结直肠癌组织中Skp2和P27kip1蛋白的表达及其临床意义

结直肠癌组织中Skp2和P27kip1蛋白的表达及其临床意义

目的探讨Skp2、P27kip12蛋白在结直肠癌中的表达及相关性，揭示Skp2和P27kip12在结直肠癌的发生和发展中的作用。方法应用免疫组织化学SP法检测Skp2、P27kip12、p53、bcl-2蛋白在100例结直肠癌中的表达情况。结果Skp2在结直肠癌组织中表达阳性率为64.0%（64/100），在正常组织中表达的阳性率为15.0%（6/40）；P27kip12在结直肠癌组织中表达阳性率为22.0%（22/100），在正常组织中表达的阳性率为90.0%（36/40）；p53在结直肠癌组织中表达阳性率为80.0%（40/50），在正常组织中表达的阳性率为0.0%（0/20）；结直肠癌组织中bcl-2蛋白阳性表达率为74.0%（74/100），显著高于结肠正常组织10.0%（4/40）（P＜0.05）。结论Skp2、P27kip12基因的异常表达是结直肠癌组织的发生、发展的原因之一。癌基因p53 及凋亡抑制基因Bcl-2的表达上调是其作用机制之一。Skp2和P27kip12基因的异常表达参与了结直肠癌的病理分化程度、临床Dukes分期、淋巴结转移。

标签：结直肠癌；Skp2；P27kip12；p53；bcl-2

Skp2 in Colorectal Carcinomas and Expression of P27kip12 Protein and Its

Clinical SignificanceSUN Xiao.（Fengtian Hospital of Shenyang Medical College，

Shenyang 110024，China）【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression and

correlation of Skp2 and P27kip12 in colon carcinoma and detect the relationship with

the development of the diseases.MethodsTo detect the protein expression of Skp2 and

P27kip12 by immunohistochemistry staining （SP method） in 100 cases of colon

cancer and 40 normal colonic mucosas.Resultsthe positive expression of Skp2 and

P27kip12 mainly located within the cellular nucleus. The protein expression of skp2

was 64.0%， significantly higher than normal colonic mucosa. 15.0% （P＜0.05）.

The protein expression of P27kip12 was 22.0% in the colonic cancer， significantly

lower than normal colonic mucosa. 90.0% （P＜0.05）. The positive expression of p53

is no expression in the normal colon tissue（0.0%， 0/40）， but there was significant

increased expression in the colon cancer（80.0%， 80/100， P＜0.01）. There was a

significant increase of positive expression of bcl-2 in the colon cancer 74.0%（74/100）compared with the normal tissue10.0%（4/40）（P＜0.05）. ConclusionsThe abnormal

expression of both Skp2 and P27kip12 is one of the reasons that cause the

development of colon cancer. It may be realized through the up-regulate the

expression of p53 and bcl-2. The abnormal expression of Skp2 and P27kip12 has

special relationship with the differentiation， Dukes staging and lymph node

metastases of colon cancer respectively.

【Key words】Colon carcinoma；Skp2；P27kip12；p53；bcl-2

近年来，我国大肠癌的发病人数呈逐年增高的趋势，有报道其发病率在恶性肿瘤中己由原来的第4位上升为第3位。因此，如何预防其发生及早期发现方面的研究是备受关注。随着分子生物学的飞跃发展，对结直肠癌的发生和发展过程

研究的揭示，主要是一些基因或特殊的基因结构发生突变，这些突变的基因包括原癌基因和抑癌基因。这些突变的基因导致细胞周期调控机制的紊乱，导致细胞的失控性生长。细胞增殖和细胞凋亡是维持细胞相对恒定的一对矛盾，是受着一系列基因调节的。我们运用免疫组织化学SP法检测Skp2、P27kip12、p53、bcl-2蛋白在100例结直肠癌中的表达情况，探讨其相关意义。

1材料与方法

1.1病例来源

标本选自沈阳医学院奉天医院病理科2000年1月至2003年12月期间临床病理资料完整蜡块标本结直肠癌100例：高分化腺癌38例，中分化腺癌34例，低分化腺癌28例。其中男性54例，女性46例。年龄34～77岁，中位年龄53岁，按1991年WHO年龄分段：青年组（44岁以下）24例；中年组（45～59岁）40例；老年组（60以上）36例。Dukes分期标准：A期26例，B期32例，C期38例，D期4例。淋巴结转移38例，无淋巴结转移62例。所有病例术前均未作放疗及化疗。正常大肠组织40例。1.2免疫组织化学染色

石蜡包埋组织4μm切片，进行免疫组织化学染色，第一抗体采用Skp2、P27kip12、p53 、bcl-2， 为武汉博士德生物工程有限公司产品； SP即用型免疫组化试剂盒及AEC显色试剂盒均为武汉博士德生物工程有限公司产品。

1.3结果判断

Skp2、P27kip12、p53阳性表达都主要定位于细胞核，呈红色；bcl-2阳性染色主要定位于胞浆，呈红色。阳性瘤细胞数大于30%时视为阳性。所有抗体均设阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作空白对照。

1.4统计学分析

采用SPSS 12.0统计软件进行统计学分析，计数资料采用卡方检验，等级相关资料采用非参数秩和检验，相关分析采用Spearman相关统计分析。

2结果

2.1Skp2在结直肠癌及正常结肠组织中的表达

Skp2在结直肠癌组织中表达阳性率为64.0%（64/100），在正常组织中表达的阳性率为15.0%（6/40），差异有统计学意义（P＜0.05）。说明Skp2蛋白在结直肠癌组织中的表达显著高于正常组织。在结直肠癌中Skp2蛋白表达与年龄和性别无关（P>0.05）。与临床病理分期、肿瘤分化程度、及是否伴有淋巴结转移有关（P＜0.05）。

2.2P27kip12在结直肠癌及正常结肠组织中的表达

P27kip12在结直肠癌组织中表达阳性率为22.0%（22/100），在正常组织中表达的阳性率为90.0%（36/40），差异有统计学意义（P＜0.05）。说明P27kip12蛋白在结直肠癌组织中的表达显著低于正常组织。在结直肠癌中P27kip12蛋白表达与年龄和性别无关（P>0.05）。与临床病理分期、肿瘤分化程度、及是否伴有淋巴结转移有关（P＜0.05）（表1）。

2.3p53 、bcl-2在结直肠癌及正常大肠组织中的表达

p53在结直肠癌组织中表达阳性率为80.0%（80/100），在正常组织中表达的阳性率为0.0%（0/40），差异有统计学意义（P＜0.01）。在结直肠癌中p53蛋白表达与年龄、性别、病理分期及是否伴有淋巴结转移无关（P>0.05），但与肿瘤分化程度有关（P＜0.05）（表2）。结直肠癌组织中bcl-2蛋白阳性表达率为74.0%（74/100），显著高于结肠正常组织10.0%（4/40）（P＜0.05） （表2； bcl-2在结直肠癌中的表达与年龄、性别、病理分期及是否伴有淋巴结转移无关，而与临床病理类型有明显相关性（P＜0.05）。

2.4Skp2与P27kip12、p53 、bcl-2在结直肠癌组织中表达的相关性分析

经Spearman相关统计学处理分析提示Skp2与P27kip12蛋白在结直肠癌组织中的表达呈负相关，r=-0.282，P＜0.05。与p53 、bcl-2的表达分别呈正相关（rs=0.345、rs=0.231，P＜0.01）。

表1临床病理参数对结直肠癌组织中Skp2与P27kip12蛋白表达的影响

例数〖3〗Skp2（-） （+）〖5〗P27kip1（-） （+）性别 χ2=0.20 χ2=0.52男 54 24 38 P>0.05 40 14 P>0.05女 46 20 2638 8年龄分组

χ2=0.12 χ2=0.82青年组 24 10 1418 6中年组 40 14 26 P>0.05 32 8

P>0.05老年组 36 12 2428 8病理分化程度 χ2=6.17 χ2=4.23高、中分化 72 32 40 P＜0.05 54 18 P＜0.05低分化 28 4 2424 4Dukes分期

χ2=4.32 χ2=6.10A+B期 58 28 30 P＜0.05 40 18 P＜0.05 C+D期 42 8 3438 4淋巴结 χ2=6.52 χ2=7.21无 62 30 32 P＜0.05 46 16 P＜0.05 有 38 6 32

32 6表2临床病理参数对结直肠癌组织中p53与bcl-2蛋白表达的影响

例数〖3〗p53（-） （+）〖5〗Bcl-2（-） （+）性别 χ2=0.14 χ2=0.32男 54 10 44P>0.05 18 36P>0.05女 46 10 368 38年龄分组 χ2=0.02 χ2=0.22青年组 24 222420中年组 40 10 30 P>0.05 8 32 P>0.05老年组 36 8 2814 22病理分化程度 χ2=6.17 χ2=4.23高、中分化 72 20 52P＜0.05

24 48P＜0.05低分化 28 0 28226Dukes分期 χ2=0.31 χ2=0.10A+B期 58 12 46 P＜0.05 454 P＜0.05 C+D期 42 8 3438 20淋巴结 χ2=0.27 χ2=0.21无 62 8 54 P＜0.05 18 44 P＜0.05 有 38 12 26 10303讨论