葡萄酒中苯甲酸和山梨酸含量测定方法的研究

第 1 页 共 2 页 山梨酸和苯甲酸的测定——薄层色谱法

1．原理 试样酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸。将试样提取液浓缩，点于聚酰胺薄层板上，绽开。显色后，按照薄层板上苯甲酸、山梨酸的比移值与标准比较定性，并可举行概略定量。 2．试剂 异丙醇、正丁醇、石油醚(沸程30～60℃)、乙醚(不含过氧化物)、氨水、无水乙醇、聚酰胺粉(200目)、盐酸(1+1，取100mL盐酸，加水稀释至200mL、氯化钠酸性溶液[40g/L，于氯化钠溶液(40g/L)中加少量盐酸(1+1)酸化]。 绽开剂：正丁醇+氨水+无水乙醇(7+1+2)或异丙醇+氨水+无水乙醇(7+1+2)。 山梨酸标准溶液：精确 称取O．2000g山梨酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液lmL相当于2.0mg山梨酸。 苯甲酸标准溶液：精确 称取0.2000g苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液1mL相当于2.0mg苯甲酸。 显色剂：溴甲酚紫-乙醇(50％)溶液(0.4g/L)，用氢氧化钠溶液(4g/L)调至pH 8。 3．仪器 吹风机、色谱分别缸、玻璃板(10cm×18cm)、微量注射器(10μL，100μL)、喷雾器。

4．分析步骤 (1)试样提取称取2.50g事先混合匀称的试样，置于25mL具塞量简中，加0.5mL盐酸(1+1)酸化，用15mL、10mL乙醚提取两次，每次振摇1min，将上层醚提取液吸入另一个25mL具塞量筒中，合并乙醚提取液。用3mL氯化钠酸性溶液(40g/L)洗涤两次，静置15min，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中，加乙醚至刻度，混匀，吸取10.0mL乙醚提取液分两次置于10mL具塞离心管中，在约40℃的水浴上挥干，加入0.10mL乙醇溶解残渣，备用。 (2)测定 聚酰胺粉板的制备：称取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加约15mL水，研磨3～5min，立刻倒入涂布器内制成10cm×18cm、厚度0.3mm的薄层板两块，室温干燥后，于80℃干燥1h，取出，置于干燥器中保存。 点样：在薄层板下端2cm的基线上，用微量注射器点1μL、2μL试样液，同时各点1μL、2μL山梨酸、苯甲酸标准溶液。 绽开与显色：将点样后的薄层板放入预先盛有绽开剂的绽开槽内，绽开槽周

Dec.2022 CHINA FOOD SAFETY 63分析检测高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的基质干扰分析及定性确证丁　梅（梅河口市食品药品检验检测中心，吉林梅河口 135000）摘　要：目的：分析食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠测定的基质干扰峰及定性确证。方法：采用高效液相色谱法测定食品中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠，当以乙酸铵溶液（20 mmol·L-1）+甲醇（95+5）为流动相出现可疑峰时，再以甲酸-乙酸铵溶液（2 mmol·L-1甲酸-20 mmol·L-1乙酸铵）+甲醇（92+8）为流动相分析可疑峰，在两种流动相（不同pH值）洗脱下，比较标液中目标峰与样品中可疑峰保留时间的一致性，定性确认样品中的可疑峰是否为目标峰。结果：基质复杂的样品，单一以一种流动相的保留时间定性，容易出现假阳性情况，而以两种流动相保留时间综合定性验证，才能使样品检测结果更可靠。结论：采用两种流动相洗脱下的保留时间进行综合定性分析，可有效避免样品基质干扰出现假阳性样品。关键词：高效液相色谱法；山梨酸；苯甲酸；糖精钠；基质干扰峰；定性确证Analysis and Qualitative Confirmation of Matrix Interference in the Determination of Sorbic Acid, Benzoic Acid, and Saccharin Sodium in Foods by High Performance Liquid ChromatographyDING Mei(Meihekou Food and Drug Testing Center, Meihekou 135000, China)Abstract: Objective: To analyze the matrix interference peaks in the determination of sorbic acid, benzoic acid and saccharin sodium in foods and to qualitatively confirm them. Method: The sorbic acid, benzoic acid and saccharin sodium in foods were determined by HPLC. When the suspicious peak appeared in the mobile phase of ammonium acetate solution (20 mmol·L-1)+methanol (95+5), and then the mobile phase of formic acid-ammonium acetate solution (2 mmol·L-1 formic acid-20 mmol·L-1 ammonium acetate)+methanol (92+8) was used to analyze the suspicious peak. Compare the consistency of retention time between the target peak in the standard solution and the suspicious peak in the sample, and qualitatively confirm whether the suspicious peak in the sample is the target peak. Result: For samples with complex matrix, the retention time of one mobile phase alone can easily lead to false positive. However, the comprehensive qualitative verification of the retention time of two mobile phases can make the sample test results more reliable. Conclusion: Using the retention time under the elution of two mobile phases for comprehensive qualitative analysis can effectively avoid the false positive sample caused by sample matrix interference.Keywords: high performance liquid chromatography; sorbic acid; benzoic acid; sodium saccharin; matrix interference peak; qualitative confirmation苯甲酸、山梨酸、糖精钠是食品中应用最广泛、最常见的食品添加剂，在《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760—2014）[1]中明确规定了其使用范围和限量，被国家食品安全监管部门列作者简介：丁梅（1970—），女，吉林梅河口人，大专，高级工程师。研究方向：食品检验与分析。Copyright©博看网. All Rights Reserved. 64 食品安全导刊 2022年12月（下）分析检测为重点监测的检测项目。目前食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠测定方法有液相色谱法[2-8]和气相色谱法[8-10]和超高效液相色谱串联质谱法[11]，其中高效液相色谱法因检验成本低、前处理简单、设备通用性和普及性好而成为主要检测方法之一。目前色谱分析主要是以保留时间进行定性，对于基质复杂的样品，相同保留时间段常有基质干扰峰出现，尤其是以一种流动相洗脱下的保留时间进行定性往往会出现假阳性样品。本文根据目标物的出峰时间会随着流动相pH值的不同而发生改变这一现象[12-13]，研究以乙酸铵溶液+甲醇（95+5）为流动相出现可疑峰时，再以（甲酸-乙酸铵溶液）+甲醇（92+8）为流动相分析可疑峰，通过不同pH的两种流动相洗脱下的保留时间进行综合定性分析，可以有效避免由样品基质干扰出现假阳性样品，在实际检测工作中效果 较好。1　材料与方法1.1　仪器与试剂LC20AT高效液相色谱仪（配紫外检测器，日本岛津公司）；重载数显型涡旋混合器（美国Talboys公司）；KQ-500DE超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；KH20R-Ⅱ高速冷冻离心机（湖南凯达科学仪器有限公司）。甲醇、甲酸（色谱纯，上海安谱实验科技股份有限公司）；标准物质苯甲酸、山梨酸、糖精钠（德国Dr.Ehrenstorfer公司）。20 mmol·L-1乙酸铵溶液：称取1.54 g优级纯乙酸铵（Alfa Aesar），加1 000 mL水溶解，过0.22 μm滤膜后备用。甲酸-乙酸铵溶液（2 mmol·L-1甲酸-20 mmol·L-1乙酸铵）：在1 000 mL乙酸铵溶液（20 mmol·L-1）中加入75.2 μL甲酸，混合后过0.22 μm滤膜后备用。1.2　色谱条件色谱柱：Shimpack VP-ODS（5 μm，250 mm× 4.6 mm）；检测波长：230 nm；柱温：30 ℃；进样量：20 μL；流速：1.0 mL·min-1；流动相1：20 mmol·L-1乙酸铵溶液+甲醇（95+5）；流动相2：甲酸-乙酸铵溶液（2 mmol·L-1甲酸-20 mmol·L-1乙酸铵）+甲醇（92+8）。1.3　标准溶液配制苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准储备溶液：分别准确称取标准物质各0.01 g于10 mL容量瓶中，分别用甲醇溶解并定容，配制的储备液浓度均为 1 mg·mL-1。苯甲酸、山梨酸、糖精钠混合标准溶液：分别准确吸取苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准储备溶液适量，用超纯水逐级稀释配制混合标准溶液，其浓度为 5 μg·mL-1。1.4　样品处理称取样品2 g（精确至0.001 g）于50 mL具塞刻度试管中，加入25 mL水，涡旋1 min，超声30 min，加亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液各2 mL，混匀，加水定容至刻度，静置30 min。取适量上清液于 10 000 r·min-1离心5 min，过0.22 μm滤膜备用。1.5　定性分析以乙酸铵溶液+甲醇（95+5）为流动相，分别进样混标液和样液，经色谱柱分离后以保留时间定性，若出现可疑色谱峰时，再以甲酸-乙酸铵溶液+甲醇（92+8）为流动相分析可疑峰，采用两种流动相洗脱下的保留时间进行综合定性分析，进一步定性验证样品中可疑色谱峰是否为目标峰。2　结果与分析2.1　以乙酸铵溶液+甲醇为流动相的检测结果随机选取市售肉千子、蛋糕、冷面、红方样品，经前处理后，以乙酸铵溶液+甲醇（95+5）为流动相（流动相1）进行色谱分析，并与混合标准溶液色谱图进行比较。以保留时间定性可知，肉千子中检出山梨酸，未检出苯甲酸、糖精钠（图1）；蛋糕中检出糖精钠，未检出苯甲酸、山梨酸（图2）；冷面中检出山梨酸，未检出苯甲酸、糖精钠（图3）；红方中检出苯甲酸，未检出山梨酸、糖精钠（图4）。-10 0000.05.010.015.020.025.030.0min混合标准溶液（浓度5 μg·mL-1）肉千子样品-5 00005 00010 00015 00020 00025 000山梨酸苯甲酸糖精钠30 00035 00040 00045 00050 000uV图1　肉千子样品和混合标准溶液色谱图（流动相1）Copyright©博看网. All Rights Reserved. Dec.2022 CHINA FOOD SAFETY 65分析检测

现代食品科技　Ｍｏｄｅｒｎ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　２０１３，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．５　多样品同时萃取一气相色谱法测定食品中　山梨酸和苯甲酸　朱国强，韦丽丽，江恩源　（梧州市疾病预防控制中心，广西梧州５４３００２）　摘要：研究了多样品同时萃．　气相色谱法对食品中山梨酸和苯甲酸的快速测定。以醋酸乙酯＋正己烷（１＋１）混合溶剂对样品　和标准系列进行一次性萃取，用ＳＥ．３０宽口径毛细柱作分析柱对萃取相进行分析。方法条件下，样品中山梨酸和苯甲酸的检出限为Ｉ　ｍｇ／ｋｇ，线性范围２５￣５００　ｍｇ／ｋｇ，回收率９３．２％、１０２．４％，相对标准偏差（ＲＳＤ）为１．９￣４．１％。方法操作简便怏捷易于控制，使用试　剂少成本低，用于批量样品的山梨酸和苯甲酸快速测定获得良好效果。　关键词：气相色谱法；多样品同时萃取；山梨酸和苯甲酸　文章篇号：１６７３．９０７８（２０１３）５．１１６６－１１６９　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉ０ｎ　０ｆ　Ｓｏｒｂｉｃ　Ａｃｉｄ　ａｎｄ　Ｂｅｎｚｏｉｃ　Ａｃｉｄ　ｉｎ　Ｆｏｏｄｓ　Ｕｓｉｎｇ　Ｍｕｌｔｉ－ｓａｍｐｌｅ　Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　Ｅｘｔｒａｃｔｉ０ｎ—ｇａｓ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ＺＨＵ　Ｇｕｏ－ｑｉａｎｇ，ＷＥＩ　Ｌ　Ｇ　Ｅｎ－ｙｕａｎ　（Ｗｕｚｈｏｕ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　ａｎｄ　Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｗｕｚｈｏｕ　５４３００２，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ　ｎｏｖｅｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｏｒｂｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｂｅｎｚｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｆｏｏｄ　ｗａｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｍｕｌｔｉ—ｓａｍｐｌｅ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ－ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅｓ　ａｎｄ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｓｅｒｉｅｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ，ｗｉｔｈ　ａ　ｍｉｘｔｕｒｅ　ｏｆｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ａｎｄ　ｈｅｘａｎｅ（１＋１）ａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｏｌｖｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎ￣ｏｆｓｏｒｂｉｃ　ａｃｉｄａｎｄｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＳＥ－３０ｗｉｄｅ　ｃａｌｉｂｅｒｃａｐｉｌｌａｒｙ．Ｉｎｔｈｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｃｏｎａｉｔｉｏｍ，ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｌｉｍｉｔ　ｆｏｒ　ｓｏｒｂｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｂｅｎｚｏｉｃ　ａｃｉｄ　Ｗａｓ　１　ｍｇ／ｋｇ，ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅ　Ｗａｓ　２５￣５００　ｍｅｐ￣ｇ，ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　Ｗａｓ　９３．２￣１０２．４％ａｎｄｔｈｅ　ＲＳＤ　Ｗａｓ　１．９－－４．１％．Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　Ｗａｓ　ｓｉｍｐｌｅ．ｒａｐｉｄ，ｅａｓｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ａｎｄ　ｌｏｗ－ｃｏｓｔ．Ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｒａｐｉｄ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆｂａｔｃｈ　ｓａｍｐｌｅ．　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｇａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｍｕｌｔｉ－ｓａｍｐｌｅ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｓｏｒｂｉｃ　ａｃｉｄａｎｄｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ　在食品加工行业，山梨酸和苯甲酸及其盐类被广　泛用作食品的防腐保鲜剂。由于存在的安全性问题，　在我国食品安全管理中山梨酸和苯甲酸及其盐类的使　用范围和使用量都有特别规定　】。目前食品中山梨酸　和苯甲酸常用的测定方法有高效液相色谱法、气相色　谱法、紫外分光光度法和薄层色谱法【２￣　ｌ，其中以前　两种方法报道最多，而气相色谱法由于仪器普及使用　较多。现有文献报道的气相色谱法多采用经典的多步　萃取法处理样品［６－　】，过程繁琐费时并耗费大量的试　剂；此外，因使用低沸点高挥发性的乙醚或乙醚加石　油醚（３０－４５０℃）作为溶剂，在高温季节开展检测时　环境条件容易对分析工作造成较大影响。也有报道采　用溶剂一步萃取法和溶剂直接混溶浸提取样法对食品　中山梨酸和苯甲酸快速检测【ｌ　］，但采用的一步萃取　法分析过程仍易受实验室环境温度条件影响，而溶剂　收稿日期；２０１２－１２－２８　作者简介：朱国强（１９６４一），主管技师，理学学士，主要从事理化检验　直接混溶浸提取样法由于相当于直接进样分析，会把　大量样品基质带入仪器进样口造成严重积炭并损害色　谱柱。另外现行气相色谱法中，标准系列溶液的制备　与样品试液的制备方法是不一致的，容易造成分析误　差。作者将样品萃取试验小试量化设计，用乙酸乙酯　＋正己烷（１＋１）混合溶剂作为萃取剂，通过选用相应　的试管架作为样品振荡萃取支架，同时对多个试样进　行一次性萃取，用ＳＥ一３０宽口径毛细柱作为分析柱对萃　取相进行分析，应用于食品中山梨酸和苯甲酸含量的　测定获得良好效果。　１试验部分　１．１仪器与试剂　安捷伦７８９０Ａ气相色谱仪，ＦＩＤ检测器，安捷伦化　学工作站Ｂ＿ｏ４．Ｏｌ版；８２．１型离心机：ｉ０（￣５００　可调　移液枪。　山梨酸和苯甲酸标准溶液，质量浓度均为１．

学号

1

苏州市职业大学

毕业论文

题目食品中山梨酸含量的测定

学生姓名： 朱韵玲

专业班级： 13工业检验与分析

学院 (部)： 教育与人文学院

校内指导教师： 陈一虎（老师） 校外指导教师： 唐伯泰（管理）

完成日期： 2016 年 3 月

目 录

一、前言

1、山梨酸的介绍

2、山梨酸的应用

3、使用山梨酸的注意事项

二、实验部分

1、实验原理

2、仪器与试剂

三、山梨酸钾的探究方式

1.吸收光谱与测量波长的测定

2.氧化反应的温度测定

3.山梨酸钾的显色酸度

4.山梨酸钾的显色剂用量

5.工作曲线

四、山梨酸钾的样品测定 1.样品溶液的测定与制备

2.精密度的实验

3.关于山梨酸钾的样品分析

五、结论

测定食品中山梨酸的含量

朱韵玲

（教育与人文学院13工业检验与分析）

【摘 要】：食品中的山梨酸如果超标严重，被人们长期使用，对人的身体健康有潜在的威胁，比如会在一定程度上抑制骨骼生长，肾和肝脏上也会受到一定的损伤。因此对于山梨酸钾的含量测定是非常的重要。测定方式应采用分光光度法，山梨酸，可以作为氧化剂，从而获得氧化产物丙二醛，然后得到的氧化产物和硫代巴比妥酸进行显色反应。测定毫升浓度为L的H2SO4溶液效果最佳的条件是：1.吸收波长是530nm;2.氧化反应的温度测定控制在60摄氏度；3.山梨酸钾的显色剂用量为。0 ~ µg/mL范围山梨酸浓度呈线性相关，吸光度与浓度之间的线性范围（山梨酸µμg／ml）的关系：A=+，R2=，回收率为%～%。

【关键词】：山梨酸；测定；分光光度