生物学基础实验技能讲义

基础实验技能培训实验操作手册2014-08植物基因组DNA提取实验材料：植物样本，植物基因组DNA提取试剂盒，β-巯基乙醇，氯仿，无水乙醇实验仪器、耗材：移液器、电泳仪、离心机、研钵、研钵棒、剪刀、天平、液氮实验前准备：1．Buffer GP1在使用前请加入β-巯基乙醇，5 ml Buffer GP1加5 μl β-巯基乙醇。

加入β-巯基乙醇的Buffer GP1室温可保存1个月。

2．预热水浴锅65度，将加入配制好的巯基乙醇预热。

3．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。

4．称取植物样本约100 mg。

5．在研磨植物材料前，向研钵中倒入酒精，放入剪刀、钥匙高温消毒。

6．研钵、剪刀、钥匙冷却后，将液氮加入在研钵中以预冷研钵。

实验步骤：1. 取植物新鲜组织约100 mg，用剪刀将样本剪碎，放入研钵，加入液氮充分研磨至粉末状。

将粉末转移到离心管中。

注意：冻存材料直接研磨，绝对不能化冻。

而且粉末应在化冻前转移，否则内源性DNase 有可能降解基因组DNA。

2. 加入700 μl 65℃预热的Buffer GP1（Buffer GP1在使用前请加入β-巯基乙醇，5 ml BufferGP1加5 μl β-巯基乙醇），迅速颠倒混匀后，将离心管置于65℃水浴20分钟，水浴过程中颠倒离心管混匀样品数次。

3. 加入700 μl 氯仿，充分混匀，12,000 rpm（～13,400×g）离心5分钟。

小心将上层水相转入一新的离心管中，加入700 μl Buffer GP2，充分混匀。

4. 将上步所得溶液全部加入到已装入收集管（Collection Tube）的吸附柱（Spin Column DM）中。

若一次不能加完溶液，可分多次转入。

10,000 rpm（～11,500×g）离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

5. 向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），10,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

目录前言 (1)第一部分植物组织培养技术实验一组织培养实验室基本设备及其用途的识别 (3)实验二培养基母液的配制 (7)实验三 MS培养基配制与灭菌 (11)实验四外植体选择、消毒灭菌和接种 (14)实验五外植体无菌培养和愈伤组织继代、增殖 (15)实验六分化成苗、生根和驯化移栽…………………………………………第二部分动植物标本制作技术实验六动物剥制标本的制作 (16)实验七动物骨骼标本的制作 (19)实验八植物蜡叶标本的制作 (21)第三部分现代生物分子技术实验九真核生物高分子量DNA制备 (23)实验十琼脂糖凝胶电泳技术 (25)实验十一 PCR基因扩增技术 (26)第四部分食用菌栽培技术实验十二食用菌的母种制作及扩大培养 (27)实验十三食用菌的原种制作 (29)实验十四食用菌的栽培种及栽培技术 (31)参考教材 (32)第一部分植物组织培养技术植物组织培养是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化并形成完整植株的过程。

其理论依据是植物细胞具有全能性。

组织培养的特点是：取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制。

组织培养不但是进行细胞学、遗传学、育种学、生物化学和药物学等学科研究的重要手段；而且在农学、园艺、林业和次生代谢产物工程等生产领域得到广泛的应用。

实验一组织培养实验室基本设备及其用途的识别一、目的1.认识植物组织培养实验室的基本结构，必须的基本设备及其用途、方法。

2.认识植物组织培养必需的仪器、器皿，几种主要设备的使用方法、常用几种药剂的配制。

二、实验室的基本结构（一）准备室（工作室）：要求明亮，通风。

准备室的任务很繁重，器皿洗涤，培养基药品称量、配制、分装、高压灭菌；植物材料的预处理，重蒸馏水的制备以及进行生理、生化因素的分析等各种操作都要在此室中进行。

实验一革兰氏染色实验一、目的要求1、学习并初步掌握革兰氏染色法2、了解革兰氏染色的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。

二、基本原理革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。

它是1884年由丹麦医师Gram创立的。

革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。

细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。

革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。

革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorising agent）和复染液（counterstain）。

碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet）。

媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine）是常用的媒染剂。

脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95％的酒精（ethanol）。

复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，从而将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液是番红。

基础生物学实验讲义（生命科学类本科生使用）广西大学行健文理学院实验一普通光学显微镜的使用与生物绘图一、实验目的1. 了解普通光学显微镜的基本构造，能规范和较熟练地使用；2. 学习细胞临时装片的制作方法和生物绘图的方法。

二、实验材料细菌涂片三、实验用具显微镜、载玻片、盖玻片、胶头滴管四、实验内容1、普通光学显微镜的基本构造、使用方法及保护显微镜的基本结构显微镜构造很复杂，种类很多，但基本结构是由机械和光学两大部分构成，现分述如下：1.1 机械部分它是为光学部分服务的部件，包括以下六部分：(1) 镜座：显微镜最下面呈马蹄形或圆形的部分，起稳定和支持显微镜作用。

(2) 镜柱：直立于镜座上的短柱，支持显微镜的其它部分。

(3) 镜臂：弯曲成马蹄形的部分，便于手持，下端与镜柱相连接的地方有一个倾斜关节，可使镜臂倾斜，便于观察。

(4) 载物台：自镜臂下端向前伸出，放置标本用的平台，其中央有一个园孔，叫通光孔。

台上有一移动器（老式的左右各有一个压片夹），用以固定和移动标本。

(5) 镜筒：和镜臂上方连接的园筒部分。

有的显微镜镜筒内有一抽管，可适当抽长，一般长度是160-170mm。

镜筒上端装有目镜，下端有一个可转动的园盘，叫物镜转换器（或叫物镜旋转盘），其上装有2-4 个物镜。

(6) 调焦器（调节器或调节螺旋）：为镜壁上两种可转动的螺旋，一大一小，能使镜筒上下移动，调节焦距。

大的叫粗调焦器，升降镜筒较快，用于低倍镜对焦；小的叫细调焦器，升降镜筒较慢。

1.2 光学部分由接目镜、接物镜、反光镜、聚光器等四部件组成。

(1) 接目镜：装于镜筒上方，由两组透镜构成，接目镜的作用是把接物镜所形成的倒立实像再放大成为一个虚像。

接目镜上刻有5×，8×，10×，15×，25×等符号，表示放大倍数。

我们所观察到的标本的物像，其放大倍数是接物镜和接目镜放大倍数的乘积。

如接物镜是10×，接目镜是8×，其物像的放大倍数是10×8＝80 倍。