微生物往往需要不同培养温度。

细菌：30～37℃培养1～2d

放线菌：25～28℃培养5～7d

霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。

◆在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。

◆选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。

微生物的培养与观察

三、结果分析与评价

1、结合对照实验，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。

若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数试题(二)

土壤中分解尿素细菌的分离与计数试题（二）

1.在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或者阻止其他种类微生物生长的培养基称做( )

A.鉴别培养基 B.加富培养基

C.选择培养基 D.基础培养基

答案 C

解析选择培养基可选择目标微生物，同时抑制或杀死其他微生物。

2.可以分离并鉴定出分解尿素的细菌的方法是( )

A.以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂

B.以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂

C.以尿素为唯一氮源的培养基中加入刚果红试剂

D.以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂

答案 A

解析尿素在尿素分解菌的作用下分解产生氨和CO2，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，酚红指示剂变红。

3.尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制选择培养基时( )

A.葡萄糖在培养基中越多越好

B.尿素分解菌有固氮能力，故培养基中只需无机氮

C.尿素在培养基中越少越好

D.尿素分解菌无固氮能力，故培养基中的尿素为化合态氮

答案 D

解析尿素既可以作为尿素分解菌的氮源，也可以作为其碳源，葡萄糖在培养基中并不是越多越好，葡萄糖过多会使培养基的渗透压过高，不利于尿素分解菌的生长繁殖，A错误；尿素分解菌没有固氮能力，故培养基中需要添加尿素作为氮源，B错误；添加尿素的目的是筛选尿素分解菌，其他微生物不能很好地生活在该培养基上，尿素在培养基中不是越少越好，过少就失去选择作用，过多又会使细胞失水死亡，C错误；尿素分解菌无固氮能力，故培养基中的尿素为化合态氮，D正确。

4.产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是( )

A一个细菌、液体培养基 B.许多细菌、液体培养基

C.一个细菌、固体培养基 D.许多细菌、固体培养基

答案 C

解析菌落是一个细菌的子细胞群体，在固体培养基上形成，有一定的形态结构，肉眼可见(液体培养基中肉眼不可见)，菌落可作为菌种鉴别的重要依据，而多种细菌形成的菌落，就不可能有比较标准的形态。 5.下列关于土壤取样的叙述，错误的是( )

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学设计

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、教材分析

“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”是选修1专题2《微生物的培养与应用》中的第2个课题，主要介绍了微生物培养过程中如何筛选菌株、统计菌落数目、设置对照、培养与观察并初步鉴定，既是课题1中所学基本技术在实践应用中的深化，同时也为课题3的学习打下基础。

学生通过学习，应当掌握微生物培养的一般方法，生产生活中关于微生物的分离、计数、培养等实际问题。在教材中占有重要的地位。

二、学情分析

在知识方面，学生已经掌握微生物实验室培养时所用到的技术——培养基的制备、接种技术和无菌技术，但对于微生物培养的生产生活方面的应用方面，尚缺乏一定的理论知识和操作技能。

在能力方面，高二学生思维敏捷，求知欲望强，思考问题有一定的深度，具备一定的自主学习及合作探究能力，但发现问题和创新意识还有待提高。

三、课题目标

知识与能力目标

通过实施“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”教学，让学生学会微生物的选择培养、分离、计数等技术的原理和方法，能够简述选择性培养基和鉴别性培养基的作用。

学科素养（1）基础知识（选择培养基对微生物的选择作用；微生物数量的测定）；

（2）基本技能（通过分析研究思路的形成过程，提高实验设计的能力。通过对实验结果的分析，培养推理和计算能力）；

（3）基本思想（对生产生活中的尿素的介绍，认同“科学、技术、社会”息息相关）；

（4）基本活动经验（培养学生养他们保护、利用土壤微生物资源的意识）。

四、课题重点与难点

1.课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制。

2.课题难点：对分解尿素的细菌的计数。

五、教学策略

采用课前和课中相结合的案例式教学策略。

课前，社团成员在老师的指导下，完成实验案例；课堂上，社团成员进行案例展示；老师引领学生以问题探讨的方式，拆分知识结构，细化知识内容，分析社团活动各个环节中存在的问题，以实践带动理论，深化理解，使得学生能够建立完整知识体系。