最新13第13章免疫组织化学技术

免疫组织化学技术第一篇：免疫组织化学技术基础免疫组织化学技术是一种利用免疫学原理对细胞或组织进行化学定位的技术。

该技术可以用于鉴定细胞或组织中某种特定抗原的存在及分布情况，从而为病理诊断、学术研究和药物研发等提供有力的支持。

一、免疫组织化学技术的原理免疫组织化学技术的原理是利用抗体与其靶分子间的特异性结合反应，来实现对目标物的检测和定位。

抗体可以识别并结合到人体或动物体内的大部分蛋白质，包括生物芯片检测、ELISA检测、Western blotting等技术所用的基质和抗原。

在免疫组织化学技术中，针对某种抗原的特异性抗体先与组织样本中的特异性抗原发生特异性结合，然后通过检测抗体所标识的色素或荧光物等发射的信号，加以可视化。

例如，用特异性抗体和明胶酶-抗明胶酶复合物在组织样本上进行化学染色，从而定位并可视化样本中的抗原。

二、免疫组织化学技术的步骤1. 样本制备：第一步是样本的制备，包括切片、固定和脱水等处理。

固定组织样本是为了保持其形态和结构，因此往往使用福尔马林等固定剂进行固定。

在制片时，细胞或组织切割成相对较薄的切片，一般为5-10 μm。

切割后，通常漂洗去除固定剂，然后脱水，通常采用乙醇浓度逐渐递增的方法进行。

最后，将切片放置于有机媒介中，如去石蜡等。

2. 抗原修复：切片离体后，抗原结构可能会发生改变，因此需要进行抗原修复。

抗原修复可以通过热处理、酶解或酸解等方式进行。

热处理方法包括水浴、压力釜等；酶解包括蛋白酶和肝素酶等；而酸解则是利用酸将组织溶解并解离抗原。

3. 抗体标记：抗体标记是免疫组织化学技术的核心步骤。

选择具体的抗体，可以选择单克隆或多克隆抗体等。

接着，抗体常被标记为一种检测信号(如与酶或荧光物质结合)。

免疫荧光技术通常是通过荧光标记的二抗或荧光标记的可溶解复合物来可视化。

荧光地染色颜色有多种不同的方式，如荧光素-醌染料、荧光素-异硫氰酸染料等，可以根据不同的研究目的选择不同的荧光染色方法。

临床分析中的免疫组织化学技术进展免疫组织化学技术（Immunohistochemistry，IHC）作为一种重要的临床分析方法，在肿瘤诊断、治疗和预后评估等方面发挥着重要作用。

随着技术的不断进步和应用的广泛推广，免疫组织化学技术逐渐成为临床医学中的一项必备技能。

本文将从技术原理、应用领域和进展方面对免疫组织化学技术进行综述。

一、技术原理免疫组织化学技术是利用抗体与相应抗原结合的特异性反应来检测组织或细胞中特定分子的存在与定位。

其基本原理是将组织切片经过特定的预处理步骤后，使用专门的免疫反应试剂盒，将抗体与待检测的抗原发生特异性结合，并通过染色反应来显示抗原的分布情况。

免疫组织化学技术的核心在于选择合适的抗体，其中包括一抗和二抗。

一抗与待检测的抗原结合后，通过与二抗反应生成复合物，再使用染色试剂可使复合物形成染色沉积物。

通过显微镜观察染色沉积物的颜色和分布情况，可以得出待检测抗原在组织中的表达情况。

二、应用领域免疫组织化学技术已广泛应用于肿瘤学、病理学、免疫学等临床领域。

在肿瘤诊断中，可以通过检测特定标志物的表达来帮助鉴别不同类型的肿瘤，指导临床治疗。

例如，通过检测ER、PR、HER2等标志物的表达情况，可以为乳腺癌患者提供更精确的治疗策略。

在病理学中，免疫组织化学技术可以帮助鉴别病变的类型和性质。

通过检测特定抗原的表达情况，可以确定病变是否来源于肿瘤细胞、病毒感染等。

此外，免疫组织化学技术还可以在肾脏病变、风湿疾病等方面提供重要的诊断依据。

免疫组织化学技术在免疫学研究中也起着重要作用。

通过检测特定免疫细胞或分子的存在与定位，可以揭示机体对疾病或外界刺激的免疫应答过程，对于研究免疫学机制具有重要意义。

三、进展方向随着科学技术的不断进步，免疫组织化学技术也在不断发展和完善。

主要体现在以下几个方面。

1. 抗体的选择和特异性改进。

随着对不同抗原的研究深入，筛选和改进抗体的方法不断提升。

目前，已有多种技术可用于获得高特异性的抗体，如单克隆抗体和人工合成抗体等。

第十三章免疫组织化学技术免疫组织化学技术又称免疫细胞化学技术，是指用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项免疫检测方法。

第一节概述免疫组织化学的基本过程包括：①抗原的提取与纯化；②免疫动物或细胞融合，制备特异性抗体以及抗体的纯化；③将标志物与抗体结合形成标记抗体；④标本的处理与制备；⑤抗原抗体免疫学反应以及标志物呈色反应；⑥观察结果。

一、标本的处理（一）标本的主要来源1.活体组织：应取材于病变组织及病变与正常组织交界处，大小适中。

减少对组织标本的损伤与挤压。

2.体液、穿刺液：可直接涂片或经离心后取沉淀物涂片。

3.培养细胞：悬浮培养的细胞经离心沉淀后做细胞涂片，盖玻片上的单层培养细胞直接固定。

（二）标本的固定与保存1.标本固定的目的：使细胞内蛋白质凝固，细胞内分解酶反应终止，以防止细胞自溶，保持细胞形态和结构；保存组织细胞抗原性；防止标本脱落；除去妨碍抗体结合的类脂，便于保存；抑制组织中细菌的繁殖，防止组织腐败和在后续组织制备中的细胞结构和成分的改变。

标本的固定应以不损伤细胞形态，不干扰固定后抗原的识别和结合为原则。

2.固定剂的选择：蛋白质类抗原，可用乙醇或甲醇固定；微生物抗原可用丙酮或三氯化碳固定；如需除去病毒的蛋白质外壳，可使用胰蛋白酶；多糖类抗原用10%福尔马林固定或以微火加热固定；如有黏液物质存在，应用透明质酸酶等处理除去；类脂质丰富的组织进行蛋白、多糖抗原检测时，需用有机溶剂（乙醚、丙酮等）处理除去类脂。

组织标本常规固定液为中性缓冲甲醛。

3.制片方法的评价：冷冻和石蜡切片是免疫组化最常用的制片方法。

首选冷冻切片。

其操作简便，可避免石蜡切片因固定（甲醛）、脱水、浸蜡等对抗原所造成的损失，适用于不稳定的抗原。

石蜡切片是研究形态学的主要制片方法，它不但是观察组织细胞结构的理想方法，而且可用在陈旧石蜡包埋材料免疫组化的回顾性研究。

免疫组织化学技术的应用免疫组织化学技术概述免疫组织化学技术是一种利用免疫学原理进行生物分子检测和定位的技术。

它采用抗体与特定抗原结合的顺反应原理，在组织切片中检测和定位某一特定分子。

原理免疫组织化学技术利用抗体与特定抗原结合的顺反应原理，即对一种特定抗原有高度选择性的抗体与组织样品中的该抗原相结合产生可见的信号。

这种信号可以是产生光学、荧光或颜色改变等形式。

应用1.生物医学研究：免疫组织化学技术可以检测组织中特定蛋白质的分布和表达，是研究生物医学领域中蛋白质分子组学的基础技术之一。

2.临床诊断：免疫组织化学技术可以应用于肿瘤诊断、流行病学调查等领域。

通过检测某些肿瘤标志物、细胞表面分子和内分泌指标等，可以帮助医生进行正确诊断。

3.药物制剂：免疫组织化学技术可以帮助研究药物分布和作用机制。

例如，在研究心血管药物时，可以用抗体检测受体的表达和分布，从而了解药物作用机制和药效。

优点1.高度特异性：免疫组织化学技术可以准确地检测特定分子，避免了其他分子的干扰。

2.高灵敏度：可以检测极微量的分子，并精确定位其位置。

3.多样性：可以应用于不同分子种类的检测和定位，有很大的应用前景。

局限性1.抗体交叉反应：某些抗体可能对多种分子有交叉反应，导致误判。

2.样品制备：样品的制备和处理对结果产生影响，需要更加严格的标准化。

3.价格昂贵：用于免疫组织化学技术的抗体相对价格较高，加上试剂盒和设备的购买，成本较高。

结论免疫组织化学技术作为一种重要的实验室技术，具有广泛的应用前景。

这种技术可以在细胞和分子层面上全面解析生物体的结构和功能，是生物医学领域中不可或缺的技术之一。

免疫组织化学技术的操作步骤1.标本制备：首先需要采集组织样本，处理后制成组织切片。

2.抗体处理：挑选合适的抗体，经过处理（如荧光标记、酶标记等），制成特定的抗体试剂。

3.特定抗原检测：在组织切片上滴加特定抗体试剂，进行特定抗原的检测。

4.反应信号检测：根据抗体的标记方式，进行相应信号的检测。

免疫组织化学技术名词解释免疫组织化学技术是一种应用于组织学研究和病理诊断中的实验技术，用于检测和定位特定抗原在组织中的表达和分布。

免疫组织化学技术结合了免疫学和组织学的原理和方法，使得我们能够在组织切片中检测到特定抗原，并通过染色的方式将其可视化。

1. 免疫染色：免疫组织化学技术的核心是免疫染色。

免疫染色是通过将特异性的抗体与待检测物质结合，并标记上染色物质，从而实现对抗原的检测和定位。

常用的染色物质包括标记着色剂如酶、荧光物质和金颗粒等。

2. 抗原：抗原是一类能够诱导机体产生抗体的物质。

在免疫组织化学技术中，抗原可以是蛋白质、多肽或者是其他小分子化合物。

通过特异性的抗体和抗原的结合来实现对抗原的检测和定位。

3. 抗体：抗体是机体特异性免疫应答产生的一类蛋白质分子。

抗体能够与特定抗原结合，并通过诱导免疫反应来清除抗原。

在免疫组织化学技术中，通过标记抗体对待检测抗原进行检测和定位。

4. 免疫组织化学染色法：免疫组织化学染色法是一种检测并定位抗原的方法。

根据标记抗体的不同，可以分为酶标法、免疫荧光染色法和免疫金染色法等。

其中，酶标法是最常用的方法之一，通过将酶标记的抗体与待检测抗原结合，然后通过酶的催化作用使染色物质可视化。

5. 免疫组织化学实验步骤：免疫组织化学技术包括多个实验步骤，一般包括组织固定、切片、抗原恢复、阻断、一抗和二抗结合、洗涤、染色和显微镜观察等。

每个步骤都需要严格的操作和控制条件，以保证实验的可靠性和准确性。

6. 免疫组织化学应用：免疫组织化学技术广泛应用于医学研究和病理诊断中。

在医学研究领域，免疫组织化学技术可以用于研究疾病的发生和发展机制、寻找新的生物标志物以及评估药物的疗效等。

在病理诊断中，免疫组织化学技术可以用于帮助确定肿瘤类型、检测特定蛋白的异常表达以及判断预后等。

7. 免疫组织化学技术的优点和局限性：免疫组织化学技术具有高度的特异性和灵敏度，可以实现对细胞和组织水平上抗原的定量和定位。

免疫组织化学检验技术一、免疫组织化学检验技术简介免疫组织化学检验技术（Immunohistochemistry，IHC）是一种常用的实验技术，它利用抗原-抗体的特异性结合反应，检测组织或细胞中的蛋白质、多肽、激素等生物活性物质。

该技术可用于疾病的诊断、病理学研究、药物靶点筛选等多个领域。

二、免疫组织化学检验技术的基本原理免疫组织化学检验技术的核心是抗原-抗体的特异性结合反应。

这种反应基于抗体和抗原的互补性，即抗体分子中的抗原结合部位能够与抗原分子中的互补部位结合。

在免疫组织化学检验中，将组织或细胞固定在载玻片上，然后加入特异性抗体，通过孵育反应，抗体与组织或细胞中的抗原结合。

随后加入显色剂进行显色反应，根据显色情况判断是否存在相应的抗原。

三、免疫组织化学检验技术的应用例子1.肿瘤诊断：免疫组织化学检验技术可用于肿瘤诊断，通过检测肿瘤组织中的特异性抗原，如癌胚抗原、糖类抗原等，有助于确定肿瘤的性质和分化程度。

例如，乳腺癌患者的肿瘤细胞可能表达ER、PR、HER2等基因蛋白，通过检测这些蛋白的表达情况，有助于指导治疗和判断预后。

2.感染性疾病诊断：免疫组织化学检验技术也可用于感染性疾病的诊断，例如检测病毒抗原、细菌抗原等，有助于确定感染的病原体种类。

例如，在流感病毒感染中，通过检测病毒核蛋白抗原，有助于确诊病毒感染。

3.药物靶点筛选：免疫组织化学检验技术还可用于药物靶点筛选，通过检测目标蛋白在组织或细胞中的表达情况，筛选出可能的药物作用靶点。

例如，在寻找治疗肿瘤的新药时，可利用免疫组织化学技术检测肿瘤细胞中的各种蛋白表达情况，筛选出可能的药物作用靶点。

四、免疫组织化学检验技术的优缺点1.优点：具有高特异性、高灵敏度、操作简便、易于定量等优点。

同时，免疫组织化学检验技术可以用于检测组织或细胞中的蛋白质、多肽、激素等生物活性物质，有助于深入探讨疾病的发病机制和病理过程。

2.缺点：可能会出现非特异性染色和交叉反应，影响结果的准确性。

临床免疫学检验技术定的一项免疫检测方法。

目录CONTENTS第一节第二节第三节第四节酶免疫组织化学技术第五节第六节影响免疫组织化学技术的主要因素免疫组织化学技术的临床应用免疫标记电镜技术亲和组织化学技术荧光免疫组织化学技术免疫组织化学过程1抗原的提取与纯化2制备特异性抗体3标记物与抗体结合形成标记抗体4标本的处理与制备基本过程5抗原抗体免疫学反应以及标记物呈色反应6观察结果免疫组织化学技术分类酶免疫组织化学技术免疫标记电镜组织化学技术标记物不同荧光免疫组织化学技术亲和组织化学技术免疫金（银）组织化学技术酶免疫组织化学技术0104定义：在一定条件下，应用酶标抗体（抗原）与组织或细胞标本中的抗原（抗体）发生反应，催化底物产生显色反应，通过显微镜观察标本中抗原（抗体)的分布位置和性质，也可通过图像分析技术达到定量的目的。

标本类型：组织切片、组织印片和细胞涂片等。

分类酶桥法过氧化物酶抗过氧化物酶（PAP ）法双桥PAP 法碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（APAAP ）法非标记抗体酶免疫组化技术酶标记抗体免疫组化技术直接法间接法直接法间接法优点操作简便特异性强检测敏感性高制备一种酶标二抗可用于检测多种抗原或抗体缺点敏感性低制备的抗体种类有限特异性不如直接法操作较为繁琐非标记抗体酶免疫组织化学染色酶桥法：抗酶抗体作为第三抗体，通过桥抗体（第二抗体），将特异性识别组织抗原的第一抗体与第三抗体连接起来，形成酶联的抗原-抗体复合物，加底物显色（图12-1）。

过氧化物酶抗过氧化物酶（PAP）法：是在酶桥法基础上加以改良。

PAP法首先将酶桥法的第三抗体（抗酶抗体）与酶组成可溶性复合物（PAP复合物，图12-2）。

该复合物由2个抗酶抗体和3个过氧化物酶分子组成，呈五角形结构，非常稳定。

通过桥抗体（第二抗体），将特异性识别组织抗原的第一抗体与PAP复合物的抗酶抗体连接起来，此时要求特异性第一抗体与第三抗体的动物种属相同（图12-3）。