毛白杨环氧水解酶

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三倍体毛白杨原料木素结构分析

８８中华氓－幕７幕Ｉ２６－目２毫Ｉ０ＲＩ期０Ｉ
维普资讯
・纤维原料・
热回流２反应结束后经过中和，后４ ℃ 以下旋转蒸ｈ。然Ｏ
１６ ’－Ｎ核磁共振￣ＰＭＲ
发。将浓缩后的溶液缓慢地滴入大量的ｐＨ值素，经
１实验
１１原料．
实验用原料为５年生三倍体毛白杨。自河北省威县取三倍体毛白杨优良品种培育基地，胸径２ｃ用人工把ｌｍ。
木材加工成木片。
１２木粉制备．
刘玉，士、教授；要从事低／无污染制浆漂白及博副主
应用于研究测定机械浆中的醌型结构后来，Ａｒｙｏｏｌｓ一步发展了这一技术，来定量地ｇｒｐｕｏ【进卜用
测定木素样品中各羟基功能基团含量。
原料木素的分离采用酶一弱酸解两段方法Ｉ。－一
第一段，处理。丙酮抽提后的木粉置入含有ｐ酶将Ｈ为４５醋酸一醋酸钠缓冲溶液的锥形瓶里，入纤维素．的加
酶，于４置０℃ 的恒温摇床里，应４反８ｈ。
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● 纤维原料 ●
三倍体毛白杨原料木素结构分析
■ 刘玉ｌ・詹怀宇陈嘉Ｊ’ ＤｍｉｉＡｇｒｐｕｏ。Ｉ２Ｉｌｉｔｓｒｙｏｏｌｓｒ（．１山东轻工业学院制浆造纸工程省级重点学科山东济南２００ｌ．５１０２华南理工大学制浆造纸工程

【国家自然科学基金】_酶促水解_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140803

2010年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
科研热词非水相芽孢杆菌(bacillus 脂包衣脂肪酶纤溶酶spfe-ⅱ 纤溶机理玉米蛋白海藻酸钠水-有机溶剂混溶拆分布洛芬多肽固定Байду номын сангаас 反应动力学 sp.nov.sk006)
推荐指数 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2013年科研热词酶促水解醋酸棉酚酶促立体选择性酪蛋白转变温度褶皱假丝酵母菌脂肪酶胰酶聚合物微球纳米纤维神经网络磷饱和度磷吸附行为碱性蛋白酶有机磷异相成核布洛芬乙烯酯巢湖尿素土壤脲酶土壤土地利用响应面法反应介质动力学特性冷榨花生粕三维表征推荐指数 3 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2008年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28
科研热词推荐指数酶促水解 2 鼠李糖脂 1 魔芋葡甘聚糖 1 金刚烷衍生物 1 酶稳定性 1 酶水解 1 酶学特性 1 羧肽酶a 1 绿豆 1 纳米sio2 1 纤维素 1 环氧水解酶 1 猪精液 1 模拟酶 1 桥联三环糊精 1 对硝基苯乙烯氧化物 1 对映归一性水解 1 大豆异黄酮 1 固定化酶 1 反应-扩散动力学 1 双相体系 1 分离纯化 1 分子量分布 1 三元超分子体系 1 β -甘露聚糖酶 1 tween80 1 n-乙酰-β -d-氨基葡萄糖苷酶 1 (r)-对硝基苯乙二醇 1
推荐指数 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

环氧水解酶的结构基础及新酶开发

环氧水解酶的结构基础及新酶开发孔旭东;郁惠蕾;周佳海;许建和【期刊名称】《生物加工过程》【年(卷),期】2013(11)1【摘要】Epoxide hydrolases (EHs) were widely used in the synthesis of chiral epoxides and diols by kinetics resolution or enantioconvergent hydrolysis. Recently, with the crystal structures of EHs, more details about their catalytic mechanism were obtained. With the development of bioinformatic, molecular biology and protein engineering, more EHs were cloned, expressed and engineered. This review focused mainly on the structure basis of EHs and the development of novel EHs as biocatalyst.%环氧水解酶能应用于外消旋环氧化物的动力学拆分或对映归一性水解制备光学纯的环氧或邻位二醇,具有广阔的应用前景.近年来,多个环氧水解酶晶体结构的报道使人们对它的结构基础有了更深入的理解.随着基因信息的增长,分子生物学和蛋白质工程技术的发展大大简化了大量克隆表达多样性环氧水解酶的过程,降低了环氧水解酶分子改造的难度,为新型具有工业应用潜力的环氧水解酶的开发提供了技术支持.本文综述了环氧水解酶的结构与机制以及近年来环氧水解酶重组表达及分子改造的研究进展.【总页数】10页(P77-86)【作者】孔旭东;郁惠蕾;周佳海;许建和【作者单位】华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海200237;中国科学院上海有机化学研究所生命有机化学国家重点实验室,上海200036;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海200237;中国科学院上海有机化学研究所生命有机化学国家重点实验室,上海200036;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海200237【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.新型环氧化物水解酶产酶菌株的筛选及产酶条件优化 [J], 明飞平;李从发;刘四新2.毛白杨环氧水解酶的异源表达及其在催化拆分手性环氧化物中的应用 [J], 赵晶;鞠鑫;潘江;李春秀;王敏杰;许建和3.有机溶剂/缓冲液双相体系中绿豆环氧化物水解酶催化环氧苯乙烯不对称水解反应 [J], 陈文静;娄文勇;王晓婷;宗敏华4.菜豆环氧水解酶归一性水解间硝基环氧苯乙烷的研究 [J], 李闯; 文正; 刘畅; 邬敏辰5.环氧化物水解酶交联细胞聚集体催化合成(R)-环氧氯丙烷 [J], 邹树平;姜镇涛;王志才;柳志强;郑裕国因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

加压热水预处理时间对毛白杨木材结构及酶解效果的影响

加压热水预处理时间对毛白杨木材结构及酶解效果的影响曲丽洁;马晓军;于丽丽【摘要】The effects of pretreatment time on the microstructure of Populus tomentosa wood before and after enzymatic reaction and reducing sugar yield were studied with hot compressed water treatment by scanning electron microscopy (SEM), X-ray diffraction (XRD), and Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR). The results showed that after the hot-compressed-water treatment of wood, the structure was loose, crystallinity, removal effi-ciency of lignin and degradation of hemicellulose, accessibility of cellulose was increased, and improved the effi-ciency of enzymolysis and reducing sugar yield. The effect is more significant as the pretreatment time prolongs. When pretreatment time was 50 min, the conversion rate of reducing sugar was 47%.%采用加压热水对毛白杨进行预处理,利用扫描电镜(SEM)、X射线衍射仪(XRD)、傅立叶红外光谱(FTIR)等研究预处理时间对木材及其酶解后微结构的影响,分析预处理时间对还原糖得率的影响.结果表明:经加压热水预处理后,毛白杨木材结构变得松散,结晶度增大,可以有效去除木质素和降解半纤维素,增加纤维素的可及度,提高酶解效率和还原糖的产量;加压热水预处理时间越长效果越明显,预处理时间为50 min时,预处理后毛白杨酶解糖转化率可达47%.【期刊名称】《西南林业大学学报》【年(卷),期】2017(037)003【总页数】5页(P187-191)【关键词】毛白杨;加压热水;木材结构;酶解效果;还原糖;SEM;XRD;FTIR【作者】曲丽洁;马晓军;于丽丽【作者单位】天津科技大学包装与印刷工程学院, 天津300222;天津科技大学包装与印刷工程学院, 天津300222;天津科技大学包装与印刷工程学院, 天津300222【正文语种】中文【中图分类】S781.3当今世界的能源问题是所有国家都面临的重大问题，不仅制约着工业的发展，也与环境保护息息相关。

加压热水预处理温度对毛白杨木材结构及酶解效果的影响

加压热水预处理温度对毛白杨木材结构及酶解效果的影响邢靖晨;于丽丽;马晓军【摘要】采用加压热水对毛白杨进行预处理,利用扫描电镜(SEM)、X射线衍射仪(XRD)、傅里叶变换红外光谱(FT-IR)等研究了预处理温度对毛白杨木材及其酶解材微结构的影响,并考察了预处理温度对还原糖得率的影响.结果表明:毛白杨木材经加压热水处理后结构松散,纤维形态和表面结构发生了改变;加压热水处理温度超过180℃以后,酶解前后物料的结晶度降低明显,酶解后的降幅最大可达74％.随着预处理温度的增加,木材酶解还原糖得率先增加后减小,其中预处理温度为200℃时还原糖得率最大可达38.3％.【期刊名称】《生物质化学工程》【年(卷),期】2017(051)005【总页数】5页(P36-40)【关键词】毛白杨;加压热水预处理;酶解;XRD;FT-IR【作者】邢靖晨;于丽丽;马晓军【作者单位】天津科技大学包装与印刷工程学院,天津300222;天津科技大学包装与印刷工程学院,天津300222;天津科技大学包装与印刷工程学院,天津300222【正文语种】中文【中图分类】TQ351.3随着石油和煤炭储量的减少以及各类环境污染问题的突出，资源丰富且可再生的木质生物质资源受到各国的广泛关注[1]。

近年来，研究者们对木质生物质资源转化为清洁燃料和化学品原料等进行了大量的卓有成效的工作[2-3]。

由于木材结构复杂，很难被直接转化为生物质能源和材料，因此预处理成为其生物转化过程的最关键步骤。

常用的预处理方法主要有有机溶剂预处理、热水预处理、弱碱性亚硫酸盐预处理、稀酸预处理、氨水及蒸汽爆破预处理等[4-6]。

与其他预处理方法相比，加压热水处理法因发酵过程中毒性副产物生成量少，设备成本低，不需添加任何化学试剂等优点而受到广泛关注。

目前加压热水处理的研究大都只停留在反应条件优化方面，而有关加压热水处理对木材微结构及其对后续酶解的影响研究不多[7-8]。

本研究对毛白杨进行加压热水预处理，利用扫描电镜(SEM)、X射线衍射仪(XRD)、傅里叶变换红外光谱(FT-IR)等研究了预处理温度对木材微结构的影响，并考察了预处理温度对毛白杨酶解后还原糖产量和得率的影响，以期为高温热水预处理在木材等生物质资源的生物转化方面的应用提供借鉴。

环氧酶1与环氧酶2作用

环氧酶1与环氧酶2作用
环氧酶1与环氧酶2是两种酶的名称，它们在生物体内参与不同
的代谢途径和生理功能。

环氧酶1和环氧酶2都是催化环氧化反应的酶，这种反应将某些
化合物中的不饱和双键转化为环氧化合物。

但是，这两种酶在催化反
应的底物和产物选择上有所不同。

环氧酶1主要存在于血管内皮细胞和胃黏膜细胞等组织中，它催
化的底物主要是花生四烯酸（Arachidonic acid），将其转化为心脏病、炎症和免疫反应等过程中的一系列生物活性物质，如前列腺素和
血栓素等。

环氧酶2主要存在于炎症和免疫细胞中，如单核细胞和巨噬细胞，它催化的底物也是花生四烯酸，但其主要产物是炎症介质，如前列腺
素E2（PGE2），参与机体的炎症反应和免疫调节。

由于环氧酶1和环氧酶2活性的调节和产物的不同，它们也具有
不同的生理和病理功能。

在药物研发中，一些研究致力于开发和应用
具有选择性抑制环氧酶1或环氧酶2活性的药物，以治疗相关的疾病。

毛白杨环氧水解酶的异源表达及其在催化拆分手性环氧化物中的应用

而ＰＥ５则优先水解（构型的缩水甘油苯基醚．因此，白杨中环氧水解酶表现出多样性．ＴＨ．毛
关键词：毛白杨；环氧水解酶；异源表达；缩水甘油苯基醚；对硝基苯乙烯氧化物；催化拆分中图分类号：４Ｏ６３文献标识码：Ａ
摘要：已公布的全基因组进行检索发现，树（ｏｕｕｏｅｔａ至少含有２对杨Ｐｐｌｓｔｍｎｏ）ｓ４个预测为可溶性环氧水解酶的基因．从中选取了７个可能的环氧水解酶基因进行克隆，过扩增得到其中５个毛白杨（ｏｕｕｏｅｔｓａｒ环氧水解酶基因．序列分通ＰｐｌｓｔｍｎｏａＣｒ）析显示，们与己克隆的巨大芽胞杆菌环氧水解酶的同源性仅为２％～６它４２％．对该系列基因进行了在Ｅｏｉ的异源表达，ｃｌ中并将得到的５个环氧水解酶（ＴＨｌ５用于缩水甘油苯基醚和对硝基苯乙烯氧化物的酶促水解反应．结果发现，中３个重组ＰＥ～）其酶具有显著的环氧水解酶活性．进一步研究表明，ＴＨ１ＰＥ２对于缩水甘油苯基醚显示了一定的反常规的）择性，ＰＥ和ＴＨ一选
文章编号：２３９３（０２０．３２００５．８７２１）２００．６
毛白杨环氧水解酶的异源表达及其在催化拆分手性环氧化物中的应用

【国家自然科学基金】_酶促催化_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140729

推荐指数 3 2 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2010年序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
53 3-二氨基吩嗪 54
2
1 1
53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86
2011年科研热词酶催化辣根过氧化物酶鞣剂金属酶重组金属β -内酰胺酶l1 酶促聚合酶促合成氯过氧化物酶核苷类似物底物识别光谱表征香兰素葡萄糖苷香兰素青蒿醛缩酶酶降解酶的检测酶活性酶催化动力学酶促反应酶促交联酶酰基转移配体选择性酰化选择件酰化近平滑假丝酵母茶氨酸花色苷聚乳酸聚乙二醇综述糖基化磷脂酰肌醇糖基化反应类孟买型磷脂酶d 磷脂酰丝氨酸研究进展皮革化学品生物合成生物催化甜菜果胶环己烯特异性磷脂酶d 漆酶活性法呢醇合酶气相色谱桃仁醇腈酶有机硅有机溶剂旨质体推荐指数 3 3 2 2 2 2 2 2 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

毛白杨PtoeIF5A4的原核表达、纯化及鉴定

毛白杨PtoeIF5A4的原核表达、纯化及鉴定张杰伟;管阳;朱丹;陈亚娟;丁莉萍;王宏芝;魏建华【摘要】为获取大量高纯度的毛白杨PtoeIF5A4蛋白以便研究其特性和生物学功能,以pGEM-T Easy-PtoeIF5A4质粒为模板,PCR扩增毛白杨PtoeIF5A4基因的cDNA编码区,测序正确后,经酶切将其插入到原核表达载体pET28a上,然后将表达载体转入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),经不同浓度IPTG诱导培养后发现,0.1 mmol/LIPTG,28℃诱导4h时目的蛋白最多,且该重组蛋白主要以可溶性的形式存在.采用亲和纯化从可溶性蛋白中纯化到大小为18 kD的蛋白条带.Western blotting分析发现亲和纯化所得蛋白可以与His单克隆抗体发生免疫交叉反应,表明纯化所得蛋白是PtoeIF5A4重组蛋白.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】5页(P83-87)【关键词】毛白杨;PtoeIF5A4;原核表达;蛋白纯化【作者】张杰伟;管阳;朱丹;陈亚娟;丁莉萍;王宏芝;魏建华【作者单位】北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心农业基因资源与生物技术北京市重点实验室,北京100097;北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心农业基因资源与生物技术北京市重点实验室,北京100097;北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心农业基因资源与生物技术北京市重点实验室,北京100097;北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心农业基因资源与生物技术北京市重点实验室,北京100097;北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心农业基因资源与生物技术北京市重点实验室,北京100097;北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心农业基因资源与生物技术北京市重点实验室,北京100097;北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心农业基因资源与生物技术北京市重点实验室,北京100097【正文语种】中文真核细胞翻译起始因子5A（eukaryotic translation initiation factor 5A，eIF5A）是真核生物中普遍存在的一类蛋白，也是目前发现的唯一含有羧腐胺赖氨酸残基的蛋白［1] 。

毛白杨抗坏血酸过氧化物酶基因PtAPX2的克隆表达及分析

毛白杨抗坏血酸过氧化物酶基因PtAPX2的克隆表达及分析潘翔;李娜;李印军;魏弘宜;张蕾;陆海【期刊名称】《北京林业大学学报》【年(卷),期】2013(35)1【摘要】以毛白杨总RNA为模板反转录得到cDNA,克隆获得抗坏血酸过氧化物酶基因家族中的一个成员PtAPX2 864bp的编码序列。

该基因编码的蛋白包含287个氨基酸,理论分子质量为31.78ku,C末端包含锚定于过氧化物酶体跨膜结构域,推断其为过氧化物酶体定位蛋白。

构建了PtAPX2原核表达载体,在大肠杆菌中表达获得了纯化的重组蛋白,并对其进行了酶学性质分析。

PtAPX2对抗坏血酸的Km值为(1.37±0.22)mmol/L,Vmax值为(3.95±0.46)mmol/(L·min·mg);对H2O2的Km值为(0.026±0.003)mmol/L,Vmax值为(1.27±0.03)mmol/(L·min·mg);该酶在28℃,pH7.0～7.4时活性最高。

实时荧光定量PCR分析表明,PtAPX2在杨树老叶叶肉中表达量最高。

对PtAPX2亚细胞定位、底物结合特征、酶学性质及组织特异性表达的分析加深了对木本植物抗氧化机理的认识。

【总页数】9页(P36-44)【关键词】毛白杨;抗坏血酸过氧化物酶;克隆;重组表达;酶学性质;表达量分析【作者】潘翔;李娜;李印军;魏弘宜;张蕾;陆海【作者单位】北京林业大学生物科学与技术学院,林木花卉遗传育种教育部重点实验室【正文语种】中文【中图分类】S792.119;Q943.2【相关文献】1.柠条锦鸡儿抗坏血酸过氧化物酶基因(CkAPX)和谷胱甘肽还原酶基因(CkGR)cDNA片段的克隆及表达分析 [J], 康太;武宏豆;逯佰艳;龙晓刚;龚春梅;白娟2.Ipomoea trifida（2 X）抗坏血酸过氧化物酶基因的克隆、序列分析和表达分析[J], 张安;曹清河;周志林;赵冬兰;逄洪波;唐君3.毛白杨细胞质抗坏血酸过氧化物酶基因的克隆及表达分析 [J], 张蕾;王昱堃;刘蕾;尹玢;曹山;陆海4.枸杞抗坏血酸过氧化物酶基因的克隆与表达分析 [J], 乔枫;耿贵工;曾阳;金兰;谢惠春5.小麦抗坏血酸过氧化物酶TaAPX基因克隆与表达分析 [J], 王润豪; 于永昂; 胡海燕; 丁超杰; 李红民; 牛晴晴; 李成伟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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手性环氧化物是有机合成中重要的手性合成砌
块 , 其环氧基团中含有一个或两个手性碳原子 , 通过

赵
晶等 : 毛白杨环氧水解酶的异源表达及其在催化拆分手性环氧化物中的应用
303
选择性开环反应可以合成诸多具有生物活性的重要化合物 , 如 β-肾上腺素阻断剂、昆虫信息素、白三烯等 , 在医药、农药、香料和精细化学品工业中具有广阔的应用前景
[7 9] [4 6]
. 研究表
明 , 巨大芽孢杆菌环氧水解酶广泛应用于 PGE 的拆 . 虽然已经陆续发现拟南芥 (Arabidopsis thaliana) 、水芹 (Oenanthe javanica)[10] 、烟草 (Nicotiana tabacum) 、甘蓝 (Brassica napus) 、大豆 (Glycine max) 、土豆 (Solanum tuberosum) 、绿豆 (Vigna radiata)[11, 12] 等植物中存在 EHs, 并成功克隆表达了来源于拟南芥、甘蓝、大豆、烟叶和土豆等少数几种植物的 EHs 基因 , 但是其多用于生理功能和生化特性研究 , 很少用于催化有机合成反应 . 而对来源于木科植物的环氧水解酶的研究目前还未见报道 . 杨树 (P. tomentosa) 是木科类植物中第一个完成全基因组测序的树木 . 根据数据库预测 , 毛白杨基因组中至少含有 24 个预测为可溶性环氧水解酶的基因 , 然而迄今为止并未见有关杨树环氧水解酶的报道 . 本文从毛白杨中克隆了多个 EHs 基因 , 并成功地在大肠杆菌中进行了异源表达 , 初步研究了这些毛白杨 EHs 催化两种常见模型环氧底物 (PGE 和 pNSO) 的水解反应 , 为后续深入研究奠定了一定基础 .
克隆所用引物
Sequence
Table 1 Primers used for cloning GGA GGA TCC ATG GCC TCC TCC ATA GAA CAC AGA GAA GTC GAC CTA GAG CTT TTG AAA GA AGTC GTA CCT GGA TCC ATG GAG AAG ATA GAG CAC ACA ACT CCA GTC GAC CTA ATT AAA CTT CTT GAT GAA ATC CGA GGA TCC ATG GCC TCC TCC ATA GAA CAC AGA CGT GTC GAC CGC TTG CTT GGT TTC CTT CCT GTT CAC GGA TCC ATG GAC TCC ATA GAA CAC AGA ACC CTC GTC GAC CTA GAA CTT TTG AAA GAA ATC ATA GTT GGA TCC ATG GAG GGG ATA AGC CAT AGA ATG GCT GTC GAC CAG TAT TTG CTA ATG TAG TCA TAA CAC GGA TCC ATG GAT TTG GGA GAG GTT AAT CAC GGC GTC GAC CTA ATC CAC AGA AAG CTT TTG AAG CCT GGA TCC ATG GAT AAG ATA GAG CAC CAA ACT GGT GTC GAC TTA AAA CTT CTT GAT GAA ATC GTA
ZHAO JingNG Minjie2, XU Jianhe1,*
1
State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, East China University of Science and Technology, Shanghai 200237, China 2 Research Institute of Forestry, Chinese Academy of Forestry, Beijing 100091, China
Abstract: The genome of Populus tomentosa was the first to be reported in trees. Based on the mining results of the database, a gene pool encoding 24 potential soluble epoxide hydrolases was proposed. In which, 7 genes were selected in this study, and 5 genes were successfully cloned and sequenced. Sequence analysis showed that the cloned epoxide hydrolases had merely 24%–26% similarity to the newly cloned Bacillus megaterium epoxide hydrolase. Then the 5 genes were heterogeneously expressed in E. coli and used for hydrolytic reactions of two model substrates, phenyl glycidyl ether and p-nitrostyrene oxide. Epoxide hydrolysis activity was detected in 3 recombinant epoxide hydrolases, in which PTEH1 and PTEH2 showed (R)-selectivity in hydrolysis of phenyl glycidyl ether, while PTEH5 preferred to hydrolyze (S)-phenyl glycidyl ether. This work proves the diversity of epoxide hydrolases from P. tomentosa. Key words: Populus tomentosa; epoxide hydrolase; heterogeneous expression; phenyl glycidyl ether; p-nitrostyrene oxide; catalytic resolution Received 12 August 2011. Accepted 26 September 2011. *Corresponding author. Tel: +86-21-64252498; Fax: +86-21-64250840; E-mail: jianhexu@ This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (20902023) and the National Basic Research Program of China (973 Program, 2009CB724706).
赵晶 1, 鞠
1 2
鑫 1, 潘
江1, 李春秀 1, 王敏杰 2, 许建和 1,*
华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室 , 上海 200237 中国林业科学研究院林业研究所 , 北京 100091
摘要 : 对已公布的全基因组进行检索发现 , 杨树 (Populus tomentosa ) 至少含有 24 个预测为可溶性环氧水解酶的基因 . 从中选取了 7 个可能的环氧水解酶基因进行克隆 , 通过扩增得到其中 5 个毛白杨 (Populus tomentosa Carr) 环氧水解酶基因 . 序列分析显示 , 它们与已克隆的巨大芽胞杆菌环氧水解酶的同源性仅为 24%~26%. 对该系列基因进行了在 E. coli 中的异源表达 , 并将得到的 5 个环氧水解酶 (PTEH 1~5) 用于缩水甘油苯基醚和对硝基苯乙烯氧化物的酶促水解反应 . 结果发现 , 其中 3 个重组酶具有显著的环氧水解酶活性 . 进一步研究表明 , PTEH1 和 PTEH2 对于缩水甘油苯基醚显示了一定的反常规的 (R)- 选择性 , 而 PTEH5 则优先水解 (S)-构型的缩水甘油苯基醚 . 因此 , 毛白杨中环氧水解酶表现出多样性 . 关键词 : 毛白杨 ; 环氧水解酶 ; 异源表达 ; 缩水甘油苯基醚 ; 对硝基苯乙烯氧化物 ; 催化拆分中图分类号 : O643 文献标识码 : A
Heterogeneous Expression of Epoxide Hydrolase Genes from Populus Tomentosa and Application of the Enzyme for Biocatalytic Resolution of Chiral Epoxides
[1 3]
高压蒸汽灭菌 20 min. 抗生素使用氨苄青霉素 (Amp, 100 μg/ml) 或硫酸卡那霉素 (Kan, 50 μg/ml) (上海生物工程公司 ). 1.2 1.2.1 毛白杨环氧水解酶基因的克隆基因的选取在杨树全基因组数据库 (http://www.jgi.doe. gov/) 中 , 以关键词 “epoxide hydrolase” 搜索 , 得到 1295 个相关结果 . 其中有 24 个预测为可溶性环氧水解酶 (soluble EH). 我们选取 7 个有全长序列、且和植物来源的土豆和绿豆 EH 的氨基酸序列相似性都较高的基因进行了克隆 . 1.2.2 引物设计根据选取的 7 个杨树 EH 基因 , 设计的引物如表 1 所列 . 引物序列中的下划线部分分别为限制性内切酶 BamH Ι 和 Sal Ι 的酶切位点 . 引物由上海生物工程公司合成 .
表1
Gene pteh1F pteh1R pteh2F pteh2R pteh3F pteh3R pteh4F pteh4R pteh5F pteh5R pteh6F pteh6R pteh7F pteh7R