高效液相色谱基本原理详解演示文稿
- 格式：ppt
- 大小：4.51 MB
- 文档页数：47
下载文档原格式
合集下载
高效液相色谱法演示文稿
固定相：C8
固定相：C18
1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯
非极性键合相常用于反相色谱。键合烷基的链长增加 ，极性降低，载样量增大、k值增大，C18分离效果优于
C8 , C1
当前第37页\共有62页\编于星期五\14点
（2）中等极性键合相 中等极性键合相常见的有醚基键合相（如YWG-
②耐高压。 通常要求泵的输出压力达到30-60MPa的高压。
③液流稳定。
输出的液流应无脉动 ④泵的死体积小。 泵的死体积通常要求小于0.5mL。 ⑤密封性能好，耐腐蚀
当前第5页\共有62页\编于星期五\14点
输液泵按输出液恒定的因素分恒压泵和恒流泵，恒流泵的 应用更广泛。
当前第6页\共有62页\编于星期五\14点
（三）梯度洗脱装置
等度洗脱： 用恒定配比的溶剂系统洗脱，方法简便、
色谱柱易再生等是其优点。
梯度洗脱： 在一个分析周期内，按一定程序不断改变 流动相的配比，逐步提高洗脱强度。梯度洗脱可以使一个 复杂样品中性质差异较大的组分，都能在各自适宜的分离 条件下分离。
梯度洗脱的特点：①缩短分析周期；②提高分离效果；③
3.流动相传质阻力项
流动相传质阻力，实际包括两方面，一是移动流 动相传质阻力Hm，二是滞流（静态）流动相传质阻力
Hsm。
当前第22页\共有62页\编于星期五\14点
当前第23页\共有62页\编于星期五\14点
a.移动流动相传质阻力（Cmu）
当流动相在色谱柱内流动时，离固定相较远的组分流动较快， 处于固定相颗粒表面的组分流动较慢，由于这种差别，会使组
当前第38页\共有62页\编于星期五\14点
3. 键合相的性质 （1）稳定性 键合相在pH2-8.5范围内稳定，太高的pH值会使硅 胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。 （2）键合量 键合相的键合量常用含碳量(C%)来表示，按含碳量的不
高效液相色谱仪介绍课件
谢谢
号
05
数据处理系统： 处理和分析色
谱数据
06
07
流动相储液瓶： 储存流动相
废液收集器： 收集废液
08
泵管路：连接 各部件，保证 流动相的流通
09
10
温度控制系统： 控制色谱柱和 检测器的温度
安全保护装置： 保护操作人员 和仪器的安全
高效液相色谱仪的工作原理
高效液相色谱仪是一种利用液体 作为流动相的色谱分析仪器。
安装
定期校准与保养
01
定期检查仪器的 各个部件，确保
其正常工作
02
定期更换易损部 件，如泵密封圈、 进样阀密封圈等
03
定期进行仪器校 准，确保分析结
果的准确性
04
定期清洁仪器， 保持仪器的清洁
和干燥
05
定期检查仪器的 电源和接地线，
确保安全使用
06
定期记录仪器的 使用情况和维护 保养情况，便于 日后查询和分析
农药分析
农药残留检测： 检测农产品中的 农药残留，保障
食品安全
农药质量控制： 监控农药生产过 程中的质量，确 保产品质量合格
农药环境污染监 测：监测环境中 的农药污染，评
估环境风险
农药研发：辅助 农药研发，提高 研发效率和质量
环境监测
01
水质监测：检测水中的污染物和化学物质
02
空气监测：检测空气中的污染物和化学物质
药物代谢：研 究药物在生物 体内的代谢过 程和机制
药物相互作用： 研究药物之间 的相互作用和 影响
3
高效液相色谱 仪的发展趋势
仪器自动化
仪器操作自动化：通过计算机控 制，实现仪器的自动化操作
数据处理自动化：自动采集、处 理和分析数据，提高分析效率
高效液相色谱的原理与构造.pptx
第14页/共63页
2.4 HPLC的基本类型：
等度： —吸光度相同； —在整个运行过程中溶剂组成保持不变 (60:40 甲醇/水)
第15页/共63页
梯度： —在运行过程中溶剂组成变化； —渐变或台阶式变化。 100% H20/ 0% MeOH 到0% H2O/100% MeOH
第16页/共63页
三、HPLC分离公式与术语
色谱图：—样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称 色谱流出曲线(elution profile)。这是一张由仪器提供的表示分离状况的色谱图，这张色谱图含有丰富的信息，现在我们来测量色谱图并以此对一些基本理论展开讨论。
第17页/共63页
（2）表面多孔型担体 （薄壳型微珠担体） 30～40μm的玻璃微球，表面附着一层厚度为1 ～ 2μm的多孔硅胶。 表面积小，柱容量底；
第4页/共63页
（3）化学键合固定相
化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广； c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N
第37页/共63页
四元泵包括一个溶剂槽、一个真空脱气机和一个四通道梯度泵。四通道的梯度泵包括一个高速配量阀和一个泵组件。它通过低压混合来产生梯度。
第38页/共63页
四元泵的液路图
第39页/共63页
4.3 自动进样器
第40页/共63页
流路中为高压力工作状态；通常使用耐高压的六通阀进样装置；其结构如图所示：
（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。
第13页/共63页
《HPLC基本原理》课件
《HPLC基本原理》PPT课 件
HPLC基本原理
1 什么是HPLC
HPLC是高效液相色谱 的缩写。它与其他色谱 方法相比具有更高的分 离效率和分离速度。
2 HPLC的全称是什么？ 3 HPLC和其他色谱的
区别是什么？
HPLC全称为高效液相 色谱（High Performance Liquid Chromatography）。
HPLC的工作原理
1 HPLC系统的组成
2 HPLC的注射器是如何工作的？
HPLC系统通常由泵浦、样品注射器、柱 和载流体、检测器和数据处理系统组成。
HPLC的注射器用于将待分离样品准确地 输入流动相中。
3 HPLC柱和载流体的作用是什么？ 4 HPLC检测器是如何检测样品的？
HPLC柱和载流体共同作用，通过对分离 物质的吸附和反向排斥，实现样品的分离。
效率、选择性强等优点，
领域的应用前景非常广
但也存在分析时间较长、
阔。
仪器价格较高等不足。
3 感谢观看本课件！
感谢大家的关注，如有 任何问题，请随时联系 我。
HPLC检测器通常使用紫外-可见光谱检测 器或荧光检测器来监测样品的吸收或荧光 信号。
HPLC的应用
1 HPLC在药学上的应用
HPLC广泛应用于药物分析、药物质量控 制和药代动力学研究等领域。
2 HPLC在环境保护中的应用
HPLC被广泛应用于环境监测中，用于分 析和测定各种环境污染物。
3 HPLC在食品科学和生命科学中的
应用
4 HPLC技术的进展和发展趋势
HPLC技术正在不断发展，包括新的柱材
HPLC在食品科学和生命科学领域中的应
料、检测器和数据处理方法的应用。
HPLC基本原理
1 什么是HPLC
HPLC是高效液相色谱 的缩写。它与其他色谱 方法相比具有更高的分 离效率和分离速度。
2 HPLC的全称是什么？ 3 HPLC和其他色谱的
区别是什么？
HPLC全称为高效液相 色谱（High Performance Liquid Chromatography）。
HPLC的工作原理
1 HPLC系统的组成
2 HPLC的注射器是如何工作的？
HPLC系统通常由泵浦、样品注射器、柱 和载流体、检测器和数据处理系统组成。
HPLC的注射器用于将待分离样品准确地 输入流动相中。
3 HPLC柱和载流体的作用是什么？ 4 HPLC检测器是如何检测样品的？
HPLC柱和载流体共同作用，通过对分离 物质的吸附和反向排斥，实现样品的分离。
效率、选择性强等优点，
领域的应用前景非常广
但也存在分析时间较长、
阔。
仪器价格较高等不足。
3 感谢观看本课件！
感谢大家的关注，如有 任何问题，请随时联系 我。
HPLC检测器通常使用紫外-可见光谱检测 器或荧光检测器来监测样品的吸收或荧光 信号。
HPLC的应用
1 HPLC在药学上的应用
HPLC广泛应用于药物分析、药物质量控 制和药代动力学研究等领域。
2 HPLC在环境保护中的应用
HPLC被广泛应用于环境监测中，用于分 析和测定各种环境污染物。
3 HPLC在食品科学和生命科学中的
应用
4 HPLC技术的进展和发展趋势
HPLC技术正在不断发展，包括新的柱材
HPLC在食品科学和生命科学领域中的应
料、检测器和数据处理方法的应用。
中国药典高效液相色谱详解演示文稿
14
当前14页，共24页，星期一。二、系统适用性试验色谱系统的适用性试验通包括 理论板数
分离度 重复性
拖尾因子 分离度和重复性是尤为重要。
15
当前15页，共24页，星期一。
色谱柱的理论板数(n)
用于评价色谱柱的分离效能。由于不同物质在同一色谱柱 上的色谱行为不同，采用理论板数作为衡量柱效能的指标 时，应指明测定物质，一般为待测组分或内标物质的理论 板数。
要时，应在各品种项下对拖尾因子作出规定。
20
当前20页，共24页，星期一。
测定法
(1)内标法 按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物
质，分别配成溶液，精密量取各适量，混合配成校正因子测定用的对 照溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图。测量对照品和内标物质的 峰面积或峰高，按下式计算校正因子：
蒸发光散检测器对结构类似的化合物，其响应值几乎仅与供试品的质 量有关；
二极管阵列检测器可以同时记录供试品的吸收光谱，故可用于供试品的 光谱鉴定和色谱峰的纯度检查。
7
当前7页，共24页，星期一。
检测器
紫外、荧光、电化学和示差折光检测器的响应值与供试品溶液的 浓度在一定范围内呈线性关系，但蒸发光散射检测器响应值与供 试品溶液的浓度通常呈指数关系，故进行计算时，一般需经对数 转换。
正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等 。
离子交换色谱系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱 系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体 的分离通常使用手性填充剂。
4
当前4页，共24页，星期一。
色谱柱
填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键 合基团的表面覆盖度、含炭量和键合类型等）以及色谱柱 的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。分析分 子量小于2000的化合物应选择孔径在15nm以下的填料，分 析分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填 料。
当前14页，共24页，星期一。二、系统适用性试验色谱系统的适用性试验通包括 理论板数
分离度 重复性
拖尾因子 分离度和重复性是尤为重要。
15
当前15页，共24页，星期一。
色谱柱的理论板数(n)
用于评价色谱柱的分离效能。由于不同物质在同一色谱柱 上的色谱行为不同，采用理论板数作为衡量柱效能的指标 时，应指明测定物质，一般为待测组分或内标物质的理论 板数。
要时，应在各品种项下对拖尾因子作出规定。
20
当前20页，共24页，星期一。
测定法
(1)内标法 按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物
质，分别配成溶液，精密量取各适量，混合配成校正因子测定用的对 照溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图。测量对照品和内标物质的 峰面积或峰高，按下式计算校正因子：
蒸发光散检测器对结构类似的化合物，其响应值几乎仅与供试品的质 量有关；
二极管阵列检测器可以同时记录供试品的吸收光谱，故可用于供试品的 光谱鉴定和色谱峰的纯度检查。
7
当前7页，共24页，星期一。
检测器
紫外、荧光、电化学和示差折光检测器的响应值与供试品溶液的 浓度在一定范围内呈线性关系，但蒸发光散射检测器响应值与供 试品溶液的浓度通常呈指数关系，故进行计算时，一般需经对数 转换。
正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等 。
离子交换色谱系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱 系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体 的分离通常使用手性填充剂。
4
当前4页，共24页，星期一。
色谱柱
填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键 合基团的表面覆盖度、含炭量和键合类型等）以及色谱柱 的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。分析分 子量小于2000的化合物应选择孔径在15nm以下的填料，分 析分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填 料。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
能 不敏感
低
选择性 电流 104 10-10 不能 敏感 敏感
紫外-可见检测器：是高效液相色谱中最广泛应用的检测器，适用于
那些能在紫外/可见区有吸收的物质。传统的紫外-可见检测器一般选择在最 大吸收波长处进行检测。近年来发展起来的二极管阵列检测器可以实时记 录各个波长下的吸光度，可以给出每个色谱峰的保留时间-吸光度-吸收波长 的三维谱图。
气相色谱法(gas chromatography，GC)是采用气体作为流动相 的一种色谱法，具有高灵敏度、高选择性、高效、快速分离的特点。 在气相色谱中，流动相(称为载气)不和组分分子相互作用，其功能仅 仅是携带试样。
气固色谱-固定相是具有多孔性及大表面积的吸附剂微粒。 气液色谱-固定相是载体表面涂一层高沸点有机化合物的液膜(称 为固定液)。
荧光检测器：适用于检测紫外光激发后能产生荧光的物质。其灵
敏度比紫外-可见检测器高2-3个数量级，可检测出ng级痕量有机物。 具有极高的灵敏度和良好的选择性。
示差折光检测器：对一些紫外没有吸收的样品可以用示差折光检
测器，它是通过检测溶液折光指数的变化来测定样品浓度的。它是 一种通用检测器。但是其灵敏度比紫外-可见检测器低3个数量级， 受温度影响波动大，不适用于梯度淋洗。
容量因子κ′：等于（固定相中溶质的量/移动相中溶质的量） 相对保留值α：表示相邻两峰调整保留时间的比值。 理论塔板数N：对于色谱峰柱效率的一种度量。 分离度Rs：色谱柱总分离效率的指标，代表了两组峰的分离效果。
峰高（Peak Heigh)：从峰最大值到峰底的距离 峰面积（Peak Area)：峰与峰底之间的面积
提高分离度的途径
1）增加N：增加柱长，提高填充剂效能。N增加峰型变窄。 2）增加α：改变固定相、流动相极性或用梯度洗脱，延长分离时间。 3）改变κ′：移动相极性减小则κ′增加，流出时间增加，峰型变宽分离度提高。
高效液相色谱仪一般可分为4个主要部分：高压输液系统，进样系统， 分离系统和检测系统。
高压输液泵要求能提供连续无脉冲的液流。泵所供应的恒定 流量变动不宜超过1%，流量范围在0.1-10mL/min，泵压一 般在10-40MPa。
高效液相色谱可分为分析型和制备型两种。分析型色谱柱 常用内径为1~6mm的管子，而制备柱则用较粗的管子， 一般用内径为25mm的管子，有的可达60mm。柱子长 度从几十厘米到几米，一般为25cm到1m。
高效液相色谱常用的商品检测器有紫外检测器、荧光检测器、示差折光检 测器、光散射检测器和电化学检测器等。
气相色譜
高效液相色谱
只能分析约20%挥发性物 几乎可分析各种物质 质
不能分析热不稳定物质 可分析热不稳定物质
使用毛细管柱可得到很高 色谱柱不能很长，柱效相
的柱效
对较低
有很灵敏的检测器 (ECD) 无灵敏的通用型检测器 和较灵敏的通用型检测器
(FID & TCD)
流动相为气体无毒，较易 流动相毒性、费用较高 处理
高效液相色谱：在液相色谱柱中，采用颗粒极细的高效固定 相，采用高压输液泵输送流动相，全部工作过程通过仪器控 制完成。
高效液相色谱法优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。尤其适用于那些不 宜用气相色谱分析的难挥发性物质、热不稳定性物质、离子型物质和生物大分子 等。目前已知化合物中，80%的有机化合物可用高效液相色谱分析。
检测器
进样口 色谱工作站
气路控制
柱箱
气体钢瓶
计算机
1-载气钢瓶；2-减压阀；3-净化器；4-气流调节阀； 5-转子流量计；6-气化室；7-色谱柱；8-检测器
①气路系统 气路系统是一个密闭的管路系统，载气在其中稳定连续地运行，要控
制好载气的纯度和载气流速。它包括载气源、净化干燥器、减压阀、 稳压阀、稳流阀、压力表、流量计、各种管线等。常见的气相色谱仪 有单柱单气路和双柱双气路两种类型，当前一般气相色谱仪都是双柱 双气路的，这种气路结构的仪器既能用于恒温分析，
应用范围 测量参数 线性范围 检测限/g.ml-1 能否用于梯度洗脱 对流速的敏感性 对温度的敏感性
紫外-可见检 测器
选择性 吸光度 2.4104
10-9 能 不敏感 低
示差折光检 荧光检测 电化学检测
测器
器
器
通用性 折射率
104 10-10 不能 不敏感 敏感
选择性 荧光强度
103 10-10
商品泵主要包括：螺旋注射泵、气动放大泵、往复柱塞泵等。
高效液相色谱柱是决定分离效率的核心部分。一般采用不锈钢材料制 成。色谱柱内壁应经过精密加工，具有高的光滑度。两端接头采用不锈 钢或聚四氟乙烯密封圈。 常用色谱柱的内径在2-6mm，长度在10-50cm。色谱柱中紧密填充 粒度为5-10微米的颗粒状固定相。最常用柱子是C-18柱（ODS柱）
检测信号和时间的关系图 不同的色谱峰对应相应的组分 可以得到相应组分的保留时间和峰面积信息。 保留时间– 定性分析 峰面积 – 定量分析
保留值：保留时间(tR):试样组分从进样到出现最高峰时多需要的时间。
死时间（ to）:不被保留物质从进样到出峰最大值的时间。 调整保留时间(tR′ )： tR′ =tR -to
1）正相色谱与反相色谱
2）分离方式的选择
分子量大于2000以上的大分子和高分子可采用凝胶色谱；极性大的水溶 性化合物，在水中可以解离的离子化合物可采用不同类型的离子交换树 脂作为填料；在水中溶解但不电离的化合物，如糖类、可以用反相色谱， 以甲醇或乙腈-水为流动相；醇水不溶的弱极性和非极性样品主要用正相 吸附色谱法，以全多孔硅胶或氰基键合硅胶为固定相。
运行操作容易
运行操作比气相难
洗脱时
分离时
进样时
基础化學 塑胶 农药 杀虫剂 添加剂
石化工业 原油分析 模拟蒸馏 油品分析 天然气分析 汽油添加剂分析
环境检测 空气污染 水污染 固体废弃物 土壤分析
制药/刑偵 新药开发 品質管制 有机溶剂残留 药物滥用
食品分析 食物 飲料 香精香料 农残
压力控制 控制面板
峰面积=半峰宽*出峰高度 (A=h*W)
h W
分离度（Resolution)
两个相邻峰的分离程度。以两个 组份保留值之差与其平均半峰宽 值的比来表示：
Rs 2(tR 2 tR1 ) W2 W1
•当R<1时，两峰会有部分重叠 •当R=1时，两峰少有重叠（5％的重叠） •当R>1.5时，两峰完全分离（分离程度为大于99.7%）
低
选择性 电流 104 10-10 不能 敏感 敏感
紫外-可见检测器：是高效液相色谱中最广泛应用的检测器，适用于
那些能在紫外/可见区有吸收的物质。传统的紫外-可见检测器一般选择在最 大吸收波长处进行检测。近年来发展起来的二极管阵列检测器可以实时记 录各个波长下的吸光度，可以给出每个色谱峰的保留时间-吸光度-吸收波长 的三维谱图。
气相色谱法(gas chromatography，GC)是采用气体作为流动相 的一种色谱法，具有高灵敏度、高选择性、高效、快速分离的特点。 在气相色谱中，流动相(称为载气)不和组分分子相互作用，其功能仅 仅是携带试样。
气固色谱-固定相是具有多孔性及大表面积的吸附剂微粒。 气液色谱-固定相是载体表面涂一层高沸点有机化合物的液膜(称 为固定液)。
荧光检测器：适用于检测紫外光激发后能产生荧光的物质。其灵
敏度比紫外-可见检测器高2-3个数量级，可检测出ng级痕量有机物。 具有极高的灵敏度和良好的选择性。
示差折光检测器：对一些紫外没有吸收的样品可以用示差折光检
测器，它是通过检测溶液折光指数的变化来测定样品浓度的。它是 一种通用检测器。但是其灵敏度比紫外-可见检测器低3个数量级， 受温度影响波动大，不适用于梯度淋洗。
容量因子κ′：等于（固定相中溶质的量/移动相中溶质的量） 相对保留值α：表示相邻两峰调整保留时间的比值。 理论塔板数N：对于色谱峰柱效率的一种度量。 分离度Rs：色谱柱总分离效率的指标，代表了两组峰的分离效果。
峰高（Peak Heigh)：从峰最大值到峰底的距离 峰面积（Peak Area)：峰与峰底之间的面积
提高分离度的途径
1）增加N：增加柱长，提高填充剂效能。N增加峰型变窄。 2）增加α：改变固定相、流动相极性或用梯度洗脱，延长分离时间。 3）改变κ′：移动相极性减小则κ′增加，流出时间增加，峰型变宽分离度提高。
高效液相色谱仪一般可分为4个主要部分：高压输液系统，进样系统， 分离系统和检测系统。
高压输液泵要求能提供连续无脉冲的液流。泵所供应的恒定 流量变动不宜超过1%，流量范围在0.1-10mL/min，泵压一 般在10-40MPa。
高效液相色谱可分为分析型和制备型两种。分析型色谱柱 常用内径为1~6mm的管子，而制备柱则用较粗的管子， 一般用内径为25mm的管子，有的可达60mm。柱子长 度从几十厘米到几米，一般为25cm到1m。
高效液相色谱常用的商品检测器有紫外检测器、荧光检测器、示差折光检 测器、光散射检测器和电化学检测器等。
气相色譜
高效液相色谱
只能分析约20%挥发性物 几乎可分析各种物质 质
不能分析热不稳定物质 可分析热不稳定物质
使用毛细管柱可得到很高 色谱柱不能很长，柱效相
的柱效
对较低
有很灵敏的检测器 (ECD) 无灵敏的通用型检测器 和较灵敏的通用型检测器
(FID & TCD)
流动相为气体无毒，较易 流动相毒性、费用较高 处理
高效液相色谱：在液相色谱柱中，采用颗粒极细的高效固定 相，采用高压输液泵输送流动相，全部工作过程通过仪器控 制完成。
高效液相色谱法优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化。尤其适用于那些不 宜用气相色谱分析的难挥发性物质、热不稳定性物质、离子型物质和生物大分子 等。目前已知化合物中，80%的有机化合物可用高效液相色谱分析。
检测器
进样口 色谱工作站
气路控制
柱箱
气体钢瓶
计算机
1-载气钢瓶；2-减压阀；3-净化器；4-气流调节阀； 5-转子流量计；6-气化室；7-色谱柱；8-检测器
①气路系统 气路系统是一个密闭的管路系统，载气在其中稳定连续地运行，要控
制好载气的纯度和载气流速。它包括载气源、净化干燥器、减压阀、 稳压阀、稳流阀、压力表、流量计、各种管线等。常见的气相色谱仪 有单柱单气路和双柱双气路两种类型，当前一般气相色谱仪都是双柱 双气路的，这种气路结构的仪器既能用于恒温分析，
应用范围 测量参数 线性范围 检测限/g.ml-1 能否用于梯度洗脱 对流速的敏感性 对温度的敏感性
紫外-可见检 测器
选择性 吸光度 2.4104
10-9 能 不敏感 低
示差折光检 荧光检测 电化学检测
测器
器
器
通用性 折射率
104 10-10 不能 不敏感 敏感
选择性 荧光强度
103 10-10
商品泵主要包括：螺旋注射泵、气动放大泵、往复柱塞泵等。
高效液相色谱柱是决定分离效率的核心部分。一般采用不锈钢材料制 成。色谱柱内壁应经过精密加工，具有高的光滑度。两端接头采用不锈 钢或聚四氟乙烯密封圈。 常用色谱柱的内径在2-6mm，长度在10-50cm。色谱柱中紧密填充 粒度为5-10微米的颗粒状固定相。最常用柱子是C-18柱（ODS柱）
检测信号和时间的关系图 不同的色谱峰对应相应的组分 可以得到相应组分的保留时间和峰面积信息。 保留时间– 定性分析 峰面积 – 定量分析
保留值：保留时间(tR):试样组分从进样到出现最高峰时多需要的时间。
死时间（ to）:不被保留物质从进样到出峰最大值的时间。 调整保留时间(tR′ )： tR′ =tR -to
1）正相色谱与反相色谱
2）分离方式的选择
分子量大于2000以上的大分子和高分子可采用凝胶色谱；极性大的水溶 性化合物，在水中可以解离的离子化合物可采用不同类型的离子交换树 脂作为填料；在水中溶解但不电离的化合物，如糖类、可以用反相色谱， 以甲醇或乙腈-水为流动相；醇水不溶的弱极性和非极性样品主要用正相 吸附色谱法，以全多孔硅胶或氰基键合硅胶为固定相。
运行操作容易
运行操作比气相难
洗脱时
分离时
进样时
基础化學 塑胶 农药 杀虫剂 添加剂
石化工业 原油分析 模拟蒸馏 油品分析 天然气分析 汽油添加剂分析
环境检测 空气污染 水污染 固体废弃物 土壤分析
制药/刑偵 新药开发 品質管制 有机溶剂残留 药物滥用
食品分析 食物 飲料 香精香料 农残
压力控制 控制面板
峰面积=半峰宽*出峰高度 (A=h*W)
h W
分离度（Resolution)
两个相邻峰的分离程度。以两个 组份保留值之差与其平均半峰宽 值的比来表示：
Rs 2(tR 2 tR1 ) W2 W1
•当R<1时，两峰会有部分重叠 •当R=1时，两峰少有重叠（5％的重叠） •当R>1.5时，两峰完全分离（分离程度为大于99.7%）