医学免疫学实验课件-实验五 设计性实验共30页

医学课件 5
【实验结果】
吞噬细菌的中性粒细胞 数 吞噬百分率 100% 观察记录的吞噬细胞总 数
被吞噬的细菌总数 吞噬指数 观察记录的吞噬细胞总 数
医学课件
6
【实验思考】 1、在吞噬细胞中发现细菌时， 如何区别吞噬的细菌和粘附在吞噬 细胞表面的细菌？ 2、简述机体非特异性免疫的概 念及特点。
3．用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以 采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。 用另一载玻片一端取适量血液加入抗抗A分型 试剂，并混匀；用另一端再取适量血液加入 抗抗B分型试剂，并混匀。用干棉签止血。 4．观察红细胞有无凝集发生。如有凝集， 可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均 匀分散。判定结果后把玻片放入消毒液中。
医学课件 27
【实验结果】 将玻片对着强光源，先观察 AFP 阳性 血清孔与抗体孔之间的白色沉淀线，然 后再观察待检血清孔与抗体孔之间是否 也有沉淀线出现，如有沉淀线，则表示 AFP试验阳性，否则AFP试验为阴性。
医学课件
28
【注意事项】 1 ．电泳时电流不宜过大，以免蛋白 变性。 2 ．抗原和抗体的电极方向不能搞错。 3 ．抗原和抗体的浓度要适当，抗原 太浓或太稀都不易出现沉淀线。 4 ．电泳所需时间与孔间距离有关， 距离越大，电泳时间越长。
血红蛋白吸管凹玱片载玱片采血针微量加样器湿盒显微镜恒温培养箱75酒精棉签香柏油二甲实验方法1用微量加样器吸叏肝素20ul加入洁净凹玱片2用酒精棉签消毒手指后刺破皮肤以血红蛋白吸管叏血40ul立即放入盛有肝素癿凹玱片凹孔内并充分混匀
免疫学实验课件
生化与免疫学实验室
医学课件
1
中性粒细胞的吞噬作用
【实验目的】
医学课件
31
【实验原理】 人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）包括淋 巴细胞和单核细胞。单个核细胞的体积、 形态和比重与外周血其他细胞不同。因此 利用一种介于1.075～1.090之间而近于等 渗的聚蔗糖-泛影葡胺（ficoll-hypaque） 混合分离液作密度梯度离心，离心后不同 比重的血细胞在分离液中呈梯度分布。从 而分离出PBMC。

饲料与饮水
提供适宜的饲料和清洁饮水，保证动物获得足够的营养和水分。
动物观察
定期观察动物的生命体征和精神状态，及时发现和处理异常情况。
03
免疫学实验方法与技术
抗原制备与纯化
抗原制备
抗原的制备是免疫学实验的重要步骤，包括提取、纯化和修 饰等过程。
抗原纯化
通过物理、化学或生物学方法去除抗原中的杂质，提高抗原 的纯度和免疫原性。
免疫接种与免疫途径
免疫接种方式
包括注射、口服、鼻内等不同接种方式，选择合适的接种方式可以提高免疫效 果。
免疫接种剂量
免疫接种剂量对免疫效果有重要影响，剂量不足可能无法产生足够的免疫反应， 而剂量过大则可能引起免疫病理反应。
免疫检测方法与试剂
01
02
03
抗体检测
通过酶联免疫吸附试验 （ELISA）、免疫荧光等 技术检测抗体。
实验动物分组方法
随机分组
将实验动物随机分配到不同的实验组和对照组，保证 各组间动物数量和特征相似。
根据体重分组
根据实验动物的体重进行分组，确保各组间动物体重 相似。
根据性别分组
根据实验动物的性别进行分组，以排除性别对实验结 果的影响。
实验动物饲养管理
饲养环境
提供适宜的饲养环境，包括温度、湿度、光照和通风等。
建立与人类自身免疫性 疾病相似的动物模型， 用于研究疾病的发生和 发展过程。
通过检测免疫细胞、细 胞因子和抗体等指标， 了解免疫反应的特点和 变化规律。
对动物模型进行治疗试 验，评估不同药物对疾 病的治疗效果和安全性 。
探究自身免疫性疾病的 发病机制，为开发新的 治疗策略提供理论依据 。
案例四：移植免疫的实验设计
抗原检测

思考题 1.试述血清学反应、凝集反应的概念。 2.简述凝集反应的类型、用途及实例。 3.如何判断ABO血型检测结果？
4大经典免疫实验
（3）补体结合反应 （4）中和反应 （5）免疫标记技术
实验一 凝集反应
一、目的要求
1.掌握血清学反应概念、特点。 2.熟悉凝集反应的概念、常用凝集反应 的实验方法及结果判定。 3.了解凝集反应的原理、类型及其用途。
二、实验内容 1.直接凝集试验(玻片法)
——ABO血型鉴定(每人做) 2.间接凝集试验
（二）间接乳胶凝集试验 —类风湿因子检测 类风湿关节炎患者血清中存在： 变性IgG — Ag 抗变性IgG抗体(类风湿因子) — Ab 临床上用检测类风湿因子以辅助诊断
类风湿关节炎。
1.材料 已知Ag：致敏乳胶(乳胶颗粒表面有变性IgG) 待测Ab：待检血清中的类风湿因子
待测Ab
已知Ag
2.检测步骤： (1)取黑底纸片三片； (2)加待测血清、阳性和阴性对照血清各1滴； (3)各加1滴致敏乳胶,用牙签混匀； (4)5分钟后观察结果，以黑背景观察为佳。
乳胶——间接乳胶凝集试验 用途：检测类风湿因子等。
间接凝集抑制试验 ——妊娠试验
（已知） （已知）
（已知） （已知）
反向间接凝集试验 ——某些传染病和原发性肝癌的早期诊断。
四、实验操作内容
（一）玻片法—— ABO血型鉴定（每人做）
用已知血型Ab,测未知血型Ag；为定性实验。
ABO血型系统
血型 红细胞表面的血型Ag 血清中的血型Ab
二、免疫实验课目的 1.验证所学理论知识。 2.训练基本操作技能，培养独立工作能力。
三、要求 1.严肃认真。 2.多想、多看、多做。 3.当堂完成实验报告。

用途：诊断肠热症(Widal reaction) 诊断布氏菌病(Wright reaction)
2、间接凝集反应
(1)间接凝集试验 已知可溶性Ag包被载体,检测未知Ab。 例如：间接乳胶凝集试验检测类风湿因子等。
(2)反向间接凝集试验 已知Ab包被载体,检测未知可溶性Ag 例如：某些传染病和原发性肝癌的早期诊断验
免疫学试验注意事项
1、必须穿白大衣进实验室；
2、实验中注意实验室秩序，禁止喧哗打闹； 3、爱惜实验器材，如发生损坏应及时报告； 4、节约实验药品； 5、实验结束后，要回收的玻璃器材如载玻片等， 放于指定容器内；废品弃于垃圾袋内，严禁丢弃 在水槽中。 6、实验完毕，清理桌面，班长安排清洁，老师检 查后，做清洁同学方可离开。
试验报告书写格式
试验题目
1、试验主要步聚； 2、试验结果； 3、结论； 4、讨论。
血清学反应：
即体外进行的Ag-Ab反应，由于抗体主要 存在于血清中，故又称血清学反应。
特点： (1)高度特异性； (2)分子表面的可逆性结合； (3)Ag、Ab比例合适才会出现肉眼可见的反应。
肉眼可见的 凝集物。
4、注意事项
(1) RBC悬液浓度 2-5%； (2) 牙签搅拌混匀时，不能使抗A和抗B血
清混合； (3)在白色背景上观察效果好。
(二)类风湿因子检测
间接乳胶凝集试验 Ag: 变性IgG Ab: 抗变性IgG(类风湿因子)
方法：
A、取一乳胶凝集实验反应板； B、加待测血清、阳性和NS对照各一滴； C、各加一滴致敏乳胶； D、5分钟后观察结果。
乳胶凝集如细沙状。 以黑背景观察为佳。
颗粒性抗原： 凝集反应
光镜下可见，肉眼观呈混浊悬液，如细菌、 RBC等。

02
实验二：免疫细胞的分离与培 养
Chapter
免疫细胞的分离方法
将细胞悬液种植在特定培养皿上 ，只有贴壁生长的细胞能够继续 繁殖，常用的有T细胞分离培养法 和B细胞分离培养法。
利用荧光标记抗体和细胞表面抗 原的特异性结合，通过荧光检测 系统对细胞进行快速分选和计数 。
密度梯度离心法 贴壁筛选法 磁珠分离法 流式细胞术
培养条件
适宜的温度、湿度、气体环境等 ，以保证细胞的正常生长和代谢 。
01 02 03 04
生长因子
刺激细胞生长和分裂的蛋白质， 如白细胞介素、集落刺激因子等 。
传代培养
当细胞密度达到一定水平时，需 要进行传代培养，即将细胞分散 并重新种植在新的培养器皿中。
免疫细胞的功能检测
增殖能力检测
通过检测细胞分裂的速率来评估细胞的增殖能力，常用方 法有MTT法和BrdU法。
抗原提呈细胞（APC）表面的共刺激 分子与T细胞表面的受体结合，提供 必要的共刺激信号，促使T细胞活化 。
细胞因子作用
如白介素（IL）、干扰素（IFN）、肿 瘤坏死因子（TNF）等细胞因子，可 与免疫细胞表面的受体结合，促进细 胞活化。
免疫细胞的分化过程
初始T细胞分化
在抗原刺激和细胞因子的作用下，初始T细胞分化为不同 亚型的效应T细胞，如Th1、Th2、Th17等。
04
血清的收集和分离是在免疫反应达到高峰后进行的，通常采用离心、 沉淀等方法将免疫血清与其它成分分离，得到纯净的免疫血清。
免疫血清的效价测定
01 02 03 04
效价测定是评估免疫血清免疫效果的重要手段，通常采用抗原-抗体 反应的方法进行测定。
效价测定的方法包括间接凝集试验、间接酶联免疫吸附试验、中和试 验等多种，根据抗原和抗体特性选择合适的方法。

《医学免疫学实验》PPT课 件
contents
目录
• 引言 • 实验材料与方法 • 实验结果与分析 • 结论与展望 • 参考文献
01
引言
实验目的
掌握医学免疫学实验 的基本原理和技术。
培养学生对医学免疫 学的兴趣和探究精神 。
了解免疫学在医学中 的应用和价值。
实验背景
医学免疫学是研究人体免疫系统 的结构和功能的科学，是医学领
实验结果一
通过ELISA方法检测了血清中IgG 的浓度，发现实验组与对照组之
间存在显著差异。
实验结果二
利用流式细胞术检测了T细胞亚 群的比例，发现实验组中CD4+ 和CD8+T细胞的比例与对照组有
所不同。
实验结果三
通过斑点试验检测了细胞因子IL2的产生，发现实验组细胞培养 上清中的IL-2浓度明显高于对照
文献
作者4，文章标题4，发表年份4，刊物名称4。
感谢您的观看
THANKS
流式细胞术
利用荧光标记的抗体检测细胞表面 或内部的抗原。
实验步骤
样本准备
采集实验动物或组织样 本，进行适当的处理和
固定。
免疫染色
按照实验方法要求，进 行抗体标记和抗原抗体
反应。
结果观察
通过显微镜或相关仪器 观察实验结果，记录数
据。
结果分析
对实验数据进行整理和 分析，得出结论。
03
实验结果与分析
实验结果
培养具备国际视野和创新能力的免疫 学人才，提升我国免疫学研究的国际 地位。
关注免疫学在疾病预防、诊断和治疗 中的应用，为人类健康事业做出贡献 。
05
参考文献
文献
作者1，文章标题1，发表年份1，刊物名称1。

两个主要亚群。CD4+ T细胞主要参与体液免疫应答，而CD8+ T细胞
则主要参与细胞免疫应答。
03
记忆T细胞的生成
在初次免疫应答后，部分T细胞会分化为记忆T细胞，当再次遇到相同抗
原时，记忆T细胞能迅速增殖并分化为效应T细胞，从而加速和增强免疫
应答。
16
B淋巴细胞发育和分化过程
骨髓内的发育
B淋巴细胞起源于骨髓中的造血干细胞，经过一系列发育和分化过程，最终成为成熟的B细胞。 在此过程中，B细胞获得表达特异性抗体的能力。
适应性免疫系统及其作用机制
2024/3/27
15
T淋巴细胞发育和分化过程
2024/3/27
01
胸腺内的发育
T淋巴细胞起源于骨髓中的淋巴样干细胞，迁移到胸腺后开始发育和分
化。在胸腺中，T细胞经历阳性选择和阴性选择，以确保其既能识别外
来抗原，又不对自身抗原产生反应。
02
T细胞亚群的分化
根据T细胞表面受体的不同，T细胞可分为CD4+ T细胞和CD8+ T细胞
感谢观看
2024/3/27
29
接种疫苗后需注意个人卫生，避免 局部感染。
24
肿瘤免疫治疗和预防策略
肿瘤免疫治疗
通过激活或增强患者自身的免疫 系统，识别和攻击肿瘤细胞，从
而达到治疗肿瘤的目的。
2024/3/27
一级预防
通过改善生活方式、避免接触致 癌物质等措施，降低肿瘤发生风 险。
二级预防
通过早期筛查、早期诊断和早期 治疗，提高肿瘤治愈率。
2024/3/27ຫໍສະໝຸດ 8抗体结构与功能特点
抗体结构
由四条多肽链组成，包括两条相同的重链和两条相同的轻链，通过二硫键连接 在一起。每条重链和轻链又分为可变区和恒定区，可变区决定抗体的特异性。

乳胶——间接乳胶凝集试验 用途：检测类风湿因子等。
间接凝集抑制试验 ——妊娠试验
（已知） （已知）
（已知） （已知）
反向间接凝集试验 ——某些传染病和原发性肝癌的早期诊断。
四、实验操作内容
（一）玻片法—— ABO血型鉴定（每人做）
用已知血型Ab,测未知血型Ag；为定性实验。
ABO血型系统
血型 红细胞表面的血型Ag 血清中的血型b
二、免疫实验课目的 1.验证所学理论知识。 2.训练基本操作技能，培养独立工作能力。
三、要求 1.严肃认真。 2.多想、多看、多做。 3.当堂完成实验报告。
四、Ag-Ab反应的相关知识 血清学反应——即体外进行的Ag-Ab反应。 由于机体绝大部分抗体存在于血清中，故
称之为血清学反应。 1.Ag-Ab反应的基本原则 （1）用已知抗体检测未知抗原； （2）用已知抗原检测未知抗体。
——类风湿因子检测(小组做)
三、凝集反应相关知识
（一）概念 颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体结
合，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集物， 称为凝集反应。
颗粒性Ag 又称凝集原 相应Ab 又称凝集素
· 颗粒性抗原： 光镜下可见，肉眼观呈浑浊悬
液，如细菌、RBC等。
· 可溶性抗原： 光镜下无形态，肉眼观呈澄清
4大经典免疫实验
（3）补体结合反应 （4）中和反应 （5）免疫标记技术
实验一 凝集反应
一、目的要求
1.掌握血清学反应概念、特点。 2.熟悉凝集反应的概念、常用凝集反应 的实验方法及结果判定。 3.了解凝集反应的原理、类型及其用途。
二、实验内容 1.直接凝集试验(玻片法)
——ABO血型鉴定(每人做) 2.间接凝集试验
（二）间接乳胶凝集试验 —类风湿因子检测 类风湿关节炎患者血清中存在： 变性IgG — Ag 抗变性IgG抗体(类风湿因子) — Ab 临床上用检测类风湿因子以辅助诊断

体检：右手食指伤口红肿，有少许粘稠黄白色分泌 物，右液窝淋巴结可触及，余均正常。体温 37.8℃，白细胞总数12000/mm3，中性粒细胞 80%。
病例分析
1. 中年女性 2. 右手指割伤5天，手指肿痛4天，发热、头
疼2天。 3. 查体：T 37.8℃；右手指红肿，有黄色脓
液；右腋窝淋巴结肿大。 4. 辅助检查：白细胞总数12000/mm3，中性
微生物设计性实验 讲评
病例分析的书写要求
• 病因，病史、 • 主要病症 • 体格检查 • 辅助检查
分析结论
病例1
王某某，女，51岁，农民
主诉：右手指割伤5天，发热、头疼2天
病史：患者于5天前手指被镰刀割伤，除稍加包扎 外未作任何处置。包扎伤口因洗菜等多次被水弄 湿，次日手指肿痛，开始服用去痛片及磺胺等， 近两天自觉发热、头疼、全身不适而求医。
第三天 第四天
镜检、血清学实验、生化反应、药敏实验 观察结果，鉴定菌种
球菌：
生化反应：触酶实验P75，血浆凝固酶实验 P43，甘露醇实验
血清学鉴定：ASO
注意
1. 已经提供增菌标本，第一天直接分离培养：取 肉汤培养液，如不均匀混浊，取沉淀物。
2. 材料写重要的，要写用哪种培养基（如：SS培 养基）
相对应的结果，预期结果与病理分析结果 不附）
淡漠；前胸皮肤玫瑰疹；脾大。 4. 辅助检查：白细胞3600/ mm3，中性粒细
胞60%。 疑似沙门菌感染所导致的肠热症
病例3
患者黄××，男，65岁，因外伤手术后持续 发热，腹痛，于2007年3月31日再次会诊。 患者于一周前因车祸，造成腹部外伤，肠穿 孔，紧急送医院作肠吻合术，输入青霉素。 患者术后体温仍高达39℃，腹部有明显压痛， 危重病容。遂由内、外科医师大会诊。经化 验检查，白细胞总数5000/ mm3，中性粒细 胞90%，淋巴细胞10%，血培养有革兰氏阴 性杆菌生长。

2021/4/19•2021 Nhomakorabea4/19
• 报告人：黄亚华
• 成 员：郭美良
•
郭书琰
•
黄亚华
•
贾晓婷
大纲
• 1.立题依据
• 1.1化疗致血小板减少症
• 1.2血小板简介
• 2.研究背景
• 3.实验目的
• 4.实验内容
2021/4/19
• 5.预期实验结果
血小板的生物学作用
• 1、收缩血管，有助于暂时止血 • 2、形成止血栓，堵塞血管破裂口 • 3、血小板的凝血作用 • 4、释放抗纤溶因子， 抑制纤溶系统的活动 • 5、营养和支持毛细血管内皮 • 6、促进血液循环
2021/4/19
研究背景
• 白细胞介素是由多种细胞产生并作用于多 种细胞的一类细胞因子。由于最初是由白 细胞产生又在白细胞间发挥作用，所以由 此得名，现仍一直沿用。最初是指由白细 胞产生又在白细胞间起调节作用的细胞因 子。
• 1979年第二届国际淋巴因子专题会议将免 疫应答过程中白细胞间相互作用的细胞因
临床前研究表明，体内应用本品后发育成熟的巨核细胞 在超微结构上完全正常，生成的血小板的形态、功能和 寿命也均正常。
实验目的
•
• 验证注射用重组人白细胞介素-11有效防治 化疗所致的血小板减少，使血小板下降程度 减轻。
2021/4/19
实验内容
• 1.获取实验动物：验血，取血小板数量在正常范围内的小白鼠16只， 每组8只分成两组，即实验组和对照组，记录各小鼠血小板数。
小板数量并记录。 • 6.将上述所测小鼠血小板数分别与其正常值和化疗后的血小板数作对
比，观察其数量变化，并观察两组小鼠皮肤有无变化，鼻腔、牙龈有 无出血。

免疫分子
包括抗体、细胞因子和补体 等，协调和调节免疫反应的 过程。
免疫学实验的目的和重要性
免疫学实验旨在研究免疫系统的功能、反应和调控机制，帮助阐明疾病发生 的机理，并提供改善诊断和治疗方法的基础。
常见的免疫学实验方法
1 ELISA检测
2 流式细胞术
通过测定特定抗体或抗原 的定量反应，用于检测疾 病标志物和免疫应答水平。
通过将细胞悬浮液与荧光 标记的抗体反应，用于定 量和鉴定免疫细胞的类型 和数量。
3 免疫组化
利用抗体与组织中的抗原 特异性结合，用于检测和 定位特定蛋白质的表达和 分布。
实验准备和实施步骤
1
实验设计
制定实验方案和流程，本采集
从受试者收集血液或其他生物样品，并进行预处理和储存。
医学免疫学实验课件
医学免疫学的定义
医学免疫学是研究人体免疫系统的一门学科，主要关注免疫系统的功能、结构和异常状态，致力于预防和治疗 与免疫系统相关的疾病。
免疫系统的组成和功能
免疫器官
包括脾脏、淋巴结和肺等， 承担着产生、存储和激活免 疫细胞的重要功能。
免疫细胞
包括T细胞、B细胞和巨噬细 胞等，负责识别、捕获和消 灭入侵的病原体。
3
试剂准备
准备实验所需的试剂、标准品和控制品，确保其纯度和可靠性。
4
实验操作
按照实验方案进行各项操作，包括样品处理、测量和分析等。
实验结果和数据分析
• 整理实验数据，进行统计和图形化处理。 • 分析数据，比较实验组和对照组的差异，并寻找相关的趋势和规律。 • 从实验结果中得出结论，并进行科学解释和讨论。
实验的局限性和未来展望
免疫学实验具有时间、资源和技术限制，未来可以发展更加高效和精确的实验方法，以进一步深入研究免疫系 统及相关疾病。