实验室常用培养基
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实验用培养基配制 >1 .牛肉膏蛋白胨培养基(用于细菌培养)7.6 ~1000mL ,pH7.4 10g ,NaCl 5g ,水牛肉膏3g ,蛋白胨) 用于放线菌培养号培养基 ( 2. 高氏 1可溶性淀粉20g ,KNO 3 1g ,NaCl 0.5g ,K 2 HPO 4-·3H 2 O 0.5g ,MgSO 。
~7.6 ,水1000mL ,pH7.4 7H 2 O 0.5g, 4 ·,FeSO4 ·7H 2 O 0.01g配制时注意,可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。
)培养基(用于从土壤中分离真菌).马丁氏( Martin 3K 2 HPO 4 1g ,MgSO 4 ·7H 2 O 0.5g ,蛋白胨5g ,葡萄糖10g ,1/3000 孟。
30min 121 ℃湿热灭菌100mL, 水900mL ,自然pH ,加拉红水溶液30 μg/mL). 链霉素含量为时加入链霉素( 待培养基融化后冷却55 ~60 ℃) 用于霉菌或酵母菌培养马铃薯培养基(PDA)( 4.1000mL ) 20g, 水去皮)200g, 蔗糖( 或葡萄糖马铃薯(配制方法如下: 将马铃署去皮, 切成约2cm 2 的小块, 放入1500mL 的烧杯中煮沸30min, 注意用玻棒搅拌以防糊底, 然后用双层纱布过滤, 取其滤液. 酵母菌用葡萄糖霉菌用蔗糖, 1000mL, 加糖, 再补足至自然pH.) )( 用于霉菌培养 5. 察氏培养基 ( 蔗糖硝酸钠培养基蔗糖30g, NaNO 3 2g, K 2 HPO 4 1g, MgSO 4 ·7H 2 O 0.5g, KCl 0.5g, FeSO4 ·7H7.2 ~2 O 0.1g, 水1000mL, pH7.0) ( 用于支原体培养培养基6. Hayflik~15g, pH7.8 琼脂10g, NaCl 5g, 蛋白胨)1000mL, 或浸出液( 牛心消化液.8.0,分装每瓶70mL, 121 ℃湿热灭菌15min, 待冷却至80 ℃左右, 每70mL 中加入马血清20mL,25% 鲜酵母浸出液10mL, 15 醋酸铊水溶液2.5mL, 青霉素G 钾盐水溶液(20 万单位以上)0.5mL, 以上混合后倾注平板. 注意: 醋酸铊. , 需特别注意安全操作是极毒的药品) 醋酸钠培养基培养基 (McCLary) ( 7 .麦氏葡萄糖0.1g, KCl 0.18g ,酵母膏0.25g ,醋酸钠0.82g, 琼脂l.5g ,蒸馏水15min 。
℃湿热灭菌l00mL 。
溶解后分装试管,1l5) .反应和甲基红试验用于 V.P 8 .葡萄糖蛋白胨水培养基 (蛋白胨0.5g ,葡萄糖0.5g ,K 2 HPO 4 0.2g ,水100mL, pH7.2, 1l5 ℃湿热20min 。
灭菌) ( 用于吲哚试验9 .蛋白胨水培养基。
湿热灭菌20min ~7.4, 121 ℃蛋白胨10g, NaCl 5g, 水1000mL ,pH7.2) ( 用于细菌糖发酵试验10 .糖发酵培养基蛋白胨0.2g, NaCl 0.5g, K 2 HPO 4 0.02g ,水100mL ,溴麝香草酚蓝( 质量分数1% 水溶液) 0.3mL ,糖类lg 。
分别称取蛋白胨和NaCl 溶于热水中,调pH 至7.4 ,再加入溴麝香草酚蓝( 先用少量质量分数95% 乙醇溶解后,再加水配成质量分数1% 水溶液) ,加入糖类,分装试管,装量 4 ~5cm 高,并倒放入一杜氏小管( 管口向下,管内充满培养液) 。
115 ℃湿热灭菌20min 。
灭菌时注意适当延长煮沸时间,尽量把冷空气排尽以使杜氏小管内不残存气泡。
常用的糖类,如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖等( 后。
1.5%) 两种糖的用量常加大为质量分数) 用于厌氧菌培养) ( ( 强化梭菌培养基 11. RCM 培养基酵母膏3g ,牛肉膏l0g ,蛋白胨10g ,可溶性淀粉lg ,葡萄糖5g, 半胱氨酸盐酸盐0.5g ,NaCl 3g ,NaAc 3g, 水l000mL, pH8.5 ,刃天青3mg/L,。
30min 湿热灭菌℃l2l) 用于厌氧菌培养( 12. TYA 培养基,醋酸(bacto-typetone)6g ,胰蛋白胨2g ,酵母膏2g ,牛肉膏40g 葡萄糖.铵3g, KH 2 PO 4 0.5g ,MgSO 4 ·7H 2 O 0.2g ,FeSO 4 ·7H 2 O 0.01g ,水。
30min 1000mL, pH6.5, 121 ℃湿热灭菌) 用于厌氧菌培养 13 .玉米醪培养基 (玉米粉65g ,自来水1000mL ,混匀,煮10min 成糊状,自然pH, 121 ℃湿30min 。
热灭菌) 用于厌氧菌培养 14 .中性红培养基 (葡萄糖40g ,胰蛋白胨6g ,酵母膏2g ,牛肉膏2g ,醋酸铵3g ,KH 2 PO4 5g ,中性红0.2g, MgSO 4 ·7H 2 O 0.2g ,FeSO 4 ·7H 2 O 0.01g, 水1000ml,。
℃湿热灭菌30min pH6.2, 121) ( 用于厌氧菌培养15 . CaCO3 明胶麦芽汁培养基麦芽汁(6 波美)1000mL ,水1000mL ,CaCO 3 10g, 明胶10g ,pH6.8,。
30min 121 ℃湿热灭菌) ( 用于乳酸发酵BCG 牛乳培养基 16 .(A) 溶液:脱脂乳粉100g ,水500mL ,加入质量分数1.6% 溴甲酚绿(B.C.G)20min 。
灭菌1mL 乙醇溶液,80 ℃(B) 溶液:酵母膏10g ,水500mL ,琼脂20g , pH6.8, 121 ℃湿热灭菌。
20min溶液混合均匀后倒平板。
(B) (A) 以无菌操作趁热将、) ( 用于乳酸发酵17 .乳酸菌培养基牛肉膏5g ,酵母膏5g ,蛋白胨10g ,葡萄糖10g ,乳糖5g, NaCl 5g ,水。
℃湿热灭菌20min 1000mL, pH6.8, 121) ( 用于酒精发酵.酒精发酵培养基18蔗糖10g, MgSO 4 ·7H 2 O 0.5g, NH 4 NO 3 0.5g, 质量分数20% 豆芽汁2mL, 。
pH 100mL KH 2 PO 4 0.5g ,水,自然) ( 用于钩端螺旋体培养柯索夫培养基19. CaCl 0.02g, KH 2 PO,0.4g, NaCl 0.7g, KCl 0.02g, Na HCO 3 0.01g 优质蛋白胨.。
40mL 蒸馏水500 mL ,无菌兔血清4 0.09g, NaH 2 PO 4 0.48g,制法:除兔血清外的其余各成分混合,加热溶解,调pH 至7.2, 121 ℃湿热灭菌20min ,待冷却后,加入无菌兔血清,制成8% 血清溶液,然后分装试管lh 后备用。
, 56 ℃水浴灭活( 5 ~10mL/ 管) 20 .豆芽汁培养基黄豆芽500g ,加水1000mL ,煮沸lh ,过滤后补足水分,121 ℃湿热灭菌50% 的豆芽汁,后存放备用,此即质量分数为用于细菌培养:质量分数10% 豆芽汁200mL ,葡萄糖( 或蔗糖)50g ,水。
~7.4 800mL, pH7.2用于霉菌或酵母菌培养:质量分数10% 豆芽汁200mL ,糖50g ,水800mL ,。
霉菌用蔗糖,酵母菌用葡萄糖。
自然pH) ( 细菌培养,常在分子生物学中应用LB(Luria—Bertani) 培养基 21 .双蒸馏水950mL ,胰蛋白胨l0g, NaCl l0g ,酵母提取物(bacto- yeastextract)5g ,用lmol/L NaOH ( 约l mL) 调节pH 值至7.0 ,加双蒸馏水至总30min 。
121 ℃湿热灭菌体积为1L ,含氨苄青霉素LB 培养基: 待LB 培养基灭菌后冷至50 ℃左右加入抗生素,。
100mg/L 80 ~至终浓度为) ) ( 用于水体中大肠菌群测定22 .复红亚硫酸钠培养基 ( 远藤氏培养基蛋白胨10g ,牛肉浸膏5g ,酵母浸膏5g ,琼脂20g ,乳糖10g, K 2 HPO 41000mL 。
20mL ,蒸馏水0.5g ,无水亚硫酸钠5g, 5% 碱性复红乙醇溶液制作过程:先将蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和琼脂加入到900mL 水中,加热溶解,再加入K 2 PO 4 ,溶解后补充水至l000mL ,调pH 至7.2 ~7.4 。
随后加入乳糖,混匀溶解后,于115 ℃湿热灭菌20min 。
再称取亚硫酸钠至一无菌空试管中,用少许无菌水使其溶解,在水浴中煮沸10min 后,立即滴加于20mL 质量分数5% 碱性复红乙醇溶液中,直至深红色转变为淡粉红色为止。
将此混合液全部加入到上述已灭菌的并仍保持融化状态的培养基中,混匀后立即倒平板,待凝固后存放冰箱备用,若颜色由淡红变为深红,则不能再用。
) 用于水体中大肠菌群测定( .乳糖蛋白胨半固体培养基23蛋白胨10g ,牛肉浸膏5g ,酵母膏5g ,乳糖10g ,琼脂5g ,蒸馏水。
20min (l0mL/ 管), 115 ℃湿热灭菌1000mL ,pH7.2 ~7.4 ,分装试管) ( 用于多管发酵法检测水体中大肠菌群24 .乳糖蛋白胨培养液蛋白胨10g ,牛肉膏3g ,乳糖5g ,NaCl 5g ,蒸馏水l000mL ,质量分数1.6% 溴甲酚紫乙醇溶液lmL 。
调pH 至7.2 ,分装试管(l0mL/ 管) ,并放20min 。
℃湿热灭菌入倒置杜氏小管,l15) 用于水体中大肠菌群测定 25 .三倍浓乳糖蛋白胨培养液 (将乳糖蛋白胨培养液中各营养成分以扩大 3 倍加入到l000mL 水中,制法同20min 。
湿热灭菌每管5mL ,1l5 ℃上,分装于放有倒置杜氏小管的试管中,) )( 培养基用于水体中大肠菌群测定和细菌转导26 .伊红美蓝培养基 (EMB蛋白胨l0g, 乳糖10g, K 2 HPO 4 2g ,琼脂25g, 质量分数2%/ 伊红Y( 曙。
pH7.4 ) 水溶液l3mL ,( ) 水溶液20mL, 质量分数0.5% 美蓝亚甲蓝红制作过程:先将蛋白胨、乳糖、K 2 HPO 4 和琼脂混匀,加热溶解后,调pH 至7.4, 1l5 ℃湿热灭菌20min ,然后加入已分别灭菌的伊红液和美蓝液,充分混匀,防止产生气泡。
待培养基冷却到50 ℃左右倒平皿。
如培养基太热会产生过多的凝集水,可在平板凝固后倒置存于冰箱备用。
在细菌转导实验中用半乳糖代替乳糖,其余成分不变。
) 用于细菌转导27 .加倍肉汤培养基 (7.6 。