第四章抗体制药 (2)优秀课件
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免疫学概论第4章抗体PPT课件
免疫学概论第4章抗体ppt 课件
• 抗体的概述 • 抗体的结构 • 抗体的产生与类别 • 抗体的应用 • 总结与展望
01
抗体的概述
抗体的定义
抗体（Antibody）：指B淋巴细胞或记忆B细胞在抗原刺激下，经一系列活化、增殖、 分化后形成的浆细胞分泌出来的一类能与相应抗原特异性结合的免疫球蛋白。
免疫调节
抗体可调节机体免疫应答，用于治疗免疫相关疾病，如风湿性关 节炎、系统性红斑狼疮等。
被动免疫
将含有抗体的免疫血清或免疫球蛋白注入机体，使机体获得特异 性免疫力。
抗体在免疫学研究中的应用
01
02
03
抗原定位
通过抗体标记抗原，研究 抗原在细胞或组织中的定 位和分布。
免疫细胞功能研究
抗体可用来研究免疫细胞 的活化、分化、凋亡等过 程，有下产生的一种蛋白质，具有高度的特异性，能够与相 应的抗原结合，发挥免疫效应。
抗体的类型
IgG
IgM
IgA
IgE
免疫球蛋白G，是血清中含量最 高的抗体类型，也是唯一能够 通过胎盘的抗体类型。它具有 抗菌、抗病毒、抗毒素等作用， 是机体重要的防御机制。
免疫球蛋白M，是初次免疫应 答中最早产生的抗体类型，主 要存在于血液中。它具有抗菌、 抗病毒、抗毒素等作用，但效 价较低。
疾病的抗体药物，提高治疗效果和降低副作用。
03
免疫治疗和免疫调控
抗体在免疫治疗和免疫调控方面具有广阔的应用前景，未来将进一步探
索其在肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病等领域的应用。
THANKS
感谢观看
合物，进而发挥免疫效应。
激活补体
抗体能够与抗原结合后激活补 体系统，通过补体的级联反应 ，发挥溶解和杀伤作用。
• 抗体的概述 • 抗体的结构 • 抗体的产生与类别 • 抗体的应用 • 总结与展望
01
抗体的概述
抗体的定义
抗体（Antibody）：指B淋巴细胞或记忆B细胞在抗原刺激下，经一系列活化、增殖、 分化后形成的浆细胞分泌出来的一类能与相应抗原特异性结合的免疫球蛋白。
免疫调节
抗体可调节机体免疫应答，用于治疗免疫相关疾病，如风湿性关 节炎、系统性红斑狼疮等。
被动免疫
将含有抗体的免疫血清或免疫球蛋白注入机体，使机体获得特异 性免疫力。
抗体在免疫学研究中的应用
01
02
03
抗原定位
通过抗体标记抗原，研究 抗原在细胞或组织中的定 位和分布。
免疫细胞功能研究
抗体可用来研究免疫细胞 的活化、分化、凋亡等过 程，有下产生的一种蛋白质，具有高度的特异性，能够与相 应的抗原结合，发挥免疫效应。
抗体的类型
IgG
IgM
IgA
IgE
免疫球蛋白G，是血清中含量最 高的抗体类型，也是唯一能够 通过胎盘的抗体类型。它具有 抗菌、抗病毒、抗毒素等作用， 是机体重要的防御机制。
免疫球蛋白M，是初次免疫应 答中最早产生的抗体类型，主 要存在于血液中。它具有抗菌、 抗病毒、抗毒素等作用，但效 价较低。
疾病的抗体药物，提高治疗效果和降低副作用。
03
免疫治疗和免疫调控
抗体在免疫治疗和免疫调控方面具有广阔的应用前景，未来将进一步探
索其在肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病等领域的应用。
THANKS
感谢观看
合物，进而发挥免疫效应。
激活补体
抗体能够与抗原结合后激活补 体系统，通过补体的级联反应 ，发挥溶解和杀伤作用。
抗体制药(2)
(一)概述(二)单克隆抗体(三)鼠源性单克隆抗体的改造(四)基因工程抗体和抗体工程(五)抗体诊断试剂 (六)抗体治疗药物抗体分子由一对轻、重链组成轻链：一个V 区、一个C 区重链：一个V 区、3个C 区同一类型抗体的C 区序列保守 V 区序列则随抗原识别特异性不同而不同互补决定区(CDR)骨架区(FR)免疫球蛋白的结构抗体可变区肽段的核苷酸编码很复杂抗原决定簇抗原决定簇((表位表位))抗原分子中能与抗体或与淋巴细胞表面受体结合的特定部分，即在分子构象上与抗体互补的部分，或者说是能与抗体分子嵌合的化学基团。
抗原结合部位轻链和重链的可变部分的20－30个氨基酸组成的囊装或裂隙状分子构象抗体的特异性决定于结合部位的构象抗体多样性的基因基础单克隆抗体临床应用的障碍鼠源性MAb 大量应用于人体时可产生人抗鼠抗体（hunman antimouse antibody ，HAMA ），使其作用和效果都受到严重影响，甚至有毒副作用 完整的抗体分子的相对分子质量过大，难于维持有效药物作用靶组织时间改造鼠源性单克隆抗体的目的降低MAb 的免疫原性降低MAb 的相对分子量，增加组织穿透能力(三)鼠源性单克隆抗体的改造抗体药物迅速发展的主要障碍①抗体人源化鼠单克隆抗体的人源化(嵌合抗体、改型抗体) 小分子抗体单价(Fab 、Fv 、SCFv 、单域抗体、超变区多肽) 多价(Diabody ，Triabody ，Minibody ）特殊类型抗体(双特异性抗体、细胞内抗体、抗原化抗体、免疫脂质体) 抗体融合蛋白（免疫粘连素、免疫毒素、催化抗体）②构建抗体库从中筛选新的单抗，即噬菌体抗体人-鼠嵌合抗体(chimeric human/mouse antibody)抗体同抗原结合的功能取决于抗体分子的可变区，同种性免疫原性则决定于抗体分子的稳定区 人-鼠嵌合抗体：将鼠MAb 的可变区基因和人免疫球蛋白的恒定区基因连接起来，在共转染骨髓瘤细胞，就可表达出完整的人-鼠嵌合抗体优点保留鼠源性抗体具有的抗原结合特异性和高亲和力降低或消除鼠源性抗体作为异源蛋白对人的免疫原性不足 鼠单抗可变区的存在，应用时仍有较强的HAMA 反应改形抗体用鼠源性MAb 的CDR序列替换人免疫球蛋白分子中的CDR 序列，则可使人的免疫球蛋白分子具有鼠源性单克隆抗体的抗原结合特异性鼠源性基因人源性基因CDRs 是IgVH 、VL 中超变区部分，它主要决定抗体结合抗原的特异性 CDRs 侧翼的FRs 是可变区免疫原性的主要来源，FRs 中的一些aa 序列直接参与抗原结合部位构象的形成由于抗体分子中鼠源部分只占很小比例，可基本消除免疫原性 最大问题是抗体的亲和力下降，甚至丧失活性改变抗体的CDRs 序列就可以改变抗体的抗原结合特异性 将FRs 稍作修饰以提高亲和力，这样人源化抗体就保留了鼠源单抗的抗原结合特异性和亲和力，同时降低甚至消除了鼠源单抗V 区存在的免疫原性改型抗体的发展早期的改型抗体简单的CDR 移植，通过点突变进行“微调”即更换某个位点上的氨基酸第二代改型抗体①应用了人抗体基因库；②引进计算机技术模拟抗体分子的立体结构(分子模拟法)；③使用了鼠人嵌合FR 。
第四章 抗体制药ppt课件
解决问题的方法或途径——基因工程技术
1984年报道了人—鼠嵌合抗体，之后制备出了改型抗体、 单链抗体、单域抗体、最小识别单位等多种类型，基本上消 除了抗体的鼠源性（免疫源性），相对分子质量只有完整抗 体分子的1/80～1/3。
第一节 单克隆抗体（Monoclonal Antibody） 的制备
1、单克隆抗体与多克隆抗体
单克隆抗体（McAb ）：如果把能分泌某种特异抗体的 一个B型淋巴细胞分离出来，通过纯种培养，则只产生一种 抗体，可以特异性地与体内一种抗原结合，这种单一的特异 抗体即为单一B细胞克隆抗体，即单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb）。
2、制备单克隆抗体的一般流程
3、杂交瘤细胞的制备与筛选流程图
BALB/C小鼠
注射矿物油诱发 骨髓瘤细胞 TK或HGBRT缺陷
BALB/C小鼠
注射某种抗原免疫 脾细胞 B淋巴细胞
融合（PEG） 分装于多孔培养板培养（HAT） 亲株死亡
杂交瘤细胞生长繁殖
鉴定单克隆抗体 选出优良杂交瘤细胞， 用于生产或冷冻保藏
二、杂交瘤细胞的制备
1、抗原与动物免疫的获得
免疫方法：体内免疫和体外免疫 抗原：颗粒性抗原和可溶性抗原 免疫动物：BALB/c小鼠和Lou大鼠
多克隆抗体：动物细胞的免疫系统接受到一个新的抗原 时，并不是对抗原的所有表面都作出反应，而只对抗原中特 异的抗原决定簇产生应答，一般一个抗原有多个抗原决定簇， 可以同时诱导产生多个B型淋巴细胞的增生。机体在同一时间 都是接受多种外界的抗原物质的，使得B型淋巴细胞增生的种 类也有多种，造成不同种B型淋巴细胞同时存在于体液中，由 此产生的抗体也是多种，所以从体液中分离提取的多种抗体 也是由多种B型淋巴细胞产生出来的，是多种抗体的混合物。 由B细胞分裂而形成的细胞群（是同质的），称为一个克隆。 因此存在于体液中各种抗体的总和可称为多种B细胞克隆抗体， 简称多克隆抗体（polyclonal antibody）。
生物技术制药：抗体工程制药(2)
（4－3）小分子抗体
➢ 小分子抗体包括Fab、Fv或ScFv、单域抗体及最 小识别单位等几种。
➢ 基因工程小分子抗体仅表达鼠源性单克隆抗体的 V区片段，其相对分子质量仅为原抗体的1/801/3。
单区抗体
Fab
最小识别单位
Fv
ScFv
(1)Fab片段抗体：VH+CH1
(2)FV抗体：VH+VL
(3)单链抗体：VH-Linker-VL
➢ Herceptin(贺赛汀):针对HER-2/neu原癌基因产 物的人/鼠嵌合单抗，特异地作用于HER-2受体过 度表达的乳腺癌细胞
（2）改型抗体（人源化抗体）
1. 将小鼠的CDR（互补决定区）序列移植到人 抗体可变区框架中，产生的抗体称为CDR移 植抗体。
重构抗体 (Reshape d Antibody)
(4)单域抗体：VH或VL
小分子抗体有很多优点: ➢ 可以用细菌或酵母菌发酵生产，成本低; ➢ 分子小，穿透力强; ➢ 不含Fc，没有Fc带来的效应; ➢ 在体内循环的半衰期短，易清除，利于解毒排出; ➢ 易于与毒素或酶基因连接，便于直接获得免疫毒
素或酶标抗体等。
(１)Fab
由完整的轻链和Fd组成，大小为完整分子的1/3。 把Fab与细菌的前导肽相连，在前导肽的作用下Fab进 入质周腔，装配折叠后，它具有结合抗原的活性。
➢ 人源性可达90主体 地位。
➢ 目前该方法是人源化单抗最常用、最基本的方法
问题
➢ 改型单抗亲和力仅为原来鼠抗体的亲和力的1/40 ➢ 亲和力下降，亲和力是影响改型单链抗体应用于
临床的重要因素 ➢ 人Ig分子的框架区一些氨基酸与鼠Ig的CDR区不
协调 ➢ 三维蛋白结构等需进一步丰富
《抗体工程制药》课件
新型抗体药物的出现
随着抗体工程技术的发展，新型抗体药物不断涌现，如双特异性抗 体、抗体融合蛋白等。
抗体药物的生产技术的发展
随着生物技术的不断发展，抗体药物的生产技术也不断改进，如细 胞培养技术的优化、基因工程技术的应用等。
抗体工程制药的未来研究方向
新型抗体的研究与开发
研究新型抗体的结构和功能，开发具有新作用机制的抗体药物。
噬菌体展示技术
噬菌体展示技术是一种利用噬菌体展示肽库筛选特异 性抗体的技术。
该技术将外源基因插入噬菌体外壳蛋白基因中，使外 源基因编码的肽段在噬菌体外壳上展示，然后通过筛
选噬菌体展示肽库来获得特异性抗体。
噬菌体展示技术具有筛选效率高、特异性强等优点， 为抗体药物的研究和开发提供了新的工具。
蛋白质工程技术
蛋白质工程技术是通过改变蛋白 质的氨基酸序列和结构来改变其
功能的一种技术。
在抗体工程制药中，蛋白质工程 技术可用于优化抗体分子的结构 和功能，提高抗体的亲和力和稳
定性，降低免疫原性。
蛋白质工程技术为抗体药物的研 发提供了强有力的手段，有助于 推动抗体工程制药领域的发展。
03 抗体药物的药效学研究
CHAPTER
抗体药物的生产技术研究
优化抗体药物的生产工艺，降低生产成本，提高产量和质量。
抗体药物的免疫原性研究
研究抗体药物的免疫原性机制，寻找降低免疫原性的新方法。
谢谢
THANKS
抗体药物的药效学研究进展
1 2 3
新型抗体药物的开发
随着抗体工程技术的发展，越来越多的新型抗体 药物被开发出来，如人源化抗体、单域抗体、双 特异性抗体等。
抗体药物的疗效和安全性
随着临床试验的深入开展，抗体药物的疗效和安 全性得到进一步验证，为抗体药物的应用提供了 更可靠的依据。
随着抗体工程技术的发展，新型抗体药物不断涌现，如双特异性抗 体、抗体融合蛋白等。
抗体药物的生产技术的发展
随着生物技术的不断发展，抗体药物的生产技术也不断改进，如细 胞培养技术的优化、基因工程技术的应用等。
抗体工程制药的未来研究方向
新型抗体的研究与开发
研究新型抗体的结构和功能，开发具有新作用机制的抗体药物。
噬菌体展示技术
噬菌体展示技术是一种利用噬菌体展示肽库筛选特异 性抗体的技术。
该技术将外源基因插入噬菌体外壳蛋白基因中，使外 源基因编码的肽段在噬菌体外壳上展示，然后通过筛
选噬菌体展示肽库来获得特异性抗体。
噬菌体展示技术具有筛选效率高、特异性强等优点， 为抗体药物的研究和开发提供了新的工具。
蛋白质工程技术
蛋白质工程技术是通过改变蛋白 质的氨基酸序列和结构来改变其
功能的一种技术。
在抗体工程制药中，蛋白质工程 技术可用于优化抗体分子的结构 和功能，提高抗体的亲和力和稳
定性，降低免疫原性。
蛋白质工程技术为抗体药物的研 发提供了强有力的手段，有助于 推动抗体工程制药领域的发展。
03 抗体药物的药效学研究
CHAPTER
抗体药物的生产技术研究
优化抗体药物的生产工艺，降低生产成本，提高产量和质量。
抗体药物的免疫原性研究
研究抗体药物的免疫原性机制，寻找降低免疫原性的新方法。
谢谢
THANKS
抗体药物的药效学研究进展
1 2 3
新型抗体药物的开发
随着抗体工程技术的发展，越来越多的新型抗体 药物被开发出来，如人源化抗体、单域抗体、双 特异性抗体等。
抗体药物的疗效和安全性
随着临床试验的深入开展，抗体药物的疗效和安 全性得到进一步验证，为抗体药物的应用提供了 更可靠的依据。
《抗体制药》课件 (2)
《抗体制药》PPT课件 (2)
# 抗体制药PPT课件 (2) ## 第一部分：抗体原理介绍 - 什么是抗体？ - 抗体的结构与类型 - 抗体的作用机制
第二部分：抗体制备
步骤
抗体制备的详细步骤，从初 始的抗原筛选到抗体的纯化 与提纯。
筛选与优化
抗体筛选和优化的方法和技 术，以确保抗体的高亲和力 和特异性。
第四部分：抗体的现状和发展趋势，
面临的挑战和解决方案
2
包括市场前景和竞争态势。
探讨抗体制药领域所面临的挑战，以及
解决方案和创新技术的应用。
3
未来发展的方向
展望抗体制药未来的发展方向，以及可 能带来的医疗创新和突破。
结构与功能分析
对抗体的结构与功能进行深 入分析，以了解其在生物活 性中的作用。
第三部分：抗体应用
抗体药物的开发和应 用
了解抗体药物的开发过程以及 目前已经应用的治疗领域。
抗体在肿瘤治疗中的 应用
探索抗体在肿瘤治疗中的作用 和机制，以及相关的临床研究 进展。
抗体在自身免疫疾病 治疗中的应用
介绍抗体在治疗自身免疫疾病 方面的重要进展和前景。
# 抗体制药PPT课件 (2) ## 第一部分：抗体原理介绍 - 什么是抗体？ - 抗体的结构与类型 - 抗体的作用机制
第二部分：抗体制备
步骤
抗体制备的详细步骤，从初 始的抗原筛选到抗体的纯化 与提纯。
筛选与优化
抗体筛选和优化的方法和技 术，以确保抗体的高亲和力 和特异性。
第四部分：抗体的现状和发展趋势，
面临的挑战和解决方案
2
包括市场前景和竞争态势。
探讨抗体制药领域所面临的挑战，以及
解决方案和创新技术的应用。
3
未来发展的方向
展望抗体制药未来的发展方向，以及可 能带来的医疗创新和突破。
结构与功能分析
对抗体的结构与功能进行深 入分析，以了解其在生物活 性中的作用。
第三部分：抗体应用
抗体药物的开发和应 用
了解抗体药物的开发过程以及 目前已经应用的治疗领域。
抗体在肿瘤治疗中的 应用
探索抗体在肿瘤治疗中的作用 和机制，以及相关的临床研究 进展。
抗体在自身免疫疾病 治疗中的应用
介绍抗体在治疗自身免疫疾病 方面的重要进展和前景。
生物制药技术-第四章-抗体制药(1,2,3)
胞都是次黄嘌呤鸟瞟岭磷酸核糖转移酶 (HGPRT)缺乏株，脾细胞内却有这种酶，因此脾-瘤融合的杂交瘤细 胞 可利用HGPRT，用次黄瞟岭(H)和胸腺嘧啶(T)合成DNA，使杂交瘤细胞 得以生长。选择 性培养的常规方法是将融合的细胞悬浮于HAT的培养 液(表4 - 2)中，加入到含有饲养细胞 的96孔板内.根据情况每2~3 d 换液一次。换液时吸去l/2~2/3培养液，加入等量的新鲜 培养液。在 融合后7 d内用HAT培养液，杀死瘤瘤融合细胞后，第七天至第十四天 改用HT 培养液，第十四天以后用普通的RPMl1640完全培养液(表4 3)，从融合后8~9d就可对所 有克隆生长孔的培养上清进行抗体检测， 筛选出产生抗体的阳性克隆。
因此，抗体是指能与相应抗原特异性综合的具有免疫功能的球 蛋白。它是机体免疫系统受 抗原物质刺激后，B淋巴细胞被活化、 增殖和分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白。20 世纪60年 代初期.发现多发性骨髓瘤是浆细胞癌变形成的恶性增殖性疾病。患 者血清中也出现 同抗体分子结构类似的球蛋白。因此，将具有抗体 活性及化学结构与抗体相似的球蛋白统称为 免疫球蛋白 (immunoglobulin，Ig)。 显然，Ig是化学结构上的概念，而抗体是生物学功能上的概 念。也 就是说，所有抗体均是Ig，但并非所有Ig分子都具有抗体活性。由 于病原微生物是含有 多种抗原决定簇的抗原物质，因此这些抗体制 剂也是多种抗体的混合物.故称多克隆抗体， 即针 对多种抗原决定 簇的抗体。这些抗体制剂在应用过程中经常发生非特异性交叉反应 而出现假阳 性结果，必须经多次吸收试验才能得到所谓的精制单价 血清，用于临床病原学诊断，如痢疾杆菌 属诊断血清和沙门氏菌属 诊断血清等。虽然称为精制单价血清，但仍然难免出现假阳性结果; 而且其产量很低.很难满足临床治疗和诊断上的需要。
因此，抗体是指能与相应抗原特异性综合的具有免疫功能的球 蛋白。它是机体免疫系统受 抗原物质刺激后，B淋巴细胞被活化、 增殖和分化为浆细胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白。20 世纪60年 代初期.发现多发性骨髓瘤是浆细胞癌变形成的恶性增殖性疾病。患 者血清中也出现 同抗体分子结构类似的球蛋白。因此，将具有抗体 活性及化学结构与抗体相似的球蛋白统称为 免疫球蛋白 (immunoglobulin，Ig)。 显然，Ig是化学结构上的概念，而抗体是生物学功能上的概 念。也 就是说，所有抗体均是Ig，但并非所有Ig分子都具有抗体活性。由 于病原微生物是含有 多种抗原决定簇的抗原物质，因此这些抗体制 剂也是多种抗体的混合物.故称多克隆抗体， 即针 对多种抗原决定 簇的抗体。这些抗体制剂在应用过程中经常发生非特异性交叉反应 而出现假阳 性结果，必须经多次吸收试验才能得到所谓的精制单价 血清，用于临床病原学诊断，如痢疾杆菌 属诊断血清和沙门氏菌属 诊断血清等。虽然称为精制单价血清，但仍然难免出现假阳性结果; 而且其产量很低.很难满足临床治疗和诊断上的需要。
抗体工程制药 ppt课件
ppt课件
29
4.3 鼠源性单克隆抗体的改造
杂交瘤单克隆抗体均为鼠源性 大量应用于人体可产生人抗鼠抗体 改造鼠源性单克隆抗体的目的： 降低免疫原性 降低相对分子质量，增加组织通透性
ppt课件
30
一、免疫球蛋白的结构
B淋巴细胞在抗原刺激下增殖分化为浆细胞，
浆细胞产生能与相应抗原发生特异性结合的
植时的抗排斥反应。在这个时期，抗体药物的研制和 应用给人们治疗疾病带来了很大的期望。20年后的今 天，单克隆抗体药物已经成为生物医药最重要的发展 领域之一，到2006年，FDA共批准23个治疗性单克隆抗
体药物。
ppt课件
27
OKT3单抗主要和T细胞表面的CD3抗原结合，
而CD3分子是与T细胞受体（TCR）紧密相联在一
ppt课件
9
自然自动免疫
在自然条件下，人体被病原体感 染后所获得的免疫力。这种免疫可以 通过得传染病获得，也可经过隐性感 染获得。
ppt课件
10
宋朝（十一世纪）时吸入天花痂粉预防 天花 ； 明代（公元十七世纪七十年代左右）接 种“人痘”，预防天花； 十八世纪后叶，英国乡村医生Jenner种 “牛痘”预防天花。
ppt课件
11
病原菌致病与疫苗
十九世纪中叶，显微镜的改进导致病原菌的
发现；
1850年在羊的血液中看到炭疽杆菌； Pasteur证明实验室培养的炭疽杆菌能使动 物感染致病； Koch提出病原菌致病的概念；
正式认识Jenner的接种牛痘苗、预防天花的
科学性和重大意义。
ppt课件
12
人工自动免疫
原（包括血小板、红细胞）可发生交叉反应而导
生物化学4抗体制药ppt课件
2. Fv与单链抗体（single chain Fv，ScFv ）
（1）Fv （可变区片断）
VL、VH非共价键结合（单价） 完整抗体的1/6 基因工程重组生产 易解离
（2）ScFv
常用连接肽：(Gly4Ser)3
优点： • 分子量小（1/6），免疫原性低 • 容易进入瘤体组织 • 无Fc，免疫诊断成像清晰，本底低 • 单链容易改造 • 可采用大肠杆菌大量生产
骨髓瘤细胞： 自身不合成或不分泌任何免疫球蛋白分子或片断。 HGPRT-（次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）
融合过程： 取脾细胞（1*108）与骨髓瘤细胞（2*107~3*107）
进行混合，在PEG作用下诱导它们融合，时间控制在 2min以内，然后用培养液将PEG融合液缓慢稀释 。
HAT选择性培养基培养
动物细胞核苷酸合成两条途径：
全合成途径、补救合成途径
氨基喋呤（Aminopterine，A）为四氢叶酸的结构类似物，能够和 二氢叶酸还原酶（能够将二氢叶酸还原生成四氢叶酸）发生不可逆结 合，阻止了四氢叶酸（核苷酸生物合成的甲基供体）的生成。从而阻 断了阻断GMP、TMP的生物合成。
GMP、TMP的补救合成途径：
离心或过滤
IgG
亲和层析
超滤
4.3 基因工程抗体
互补性决定区 (CDR， complementar ity determinant region) 骨架区（FR, frame region）
Vk1
一、嵌合抗体（chimeric antibody）
将鼠源单克隆抗体 可变区和人抗体恒定区 连接起来的抗体。
根据Ig的类和亚类以及用途选择不同的纯化方法： • 体外诊断试剂IgG类-----沉淀处理+亲和层析 • IgM类------沉淀处理+凝胶过滤 • 体内诊断试剂或治疗用药-----亲和层析+阴离子交换层析
《抗体制药》 (2)幻灯片
到2021年，增长至400亿美元，同期全部药 品销售7730亿美元，市场份额提升至5.2%
抗体药物年销售额复合增速高达56%，是总 药品销售增速的6倍
2021年，美国FDA批准的6项新的生物制 品许可申请中，有4只产品属于单抗药物,
欧洲7个
2021年
强生的抗肿瘤坏死因子(TNF)-α单克隆抗 体Remicade销量达74亿美元
1975 年 ， 德 国 学 者 Kohler 和 英 国 学 者 Milstein合作研究将经绵羊红细胞免疫后的 小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，建立了 能持续分泌抗棉样细胞抗体的杂交瘤细胞， 从而创立了具有划时代意义的新技术，为此 获得了1984年医学诺贝尔奖
一、抗体的种类
1. 多克隆抗体 多克隆抗体含有两层意思：一是有含多个抗原 位区的大分子刺激产生的、识别不同抗原位区 的各种抗体；二是由体内不同淋巴细胞产生的 、可针对同一抗原位区的多克隆抗体 2. 单克隆抗体 仅识别抗原分子上同一抗原位区的由同一克隆 细胞产生的抗体为单克隆抗体
罗氏的Rituxan销售额到达65亿美元
罗氏的抗Her-2受体单克隆抗体赫赛汀 〔Herceptin〕销售额到达51亿美元
第一节 抗体药物概念及其特点
一、抗体药物概念
通过细胞工程或基因工程生产的，用于诊 断或治疗的单克隆抗体、多克隆抗体、抗 体片段、基因工程改造的抗体或免疫偶联 物统称为抗体药物
五、特异杂交瘤细胞的选择
1. 杂交瘤细胞的选择 融合后，有杂交瘤细胞有骨髓瘤－B淋巴 细胞、B淋巴瘤细胞－B淋巴瘤细胞、骨 髓瘤细胞－骨髓瘤细胞，还有未融合的 骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 一般用HAT培养液进展筛选
TK- m
m
核酸补救合成
TK HGPRT
抗体药物年销售额复合增速高达56%，是总 药品销售增速的6倍
2021年，美国FDA批准的6项新的生物制 品许可申请中，有4只产品属于单抗药物,
欧洲7个
2021年
强生的抗肿瘤坏死因子(TNF)-α单克隆抗 体Remicade销量达74亿美元
1975 年 ， 德 国 学 者 Kohler 和 英 国 学 者 Milstein合作研究将经绵羊红细胞免疫后的 小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，建立了 能持续分泌抗棉样细胞抗体的杂交瘤细胞， 从而创立了具有划时代意义的新技术，为此 获得了1984年医学诺贝尔奖
一、抗体的种类
1. 多克隆抗体 多克隆抗体含有两层意思：一是有含多个抗原 位区的大分子刺激产生的、识别不同抗原位区 的各种抗体；二是由体内不同淋巴细胞产生的 、可针对同一抗原位区的多克隆抗体 2. 单克隆抗体 仅识别抗原分子上同一抗原位区的由同一克隆 细胞产生的抗体为单克隆抗体
罗氏的Rituxan销售额到达65亿美元
罗氏的抗Her-2受体单克隆抗体赫赛汀 〔Herceptin〕销售额到达51亿美元
第一节 抗体药物概念及其特点
一、抗体药物概念
通过细胞工程或基因工程生产的，用于诊 断或治疗的单克隆抗体、多克隆抗体、抗 体片段、基因工程改造的抗体或免疫偶联 物统称为抗体药物
五、特异杂交瘤细胞的选择
1. 杂交瘤细胞的选择 融合后，有杂交瘤细胞有骨髓瘤－B淋巴 细胞、B淋巴瘤细胞－B淋巴瘤细胞、骨 髓瘤细胞－骨髓瘤细胞，还有未融合的 骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 一般用HAT培养液进展筛选
TK- m
m
核酸补救合成
TK HGPRT
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单克隆抗体制备过程 取出脾細胞
+ 癌細胞
细胞融合
单抗
各抗体分开
抗体的应用
疾病的诊断和治疗：
诊断: 检测与某些疾病相关的抗原，辅助临床诊断。
临床治疗： 如针对T淋巴细胞共有的分化抗原CD3的单克隆抗体，对器官
移植排斥反应有显著抑制作用，用作免疫抑制剂。 作为载体制备导向药物（Antibody drug conjugates,ADC）
治疗肿瘤。
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需解决的问题： 鼠源性单克隆抗体的免疫原性（HAMA）； 完整的抗体分子分子量过大，难以穿透实
体肿瘤组织，达不到有效的治疗浓度； 延长半衰期。 其他
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基因工程技术为解决问题提供了可能
基本消除了单克隆抗体的鼠 源性（免疫原性）,鼠源氨基 酸只占完整抗体分子的 1/80~1/3，只保留同抗原特 异性结合的活性。
9.24 8.678 8.538 7.279 6.957
RA、Crohn’s Non-Hopkin’s
Lymphoma RA、牛皮癣
I/II型糖尿病
结肠癌，NSBiblioteka LC7Herceptin
8
Neulasta
9
Lucentis
10
Epogen
Roche/Genentech
单克隆抗体：针对一个抗原决定簇的抗体，又是 单一的B淋巴细胞克隆产生的、高度特异、均一、 来源稳定、可大量生产的抗体。
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抗原 免疫
传统抗血清
所有抗体混合
31 2 4
多克隆抗体制备过程
BA LB /c
1234
脾脏 淋巴結 B 細胞
31 2 4
1 3
2 4
m m
m m
1 23
4
12 34
Indication
1 Humira (adalimumab) AbbVie & Eisai
12.54
RA
2
Remicade
J&J
3
Rituxan
Biogen-IDEC
4
Enbrel
Amgen
4
Lantus (insulin glargine)
Sanofi
6
Avastin
Roche/Genentech
Ab
生物学功能上的概念
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Ig
化学结构上的概念
4
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免疫球蛋白（抗体）的基本结构
1、重链和轻链
重链可分为α、δ、ε、γ、μ链；轻链可 分为κ、λ型。抗体的类型由重链类型决定， 上述重链分别对应了IgA IgD IgE IgG IgM
2、可变区和恒定区
重链和轻链N端第一个结构域为可变区 （variable region,V区)，轻链其余的1个 及重链的3-4个结构域为恒定区；
2011 Benlysta Yervoy Adcetris
2012 Perjeta Eylea
2013 Kadcyla Gazyva
2014 Cyramza Sylvant Entyvio Keytruda
鼠源
嵌合
人源化
人源
ADC
2014年全球生物药品销售额前10名
N O.
Drug
Company
Sale(billion $)
V区存在3个高变区也称互补决定区 (complementarity-determining region, CDR1~3)及4个骨架区（framework region, FR1~4).三个高变区共同组成Ig 的 抗原识别部位，形成与抗原决定基互补的 表位。
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7
多抗与单抗
多克隆抗体：病原微生物含有多种抗原决定簇的 抗原物质，对其产生的抗体也是多种抗体的混合 物，称为多克隆抗体。
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基因工程
14
整体水平抗体生成技术 多克隆抗体（抗血清）
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细胞工程抗体生成技术 单克隆抗体
基因工程抗体生成技术
嵌合抗体、改形抗体
“小型化抗体”（单链抗体） 组合抗体库技术 噬菌体抗体库技术 Ig基因转基因小鼠 15 抗体真核表达技术
商业化的抗体药物
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Zevalin Xolair Avastin Lucentis Soliris
Humira Bexxar Erbitux Vectibix
抗体片段 3个
ADC
3个（1个已撤市）
双特异抗体 2个
Fc融合蛋白 7个
2008 Cimzia
2009 Stelara Sinponi
2010 Actemra Numax
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第一节 概 述
一、基本概念
➢抗体工程制药：利用基因工程、细胞工程和转基因动植 物技术生产抗体药物的过程。
➢抗体（antibody，Ab）： 指能与相应抗原特异性结合 的具有免疫功能的球蛋白。
➢免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）:具有抗体活性或
化学结构与抗体相似的球蛋白
单克隆
抗体白，并证明抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分。
➢1975年，Köhler and Milstein等首次利用B淋巴细胞杂
交瘤技术制备出 McAb. 在临床上主要用于诊断和治疗。
➢1976年，Susumu Touegava（利根川进）揭示了抗体
多样性的遗传学基础。
➢1984年报道了人—鼠嵌合抗体
第四章抗体制药
学习要求:
掌握：单克隆抗体的制备原理、方法及基本过程；单克隆 抗体药物靶标的选择；基因工程抗体的类型。 熟悉：噬菌体抗体库技术的原理和基本过程；单链抗体、 双特异抗体的制备方法；转基因动物表达抗体的方法。 了解：抗体药物的发展趋势。
内容
第一节 概述 第二节 单克隆抗体及其制备 第三节 基因工程抗体及其制备 第四节 噬菌体抗体库技术 第五节 转基因动物表达抗体 第六节 抗体治疗药物
1986 OKT3
FDA 批准的抗体药物
1994 ReoPro
1997 Rituxan Zenapax
1998 Simulect Synagis Remicade Herceptin Enbrel
2000 Mylotarg 2001 Campath
全抗体 37个（至2014.10月）
2002 2003 2004 2006 2007
制备出改形抗体、单链抗体、 单域抗体、最小识别单位等 很多类型的抗体或抗体单位。
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二、抗体工程发展历程及趋势
➢1890年，Behring和北里柴三郎发现白喉抗多毒克素体隆抗 ➢1937年， Tiselius等人用电泳法将血清蛋白分为白蛋白、
甲种（α）球蛋白、乙种（ β ）球蛋白、丙种（ γ ）球蛋