云南农业大学硕士研究生培养计划(一)

云南农业大学草学学科博士研究生培养方案毕玉芬，罗富成，李元，黄必志，郭凤根，祖艳群，吴红芝，文亦芾，姜华（云南农业大学动物科技学院，云南昆明650201）摘要：云南农业大学草学学科博士研究生的培养目标是培养德、智、体、美全面发展，具有一定批判性思维和创新思维，能独立从事科学研究工作或独立承担专业技术或管理工作的高素质研究型人才。

关键词：草学；博士中图分类号：S81文献标识码：B 文章编号：2096－3971（2020）增刊－0032－05DOI ：10.3969/j.issn.2096－3971.2020.增刊.009收稿日期：2019－12－25作者简介：毕玉芬（1960－），女（蒙古族），教授，博士生导师，主要研究方向为草地植物资源与遗传育种。

1学科简介云南农业大学草业教育始于20世纪70年代，由饲草生产学课程逐步发展为完整专业。

草学专业创建于1999年；2000年联合云南省草地动物科学研究院申报获得草业科学硕士学位授予权；2001年学科被遴选为云南省省级重点学科，并于2007年通过验收；2011年学科获草学一级学科硕士和博士学位授予权，次年开始招收博士研究生；2016年学科被遴选为云南省一流建设学科，2019年入选云南省省级博士后科研流动站。

草学学科现有专任教师20名。

其中，博导8名，硕导14名，国家百千万人才1人，国务院和云南省政府特殊津贴专家2人，省市学术和技术带头人、教学科研带头人、技术创新及青年拔尖人才7人，云南省教学名师1人，云南农大百名青年学术技术带头人3人；具有博士学位者15人；11人为正高，5人为副高。

20名教师分别毕业于国内外11所高校或科研院所，14人具有国外留学经历。

草学学科已形成一支年龄、职称和学历结构合理，学缘结构较好，满足人才培养及学科发展需要的师资队伍。

此外，学科另有联合办学单位－云南省草地动物科学研究院牧草学兼职教师15名。

其中，正高8人，副高5人；博导1人，硕导4人；国务院和云南省政府特殊津贴专家4人；云南省学术和技术带头人5人；云岭学者、云岭产业技术领军人才各1人。

㊀Ｇｕｉｈａｉａ㊀Ａｕｇ.２０２１ꎬ４１(８):１２１９－１２２５ｈｔｔｐ://ｗｗｗ.ｇｕｉｈａｉａ－ｊｏｕｒｎａｌ.ｃｏｍＤＯＩ:１０.１１９３１/ｇｕｉｈａｉａ.ｇｘｚｗ２０１９１２０２０武丽霞ꎬ韩丽ꎬ赵宜婷ꎬ等.生长素输出载体蛋白ＰＩＮ１在作物根和胚中的亚细胞定位[Ｊ].广西植物ꎬ２０２１ꎬ４１(８):１２１９－１２２５.ＷＵＬＸꎬＨＡＮＬꎬＺＨＡＯＹＴꎬｅｔａｌ.ＳｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆａｕｘｉｎｅｆｆｌｕｘｃａｒｒｉｅｒｐｒｏｔｅｉｎＰＩＮ１ｉｎｃｒｏｐｒｏｏｔａｎｄｅｍｂｒｙｏ[Ｊ].Ｇｕｉｈａｉａꎬ２０２１ꎬ４１(８):１２１９－１２２５.生长素输出载体蛋白ＰＩＮ１在作物根和胚中的亚细胞定位武丽霞１ꎬ２ꎬ３ꎬ韩㊀丽１ꎬ２ꎬ３ꎬ赵宜婷１ꎬ２ꎬ３ꎬ周㊀璇１ꎬ２ꎬ３ꎬ杜云龙１ꎬ２ꎬ３∗(１.云南农业大学植物保护学院ꎬ昆明６５０２０１ꎻ２.云南生物资源保护与利用国家重点实验室ꎬ云南农业大学昆明６５０２０１ꎻ３.云南农业大学农业生物多样性与病害控制教育部重点实验室ꎬ昆明６５０２０１)摘㊀要:生长素输出载体在植物发育中起非常重要的作用ꎮ然而ꎬ生长素输出载体蛋白ＰＩＮ１在农作物水稻㊁小麦㊁玉米和大豆的根和胚中的亚细胞定位尚不清楚ꎮ该研究首先分析了ＯｓＰＩＮ１ｂ和它的同源物的氨基酸序列特征ꎬ发现小麦(ＴａＰＩＮ１)㊁玉米(ＺｍＰＩＮ１ｂ)和大豆(ＧｍＰＩＮ１ｂ)中的ＰＩＮ１序列与水稻的ＯｓＰＩＮ１ｂ序列分别具有６１.５％㊁６２.５％㊁６１.９％的相似性ꎮ然后根据水稻 日本晴 ( Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ )的ＯｓＰＩＮ１ｂ的氨基酸序列ꎬ人工合成ＯｓＰＩＮ１ｂ多肽并注射健康的新西兰白兔获得了抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体ꎬ在通过免疫印迹方法检测抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体的有效性后ꎬ发现可以利用该抗体有效检测到水稻叶片及根中ＯｓＰＩＮ１ｂ的表达ꎮ为检测ＯｓＰＩＮ１及其同源物在不同作物胚根和胚中子叶细胞的定位ꎬ利用制备的抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体并通过免疫组化实验ꎬ发现水稻的ＯｓＰＩＮ１ｂ㊁小麦的ＴａＰＩＮ１和玉米的ＺｍＰＩＮ１ｂ非极性定位在早期的胚根和胚中子叶表皮细胞的细胞质膜上ꎬ大豆中的ＧｍＰＩＮ１ｂ非极性定位在胚根表皮细胞的质膜上ꎬ而在胚的子叶细胞中是胞质定位ꎮ为进一步检测水稻中ＯｓＰＩＮ１ｂ的亚细胞定位ꎬ对水稻根分生区表皮细胞用蛋白质转运抑制剂ＢＦＡ(ＢｒｅｆｅｌｄｉｎＡ)及抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体处理后ꎬ进行免疫组化实验ꎬ结果发现水稻中的ＯｓＰＩＮ１ｂ可以通过胞吞转运途径从水稻根表皮细胞膜进入细胞质中ꎮ该研究利用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体有效检测了ＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源物在水稻㊁小麦㊁玉米和大豆的胚根表皮细胞及胚中子叶表皮细胞的亚细胞定位ꎬ这将有助于进一步揭示生长素输出载体ＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源物通过调控生长素极性运输而参与作物发育的作用机制ꎮ关键词:生长素输出载体ꎬＰＩＮ１ꎬ水稻ꎬ小麦ꎬ玉米ꎬ大豆中图分类号:Ｑ９４３㊀㊀文献标识码:Ａ㊀㊀文章编号:１０００￣３１４２(２０２１)０８￣１２１９￣０７ＳｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆａｕｘｉｎｅｆｆｌｕｘｃａｒｒｉｅｒｐｒｏｔｅｉｎＰＩＮ１ｉｎｃｒｏｐｒｏｏｔａｎｄｅｍｂｒｙｏＷＵＬｉｘｉａ１ꎬ２ꎬ３ꎬＨＡＮＬｉ１ꎬ２ꎬ３ꎬＺＨＡＯＹｉｔｉｎｇ１ꎬ２ꎬ３ꎬＺＨＯＵＸｕａｎ１ꎬ２ꎬ３ꎬＤＵＹｕｎｌｏｎｇ１ꎬ２ꎬ３∗收稿日期:２０２０－０２－０５基金项目:国家自然科学基金(３１４６０４５３ꎬ３１６６０５０１ꎬ３１８６００６４)ꎻ云南省教育厅重大科研专项计划(ＺＤ２０１５００５)ꎻ教育部留学回国人员科研启动基金([２０１３]１７９２)ꎻ云南省应用基础研究计划的重点项目(２０１７ＦＡ０１８)[ＳｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ(３１４６０４５３ꎬ３１６６０５０１ꎬ３１８６００６４)ꎻＭａｊｏｒＳｐｅｃｉａｌＰｒｏｇｒａｍｆｏｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｓｅａｒｃｈꎬＥｄｕｃａｔｉｏｎＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＹｕｎｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ(ＺＤ２０１５００５)ꎻＰｒｏｊｅｃｔｏｆＳＲＦｆｏｒＲＯＣＳꎬＳＥＭ([２０１３]１７９２)ꎻＫｅｙＰｒｏｊｅｃｔｏｆＡｐｐｌｉｅｄＢａｓｉｃＲｅｓｅａｒｃｈＰｌａｎｏｆＹｕｎｎａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ(２０１７ＦＡ０１８)]ꎮ作者简介:武丽霞(１９９４－)ꎬ硕士研究生ꎬ研究方向为水稻根系发育ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)２４１６２０６２４８＠ｑｑ.ｃｏｍꎮ∗通信作者:杜云龙ꎬ博士ꎬ教授ꎬ博士研究生导师ꎬ研究方向为激素与根系发育ꎬ(Ｅ￣ｍａｉｌ)ｙｕｎｌｏｎｇｄｕ＠ａｌｉｙｕｎ.ｃｏｍꎮ(１.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎꎬＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＫｕｎｍｉｎｇ６５０２０１ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＣｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎａｎｄＵｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＢｉｏ￣ＲｅｓｏｕｒｃｅｓꎬＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＫｕｎｍｉｎｇ６５０２０１ꎬＣｈｉｎａꎻ３.ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｇｒｏ￣ＢｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄＰｅｓｔＭａｎａｇｅｍｅｎｔｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＣｈｉｎａꎬＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＫｕｎｍｉｎｇ６５０２０１ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ａｕｘｉｎｅｆｆｌｕｘｃａｒｒｉｅｒｐｌａｙｓａｎｅｘｔｒｅｍｅｌｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｐｌａｎｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ.ＨｏｗｅｖｅｒꎬｔｈｅｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆａｕｘｉｎｅｆｆｌｕｘｃａｒｒｉｅｒＰＩＮ１ｉｎｔｈｅｒｏｏｔｓａｎｄｅｍｂｒｙｏｓｏｆｃｒｏｐｓｒｉｃｅꎬｗｈｅａｔꎬｍａｉｚｅａｎｄｓｏｙｂｅａｎｒｅｍａｉｎｓｕｎｃｌｅａｒ.ＩｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙꎬｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＯｓＰＩＮ１ｂａｎｄｉｔｓｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄꎬａｎｄｉｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅＰＩＮ１ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｗｈｅａｔ(ＴａＰＩＮ１)ꎬｍａｉｚｅ(ＺｍＰＩＮ１ｂ)ａｎｄｓｏｙｂｅａｎ(ＧｍＰＩＮ１ｂ)ｓｈａｒｅｄ６１.５％ꎬ６２.５％ａｎｄ６１.９％ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓｗｉｔｈｒｉｃｅＯｓＰＩＮ１ｂꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.ＮｅｘｔꎬａｎａｒｔｉｆｉｃｉａｌＯｓＰＩＮ１ｂｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｗａｓｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｂａｓｅｄｏｎｔｈｅＯｓＰＩＮ１ｂａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆｒｉｃｅ Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ ａｎｄｉｎｊｅｃｔｅｄｉｔｉｎｔｏｈｅａｌｔｈｙＮｅｗＺｅａｌａｎｄｗｈｉｔｅｒａｂｂｉｔｓｔｏｏｂｔａｉｎａｎｔｉ￣ｒａｂｂｉｔＯｓＰＩＮ１ｂｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ.ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓｏｆｔｈｅｐｒｅｐａｒｅｄｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔＯｓＰＩＮ１ｂｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｅｂｌｏｔｍｅｔｈｏｄꎬａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＯｓＰＩＮ１ｂｗａｓｆｏｕｎｄｔｏｂｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｒｉｃｅｌｅａｖｅｓａｎｄｒｏｏｔｓ.ＦｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅꎬｔｈｅｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＯｓＰＩＮ１ｂａｎｄｉｔｓｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｉｎｐｒｉｍａｒｙｒｏｏｔｓａｎｄｃｏｔｙｌｅｄｏｎｃｅｌｌｓｏｆｅｍｂｒｙｏｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｒｏｐｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈａｎｔｉ￣ｒａｂｂｉｔＯｓＰＩＮ１ｂｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｂｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｓｓａｙ.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｒｉｃｅＯｓＰＩＮ１ｂꎬｗｈｅａｔＴａＰＩＮ１ａｎｄｍａｉｚｅＺｍＰＩＮ１ｂａｐｏｌａｒｌｙｌｏｃａｌｉｚｅｄｏｎｔｈｅｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅｏｆｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓｏｆｐｒｉｍａｒｙｒｏｏｔｓａｎｄｃｏｔｙｌｅｄｏｎｏｆｅｍｂｒｙｏｉｎｒｉｃｅꎬｗｈｅａｔａｎｄｍａｉｚｅｇｒｏｗｎｉｎｅａｒｌｙｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｔａｇｅｓꎬａｎｄｓｏｙｂｅａｎＧｍＰＩＮ１ｂａｐｏｌａｒｌｙｌｏｃａｌｉｚｅｄｏｎｔｈｅｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅｏｆｐｒｉｍａｒｙｒｏｏｔｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓꎬｂｕｔｗａｓｃｙｔｏｓｏｌｉｃｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｃｏｔｙｌｅｄｏｎｃｅｌｌｓｏｆｅｍｂｒｙｏ.ＴｏｆｕｒｔｈｅｒｄｅｔｅｃｔｔｈｅｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＯｓＰＩＮ１ｂꎬｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓｏｆｒｉｃｅｐｒｉｍａｒｙｒｏｏｔｍｅｒｉｓｔｅｍｒｅｇｉｏｎｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｐｒｏｔｅｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓＢＦＡ(ＢｒｅｆｅｌｄｉｎＡ)ａｎｄａｎｔｉ￣ｒａｂｂｉｔＯｓＰＩＮ１ｂｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｎｄｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｓｓａｙ.ＩｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＯｓＰＩＮ１ｂｌｏｃａｌｉｚｅｄｏｎｃｙｔｏｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅｏｆｒｉｃｅｒｏｏｔｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓｃｏｕｌｄｅｎｔｅｒｉｎｔｏｔｈｅｃｙｔｏｐｌａｓｍｖｉａｅｎｄｏｃｙｔｉｃｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇｍａｎｎｅｒ.ＩｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙꎬｔｈｅｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＯｓＰＩＮ１ｂａｎｄｉｔｓｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｉｎｔｈｅｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓｏｆｐｒｉｍａｒｙｒｏｏｔｓａｎｄｃｏｔｙｌｅｄｏｎｓｏｆｅｍｂｒｙｏｓｏｆｒｉｃｅꎬｗｈｅａｔꎬｍａｉｚｅａｎｄｓｏｙｂｅａｎｗｅｒｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅａｎｔｉ￣ｒａｂｂｉｔＯｓＰＩＮ１ｂｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙꎬａｎｄｉｔｗｉｌｌｆａｃｉｌｉｔａｔｅｕｓｔｏｒｅｖｅａｌｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｕｘｉｎｅｆｆｌｕｘｃａｒｒｉｅｒＯｓＰＩＮ１ｂａｎｄｉｔｓｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｂｙｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｐｏｌａｒａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｔｏｉｎｖｏｌｖｅｉｎｃｒｏｐｓｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ａｕｘｉｎｅｆｆｌｕｘｃａｒｒｉｅｒꎬＰＩＮ１ꎬｒｉｃｅꎬｗｈｅａｔꎬｍａｉｚｅꎬｓｏｙｂｅａｎ㊀㊀生长素输出载体蛋白在调节植物生长素极性运输中起重要作用ꎮ生长素极性运输参与胚胎形态发生(Ｂｌｉｌｏｕｅｔａｌ.ꎬ２００５)和侧生器官的形成(Ｃａｓｉｍｉｒｏｅｔａｌ.ꎬ２００１)ꎮ拟南芥基因组中的ＰＩＮ基因家族编码ＰＩＮ１－８的８种生长素输出载体蛋白(Ｆｒｉｍｌｅｔａｌ.ꎬ２００３ꎻＢｅｎｊａｍｉｎｓ＆Ｓｃｈｅｒｅｓꎬ２００８)ꎮＰＩＮ蛋白可以通过内吞作用转运到细胞质中ꎬ并形成循环小泡返回质膜(Ｇｅｌｄｎｅｒｅｔａｌ.ꎬ２００１)ꎮＡｔｐｉｎ１突变体植株表现出针状花序并且花和维管组织发育表现明显缺陷(Ｇäｌｗｅｉｌｅｒｅｔａｌ.ꎬ１９９８)ꎮＡｔＰＩＮ１的极性定位还影响胚胎的发育(Ｆｒｉｍｌｅｔａｌ.ꎬ２００３)ꎮＡｔＰＩＮ１分布于维管组织(Ｇäｌｗｅｉｌｅｒｅｔａｌ.ꎬ１９９８)㊁木质部薄壁组织(Ｇäｌｗｅｉｌｅｒｅｔａｌ.ꎬ１９９８ꎻＰａｌｍｅ＆Ｇäｌｗｅｉｌｅｒꎬ１９９９)㊁根表皮和皮层细胞(Ｂｌｉｌｏｕｅｔａｌ.ꎬ２００５)㊁分生组织表皮和原基表皮(Ｇｕｅｎｏｔｅｔａｌ.ꎬ２０１２)的细胞质中ꎮ但是ꎬ目前人们对单子叶植物和双子叶植物之间ＰＩＮ１蛋白的亚细胞定位差异仍不清楚ꎮＡｔＰＩＮ１的同源基因可以存在于水稻(Ｘｕｅｔａｌ.ꎬ２００５ꎻＬｉｅｔａｌ.ꎬ２０１９)㊁小麦(Ｓｉｎｇｈｅｔａｌ.ꎬ２０１８)㊁玉米(Ｇａｌｌａｖｏｔｔｉｅｔａｌ.ꎬ２００８)和大豆(Ｗａｎｇｅｔａｌ.ꎬ２０１５)的基因组中ꎮ在水稻的维管组织和根原基中可以检测到ＯｓＰＩＮ１的表达(Ｘｕｅｔａｌ.ꎬ２００５)ꎬＯｓＰＩＮ１以生长素依赖性的方式参与水稻根㊁茎㊁花序和分蘖的发育(Ｘｕｅｔａｌ.ꎬ２００５ꎻＬｉｅｔａｌ.ꎬ２０１９)ꎮＺｍＰＩＮ１ａ主要定位在玉米幼苗的上叶原基(Ｇａｌｌａｖｏｔｔｉｅｔａｌ.ꎬ２００８)㊁根中的中柱鞘细胞和内皮层细胞(Ｃａｒｒａｒｏｅｔａｌ.ꎬ２００６)㊁胚芽鞘(Ｋａｍａｄａｅｔａｌ.ꎬ２０１８)和叶片(Ｍｏｏｎｅｔａｌ.ꎬ２０１３)的表层细胞ꎮ此外ꎬＺｍＰＩＮ１ａ在根冠细胞中显示为胞质定位０２２１广㊀西㊀植㊀物４１卷(Ｆｏｒｅｓｔａｎｅｔａｌ.ꎬ２０１２)ꎬ在花序初生原基细胞中显示为非极性定位(Ｓｋｉｒｐａｎｅｔａｌ.ꎬ２００９)ꎮ但是ꎬ目前尚不清楚ＰＩＮ１在不同作物的根和胚中的亚细胞定位ꎬ包括水稻㊁小麦㊁玉米和大豆ꎮ在这项研究中ꎬ我们基于水稻 日本晴 ( Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ )的ＯｓＰＩＮ１ｂ氨基酸序列ꎬ制备了抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体ꎬ利用该抗体开展的免疫组化实验发现水稻的ＯｓＰＩＮ１ｂ及小麦和玉米中的同源蛋白可以非极性定位在根和胚中子叶表皮细胞的细胞质膜上ꎬ而大豆的ＧｍＰＩＮ１ｂ可以非极性地定位在根中表皮细胞的质膜上ꎬ但是ꎬ在胚的子叶表皮细胞中是细胞质定位ꎮ此外ꎬ水稻根表皮细胞质膜上的ＯｓＰＩＮ１ｂ可以通过内吞运输途径进入到细胞质中ꎮ这些ＰＩＮ１定位结果将有助于我们研究生长素极性运输在水稻㊁小麦㊁玉米和大豆作物发育中的作用ꎮ１㊀材料与方法１.１植物材料植物材料为水稻品种 Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ 和 丽江新团黑谷 ( ＬＴＨ )(Ｏｒｙｚａｓａｔｉｖａｓｕｂｓｐ.ｊａｐｏｎｉｃａ)㊁小麦(Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ Ｃｈｕａｎｍａｉ１０７ )㊁玉米(Ｚｅａｍａｙｓ Ｂ７３ )和大豆(Ｇｌｙｃｉｎｅｍａｘ Ｗｉｌｌｉａｍｓ )ꎬ各作物种子置于２８ħ条件下水培萌发ꎬ使用生长了７ｄ的胚根分生区细胞和１ｄ的子叶胚来检测ＯｓＰＩＮ１ｂ及同源物的亚细胞定位ꎮ１.２抗体的制备和检测根据水稻 Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ 的生长素输出载体ＯｓＰＩＮ１ｂ(Ｏｓ０２ｇ０７４３４００)的氨基酸序列人工合成多肽ＱＳＳＲＮＰＴＰＲＧＳＳＦＮＣꎬ并将其注入新西兰兔体内ꎮ通过ＥＬＩＳＡ方法检测到纯化的抗兔ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体ꎬ其浓度为０.５１ｍｇ ｍＬ￣１(１ʒ２００００)(杭州华安生物技术有限公司)ꎮ１.３免疫杂交和免疫组化检测为检测ＯｓＰＩＮ１ｂ的表达ꎬ提取了水稻叶片和根的总蛋白ꎬ并用一抗[抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体(１ʒ２００)]和二抗[山羊抗兔的ＩｇＧ￣ＨＲＰ(１ʒ５０００)]进行了免疫杂交ꎮ为了检测蛋白亚细胞定位ꎬ使用或不使用５０ｍｍｏｌ Ｌ￣１ＢｒｅｆｅｌｄｉｎＡ(ＢＦＡ)(ｍｏｌｅｃｕｌａｒｐｒｏｂｅｓ)对不同农作物的根和胚处理９０ｍｉｎꎬ然后使用改良的免疫组织化学分析方法进行检测(Ｐａｃｉｏｒｅｋｅｔａｌ.ꎬ２００６)ꎮ具体如下:首先ꎬ将样品在２５ħ室温条件下用４％戊二醛溶液固定１ｈꎻ然后ꎬ３７ħ条件下用２％崩溃酶处理１ｈꎻ最后ꎬ用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体(１ʒ２００)和二抗[驴抗兔的ＩｇＧ(Ｈ＋Ｌ)￣Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ４８８抗体(１ʒ５００)](ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ)进行免疫组化检测ꎮ使用ＬｅｉｃａＳＰ５激光共聚焦显微镜(ＬｅｉｃａＭｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ)观察ＯｓＰＩＮ１ｂ的定位ꎮ１.４生物信息学分析从ＮＣＢＩ(ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｎｃｂｉ.ｎｌｍ.ｎｉｈ.ｇｏｖ/)获得ＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源蛋白的氨基酸序列ꎬ通过在线网站(ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｕｎｉｐｒｏｔ.ｏｒｇ/)分析ＯｓＰＩＮ１ｂ的跨膜结构域ꎬ使用软件ＶｅｃｔｏｒＮＴＩＳｕｉｔｅ６进行氨基酸序列比对ꎬ所有图片均使用Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ软件处理ꎮ２㊀结果与分析２.１不同作物的ＰＩＮ１序列相似性分析为了检测不同作物中生长素输出载体蛋白ＰＩＮ１的亚细胞定位ꎬ首先ꎬ我们对拟南芥(ＡｔＰＩＮ１)㊁水稻(ＯｓＰＩＮ１ｂ)㊁小麦(ＴａＰＩＮ１)㊁玉米(ＺｍＰＩＮ１ｂ)和大豆(ＧｍＰＩＮ１ｂ)中ＰＩＮ１的氨基酸序列进行比对分析(图１)ꎮ结果表明:ＡｔＰＩＮ１㊁ＴａＰＩＮ１㊁ＺｍＰＩＮ１ｂ㊁ＧｍＰＩＮ１ｂ的序列与ＯｓＰＩＮ１ｂ分别具有５８.６％㊁６１.５％㊁６２.５％㊁６１.９％的相似性ꎬ在ＯｓＰＩＮ１ｂ的氨基酸序列中存在１０个跨膜区ꎮ２.２水稻中ＯｓＰＩＮ１ｂ的检测ＰＩＮ１序列在水稻㊁小麦㊁玉米和大豆之间显示出高度相似性(图１)ꎮ我们选择ＯｓＰＩＮ１ｂ中的序列ＱＳＳＲＮＰＴＰＲＧＳＳＦＮＣꎬ通过人工合成多肽免疫兔子制备了抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体ꎮ为检测抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体的有效性ꎬ我们提取了水稻叶片和根的总蛋白ꎬ并使用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体进行免疫杂交检测ꎮ结果表明ꎬ用ＯｓＰＩＮ１ｂ抗体可以检测到目标蛋白ＯｓＰＩＮ１ｂ(图２)ꎮ２.３ＰＩＮ１在不同农作物中的亚细胞定位通过免疫组织化学分析进一步检测了水稻㊁小麦㊁玉米和大豆根中ＰＩＮ１的亚细胞定位ꎬ发现１２２１８期武丽霞等:生长素输出载体蛋白ＰＩＮ１在作物根和胚中的亚细胞定位水稻ꎬ小麦ꎬ玉米ꎬ大豆和拟南芥之间的ＰＩＮ１氨基酸序列比对ꎬ红框中的氨基酸序列为水稻ＯｓＰＩＮ１ｂ的跨膜结构域ꎮＰＩＮ１ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓａｒｅａｌｉｇｎｅｄａｍｏｎｇｒｉｃｅꎬｗｈｅａｔꎬｍａｉｚｅꎬｓｏｙｂｅａｎａｎｄＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓꎬａｎｄｒｅｄｂｏｘｅｓｓｈｏｗｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｄｏｍａｉｎｓｏｆｒｉｃｅＯｓＰＩＮ１ｂａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｃｅｓ.图１㊀ＰＩＮ１的氨基酸序列比对Ｆｉｇ.１㊀ＰＩＮ１ａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅａｌｉｇｎｍｅｎｔＰＩＮ１虽然可定位于根表皮细胞的细胞质膜上ꎬ但没有明显的极性分布(图３:Ａ－Ｄ)ꎮ在检测ＰＩＮ１在胚细胞中的定位时ꎬ发现ＰＩＮ１虽然可分布在水稻(图３:Ｅ)㊁小麦(图３:Ｆ)和玉米(图３:Ｇ)胚中子叶表皮细胞的细胞质膜上ꎬ但没有明显的极性分布ꎮ大豆中的ＧｍＰＩＮ１ｂ非极性分布在根表皮细２２２１广㊀西㊀植㊀物４１卷提取水稻 日本晴 叶片(Ａ)和根(Ｂ)中的总蛋白ꎬ用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体进行免疫杂交ꎮ箭头指示目标蛋白ＯｓＰＩＮ１ｂ的条带ꎮＴｏｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｒｉｃｅｌｅａｖｅｓ(Ａ)ａｎｄｒｏｏｔｓ(Ｂ)ｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｒｉｃｅ Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ ａｎｄｂｌｏｔｔｅｄｗｉｔｈａｎｔｉ￣ｒａｂｂｉｔＯｓＰＩＮ１ｂｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ.ＡｒｒｏｗｐｏｉｎｔｓｔｏｔｈｅｔａｒｇｅｔｐｒｏｔｅｉｎＯｓＰＩＮ１ｂ.图２㊀蛋白免疫杂交检测水稻叶片和根中的ＯｓＰＩＮ１ｂＦｉｇ.２㊀ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＯｓＰＩＮ１ｂｉｎｒｉｃｅｌｅａｖｅｓａｎｄｒｏｏｔｓｂｙｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｍｅｔｈｏｄ胞的细胞质膜上ꎬ而在胚的子叶表皮细胞中则分布于细胞质中(图３:Ｈ)ꎮ２.４水稻中ＯｓＰＩＮ１ｂ的胞吞检测由于ＯｓＰＩＮ１ｂ蛋白定位于细胞质膜上(图３:ＡꎬＥ)ꎬ因此ꎬ我们进一步检测了ＯｓＰＩＮ１ｂ是否可以通过胞吞的方式从细胞质膜转运入细胞质ꎮ用蛋白转运抑制剂ＢＦＡ处理水稻 Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ 和 ＬＴＨ 的根尖ꎬ用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体开展免疫组织化学实验ꎬ结果发现在细胞质中可以检测到ＯｓＰＩＮ１ｂ蛋白的聚集(图４)ꎮ这表明ＯｓＰＩＮ１ｂ可以通过胞吞途径从细胞质膜转移到细胞质中ꎮ３㊀讨论与结论生长素输出载体蛋白ＰＩＮ家族在植物发育中起着至关重要的作用ꎮ在这项研究中ꎬ我们利用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体有效检测了水稻㊁小麦㊁玉米和大豆的胚根分生区表皮细胞及胚中子叶表皮细胞的ＯｓＰＩＮ１及其同源物的亚细胞定位ꎬ结果发现ＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源物分布在水稻㊁小麦㊁玉米和大豆的根和胚中子叶表皮细胞的细胞质膜及细胞质中ꎮ不同作物中的相同细胞定位表明ＰＩＮ１在不同植物发育中ꎬ其调节生长素分布功能是保守的ꎮ此外ꎬ我们也注意到与拟南芥ＡｔＰＩＮ１的极性定位相比(Ｆｒｉｍｌｅｔａｌ.ꎬ２００３)ꎬ在不同农作物的根表皮细胞中ꎬＯｓＰＩＮ１及其同源物的定位是非极性的ꎮＯｓＰＩＮ１ｂ的氨基酸序列与ＡｔＰＩＮ１具有５８.６％的相似性ꎬ因此ꎬ不同作物和拟南芥ＡｔＰＩＮ１蛋白的亚细胞定位模式存在的差异可能与不同植物中ＰＩＮ１蛋白结构差异有关ꎮ玉米中的ＺｍＰＩＮ１ａ在不同玉米组织中的定位存在极性定位(Ｃａｒｒａｒｏｅｔａｌ.ꎬ２００６ꎻＧａｌｌａｖｏｔｔｉｅｔａｌ.ꎬ２００８ꎻＭｏｏｎｅｔａｌ.ꎬ２０１３ꎻＫａｍａｄａｅｔａｌ.ꎬ２０１８)㊁非极性定位(Ｓｋｉｒｐａｎｅｔａｌ.ꎬ２００９)和胞质定位(Ｆｏｒｅｓｔａｎｅｔａｌ.ꎬ２０１２)ꎬ一些研究也发现ＡｔＰＩＮ１的极性分布与胚发育中的生长素动态相关(Ｆｒｉｍｌｅｔａｌ.ꎬ２００３)ꎮ在本研究中ꎬ用于ＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源物细胞定位观察的胚根及子叶胚都处于植物发育的早期阶段ꎬ这表明不同作物中ＰＩＮ１的定位还与作物组织发育阶段有关ꎮ此外ꎬ利用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体可以检测到ＯｓＰＩＮ１ｂ蛋白ꎮ进一步分析结果发现ＯｓＰＩＮ１ｂ与ＯｓＰＩＮ１ａ氨基酸序列相似性为６２.４％ꎬＯｓＰＩＮ１ａ㊁ＯｓＰＩＮ１ｂ蛋白分子量分别为６４.７㊁５９.３ｋＤꎬ且ＯｓＰＩＮ１ａ氨基酸序列中含有用于制备抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体的序列ＱＳＳＲＮＰＴＰＲＧＳＳＦＮＣꎮ因此ꎬ不能完全排除所检测到的蛋白条带中含有ＯｓＰＩＮ１ａꎬ而这也可能部分解释了我们在根表皮细胞中所观察到的ＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源物的非极性定位ꎮＰＩＮ蛋白由于胞吞作用而产生的细胞定位的改变可影响生长素的极性运输ꎬ从而进一步调控器官形成(Ｋｌｅｉｎｅ￣Ｖｅｈｎｅｔａｌ.ꎬ２００８)ꎮ本研究结果发现ＯｓＰＩＮ１ｂ可以通过胞吞途径进入到细胞质中ꎮ这显示由于细胞的胞吞作用ꎬＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源物的细胞质膜及细胞质定位可能会发生变化ꎬ并参与调控植物内生长素的分布ꎮＰＩＮ蛋白的细胞定位可受到其他物质如水杨酸的调控(Ｄｕｅｔａｌ.ꎬ２０１３)ꎮ但是ꎬ我们观察到ＯｓＰＩＮ１ｂ的定位可由自身胞吞作用而改变ꎬ因此ꎬ不同作物中ＰＩＮ１蛋３２２１８期武丽霞等:生长素输出载体蛋白ＰＩＮ１在作物根和胚中的亚细胞定位水稻 日本晴 (ＡꎬＥ)ꎬ小麦(ＢꎬＦ)ꎬ玉米(ＣꎬＧ)和大豆(ＤꎬＨ)的根(Ａ－Ｄ)和胚(Ｅ－Ｈ)用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体开展免疫组化实验ꎮ标尺＝１０μｍꎮＲｏｏｔｓ(Ａ－Ｄ)ａｎｄｅｍｂｒｙｏｓ(Ｅ－Ｈ)ｏｆｒｉｃｅ Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ (ＡꎬＥ)ꎬｗｈｅａｔ(ＢꎬＦ)ꎬｍａｉｚｅ(ＣꎬＧ)ａｎｄｓｏｙｂｅａｎ(ＤꎬＨ)ｗｅｒｅｄｅｖｅｌｏｐｅｄｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｓｓａｙｗｉｔｈａｎｔｉ￣ｒａｂｂｉｔＯｓＰＩＮ１ｂｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ.Ｂａｒｓ＝１０μｍ.图３㊀ＰＩＮ１在根和胚的子叶表皮细胞中的亚细胞定位Ｆｉｇ.３㊀ＳｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＰＩＮ１ｉｎｒｏｏｔａｎｄｅｍｂｒｙｏｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓ用２５μｍｏｌ Ｌ￣１ＢＦＡ处理水稻品种 丽江新团黑谷 (Ａ)和 日本晴 (Ｂ)的根尖９０ｍｉｎꎬ然后用抗兔的ＯｓＰＩＮ１ｂ多克隆抗体通过免疫组化检测ＯｓＰＩＮ１ｂ的胞吞ꎮ箭头指示根表皮细胞胞质中ＯｓＰＩＮ１ｂ蛋白聚集体ꎮ标尺＝１０μｍꎮＲｏｏｔｓｏｆｒｉｃｅｌｉｎｅｓ ＬＴＨ (Ａ)ａｎｄ Ｎｉｐｐｏｎｂａｒｅ (Ｂ)ｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈ２５μｍｏｌ Ｌ￣１ＢＦＡｆｏｒ９０ｍｉｎꎬａｎｄｂｌｏｔｔｅｄｗｉｔｈａｎｔｉ￣ｒａｂｂｉｔＯｓＰＩＮ１ｂｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｂｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｓｓａｙ.ＡｒｒｏｗｐｏｉｎｔｓｔｏｔｈｅＯｓＰＩＮ１ｂｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎｉｎｃｙｔｏｐｌａｓｍａｏｆｒｏｏｔｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓ.Ｂａｒｓ＝１０μｍ.图４㊀水稻根表皮细胞中ＯｓＰＩＮ１ｂ的胞吞检测Ｆｉｇ.４㊀ＥｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＯｓＰＩＮ１ｂｉｎｔｈｅｃｙｔｏｐｌａｓｍａｏｆｒｉｃｅｒｏｏｔｅｐｉｄｅｒｍａｌｃｅｌｌｓ４２２１广㊀西㊀植㊀物４１卷白的亚细胞定位是一个动态的过程ꎮ不同作物中ＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源物可非极性定位于细胞质膜及细胞质中ꎬ这是一个动态的分布过程ꎬ并与植物所处的发育阶段密切相关ꎮＯｓＰＩＮ１ｂ及其同源物的亚细胞定位将有助于揭示生长素输出载体通过影响生长素极性分布而参与调控农作物中根和胚发育的分子机制ꎮ登录号㊀文章中相关蛋白在ＮＣＢＩ数据库中的登录号分别为ＡｔＰＩＮ１(ＮＰ＿１７７５００.１)㊁ＯｓＰＩＮ１ｂ(ＸＰ＿０１５６１６０１４.１)㊁ＴａＰＩＮ１(ＡＡＳ１９８５８.１)㊁ＺｍＰＩＮ１ｂ(ＡＢＨ０９２４３.１)㊁ＧｍＰＩＮ１ｂ(ＮＰ＿００１２３７５４６.２)ꎮ参考文献:ＢＥＮＪＡＭＩＮＳＲꎬＳＣＨＥＲＥＳＢꎬ２００８.Ａｕｘｉｎ:ｔｈｅｌｏｏｐｉｎｇｓｔａｒｉｎｐｌａｎｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ[Ｊ].ＡｎｎＲｅｖＰｌａｎｔＢｉｏｌꎬ５９(１):４４３－４６５.ＢＬＩＬＯＵＩꎬＸＵＪꎬＷＩＬＤＷＡＴＥＲＭꎬｅｔａｌ.ꎬ２００５.ＴｈｅＰＩＮａｕｘｉｎｅｆｆｌｕｘｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒｎｅｔｗｏｒｋｃｏｎｔｒｏｌｓｇｒｏｗｔｈａｎｄｐａｔｔｅｒｎｉｎｇｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｒｏｏｔｓ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｅꎬ４３３(７０２１):３９－４４.ＣＡＲＲＡＲＯＮꎬＦＯＲＥＳＴＡＮＣꎬＣＡＮＯＶＡＳꎬｅｔａｌ.ꎬ２００６.ＺｍＰＩＮ１ａａｎｄＺｍＰＩＮ１ｂｅｎｃｏｄｅｔｗｏｎｏｖｅｌｐｕｔａｔｉｖｅｃａｎｄｉｄａｔｅｓｆｏｒｐｏｌａｒａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔａｎｄｐｌａｎｔａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍａｉｚｅ[Ｊ].ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌꎬ１４２(１):２５４－２６４.ＣＡＳＩＭＩＲＯＩꎬＭＡＲＣＨＡＮＴＡꎬＢＨＡＬＥＲＡＯＲＰꎬｅｔａｌ.ꎬ２００１.ＡｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｐｒｏｍｏｔｅｓＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｌａｔｅｒａｌｒｏｏｔｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ[Ｊ].ＴｈｅＰｌａｎｔＣｅｌｌꎬ１３(４):８４３－８５２.ＤＵＹＬꎬＴＥＪＯＳＲꎬＢＥＣＫＭꎬｅｔａｌ.ꎬ２０１３.Ｓａｌｉｃｙｌｉｃａｃｉｄｉｎｔｅｒｆｅｒｅｓｗｉｔｈｃｌａｔｈｒｉｎ￣ｍｅｄｉａｔｅｄｅｎｄｏｃｙｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ[Ｊ].ＰＮＡＳꎬ１１０(１９):７９４６－７９５１.ＦＯＲＥＳＴＡＮＣꎬＦＡＲＩＮＡＴＩＳꎬＶＡＲＯＴＴＯＳꎬ２０１２.ＴｈｅｍａｉｚｅＰＩＮｇｅｎｅｆａｍｉｌｙｏｆａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＰｌａｎｔＳｃｉꎬ３(１６):１６.ＦＲＩＭＬＪꎬＶＩＥＴＥＮＡꎬＳＡＵＥＲＭꎬｅｔａｌ.ꎬ２００３.Ｅｆｆｌｕｘ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔａｕｘｉｎｇｒａｄｉｅｎｔｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｔｈｅａｐｉｃａｌ￣ｂａｓａｌａｘｉｓｏｆＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｅ(Ｌｏｎｄｏｎ)ꎬ４２６(６９６３):１４７－１５３.ＧＡＬＬＡＶＯＴＴＩＡꎬＹＡＮＧＹꎬＳＣＨＭＩＤＴＲＪꎬｅｔａｌ.ꎬ２００８.Ｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔａｎｄｍａｉｚｅｂｒａｎｃｈｉｎｇ[Ｊ].ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌꎬ１４７(４):１９１３－１９２３.ＧÄＬＷＥＩＬＥＲＬꎬＧＵＡＮＣꎬＭＵＬＬＥＲＡꎬｅｔａｌ.ꎬ１９９８.ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｐｏｌａｒａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｂｙＡｔＰＩＮ１ｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｖａｓｃｕｌａｒｔｉｓｓｕｅ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ２８２(５３９７):２２２６－２２３０.ＧＥＬＤＮＥＲＮꎬＦＲＩＭＬＪꎬＳＴＩＥＲＨＯＦＹＤꎬｅｔａｌ.ꎬ２００１.ＡｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｂｌｏｃｋＰＩＮ１ｃｙｃｌｉｎｇａｎｄｖｅｓｉｃｌｅｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｅꎬ４１３(６８５４):４２５－４２８.ＧＵＥＮＯＴＢꎬＢＡＹＥＲＥꎬＫＩＥＲＺＫＯＷＳＫＩＤꎬｅｔａｌ.ꎬ２０１２.ＰＩＮ１￣ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｅａｆｉｎｉｔｉａｔｉｏｎｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ[Ｊ].ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌꎬ１５９(４):１５０１－１５１０.ＫＡＭＡＤＡＭꎬＭＩＹＡＭＯＴＯＫꎬＯＫＡＭꎬｅｔａｌ.ꎬ２０１８.ＰｒｏｃｅｄｕｒｅｓｆｏｒｃｈｅｍｉｃａｌｆｉｘａｔｉｏｎｉｎｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎａｌｙｓｅｓｏｆＰＩＮｐｒｏｔｅｉｎｓｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｐｏｌａｒａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔ:ｒｅｌｅｖａｎｃｅｔｏｓｐａｃｅｆｌｉｇｈｔｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ[Ｊ].ＬｉｆｅＳｃｉＳｐａｃｅＲｅｓ(Ａｍｓｔ)ꎬ１８:４２－５１.ＫＬＥＩＮＥ￣ＶＥＨＮＪꎬＤＨＯＮＵＫＳＨＥＰꎬＳＡＵＥＲＭꎬｅｔａｌ.ꎬ２００８.ＡＲＦＧＥＦ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｔｒａｎｓｃｙｔｏｓｉｓａｎｄｐｏｌａｒｄｅｌｉｖｅｒｙｏｆＰＩＮａｕｘｉｎｃａｒｒｉｅｒｓｉｎＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ[Ｊ].ＣｕｒｒＢｉｏｌꎬ１８(７):５２６－５３１.ＬＩＹꎬＺＨＵＪＳꎬＷＵＬＬꎬｅｔａｌ.ꎬ２０１９.ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅｏｆＰＩＮ１ｐａｒａｌｏｇｏｕｓｇｅｎｅｓｉｎｒｉｃｅ[Ｊ].ＰｌａｎｔＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌꎬ６０(１２):２７２０－２７３２.ＭＯＯＮＪꎬＣＡＮＤＥＬＡＨꎬＨＡＫＥＳꎬ２０１３.Ｔｈｅｌｉｇｕｌｅｌｅｓｓｎａｒｒｏｗｍｕｔａｔｉｏｎａｆｆｅｃｔｓｐｒｏｘｉｍａｌ￣ｄｉｓｔａｌｓｉｇｎａｌｉｎｇａｎｄｌｅａｆｇｒｏｗｔｈ[Ｊ].Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔꎬ１４０(２):４０５－４１２.ＰＡＣＩＯＲＥＫＴꎬＳＡＵＥＲＭꎬＢＡＬＬＡＪꎬｅｔａｌ.ꎬ２００６.Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｐｒｏｔｅｉｎｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｉｎｓｅｃｔｉｏｎｓｏｆｐｌａｎｔｔｉｓｓｕｅｓ[Ｊ].ＮａｔｕｒｅＰｒｏｔｏｃｏｌｓꎬ１(１):１０４－１０７.ＰＡＬＭＥＫꎬＧÄＬＷＥＩＬＥＲＬꎬ１９９９.ＰＩＮ￣ｐｏｉｎｔｉｎｇｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｂａｓｉｓｏｆａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔ[Ｊ].ＣｕｒｒＯｐｉｎＰｌａｎｔＢｉｏｌꎬ２(５):３７５－３８１.ＳＫＩＲＰＡＮＡꎬＣＵＬＬＥＲＡＨꎬＧＡＬＬＡＶＯＴＴＩＡꎬｅｔａｌ.ꎬ２００９.ＢＡＲＲＥＮＩＮＦＬＯＲＥＳＣＥＮＣＥ２ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｗｉｔｈＺｍＰＩＮ１ａｓｕｇｇｅｓｔｓａｒｏｌｅｉｎａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｄｕｒｉｎｇｍａｉｚｅｉｎｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ[Ｊ].ＰｌａｎｔＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌꎬ５０(３):６５２－６５７.ＳＩＮＧＨＫꎬＳＩＮＧＨＪꎬＪＩＮＤＡＬＳꎬｅｔａｌ.ꎬ２０１８.ＳｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆａｎａｕｘｉｎｅｆｆｌｕｘｃａｒｒｉｅｒＰＩＮ１ａｎｄｉｔｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｉｎｃｏｍｍｏｎｗｈｅａｔ[Ｊ].ＦｕｎｃｔＩｎｔｅｇｒＧｅｎｏｍｉｃꎬ１９(１):２９－４１.ＷＡＮＧＹＱꎬＣＨＡＩＣＬꎬＶＡＬＬＩＹＯＤＡＮＢꎬｅｔａｌ.ꎬ２０１５.Ｇｅｎｏｍｅ￣ｗｉｄｅａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇｏｆｔｈｅＰＩＮａｕｘｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｇｅｎｅｆａｍｉｌｙｉｎｓｏｙｂｅａｎ(Ｇｌｙｃｉｎｅｍａｘ) [Ｊ].ＢＭＣＧｅｎｏｍｉｃｓꎬ１６(１):９５１－９６３.ＸＵＭꎬＺＨＵＬꎬＳＨＯＵＨＸꎬｅｔａｌ.ꎬ２００５.ＡＰＩＮ１ｆａｍｉｌｙｇｅｎｅꎬＯｓＰＩＮ１ꎬｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎａｕｘｉｎ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓｒｏｏｔｅｍｅｒｇｅｎｃｅａｎｄｔｉｌｌｅｒｉｎｇｉｎｒｉｃｅ[Ｊ].ＰｌａｎｔＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌꎬ４６(１０):１６７４－１６８１.(责任编辑㊀周翠鸣)５２２１８期武丽霞等:生长素输出载体蛋白ＰＩＮ１在作物根和胚中的亚细胞定位。

全日制农业推广硕士专业学位农村与区域发展领域研究生培养方案一、培养目标农业推广是与农业技术推广和农村发展任职资格相联系的专业学位。

主要为农业技术研究、应用、开发及推广，农村发展，农业教育等企事业单位和管理部门培养具有综合职业技能的应用型、复合型高层次人才。

具体要求为：（一）农业推广硕士专业学位获得者应较好地掌握中国特色社会主义理论；拥护党的基本路线、方针、政策；热爱祖国，热爱农业，遵纪守法，品德良好，艰苦奋斗，求实创新，积极为我国农业现代化和农村发展服务。

（二）农业推广硕士专业学位获得者应掌握农业推广领域坚实的基础理论、系统的专业知识，以及相关的管理、人文和社会科学知识；具有较宽广的知识面，较强的专业技能和技术传授技能，具有创新意识和新型的农业推广理念，能够独立从事较高层次的农业技术推广和农村发展工作。

（三）基本掌握一门外国语，能够阅读本领域的外文资料。

二、学习方式及年限采用全日制学习方式，学习年限一般为2年。

最长年限不超过3年。

其中课程学习实践为1年，参加专业实践时间为1年。

三、培养方式（一）采用课程学习，实践教学和学位论文相结合的培养方式，实行多学科综合、宽口径培养。

课程学习与专业实践要紧密衔接，课程学习在校内完成，实践教学科研在实习单位或校外实践基地完成。

（二）故里建立校内外双导师制，实行学位论文导师负责制，以校内导师指导为主，聘请校外导师参与实践过程、研究项目、课程与论文等多个环节的指导工作，吸收本领域的专家、学着和时间领域有丰富经验的具有高级技术职称的专业人员，共同承担专业学位研究生的培养工作。

四、课程设置及学分要求（一）课程分类及学分要求课程学习实践环节实行学分制。

研究生课程总学分为30—32学分（含专业实践），所有课程应全部在一年内修完。

课程设置分为学位课和非学位课。

学位课程为必修课，研究生课程学习必须通过考试或考查，成绩合格方能获得学分，所有课程的成绩均采用百分制，60分为合格，不合格的课程必须按有关规定进行重修。

专业学位研究生培养方案云南大学研究生院编二〇一四年三月应用统计专业学位硕士研究生培养方案 (1)国际商务（MIB）专业学位硕士研究生培养方案 (5)资产评估专业学位硕士研究生培养方案 (8)审计（MAud）专业学位硕士研究生培养方案 (11)法律（非法学）专业学位硕士研究生培养方案 (14)法律（法学）专业学位硕士研究生培养方案 (19)在职攻读法律硕士专业学位研究生培养方案 (24)社会工作专业学位硕士研究生培养方案 (29)教育硕士（教育管理领域）专业学位研究生培养方案 (33)教育硕士（现代教育技术）专业硕士研究生培养方案 (36)汉语国际教育专业学位硕士研究生培养方案 (40)新闻与传播专业学位硕士研究生培养方案 (45)翻译硕士（英语笔译）专业学位研究生培养方案 (48)翻译硕士（法语笔译）专业学位研究生培养方案 (52)文物学与博物馆学专业学位硕士研究生培养方案 (56)工程硕士材料工程领域专业学位研究生培养方案 (59)工程硕士电子与通信工程领域专业学位研究生培养方案 (63)工程硕士控制工程领域硕士研究生培养方案 (67)工程硕士计算机技术领域研究生培养方案 (71)工程硕士软件工程领域硕士研究生培养方案 (75)工程硕士建筑与土木工程领域专业学位研究生培养方案 (80)在职攻读工程硕士建筑与土木工程领域研究生培养方案 (85)工程硕士化学工程领域专业学位研究生培养方案 (91)工程硕士制药工程领域硕士研究生培养方案 (95)工程硕士生物工程领域硕士研究生培养方案 (99)工程硕士项目管理领域专业学位研究生培养方案 (103)工商管理（MBA）硕士专业学位研究生培养方案......................................... 错误!未定义书签。

公共管理（MPA）专业学位硕士研究生培养方案 (113)会计（MPAcc）专业学位硕士研究生培养方案 (119)旅游管理（MTA）专业学位硕士研究生培养方案 (123)图书情报（MLIS）专业学位硕士研究生培养方案 (126)工程硕士工程管理领域专业学位研究生培养方案 (130)艺术硕士（MFA）专业学位研究生培养方案 (134)应用统计专业学位硕士研究生培养方案（专业代码：025200）一、培养目标（一）培养目标为政府部门、大中型企业、咨询和研究机构培养高层次、应用型统计专门人才。

2013年增列硕士专业学位授权点申请表硕士专业学位类别：翻译申报单位名称：云南农业大学国务院学位委员会办公室制表2013年12月29日填目录一、申请翻译硕士专业学位授权点论证报告………………………（1-9）二、申请翻译硕士专业学位授权点培养方案……………………（10-27）三、申请翻译硕士专业学位授权点简况表………………………（28-59）一、申请翻译硕士专业学位授权点论证报告内容要求：参照《增列硕士专业学位授权点基本条件》，从人才需求和招生计划、培养目标定位、培养方案和培养方式、质量保障条件以及自身的优势与特色等方面就增列本硕士专业学位授权点的必要性和可行性进行论证，同时还须就与行（企）业合作的状况做出说明。

论证报告限5000字以内。

申请翻译硕士专业学位授权点论证报告云南农业大学外国语言文学专业多年来坚持“质量立院、彰显农科特色”的办学理念，积极对接国家“农业强国”的发展战略，通过13余年的专业发展和学科建设，已构建形成“多元化生源——特色化师资——个性化实训——多渠道就业”的产业化人才培养模式，分别在“农业科普知识翻译”、“南博会、农博会、花博会、旅交会实务口译”等方面凸显了学科特色和优势，拥有“同声传译实训室”、“云南省翻译协会”、“云南世博园艺有限公司”、“中国—东盟教育培训中心”等突出实践技能实训的基地群，实现了涉农行业需求与英语翻译人才培养有效对接，在围绕云南省桥头堡建设和服务地方经济涉农英语翻译领域树立了良好的专业品牌和形象。

本专业为了更具针对性地培养“翻译技能与农科特色结合”、“理论基础与实践应用结合”、“职业素养与市场需求结合”的高层次应用型涉农英语笔译翻译人才，拟申请增列翻译硕士专业学位授权点，其必要性和可行性具体阐述如下：一、申请增列翻译硕士专业学位授权点的必要性1、符合市场对高层次应用型专业英语翻译人才的客观需要在当今世界信息化时代，国际交流与合作日益频繁，中国与世界其他国家的交流与合作离不开语言的互译，英语作为一种世界性语言，翻译在经济社会的发展中扮演着愈来愈重要的角色，社会对翻译人才的需求已呈多元化态势。

农业硕士专业学位研究生培养方案研究生部2013年8月全日制农业硕士专业学位研究生培养方案为做好全日制农业硕士专业学位各领域研究生的培养工作，确保培养质量，根据教育部教研[2009]1号和国务院学位办[2009]23号文件有关要求，特制定《全日制农业硕士专业学位研究生培养方案》，以规范农业硕士专业学位研究生的培养目标、培养方式、课程学习、学位授予等环节。

一、培养目标和要求（一）培养目标农业硕士专业学位是与农业技术推广和农村发展相关职业要求相联系的专业学位，主要为农业技术研究、应用、开发及推广、农业教育等企事业单位和管理部门培养具有综合职业技能的应用型、复合型高层次人才。

（二）培养要求1. 农业硕士专业学位获得者应掌握中国特色社会主义理论；拥护党的基本路线、方针、政策；热爱祖国、热爱农业，遵纪守法，求实创新，勇于实践，树立科学发展观；具有为国家富强、民族振兴而奋斗的理想、事业心和责任感，自愿为我国农业现代化和农村发展服务。

2. 农业硕士专业学位获得者应掌握本领域坚实的基础理论、系统的专业知识、基本的专业技能以及相关的管理、人文和社会科学知识；具有较宽的知识面，较强的专业技能和技术传授能力，具有创新意识和良好的职业素养，能够独立从事本领域的研究或开发、管理等工作。

3. 基本掌握一门外国语，能够阅读本专领域的外文资料。

二、招生对象全日制农业硕士专业硕士研究生的招生对象主要为国民教育序列应届和往届大学本科毕业生（或本科同等学力）；相近专业大专毕业并从事2年以上相关领域的实际工作。

三、学习方式及年限采用全日制学习方式，学习年限一般为2年。

特殊情况不能超过4年。

四、培养方式（一）攻读农业硕士专业学位的研究生，课程学习实行学分制，实行多学科综合、宽口径的培养方式。

校外实践研究主要在相关实践基地进行，鼓励用顶岗实践的方式进行实践研究。

（二）学位论文实行双导师负责制，由具有高级专业技术职务和丰富实践经验的校内外导师联合指导。

在职攻读专业学位的探索与实践通过对在职攻读农业推广硕士专业学位的现状、管理模式，以云南农业大学为例介绍了其主要做法与措施，对成效与相关经验进行分析总结，并结合当前对其发展趋势提出建议，旨在为在职攻读农业推广硕士专业学位模式提供参考。

专业学位农业推广硕士研究生教育一、背景介绍为了适应我国社会发展的需要，我国1990年开始设置和试办专业学位教育，经过了20年的发展，到2011年硕士专业学位增至39个，招生人数累计已近百万。

1999年5月，为落实“科教兴国”和“可持续发展”战略，更好地适应我国农业现代化和农村发展对高层次专门人才的迫切需要，完善具有中国特色的学位制度，经国务院学位委员会批准，设置“农业推广硕士（暂定名）”专业学位。

经过十多年的发展，农业推广硕士专业学位教育取得了较好的发展，截至2011年，农业推广硕士专业学位授权单位近百个，年招生人数超过万人，为农业技术推广和农村发展培养了一批高层次、应用型人才，为我国农业现代化和农村发展做出了重要贡献。

现在各高校都在积极探索专业学位的发展模式和对策，本文以云南农业大学发展农业推广硕士专业学位为例，介绍其农业推广硕士专业学位的方法，并就相关模式提出相应的建议以供探讨。

二、云南农业大学农业推广硕士专业学位现状及特色近年来，云南农业大学结合自身实际和区位特点，努力探索适合于地处西南边疆、少数民族众多、农业人口比重大，农科专业学位教育相对滞后等省情的招生、培养、学位授予等教育规律，在专业学位培养模式构建等方面开展了积极的工作，对云南省实施人才强省战略和解决“三农”问题有重要的现实意义和深远的战略作用。

云南农业大学从2002年开始在职人员攻读硕士专业学位教育工作，现有农业推广硕士、兽医硕士和高校教师三种专业学位。

到2011年12月止已授予硕士专业学位641人，其中农业推广硕士专业学位557人、兽医硕士学位66人，高校教师18人。

到2011年12月，在读专业学位研究生1275人（在职攻读农业推广硕士学位1183人），在校科学学位硕士研究生人数1243，规模上与专业学位人数已超过科学学位研究生人数。

湖南农业大学攻读全日制农业推广硕士专业学位研究生培养方案总则(试行)为更好地适应国家经济社会发展对高层次应用型人才的需要，加快研究生培养类型和模式的改革步伐，教育部于2009年启动了全日制专业学位硕士研究生招生工作，这是我国人才培养模式改革的重大步骤。

为做好全日制农业推广硕士专业学位研究生的培养工作，确保质量，根据教育部教研［2009］1号文件《关于做好全日制硕士专业学位研究生培养工作的假设干意见》以及全国农业推广硕士专业学位教育指导委员会颁发的《全日制农业推广硕士专业学位研究生指导性培养方案》〔试行〕，特制订我校《全日制农业推广硕士专业学位研究生培养方案总则》。

一、培养目标和要求1.培养目标农业推广硕士专业学位〔含农业、林业、牧业、渔业推广，下同〕是与农业技术推广和农村发展任职资格相联系的专业学位。

主要为农业技术研究、应用、开发及推广，农村发展，农业教育等企事业单位和管理部门培养具有综合职业技能的应用型、复合型高层次人才。

2.培养要求〔1〕较好地掌握马克思主义、毛泽东思想、邓小平理论和“三个代表”重要思想，深入学习实践科学发展观，拥护党的基本路线、方针、政策，热爱祖国，热爱农业，遵纪守法，品德良好，艰苦奋斗，求实创新，积极为我国农业现代化和农村发展服务。

〔2〕应掌握农业推广领域坚实的基础理论、系统的专业知识，以及相关的管理、人文和社会科学知识；具有较宽广的知识面，较强的专业技能和技术传授技能，具有创新意识和新型的农业推广理念，能够独立从事较高层次的农业技术推广和农村发展工作〔或独立从事相关领域的研究或开发、管理等工作的能力〕。

〔3〕基本掌握一门外国语，能够阅读本领域的外文资料。

二、入学条件招生对象主要为具有学士学位的应届、往届本科毕业生，或在职人员。

报考人员须参加全国统一入学考试和各培养单位组织的复试。

复试重点考察考生的职业素质，专业技能和实践能力。

三、培养方式及学习年限1．采取校内课程学习和校外实践研究相结合的学习方式。