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PAGE胶及银染详细步骤[PAGE胶及银染详细步骤变性聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。
在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷多少来分离。
聚丙烯酰胺凝胶电泳适宜分离鉴定低分子量蛋白质、小于1Kb的DNA片段和DNA序列分析，其装载的样品量大，回收DNA纯度高，长度仅相差0.1%(即1000bp中的1bp)的核苷酸分子即能分离。
聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体，在催化剂TEMED(N，N，N，N'一四甲基乙二胺)和过硫酸铵的作用下，丙烯酰胺聚合形成长链，聚丙烯酰胺链在交联剂，N，N'一亚甲双丙烯酰胺（交联剂）参与下，聚丙烯胺链与链之间交叉联接而形成凝胶。
聚丙烯酰胺凝胶孔径的大小是由丙烯酰胺和交联剂的浓度及比例决定的，不同浓度丙烯酰胺和DNA的有效分离范围见下表.*表中给出的数字为与指示剂迁移率相等的双链DNA分子所含碱基对数目(bp)。
一器材及试剂1.电泳仪，垂直电泳槽及其附件，玻璃板，常用实验器材等。
2.玻璃板处理试剂：（1）KOH/甲醇溶液：5gKOH溶于100ml甲醇中，用于清洗玻璃板。
（2）95%乙醇（3）亲和硅烷溶液：95%乙醇 4ml冰乙酸20ul亲和硅烷20ul（4）玻璃硅烷：用移液器取适量于短板上，用无尘擦拭纸涂抹均匀。
2.丙烯酰胺溶液45%丙烯酰胺：43.4克N，N'一亚甲基双丙烯酰胺：1.6克H2O，加至100ml装于棕色瓶内，4℃可保存二个月。
3.变性剂尿素0.7g/ml：称取175g溶于125ml左右水中，定容到250ml。
4.过硫酸铵0.1g/ml：称取过硫酰铵1g加水至10ml。
4℃可保存一周，-20℃可保存一个月。
5.TEMED(四甲基乙烯基二胺)：和过硫酸铵一起作为交联反应的催化剂。
易吸潮，4℃封闭保存。
6.1XTBE电泳缓冲液TBE电泳母液（5×）的配制1）分别称取54克Tris碱，27.5克硼酸，20ml 0.5mol/EDTA（PH=8.0）2）将各组分别加入1升烧杯中，用ddH2O定容到1升。
聚丙烯酰胺凝胶电泳步骤
聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE）是一种常用的分离和分析蛋白质的方法。
以下是一般
的聚丙烯酰胺凝胶电泳步骤：
1. 制备凝胶：将聚丙烯酰胺和交联剂（通常是二甲基亚砜）在缓冲液中混合，加热溶解，然后迅速倒入电泳槽或制备模具中，留下一端可以装入电极。
2. 固化凝胶：将凝胶慢慢冷却至室温，使其固化。
这通常需要约30分钟至1小时。
3. 准备样品：将待测样品与一定体积的加载缓冲液混合均匀（可以包含甲基绿或其他荧光染料），并加热处理。
这样做是为了使样品蛋白质裂解、去除二硫键、破坏二级和三级结构，以使所有蛋白质都呈线性链状。
4. 加载样品：用微量移液器向凝胶中的小孔加入已经处理好的样品。
5. 进行电泳：将电泳槽连接至电源并设定合适的电压和电流。
根据待测蛋白质的大小和分子量，可以选择不同的电泳条件（如电压、电流和时间）。
6. 着色和显影：电泳结束后，用染料染色或其他方法可视化蛋白质。
通常使用染料如明胶蓝或银染法来增强蛋白质的显色。
7. 分析和解读：根据电泳图像，分析和解读样品中的蛋白质分离情况，如判断蛋白质的相对分子量、纯度等。
请注意，以上步骤仅为一般的聚丙烯酰胺凝胶电泳步骤，具体操作可能会根据实验目的和需求有所变化。
同时，操作和设备使用时应遵守实验室安全规定。
6 ％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验试剂及配制：a, 40 %丙烯酰胺单体凝胶贮存液。
丙烯酰胺38 g，甲叉双丙烯酰胺 2 g，加双蒸水定容至 100mL，过滤，贮存于棕色瓶中。
b,变性剂。
1 M NaOH 1 mL，甲酰胺 95 mL，溴酚蓝 0. 05 g，二甲苯青 0. 05 g，加双蒸水定容至100 mL。
C, 固定液。
100 mL 冰醋酸溶于双蒸水定容至1 000 mL。
d, 银染液。
硝酸银 1 g， 37 甲醛 1. 5 mL，加双蒸水定容至1000 mL。
f, 显影液。
无水碳酸钠 30 g， 37 甲醛 1. 5mL， 10 mg /mL 硫代硫酸钠 200 μL，加双蒸水定容至 1 000 mL。
DNA 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作流程6 ％变性凝胶的制备：40 %的凝胶贮存液 11. 2 mL，尿素36.36g， 5 × TBE 15mL，加双蒸水定容至 75 mL。
预冷至 4 ℃后，加入500 μL 10 过硫酸铵和 50 μL TEMD 混合均匀，灌胶。
灌胶完毕，插入样品梳，在室温下聚合 30 ～60 min。
聚合完全后，梳齿下可见二条折光线。
电泳:安装电泳装置，在电泳槽中加入1 × TBE缓冲液，使缓冲液覆盖样品孔。
拔出样品梳，用移液器吸取适量缓冲液冲洗样品孔。
打开变压器，恒定功率 60 W 预电泳 15 ～30 min。
预电泳结束后，用移液器将 DNA 样品小心注入样品孔中( 加样量为 3 ～ 5 μL) ，电泳直至带型分开。
固定:关闭电源，卸下玻璃板，剥离玻璃板，将胶板置于固定液中固定 30 min，直到指示剂颜色褪去。
漂洗:将胶板转移到双蒸水中漂洗三遍，每次 2 ～ 3 min。
染色:转移胶板至染色液中，在摇床上摇动染色 30 ～ 40 min。
显影:将胶板在双蒸水中漂洗 5 ～ 10 s 后立即放入预冷为 4 ℃～ 10 ℃的显影液中，摇动显影直到带型完全出现。
8%聚丙烯酰胺凝胶电泳
50ml配方：
30%丙烯酰胺：13.33ml
10×TBE：5ml（或者5×TBE加10ml）
TEMED：25ul
10%过硫酸铵（新鲜配制）：250ul
ddH2O:补到50ml
丙烯酰胺30%为29：1（质量比，丙烯酰胺：双甲叉丙烯酰胺）
电泳槽中加入0.5×TBE
银染液的配制：
固定液: 100mL 冰乙酸加水稀释至1000mL，可重复使用；
染色液: 1g AgNO3、1. 5mL 37%甲醛, 加水至1000mL (4摄氏度预冷效果佳)，可重复使用，棕色瓶存放；
显色液: 30g Na2 CO3、1. 5mL 37% 甲醛、0. 2mL Na2S2O3(10mg/mL) , 加水至1000mL；
终止液：配方同固定液，10%冰乙酸，可以用回收的固定液进行终止。
染色：
1、加入固定液固定30min，水洗5-10min；
2、加入染色液染色30min，水洗2次，每次不超过30s；
3、加入显色液显色（条带清晰即可，一般不超过5min）；
4、加入终止液终止反应；
需要配制的溶液：
10%过硫酸铵：称取5g过硫酸铵溶解于50ml蒸馏水中。
37%甲醛：37ml甲醛和63ml蒸馏水混匀。
10mg/mL Na2S2O3：称取0.3g溶解于30ml蒸馏水中。
10%冰乙酸：100mL 冰乙酸加水稀释至1000mL，可重复使用。
5×TBE缓冲液：54gTris，27.5g硼酸，20ml 0.5M EDTA(pH8.0)，加水定容至1升。
SSR的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与银染检测
技术实验报告
自查报告。
实验报告标题，SSR的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与银染检测技
术实验报告。
自查报告：
在完成本次实验报告之后，我对实验过程和结果进行了自查，
以确保实验数据的准确性和报告的完整性。
首先，我检查了实验操作的每一个步骤，包括样品制备、凝胶
电泳分离、银染检测等。
我确认每一个步骤都按照实验指导书上的
要求进行，并且在操作过程中严格控制了实验条件，以避免可能的
误差。
其次，我对实验结果进行了反复检查和比对。
我确认所有的实
验数据都已经被正确记录，并且在报告中进行了清晰的呈现和分析。
我特别关注了SSR的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离和银染检测的结果，
确保它们符合预期并且能够支撑实验结论。
最后，我对实验报告的格式和内容进行了审查。
我检查了报告中的文字、图表、参考文献等，以确保它们符合学术规范并且能够清晰地传达实验过程和结果。
通过以上的自查工作，我确认本次实验报告的内容准确无误，并且已经符合了要求。
在以后的实验工作中，我将继续严格执行实验操作规程，并且对实验数据和报告进行认真的自查，以确保科研工作的可靠性和真实性。
聚丙烯酰胺凝胶电泳操作步骤聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离和分析方法。
以下是其操作步骤：1. 准备试剂聚丙烯酰胺凝胶电泳所需试剂包括：丙烯酰胺、N，N'-甲叉双丙烯酰胺、过硫酸铵、TEMED、甘氨酸、尿素、溴酚蓝等。
其中，丙烯酰胺和N，N'-甲叉双丙烯酰胺是聚合反应的主要原料，过硫酸铵和TEMED是聚合反应的催化剂和加速剂，甘氨酸和尿素可以增加凝胶的强度和稳定性，溴酚蓝则可以作为指示剂。
2. 制备凝胶首先将丙烯酰胺和N，N'-甲叉双丙烯酰胺按照一定比例混合，加入适量的去离子水溶解，然后加入过硫酸铵和TEMED，混合均匀后倒入聚四氟乙烯模具中。
接着将模具放入电泳槽中，加入电极缓冲液，连接电源开始电泳。
3. 加样在电泳过程中，当凝胶完全聚合后，将电极缓冲液排出，取下凝胶。
用刀片将凝胶切割成所需大小的小块，放入电泳槽中。
然后加入适量的样品溶液，用微量进样器将样品加入到凝胶孔中。
4. 开始电泳加完样后，重新连接电源，设置电泳参数（如电压、电流和时间等），开始电泳。
在电泳过程中要随时注意电泳进度，观察是否有异常情况发生（如条带跑偏、条带模糊等）。
5. 终止电泳当电泳完成后，断开电源，将凝胶取出。
用刀片将凝胶切割成所需大小的小块，放入缓冲液中浸泡一段时间，以终止电泳反应。
6. 染色将终止电泳后的凝胶进行染色。
常用的染色方法有银染法和考马斯亮蓝染色法等。
银染法是用硝酸银溶液将蛋白质固定在凝胶上，然后进行显色；考马斯亮蓝染色法是用考马斯亮蓝染料将蛋白质染色后用乙醇进行脱色。
7. 脱色经过染色后的凝胶可以进行脱色处理。
常用的脱色方法有乙醇脱色法和醋酸铵脱色法等。
乙醇脱色法是用无水乙醇多次冲洗凝胶以去除未结合的染料；醋酸铵脱色法是用醋酸铵溶液浸泡凝胶以去除未结合的染料。
8. 观察和拍照最后观察并拍照记录电泳结果。
银染法可以通过观察颜色深浅判断蛋白质分子量大小；考马斯亮蓝染色法则可以通过观察条带的亮度判断蛋白质含量高低。
SSR的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与银染检测技术实验报告英文回答：Introduction。
Single-stranded RNA (SSR) is a type of RNA that is not double-stranded like most other types of RNA. It is found in some viruses and in some eukaryotic cells. SSR can be separated by polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and visualized by silver staining.Materials and Methods。
SSR sample。
10% polyacrylamide gel。
Electrophoresis buffer。
Silver staining solution。
UV transilluminator。
Procedure。
1. Load the SSR sample onto the polyacrylamide gel.2. Run the gel at 100 volts for 2 hours.3. Stain the gel with silver staining solution for 30 minutes.4. Visualize the SSR bands under a UV transilluminator.Results。
The silver staining revealed several SSR bands in the gel. The bands were of different sizes, indicating that the SSR sample contained SSRs of different lengths.Discussion。
SSR的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与银染检测技术实验报告英文回答：Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and silver staining techniques experiment report。
Introduction。
Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) is a technique used to separate proteins based on their molecular weight. The proteins are first denatured by boiling them in a solution containing SDS, a detergent that disrupts the protein's interactions and unfolds it. The denatured proteins are then loaded onto a polyacrylamide gel, which is a porous matrix that acts as a molecular sieve. When an electric current is applied to the gel, the proteins migrate through the gel at different rates, with smaller proteins moving faster than largerproteins.Silver staining is a sensitive technique used to visualize proteins on a polyacrylamide gel. The proteinsare first fixed to the gel by soaking it in a solution containing glutaraldehyde, a cross-linking agent that prevents the proteins from diffusing. The gel is then incubated in a solution containing silver nitrate, which binds to the proteins. The silver ions are then reduced to silver metal, which appears as a dark brown band on the gel.Materials and methods。
SSR的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与银染检测
技术实验报告
实验目的：
本实验旨在利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离技术，对样品进行分离，并通过银染检测技术对分离的蛋白质进行检测，从而达到对蛋白质进行定性和定量分析的目的。
实验步骤：
1. 准备样品，收集待分离的蛋白质样品，如细胞提取液或组织提取液。
2. 样品处理，将样品进行蛋白质溶解、蛋白质浓缩和蛋白质还原处理。
3. 凝胶制备，制备聚丙烯酰胺凝胶，包括制备上、下凝胶液和加载样品。
4. 电泳分离，将样品加载至凝胶上，进行电泳分离。
5. 银染检测，将分离的蛋白质在凝胶上进行银染处理，观察蛋白质条带。
实验结果：
通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，成功分离出样品中的蛋白质，并通过银染检测技术观察到了清晰的蛋白质条带。
根据条带的位置和强度，可以初步判断样品中的蛋白质种类和含量。
实验结论：
本实验成功利用SSR的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与银染检测技术对样品中的蛋白质进行了分离和检测，为后续的蛋白质定性和定量分析奠定了基础。
同时，实验中还发现了一些问题，如电泳条件的优化和银染技术的改进，这些问题将是我们未来研究的方向。
变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染实验
一变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
配制溶液：
1、30% Acrylamide（14.5 g 丙烯酰胺，0.5g 双丙烯酰胺，加水溶解，定容至50 ml，4℃，棕色瓶中储存）
2、10% 过硫酸铵（0.5g APS，溶于5ml 去离子水中，4℃可储存数个月）
3、10 ×TBE 缓冲液（10.8g Tris,0.744g EDTA,5.5g 硼酸，定容到100ml）
4、TEMED
5、20-200 DNA marker
6、尿素
实验步骤：
1、配置10%的胶10ml：8M*10ml*60g/mol=4.8g 尿素
6.1ml water
3.3ml 30% Acrylamide
1ml 10 ×TBE
0.11ml APS
0.01mlTEMED
2、立即将胶倒入两块板间并插好梳子，放置，待凝固30min，时间可以适当延长。
3、向电泳槽加入1×TBE，拔出梳子并用注射针筒多次洗涤点样孔，尽可能排除未聚合
的丙烯酰胺。
4、将DNA marker 加到点样孔中，以120V（10V/cm）进行电泳直到燃料走到靠近底部
的三分之一处，大约需要60-90分钟。
二银染实验
银染溶液的配置：实验之前准备4℃水
1、固定液（10%醋酸）：20ml冰醋酸，180mlddH2O混匀（通风厨中进行）
2、染色液：将0.1g AgNO3溶解于100 ml ddH2O中，使用前加1.5ml37%甲醛溶液，必须
储存于避光瓶中，防止接触皮肤（通风厨中进行）
3、显影液：将30gNa2CO3溶解于ddH2O中，冷却至4℃，使用前加1.5ml37%甲醛溶液
（通风厨中进行），0.1M五水硫代硫酸钠150μl；（0.1M Na2S2O3。
5H2O：将2.48g Na2S2O3。
5H2O溶于100mlddH2O）。
注意事项：
1、染色液和显影液要现用现配；
2、显影液必须在4℃使用且必须保存在4℃；
3、甲醛蒸汽致癌，在通风厨内操作；
4、实验室中柔和的背景光线有利于降低背景颜色；
5、显色不能在透光的盒子中进行；
6、溶液不能直接倒在胶面上，应使盘倾斜后将溶液倒在盘的角上，或者将每种溶液各方
一盘，然后将胶从一个盘转到另一个盘；
7、溶液的体积必须足够将胶全部浸没；
8、显色过程中盘中须轻轻摇动。
实验步骤：
1、固定：用刀子轻轻分开玻璃板，将带有凝胶的一块玻璃板放入盛有200ml固定液的盘
子中，放在水平摇床上摇动20min或直至染料带完全消失
2、洗涤：把固定液倒回大烧杯中，然后用ddH2O清洗三次，每次2min
3、染色：把玻璃板放在盛有100ml染色液的盘子里，在水平摇床上摇动30min
4、显影：把玻璃板在预冷ddH2O中快速过一下（不超过10s），迅速放入预冷（4℃）的
显影液中，显色3-5min或直至所有的带都出现
5、停止：当出现清晰的条带时，加入先前用过的500ml固定液轻轻摇动，停止显影
6、用ddH2O将凝胶洗2次，每次2min
7、晾干，扫描
8、拍照观察。
