植物的组织培养技术

MS培养基是目前使用最普遍的培养基。

其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。

由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。

MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。

MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。

因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。

和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。

1．下列有关花药离体培养，说法错误的是(A)
A．对材料的选择最常用的方法是焙花青—铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色
醋酸洋红法
B．材料消毒时需先用酒精浸泡，然后用氯化汞或次氯酸钙溶液浸泡，最后用无菌水冲洗C．接种花药后一段时间内不需要光照，但幼小植株形成后需要光照
D．若接种的花药长出愈伤组织或形成胚状体后，要适时转换培养基，以便进一步分化成再生植株。

2．MS培养基和培养微生物所配制的培养基的主要区别是(A)
A．MS培养基一般含植物激素，微生物培养基不含植物激素
B．MS培养基需要氨基酸，微生物培养基不含各种氨基酸
C．MS培养基需要碳源，微生物培养基不含碳源
D．MS培养基含维生素B1和维生素B2，而微生物培养基不含
3．(2010年临沂模拟)菊花的花粉经组织培养可发育成一株幼苗，这一过程不涉及下列哪一项(D)
A．有丝分裂、细胞分化、组织器官的形成
B．呼吸作用、光合作用、相关激素的调控
C．DNA的复制、转录、蛋白质的生物合成
D．等位基因的分离、非等位基因的自由组合
4．某种花卉感染了植物病毒，叶子呈现疱状，欲培养出无病毒的后代，应采取的方法是(C)
A．用种子培养后代
B．用无明显症状部分的枝扦插
C．用茎尖进行组织培养诱导出植株
D．用叶表皮细胞进行组织培养，诱导出植株
5．如下图所示，图Ⅰ为植物组织培养流程图，图Ⅱ为植物组织培养过程的部分示意图，请据图回答：
(1)植物组织培养依据的原理是____________植物细胞的全能性_______________。

(2)图Ⅰ中外植体是从植物____器官、组织、细胞、原生质体____分离出来的。

(3)图Ⅰ中的②和图ⅡA中培养基上的培养物都是由无特定形态与功能的细胞组成，称为____愈伤组织____。

(4)图Ⅱ中D培养物已经形成幼体。

请根据植物组织培养过程对图Ⅱ重新排序：B→A →D→C。

【答案】(1)植物细胞的全能性(2)器官、组织、细胞、原生质体(3)愈伤组织(4)B→A→D→C
6．利用植物组织培养的方法可快速、大量地繁殖植物。

在培养过程中，取该植物的花芽并将其分别培养在含有不同比例的吲哚乙酸和细胞分裂素的培养基中，花芽的生长状况如下表所示。

生长素=吲哚乙酸！！！
请据表回答下列问题：
(1)在此过程中能实现脱分化的花芽是____BCD____组。

从实验结果可以看出，能诱导新芽形成的条件是_____________细胞分裂素浓度大于吲哚乙酸浓度_____________ ________________________________________________________________________。

(2)上述实验结果表明，在植物组织培养过程中，诱导芽和根形成的关键是_________________________________培养基中细胞分裂素含量与生长素含量之间的比例(或培养基中细胞分裂素与生长素的浓度比)__________________________。

在生产实践中，欲快速、大量获得此植物的花芽，可选用___D___组的培养基进行大量生产。

7．叶肉细胞原生质体的分离和培养的主要过程可以用下图解简单表示：
(1)图解中“酶解”所用的酶应该包括______纤维素酶、果胶酶_______。

(2)图解中“原生质体”的结构由细胞的______细胞膜、细胞质、细胞核______三部分组成。

(3)“DPD培养基”的成分中，除了糖类、无机盐等各种营养成分外，还必须含有_植物激素_才能获得愈伤组织。

(4)获得原生质体后，需要对其活力进行检查，下列哪种实验最适合？___B____。

A．观察原生质体的结构是否完整
B．观察细胞质流动
C．观察细胞的有丝分裂
D．观察叶绿体数目的多少
(5)一般在培养基上培养24～48小时后，大部分原生质体已再生出细胞壁。

可以取样，利用25%的蔗糖溶液以及其他用具，通过____植物细胞的质壁分离与复原_____实验来鉴别细胞壁是否已经再生。

8．(2010年南京模拟)通过植物组织培养技术可以快速繁殖、生产药物及培育无病毒的植物等。

据图甲、表乙回答问题：
图甲：植物组织培养过程
错误!①,愈伤组织②,胚状体培养,植物体
(1)离体的植物器官、组织或细胞能够被培养成新的植物体的原因是_____植物细胞具有全
能性______。

(2)用植物组织培养方法诱导离体的植物组织形成具有生根发
芽能力的胚状体结构，若包上人造种皮，制成人工种子，可能解决有些作物品种繁殖能力差、结子困难或发芽率低等问题。

胚状体来源于离体的植物体细胞，其形成过程中要经过的生理变化大体上是图甲中[]____脱分化____和[]_____再分化___过程，在此过程中被培养的细胞始终受____植物激素____的调节([]内填序号)。

(3)应用植物组织培养技术培养茎尖或根尖组织可获得无病毒植株，其原因是_________茎尖和根尖很少被病毒感染，甚至无病毒_____。

(4)从表乙的实验结果可看出：吲哚乙酸和细胞分裂素是实验中的两种重要物质。

其中，新芽形成必需的条件是___________细胞分裂素的浓度大于吲哚乙酸的浓度_____________；而在培养形成完整新个体的过程中，对它们的调控关键是_______适当调控好不同培养期培养基中细胞分裂素与吲哚乙酸的浓度和它们的比例_____________。

答案及解析
1、【解析】确定花粉发育的时期最常用的方法是醋酸洋红法，有些植物细胞核不易着色时，需采用焙花青—铬矾法。

【答案】 A
2、【解析】MS培养基是用于植物组织培养的培养基，其中一般含有植物激素，而培养微生物的培养基中不含植物激素。

另外，由于培养的微生物一般都是异养微生物，所以在它们的培养基中一般含有碳源、氮源和生长因子。

3、【答案】 A
4、【答案】 D
5、【答案】 C
6、【答案】(1)BCD细胞分裂素浓度大于生长素浓度(2)培养基中细胞分裂素含量与生长素含量之间的比例(或培养基中细胞分裂素与生长素的浓度比) D
7、【解析】(1)从叶片获取叶肉细胞的原生质体，需去除细胞壁。

细胞壁的主要成分是纤维素和果胶。

(2)植物细胞去除细胞壁构成原生质体，故原生质体包括细胞膜、细胞质和细胞核三部分。

(3)从原生质体培养成愈伤组织，除各种营养成分外，还必须加入一定比例的植物激素，如生长素和细胞分裂素。

(4)对原生质体的活力进行检查，可用观察细胞质流动的实验，流动性越强，说明原生质体的活力越大。

(5)用质壁分离与复原的实验，可以检测是否产生了细胞壁。

能发生质壁分离及复原，表明已经产生了细胞壁。

【答案】(1)纤维素酶、果胶酶(2)细胞膜、细胞质、细胞核(3)植物激素(4)B(5)植物细胞的质壁分离与复原
8、【答案】(1)植物细胞具有全能性
(2)[①]脱分化[②]再分化植物激素
(3)植物的茎尖或根尖很少被病毒感染，甚至无病毒
(4)细胞分裂素的浓度大于吲哚乙酸的浓度适当调控好不同培养期培养基中细胞分裂素与吲哚乙酸的浓度和它们的比例。