端粒酶PCR SCE检测对诊断膀胱癌的价值及应用
- 格式：doc
- 大小：2.79 KB
- 文档页数：2
作者：胡金钟汪定海傅祝能单小云徐瑞龙
【摘要】目的探明膀胱癌患者端粒酶阳性率及姊妹染色单体互换（sce）率，以确定其诊断及应用价值。
方法采用膀胱癌及对照正常膀胱的组织进行端粒酶活性检测（trap-银染法）、外周血淋巴细胞sce检测，然后进行比较分析。
结果（1）组织标本的端粒酶阳性率：膀胱癌93.75%（30/32），正常膀胱组织0%（0/30），表明膀胱癌端粒酶高度表达，其与正常对照组比较差异有显著性（p<0.001）。
（2）外周血淋巴细胞sce率（x）：膀胱癌32例（10.06），膀胱癌的sce率均显著高于正常对照组（p<0.001）；（3）膀胱癌患者的端粒酶活性与sce率的关系：阳性组32例sce率10.06；膀胱癌患者端粒酶阴性组30例sce率9.17（p<0.05）。
结论端粒酶pcr及sce检测对于膀胱癌诊断及鉴别良恶性均具有重要的价值，可作为辅助诊断及鉴别诊断指标，sce率可作为膀胱肿瘤的疗效评价指标。
【关键词】端粒酶 sce 膀胱癌
自1994年kin等［１］报道了端粒酶重复片段扩增法（trap）以来，国内外对各种恶性肿瘤细胞端粒酶的研究骤增，但膀胱癌等的报道相对较少。
姊妹染色单体互换（sce）可作为评价环境化学物质对细胞dna损伤的敏感指标，文献报道恶性肿瘤患者外周血的淋巴细胞sce率增高，sce增高是染色体不稳定的表现，并与肿瘤的发生相关。
本资料同时以端粒酶pcr及sce技术对膀胱癌进行检测，并进行对照比较分析，旨在探讨其对膀胱癌的诊断、鉴别诊断及应用价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料
组织标本端粒酶pcr检测选择膀胱癌32例，男22例，女10例；年龄30～91岁，平均62岁。
正常对照30例，男20例，女10例；年龄58～80岁，平均60.5岁；sce检测62例。
其中全膀胱切除13例，膀胱部分切除19例；tur-b 5例，均诊断为移行细胞癌，其中i级5例，ii级22例，iii级 5例，32例膀胱癌均经临床病理确诊。
1.2 方法
端粒酶pcr检测（trap-银染法）试剂盒由intergen公司提供。
（1）组织标本：离体后取绿豆大小迅速放入1.5ml或0.5ml尖底离心管中，保存于低温（-30℃）状态，取已消毒处理的眼科剪刀，反复剪碎组织呈糊状，每40～100mg的组织用200μl的l× chaps lysis buffer混合置于低温冰箱上保存（-30℃），1周内完成端粒酶活性测定。
(2)trap-银染法：按试剂盒说明操作并加以改进。
将标本提取液融化后置于2～8℃冰箱内冷藏1h，取出离心10min（12000r/min），再取上清液2μl置于反应液（48μl）内，并同时进行阳性、阴性、热灭活、引物-二聚体pcr污染等对照；上层覆盖20μl石蜡油后行pcr扩增。
30℃30min后按94℃30s，59℃30s两种温度循环33次，取出扩增物进行pcr产物浓缩，加二甲苯青少许，混匀，作聚丙烯酰胺明胶电泳，10～12cm垂直200v、1.5h或直至二甲苯青电泳至胶长度的70％～75%，电泳后进行银染，观察结果后制膜，干燥保存。
(3)判断标准：端粒酶阳性标本可看到36bp.s-ic带及6个碱基增加的阶层带，阴性标本，只能看到36bp.s-ic带。
sce检测：按常规染色体培养法即每例抽全血2ml，肝素抗凝，取0.3～0.5ml加入5ml 1640培养液内37℃培养24h后加5-溴尿嘧啶核苷（brdu，德国产），双盲法计数20个分化清晰的第2周期分裂相，求得sce细胞的平均值，即为sce率。
2 结果
2.1 两组组织标本端粒酶活性检测结果见表1。
表1 两组组织标本端粒酶活性检测结果(略)
2.2 膀胱癌患者及正常对照组外周血淋巴细胞sce检测结果见表2。
sce率结果与性别，
年龄等无显著相关性，膀胱癌组与正常对照组比较差异有显著性（p<0.001）。
