三角帆蚌热休克蛋白60基因克隆及其表达分析

热休克蛋白60基因定点诱变导致其在细胞内定位的改变王银;游丽琴;李云鸿;滕鹏;成文静;张玉梅;苗珍花;蒲静;马娇;张楠【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2011(033)007【摘要】目的研究将热休克蛋白60(HSP60)蛋白序列中第70位的丝氨酸(serine)突变为丙氨酸(alanine)后,HSP60在细胞内定位的改变.方法将PrC/CMV -HSP60P1重组质粒中HSP60P1编码第70位丝氨酸的碱基定点诱变为编码丙氨酸的碱基序列,转染至小胶质细胞BV -2细胞株中表达.细胞经10h缺氧处理后,裂解细胞,应用差速离心方法分离细胞膜、细胞质和线粒体,应用Western- blot方法检测各细胞器中HSP60的含量.结果在转染未诱变PrC/CMV - HSP60P1质粒的细胞中,正常情况下,HSP60大部分分布在线粒体,少部分在胞浆,细胞膜中未见表达；缺氧刺激后,HSP60在细胞膜、胞浆和线粒体中均有表达；然而70位丝氨酸突变为丙氨酸后,只观察到HSP60在胞浆和线粒体中的表达,而在细胞膜上未见表达.结论作为磷酸化位点的Serine70对HSP60在细胞内的定位具有关键作用.【总页数】4页(P609-611,618)【作者】王银;游丽琴;李云鸿;滕鹏;成文静;张玉梅;苗珍花;蒲静;马娇;张楠【作者单位】宁夏医科大学科学技术中心,银川750004;宁夏医科大学基础医学院神经生物系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院医用化学系,银川750004;宁夏医科大学科学技术中心,银川750004;宁夏医科大学基础医学院神经生物系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院神经生物系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院医用化学系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院医用化学系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院医用化学系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院医用化学系,银川750004【正文语种】中文【中图分类】R345.05【相关文献】1.pEGFP-HuR真核表达载体的构建及热休克刺激后细胞内定位的改变 [J], 于文燕;艾斯克·吐拉洪;周宁;买买提祖农·买苏尔;罗海华;张传丽;孙宏卫;孙湛;马小娟2.缺氧缺血新生鼠脑组织谷氨酸及脑细胞内钙改变和降钙素基因相关肽的保护作用[J], 唐兰芬;王优;黄宇戈;黄秀兰;侯敢3.科学家揭示人类基因组“暗物质”——可帮助定位导致疾病的基因突变 [J],4.人体细胞内线粒体基因变异可导致衰老 [J], 巴木;文仪5.应力导致的细胞内信号转导和基因表达变化 [J], 尚娟芳;王远亮;唐丽灵;牛旭锋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

三角帆蚌钙网蛋白基因cDNA的全长克隆与表达分析舒妙安;胡杭娇;陆晶莹;徐宾朋;王岩;刘广绪;郭晓令【期刊名称】《水生生物学报》【年(卷),期】2013(000)006【摘要】采用同源克隆策略和RACE技术,从三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)外套膜组织中成功克隆得到钙网蛋白(Calreticulin, CRT)基因的全长cDNA序列,共1838 bp,开放阅读框为1257 bp,编码418个氨基酸,5′端非编码区为75 bp,3′端非编码区为506 bp,基因序列提交GenBank的登录号为JX416227。

生物信息学分析表明,三角帆蚌钙网蛋白基因具有一段信号肽序列、两条典型的钙网蛋白家族标签序列 KHEQNIDCGGGY和IMFGPDICG、三个保守的 N-、P-和 C-端功能域及内质网前导序列 HDEL。

NJ 法系统进化分析显示三角帆蚌首先与海洋双壳类紧密聚在一起,且与蚯蚓等环节动物亲缘关系较近,聚为一支,然后依次与虾类、昆虫、鱼类、两栖类、哺乳类聚在一起。

经荧光定量 PCR 检测,钙网蛋白基因在三角帆蚌的外套膜、闭壳肌、斧足、鳃、肝脏、性腺、心脏、肠等8个组织中均有表达,其中在外套膜、鳃和斧足等与贝类钙代谢相关的组织中表达量较高预示其可能参与三角帆蚌的钙代谢。

不同 Ca2+浓度处理试验的结果表明,随着水体中 Ca2+浓度逐渐升高,三角帆蚌钙网蛋白基因在外套膜中的表达水平呈先上升后下降的趋势,并在60 mg/L 时达到最高峰,表明适宜的 Ca2+浓度可促进钙网蛋白基因表达,而过高的Ca2+浓度则会抑制其表达。

同时在60 mg/L Ca2+浓度条件下,对三角帆蚌外套膜进行不同时间的表达试验,结果表明钙网蛋白基因的表达量随时间推移先上升,并于48h达到最大表达量,而后逐渐下降。

上述结果为进一步深入研究钙网蛋白基因的功能及其调控机理奠定基础。

%The full-length cDNA sequence of CalreticulinCRT gene was isolated from the mantle of Hyriopsis cumingii by using homology cloning strategy and SMART RACE technique. The entire CRT cDNA was 1838 bp, containing a 1257 bp complete open reading frame which encoding a protein with 418 amino acids, a 75 bp 5′UTR, and a 506 bp 3′UTR (GenBank accession number is JX416227). Bioinformatics analysis indicated that the calreticulin gene had a sig-nal peptide, two typical calreticulin family labels (KHEQNIDCGGGY and MFGPDICG), three conserved domains (N-, P-, and C-), and the endoplasmic reticulum retrieval sequence HDEL. Phylogenetic analysis indicated that the CRT gene of H. cumingii was closely related to seawater bivalves, followed by that of annelidas and then fish, amphibians, and mammals. Real-time PCR revealed that CRT gene was ubiquitously expressed in all tested tissues, but far more abun-dant in tissues that closely relating to calcium metabolism such as mantle, gill and foot. This result indicates an intrin-sical relationship between CRT gene and calcium metabolism in H. cumingii. When exposed to a serie of increasing Ca2+, the mRNA expression of CRT gene in mantle was shown to be bell-shaped, ascending when Ca2+concentration was less than 60 mg/L and descending whenCa2+concentration was greater than 60 mg/L. The result that CRT gene expression reached its maxium when exposed to 60 mg/L Ca2+, suggesting appropriate Ca2+concentration would stimulate the ex-pression of CRT gene. Moreover, as the Ca2+(60 mg/L) exposure time increased, the CRT gene expression in mantle was shown to increase initially, reach its peak at 48h, and then decrease subsequently. The resultsof present study will provid useful information for further studies on function and regulation mechanism of CRT gene.【总页数】8页(P999-1006)【作者】舒妙安;胡杭娇;陆晶莹;徐宾朋;王岩;刘广绪;郭晓令【作者单位】浙江大学动物科学学院，杭州310058;浙江大学动物科学学院，杭州310058;浙江大学动物科学学院，杭州310058;浙江大学动物科学学院，杭州310058;浙江大学动物科学学院，杭州310058;浙江大学动物科学学院，杭州310058;浙江大学动物科学学院，杭州310058【正文语种】中文【中图分类】Q781【相关文献】1.三角帆蚌钙调蛋白(CaM)基因的cDNA序列克隆与表达分析 [J], 李文娟;李倩;祁晓翔;尚朝;周子睿;施志仪2.三角帆蚌肌球蛋白必需轻链基因(MELC)的cDNA全长克隆与表达分析 [J], 舒妙安;胡杭娇;陆晶莹;徐宾朋;王岩;刘广绪;郭晓令3.三角帆蚌HcCUBDC基因cDNA的全长克隆与表达分析 [J], 罗红瑞;白志毅;刘晓军;李清清;董绍建;曾仕梅;李家乐4.三角帆蚌钙网蛋白基因cDNA的分子特征与表达分析 [J], 夏秀琳;汪桂玲;白志毅;李家乐5.一种三角帆蚌肌浆网Ca2+-ATP酶基因cDNA的全长克隆与表达分析 [J], 张爱菊;刘士力;刘金殿;张根芳;周志明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

三角帆蚌钙调蛋白(CaM)基因的cDNA序列克隆与表达分析李文娟;李倩;祁晓翔;尚朝;周子睿;施志仪【摘要】[目的]研究三角帆蚌钙调蛋白(CaM)基因在育珠和非育珠蚌各组织中的表达和不同Ca2+浓度下外套膜中的表达变化.[方法]通过RACE技术,以我国重要的淡水珍珠贝——三角帆蚌为研究客体,克隆了CaM的cDNA全长,并通过Real-Time Q-PCR技术分析了该基因在育珠和非育珠蚌各组织中的表达和不同Ca2+浓度下外套膜中的表达变化.[结果]三角帆蚌CaM基因cDNA全长659bp,包括70 bp的5'UTR,299 bp的3'UTR和447 bp的ORF,编码149个氨基酸,预测其分子量为16.8 kDa,等电点为4.14.cDNA序列比对信息表明三角帆蚌与池蝶蚌、合浦珠母贝间均具有57％的相似度,而其蛋白具有高度的保守性,除斑马鱼外,各生物CaM相似率达97％.定量数据表明,CaM基因广泛表达于三角帆蚌各组织,外套膜内膜与腮中表达量显著升高(P＜0.05),其次是外套膜外膜和内脏团组织.插核育珠能增加该基因在各组织的表达,特别是在外套膜外膜和鳃组织中,育珠蚌该基因的表达显著高于非育珠蚌(P＜0.05).此外,水体Ca2+浓度的增大对CaM基因表达有显著的影响,外套膜内膜该基因的表达随Ca2+浓度升高而增加,而外套膜外膜1.25 mmol/L Ca2+浓度下该基因的表达水平显著高于0.50 mmol/L、3.00 mmol/L 组(P＜0.05).[结论]为进一步深入研究钙调蛋白基因的在珍珠生长过程中的功能及其调控机理奠定了分子基础.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2014(000)022【总页数】5页(P7310-7314)【关键词】三角帆蚌;CaM;序列克隆;基因表达【作者】李文娟;李倩;祁晓翔;尚朝;周子睿;施志仪【作者单位】上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海201306;上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海201306;上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海201306;上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海201306;上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海201306;上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海201306;上海市高校水产养殖学E-研究院,上海海洋大学,上海201306【正文语种】中文【中图分类】S188钙调蛋白(Calmodulin protein，CaM)是存在于生物体内含量最丰富的钙离子结合蛋白，广泛存在于所有真核细胞中，参与细胞钙代谢、离子转运、细胞分泌、细胞增殖与分化、基因表达、防御反应等重要生理过程的调节［1－2］。

三角帆蚌theromacin基因克隆及其表达分析李耀国;苏建明;刘巧林;肖调义【期刊名称】《湖南文理学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(23)4【摘要】为了构建一个theromacin抗菌肽基因(theromacin)融合表达载体并使其成功表达,通过RT-PCR扩增出三角帆蚌theromacm的开放阅读框序列,将其亚克隆到pUCm-T载体中,转Escherichia coli DHSa,经菌液PCR初步检测及测序验证后同pET32a(+)载体经酶切、纯化及连接,转入到大肠杆菌Escherichia coliBL21 (DE3)中,测序验证后得到融合表达质粒pET32a(+)-Ther.在37℃条件下,OD600为0.8时用1 mmol/L IPTG诱导8h之后SDS-PAGE电泳检测.结果表明:扩增出的开放阅读框序列大小为294 bp,编码97个氨基酸.pET32a(+)空载体表达出约为19kDa大小的产物,含目的基因的pET32a(+)-Ther表达出大小约为29 kDa的融合表达目的条带.实现了theromacin在大肠杆菌中的成功表达,并为进一步研究theromacin的功能奠定了基础.【总页数】5页(P65-69)【作者】李耀国;苏建明;刘巧林;肖调义【作者单位】湖南农业大学动物科学技术学院水生生物学实验室,湖南长沙,410128;湖南农业大学动物科学技术学院水生生物学实验室,湖南长沙,410128;湖南农业大学动物科学技术学院水生生物学实验室,湖南长沙,410128;湖南农业大学动物科学技术学院水生生物学实验室,湖南长沙,410128【正文语种】中文【中图分类】Q785【相关文献】1.三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)叉头蛋白2(foxl2)基因和性别决定框14(sox14)基因克隆与表达分析 [J], 叶容晖;任海波2.三角帆蚌热休克蛋白70基因克隆及其表达分析 [J], 吴圣楠;隗黎丽;李海军;付建平;刘毅3.三角帆蚌短型肽聚糖识别蛋白S3基因克隆及表达分析 [J], 李海军;张建强;吴圣楠;隗黎丽;刘毅4.三角帆蚌热休克蛋白60基因克隆及其表达分析 [J], 吴圣楠;刘大伟;刘毅;胡宝庆;张建强;王艳;王婷5.背角无齿蚌抗菌肽theromacin基因cDNA全序列克隆及表达分析 [J], 张果苹;汪桂玲;郭诗照;白志毅;李家乐因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

三角帆蚌CypA基因的克隆及其在嗜水气单胞菌感染后的表达分析夏虎;雷婷;杨品红;刘良国;余嘉;张运生;邓以国;陈福艳;陈秀荔;贺欢乐【期刊名称】《水生生物学报》【年(卷),期】2024(48)5【摘要】为研究亲环蛋白A(Cyclophilin A,CypA)在三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)免疫系统中的作用,研究利用PCR与RACE技术克隆获得三角帆蚌CypA 基因全长cDNA序列(基因序列登录号:MN121742)。

三角帆蚌CypA基因cDNA 序列全长1237 bp,其5′非编码区(UTR)长度为57 bp,3′非编码区长度为688 bp,三角帆蚌CypA基因的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)长度为492 bp,编码164个氨基酸,CypA蛋白质理论等电点为8.9,相对分子量为17.29 kD。

在GenBank中进行同源序列检索,三角帆蚌CypA氨基酸序列与其他贝类CypA的相似性依次为池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)(99.39%)、青蛤(Cyclinasinensis)(77.44%)、菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)(78.05%)、近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)(78.66%)和大竹蛏(Solen grandis)(75.05%)。

通过SWISS-MODEL预测三角帆蚌CypA含有8个β折叠和2个α螺旋,可能形成CypA的活性中心区域。

利用MEGA 5.1软件将三角帆蚌CypA与其他物种CypA 基因进行序列比对并构建系统进化树,分析发现三角帆蚌CypA与池蝶蚌的CypA聚为一支,其与池蝶蚌CypA具有最近的亲源关系。

通过qRT-PCR检测CypA基因在三角帆蚌不同组织中表达,发现三角帆蚌性腺中CypA基因的表达量最高,肝脏、肾和鳃中的表达量次之。

对三角帆蚌浸泡感染嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),CypA基因在肝脏、性腺、肠和鳃中的表达水平在感染72h先升高后降低,其表达量在性腺和鳃中6h最高,肝脏中12h达到峰值,肠中24h达到最高值,表明三角帆蚌感染嗜水气单胞菌后,可显著诱导CypA基因的表达。

三角帆蚌Nacrein基因克隆、蛋白提纯及其对珍珠晶体成型的影响韩健;李文娟;施志仪;郝莹莹;靳雨丽【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2010(000)012【摘要】为研究三角帆蚌Nacrein蛋白对珍珠晶体成型的影响,通过巢式及3'-RACE PCR对三角帆蚌基质蛋白Nacrein基因3'端序列进行克隆,得到850 bp碱基片段,分析表明其与合浦珠母贝同源基因序列相似度为56%,与马氏珠母贝相似度为50%.试验通过水提法初步分离出珍珠质水溶性基质蛋白,并采用快速蛋白液相色谱(fast protein liquid chromatography,FPLC)分离出分子量约为60 kD的Nacrein蛋白.此外,采用配对试验设计,对试验组外套膜组织培养样品加入Nacrein 蛋白,研究Nacrein蛋白对晶体成型的影响,结果显示,加入Nacrein蛋白的试验组结晶成棱形状;而未加Nacrein蛋白的对照组结晶成雪花状,而且在晶体形成的时间上,试验组也较之对照组要旱.研究表明,Nacrein蛋白能加速外套膜组织分泌的钙质形成棱状结晶,从而对晶体成型产生影响.本研究为进一步研究基质蛋白对生物矿化的作用提供试验依据,对珍珠培育生产有一定指导意义.【总页数】5页(P137-141)【作者】韩健;李文娟;施志仪;郝莹莹;靳雨丽【作者单位】上海海洋大学,农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海,201306;上海海洋大学,农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海,201306;上海海洋大学,农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海,201306;上海海洋大学,农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海,201306;上海海洋大学,农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海,201306【正文语种】中文【相关文献】1.人γ晶体蛋白的一级结构测定I.γ晶体蛋白的分离提纯及其顺序测定方法(GC／MS法)的研究 [J], 程志青;曾奇;潘苏华;吴开力2.三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)叉头蛋白2(foxl2)基因和性别决定框14(sox14)基因克隆与表达分析 [J], 叶容晖;任海波3.三角帆蚌热休克蛋白70基因克隆及其表达分析 [J], 吴圣楠;隗黎丽;李海军;付建平;刘毅4.三角帆蚌短型肽聚糖识别蛋白S3基因克隆及表达分析 [J], 李海军;张建强;吴圣楠;隗黎丽;刘毅5.硫酸铜对三角帆蚌的珍珠质量及外套膜与珍珠囊细胞的影响 [J], 肖永清;石安静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。