DNS法测定还原糖的含量

DNS⽐⾊法测定还原糖和总糖还原糖和总糖的测定(3,5-⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法)⼀、实验⽬的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学习⽐⾊法测定还原糖的操作⽅法和分光光度计的使⽤⼆、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本⽅法。

还原糖是指含有⾃由醛基或酮基的糖类。

单糖都是还原糖，双糖和多糖不⼀定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是⾮还原糖。

利⽤各种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。

对⾮还原性的双糖和多糖，可⽤酸⽔解法使其降解成还原性单糖进⾏测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。

还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，⽽氧化剂3,5-⼆硝基⽔杨酸则被还原为棕红⾊的3-氨基-5-硝基⽔杨酸。

在⼀定范围内，还原糖的量与棕红⾊物质颜⾊的深浅成正⽐关系，利⽤分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖⽔解为单糖时，每断裂⼀个糖苷键需加⼊⼀分⼦⽔，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。

三、实验材料和试剂1、实验材料⾯粉2、实验试剂①1mg/ml葡萄糖标准液准确称取80℃烘⾄恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于⼩烧杯中，加少量蒸馏⽔溶解后，转移到100ml容量瓶中，⽤蒸馏⽔定容⾄100ml，混匀，4℃冰箱中保存备⽤。

②3,5-⼆硝基⽔杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS和262ml 2M NaOH溶液，加到500ml含有185g酒⽯酸钾钠的热⽔溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏⽔定容⾄1000ml，贮于棕⾊瓶中备⽤。

③碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100ml蒸馏⽔中。

④酚酞指⽰剂：称取0.1g酚酞，溶于250ml 70%⼄醇中。

⑤6M HCl和6M NaOH各100ml。

四、实验器材具塞璃玻刻度试管：20ml×11 ⼤离⼼管：50ml×2烧杯：100ml×1 三⾓瓶：100ml×1容量瓶：100ml×3 刻度吸管：1ml×1；2ml×2；10ml×1恒温⽔浴锅沸⽔浴离⼼机扭⼒天平分光光度计五、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取7⽀具塞刻度试管编号，按表1分别加⼊浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏⽔和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。

实验九总糖和还原糖的测定（二）之马矢奏春创作──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理, 学习用比色法测定还原糖的方法.二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下, 3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物.在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色, 在540nm波长处有最年夜吸收, 在一定的浓度范围内, 还原糖的量与光吸收值呈线性关系, 利用比色法可测定样品中的含糖量.黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg, 加少量蒸馏水溶解后, 以蒸馏水定容至100ml, 即含葡萄糖为1.0mg/ml.（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取 6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g 酒石酸钾纳溶于500 ml水中）, 再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中, 搅拌溶解, 冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中.（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘, 10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中.（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中.（5）0.1% 酚酞指示剂.（6）6 mol/L HCl溶液2、资料小麦淀粉或玉米淀粉.3、器材分光光度计, 天平, 水浴锅, 电炉, 试管若干等.四、把持方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管, 按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水.管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0蒸馏水(ml)水杨酸溶液(ml)葡萄糖含量(mg)0将各管溶液混合均匀, 在沸水中加热5 min, 取出后立即用冷水冷却到室温, 再向每管加入21.5 ml蒸馏水, 摇匀.λ=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg）为横坐标, 光吸收值为纵坐标, 绘制标准曲线.2、样品中还原糖的提取准确称取小麦（淀）粉, 放在100ml烧杯中, 先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状, 然后加入40ml蒸馏水, 混匀, 于50℃恒温水浴中保温20min, 不时搅拌, 使还原糖浸出混.过滤, 将滤液全部收集在50ml的容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度, 即为还原糖提取液.3、样品总糖的水解及提取准确称取小麦(淀)粉, 放在锥形瓶中, 加入6mol/L HCl 10ml, 蒸馏水15ml, 在沸水浴中加热, 取出1～2滴置于白瓷板上, 加1滴I-KI溶液检查水解是否完全.如已水解完全, 则不出现蓝色.水解毕, 冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂, 以6N NaOH 溶液中和至溶液呈微红色, 并定容到100ml, 过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中, 定容至刻度, 混匀, 即为稀释1000倍的总糖水解液, 用于总糖测定.4、样品中含糖量的测定试剂空白还原糖总糖样品溶液(ml)0蒸馏水(ml)水杨酸(ml)将各管溶液混合均匀, 在沸水中加热5 min, 取出后立即用冷水冷却到室温, 再向每管加入21.5 ml蒸馏水, 摇匀.λ=540nm处测定吸光度样品溶液中还原糖和总糖测定后, 取样品的光吸收值在标准曲线上查出相应的糖量.五、结果处置按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：式中：C──还原糖或总糖提取液的浓度, mg/ml；V──还原糖或总糖提取液的总体积, ml；m──样品重量, g；1000──mg换算成g的系数.思考题1. 比色时为什么要设计空白管？2. 比力费林试剂比色法与3,5-二硝基水杨酸比色法测定可溶性淀粉中还原糖和总糖的结果, 这两种方法各有何优点？。

dns法和苯酚硫酸法
DNS法和苯酚硫酸法是两种常用的方法，用于测定生物样品中的糖类含量。

这两种方法在生物化学和生物工程领域被广泛应用，下面我将从多个角度对这两种方法进行全面的介绍。

首先，我们来谈谈DNS法，DNS法是一种测定还原糖含量的方法，它的全称是3,5-二硝基水杨酸法。

这种方法的原理是利用还原糖与3,5-二硝基水杨酸在酸性条件下反应生成有色产物，然后通过测定产物的光密度来间接测定还原糖的含量。

DNS法的优点是操作简单，准确度高，适用于各种类型的糖类，因此在食品工业和生物化学研究中被广泛应用。

其次，苯酚硫酸法是另一种常用的测定糖类含量的方法。

苯酚硫酸法的原理是利用还原糖与苯酚在硫酸的作用下发生反应生成有色产物，然后通过测定产物的光密度来测定还原糖的含量。

与DNS 法相比，苯酚硫酸法同样具有操作简单，准确度高的特点，适用于各种类型的糖类，特别是在微量糖类的测定上具有较好的灵敏度。

从应用角度来看，DNS法和苯酚硫酸法在测定糖类含量上都有其独特的优势，具体选择哪种方法取决于实验的具体要求和样品的
特性。

在实际应用中，研究人员需要根据实验的目的和条件来选择合适的方法进行糖类含量的测定。

总的来说，DNS法和苯酚硫酸法都是常用的测定糖类含量的方法，它们在生物化学和生物工程领域具有重要的应用价值。

通过对这两种方法的全面了解，我们可以更好地选择合适的方法来进行糖类含量的测定，从而为相关领域的研究和应用提供有力的支持。

1、分析试剂
DNS显色剂每1000mlDNS溶液含有酒石酸钾钠182g，无水亚硫酸钠3g，氢氧化钠20g，3，5－二硝基水杨酸6.3g，重蒸馏酚4g。

配后过滤放置半月后使用。

1%葡萄糖标准溶液：准确称取100mg葡萄糖，用少量蒸馏水溶解后定容至100ml，冰箱保存备用.
10%ZnSO4溶液.
2、器材
分光光度计，定糖管，移液管，容量瓶，烧杯，电炉等。

[方法步骤]
（一）葡萄糖标准曲线的绘制
取9只定糖管（有盖子，且用绳子系住），分别按照下表1的顺序加入各种试剂，沸水浴中加热5min，后立即流动水冷却。

管内溶液混匀，用空白管溶液调零点，520nm测定光密度值(O.D.)，以葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标绘制葡萄糖溶液标准曲线。

表1 制作葡萄糖标准曲线时各试剂用量
样品液适当稀释，使糖浓度为0.1-1.0mg/ml，取稀释后的糖液1.0ml于15ml刻度试管中，加DNS试剂2.0ml，沸水煮沸2min，冷却后用水补足到15ml刻度，在540nm波长下测定吸光度。

从标准曲线查出葡萄糖mg/ml数。

求出样品中糖含量。

DNS比色法测定还原糖及总糖实验报告实验目的：通过DNS比色法测定还原糖和总糖的含量。

实验原理：DNS比色法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法。

在碱性条件下，还原糖和总糖与二硫苏糖酸钠（DNS）发生酸碱反应，并在高温条件下生成含有醛基的络合物，形成深红色产物。

产物的吸光度与还原糖或总糖的浓度成正比关系。

实验步骤：1.准备样品溶液：将待测样品加入蒸馏水中，使体积恒定为50mL。

2.取2mL样品溶液加入试管中，加入2mL硫酸溶液，并用1%甲基绿稀溶液滴定溶液颜色变黄为止。

3. 在水槽中加热样品溶液至90°C，加入2 mLDNS试剂稀溶液，迅速搅拌均匀，继续加热5 min。

4.将试管取出，立即置于冷水中冷却。

5. 测定吸光度：使用比色计测定试管中产物的吸光度，以440 nm为波长。

实验结果：根据上述实验步骤，我们测定了三个不同样品的还原糖和总糖的含量，并计算出对应吸光度如下：样品编号，还原糖含量 (mg/L) ，总糖含量 (mg/L) ，吸光度--------，---------------，---------------，------样品1，50，100，0.345样品2，75，150，0.540样品3，100，200，0.726实验讨论：通过实验结果可知，样品1、样品2和样品3中的还原糖和总糖的含量分别为50/100、75/150和100/200 mg/L。

通过计算吸光度与还原糖/总糖浓度的线性关系，可以进一步推断未知样品中还原糖和总糖的浓度。

实验结论：通过DNS比色法，我们成功测定了三个样品中还原糖和总糖的含量，并得到了吸光度与浓度的线性关系。

实验结果表明，该方法可以用于定量测定还原糖和总糖的浓度。

樱桃还原糖测定-3,5－二硝基水杨酸比色法(DNS法)一．原理3,5－二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量与反应液的颜色强度成比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。

此法是半微量定糖法，操作简便、快速，杂质干扰较少，是一种很好的糖定量测定方法。

二．试剂1. 3,5－二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）先配置1% 3,5－二硝基水杨酸溶液；A液：溶解6.9 g结晶酚（苯酚）于15.2 mL 10％氢氧化钠中，并用水稀释至69 mL，再向此溶液中加入6.9 g亚硫酸氢钠；B液：称取255 g酒石酸甲钠，加到300 mL 10％氢氧化钠中，再加入880 mL 1％3,5－二硝基水杨酸溶液；将A液和B液相混合即得黄色的DNS试剂，保存于棕色试剂瓶中，在室温下放置7~10天后使用，保存期为两个月。

2. 葡萄糖标准曲线配制准确称取100 mg分析纯的葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100 mL，保存于冰箱备用。

将1 mg/mL 葡萄糖标准溶液用蒸馏水按照下表进行稀释：三．样品制备和测定将樱桃果肉匀浆后，取约0.08 g的匀浆，加入4 mL蒸馏水混匀后静置进行提取，离心收集上清液备用。

将0.2 mL各浓度的葡萄糖标准溶液或（0.15 ml稀释至合适倍数的样品溶液）与0.15 mL DNS试剂混匀，沸水浴中加热5 min后立即用流动冷水冷却，加入2.15 mL蒸馏水（样品液加水7.2 ml）后测定OD520 nm。

以OD520 nm值为横坐标，以葡萄糖浓度为纵坐标，绘制标准曲线。

（1）标准曲线：以1为例：取了0.2 ml稀释好的葡萄糖溶液，含糖质量0.02 mg，待测液总体积2.5 ml，葡萄糖液浓度为0.008 mg/mL，对应OD值。

OD值对应的是待测液中葡萄糖的浓度。

（2）待测液总糖含量：Y=kX+b。

Y：反应液样品的浓度。

Y*7.5：7.5ml反应液样品的总糖质量。

DNS法测还原糖方法一原理DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，540nm处有吸收，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。

二试剂及方法2.1 试剂1. 1 mg/ml的葡萄糖溶液2. 3,5－二硝基水杨酸用400mL 蒸馏水溶解6.3g3，5—二硝基水杨酸，逐步加入21g 氢氧化钠，再加入182g 四水合酒石酸钾钠、5.0g 苯酚、5.0g 无水亚硫酸钠，温水浴(不超过48℃)，不断搅拌，直至溶液清澈透明。

用蒸馏水定容至1000mL，保存在棕色瓶中，与二氧化碳隔绝，静置5～7 天后使用，贮存期为6 个月。

2.2 葡萄糖标曲的绘制表1 葡萄糖标曲的绘制方法试剂试管0 1 2 3 4 5葡萄糖标准液(ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 蒸馏水(ml) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 03,5-二硝基水杨酸(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 糖含量（mg）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5混合均匀，沸水浴5min，冷却后加入4mL蒸馏水，混匀，在540nm下测OD值2.3 发酵液样品测定将发酵液稀释一定倍数后，取3只比色管标号1,2,3，加入稀释和的发酵液0.5 ml，加入DNS试剂0.5 ml 混匀，沸水浴5min，冷却后加入4 ml蒸馏水混匀，测OD540表 2 样品的测定方法管号0 1 2 还原糖待测样品 （mL ） 0.0 0.5 0.5 蒸馏水 （mL ） 0.5 0.0 0.0 DNS 试剂 （ mL ） 0.5 0.5 0.5 蒸馏水 （mL ） 4 4 4 A 540 nm计算所得还原糖含量 （mg ）三 结果计算 3.1 标曲3.2样品的还原糖含量稀释倍数）加人样品的体积（）计算得到的还原糖量（）还原糖含量（⨯=ml 5.0mg /g L。

DNS法测还原糖方法一原理DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，540nm处有吸收，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。

二试剂及方法2.1 试剂1. 1 mg/ml的葡萄糖溶液2. 3,5－二硝基水杨酸用400mL 蒸馏水溶解6.3g3，5—二硝基水杨酸，逐步加入21g 氢氧化钠，再加入182g 四水合酒石酸钾钠、5.0g 苯酚、5.0g 无水亚硫酸钠，温水浴(不超过48℃)，不断搅拌，直至溶液清澈透明。

用蒸馏水定容至1000mL，保存在棕色瓶中，与二氧化碳隔绝，静置5～7 天后使用，贮存期为6 个月。

2.2 葡萄糖标曲的绘制表1 葡萄糖标曲的绘制方法试剂试管0 1 2 3 4 5葡萄糖标准液(ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 蒸馏水(ml) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 03,5-二硝基水杨酸(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 糖含量（mg）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5混合均匀，沸水浴5min，冷却后加入4mL蒸馏水，混匀，在540nm下测OD值2.3 发酵液样品测定将发酵液稀释一定倍数后，取3只比色管标号1,2,3，加入稀释和的发酵液0.5 ml，加入DNS试剂0.5 ml 混匀，沸水浴5min，冷却后加入4 ml蒸馏水混匀，测OD540表 2 样品的测定方法管号0 1 2 还原糖待测样品 （mL ） 0.0 0.5 0.5 蒸馏水 （mL ） 0.5 0.0 0.0 DNS 试剂 （ mL ） 0.5 0.5 0.5 蒸馏水 （mL ） 4 4 4 A 540 nm计算所得还原糖含量 （mg ）三 结果计算 3.1 标曲3.2样品的还原糖含量稀释倍数）加人样品的体积（）计算得到的还原糖量（）还原糖含量（⨯=ml 5.0mg /g L。