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基因芯片法在肺结核诊断中的临床应用价值

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基因芯片法在肺结核诊断中的临床应用价值陈蕾【摘要】目的探讨基因芯片技术在肺结核诊断中的应用价值。

方法采集641例肺结核患者的痰及 纤支镜冲洗液标本，同时进行抗酸染色法、MGIT液体培养法+微孔板比例法药物敏感性试验（（简称“药敏试 验”）及基因芯片法检测，分析不同方法检测结核分枝杆菌（Mtb)及其异烟肼、利福平耐药性的敏感度、特异 度、阳性预测值、阴性预测值和kappa值。

不同方法之间Mtb及耐异烟肼、耐利福平、耐多药阳性检出率的比 较采用X2检验'<〇.〇5为差异有统计学意义。

结果基因芯片法敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值 和kappa值均较高。

基因芯片法Mtb阳性检出率54. 91 %高于涂片法27. 61 %,与液体培养法60. 06%比较差 异无统计学意义。

基因芯片法和药敏试验检测Mtb耐异烟肼、耐利福平、耐多药阳性检出率，两者比较差异 无统计学意义。

结论基因芯片法在检测Mtb及其耐药性方面与传统液体培养法和药敏试验相比，有较高 的敏感度和特异度，检测时间短，一致性高,值得临床应用推广。

【关键词】基因芯片技术;肺;结核分枝杆菌;诊断Gene chip in diagnosis of pulmonary tuberculosis and its clinical application value CHEN Lei Public Healthy Clinical Medical Center of Chengdu, Chengdu, Sichuan 610000，China[Abstract] Objective To explore the application value of gene chip technology in diagnosis of pulmonary tu­berculosis. Methods The data of 641 cases of pulmonary tuberculosis patients with sputum and bronchoscopic lav­age specimens were detected by acid fast stain, MGIT liquid ( ( hereinafter referred to as " drug sensitive test" ) de­tection and gene chip method. Their drug sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value and Kappa value of Mycobacterium tuberculosis ( Mtb) , isoniazid and rifampicin were analyzed, and the results were analyzed by X2 test among different groups. P < 0. 05 difference was statistically significant. Results The sensitivi­ty, specificity, positive predictive value, negative predictive value and Kappa value were higher for gene chip meth­od. The positive rate of Mtb was 54. 91% in the gene chip group, which was higher than 27. 61% of the smear meth­od group ( P < 0. 05 ) and similar with 60. 06% of the liquid culture method group. There was no significant differ­ence in the positive rate of isoniazid, rifampin and multi-drug resistance of Mtb between the gene chip group and the drug sensitive test group. Conclusion Gene chip method has high sensitivity and specificity and consistency in de­tection of Mtb and its drug resistance, which is worthy of widely clinical application.[Key words] gene chip technique; pulmonary；Mycobacterium tuberculosis；diagnosis结核病的病原学诊断，目前临床上还是主要依 赖于传统的涂片法和培养法。

涂片法敏感度较低，特异度较差;作为金标准的液体培养法加药物敏感 性试验(简称“药敏试验”）方法耗时长，需要4 - 8 周才能获得结果，且程序繁琐，重复性差，对结核病 尤其是耐药结核病的早期诊断治疗带来了障碍[1]。

因此，临床迫切需要一种新型、快速、准确的检测方 法，快速完成结核分枝杆菌（Mtb)检测及耐药性分 析，为临床治疗争取时间。

近年来应用分子生物学doi：10.3969/j.issn. 1009 -6663.2017.010.038作者单位:610000四川成都，成都市公共卫生临床医疗中心（净居寺院区）诊断技术检测M tb成为传统诊断方法的重要补充，也是结核病快速诊断主要的研究方向[2]。

基因芯 片技术是一种新型核酸检测方法，可快速检测结核 分枝杆菌耐利福平和异烟肼3个基因（r〇PB、KatG、mhA)的常见突变位点，并鉴定非结核分枝杆菌属。

本研究将基因芯片法与传统痰涂片检查、液体培养 法做比较，对该技术检测痰和纤支镜冲洗液标本中 结核分枝杆菌的效果和临床价值进行评价。

资料与方法一、标本来源采集2015年11月至2016年11月住院肺结核患者痰及纤支镜冲洗液标本，排除检测失败、污染等因素，实际纳入标本共计641例，其中有痰者取痰液 536例，无痰者行纤维支气管镜检查取纤支镜冲洗 液105例。

对标本同时进行抗酸染色镜检、液体MGIT 培养+药敏试验和基因芯片检测。

二、研究方法1. 涂片检查:采用萋-尼氏染色法，并遵照《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》[3]的要求进行操作。

2.液体培养检查:采用BACTEC MGIT 960培养基，按照《分枝杆菌分离培养标准化操作程序及质 量保证手册》[4]的要求进行培养，所有涂片标本均 进行培养检查。

3. 药敏试验:经BACTEC MGIT 960快速培养后 分离的阳性菌株，采用微孔板比例法，按照《结核分 枝杆菌药物敏感性试验标准化操作程序及质量保证手册》[5]的要求进行药敏试验。

4. 基因芯片法:利用仪器对患者标本经过标本 处理-核酸提取-PCR 扩增-杂交反应-芯片扫 描-自动判读，发现突变的耐药基因。

根据M tb 的 耐药性与基因突变有关的分子机制，通过检测位点 的突变情况判断耐药性，如利福平耐药相关基因 ropB 、异烟肼耐药相关基因KatG 、inhA 。

如果耐药 相关基因为野生型，判断为相应药物敏感，如耐药相 关基因为突变型，判断为相应药物耐药。

5. 试剂与仪器试剂:试验所用染色液、药敏试验用培养基均由 珠海贝索生物技术有限公司提供。

基因芯片法试剂 包括晶芯分枝杆菌核酸检测试剂盒（PCR -荧光探针 法）、晶芯分枝杆菌菌种鉴定试剂盒、晶芯M tb 耐药 基因检测试剂盒（D N A 微阵列芯片法）、核酸提取 液、PCR 扩增试剂、杂交缓冲液、配套基因芯片等购 自北京博奥生物有限公司仪器:晶芯ExtractTM 核酸快速提取仪、Capital -Bio 基因芯片杂交盒、 BioMixerTM 芯片杂交仪、 AB 17500PCR 扩增仪、Slide-WasherTM 芯片洗干仪、Lux -ScanTMlOK -B 微阵列芯片扫描仪等均购自北京博奥生物有限公司。

6. 统计学分析：应用SPSS 13.0软件进行统计 学分析。

以液体培养法为金标准，计算涂片法、基因 芯片法检测M tb 的敏感度、特异度、阳性预测值、阴 性预测值。

以药敏试验为金标准，计算基因芯片法 检测异烟肼、利福平耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。

不同方法检测结果的一致性 用kappa 检验判别（kappa >0. 75具有高度一致性， 0. 75 > kappa 為0. 4 具有较好一■致性，kappa < 0. 4 具 有较差一致性）。

不同方法之间M tb 及异烟肼、利福平、耐多药阳性检出率的比较采用x 2检验，^ < 〇.〇5为差异有统计学意义。

结 果一、采用涂片法、培养法、基因芯片法检测分杆囷结果641例标本（痰536例，纤支镜冲洗液105例）同时采用三种方法检测Mtb ，以液体培养法检测结 果为金标准，基因芯片法检测技术的敏感度、特异 度、阳性预测值、阴性预测值分别为86.23% (332/ 385 )、92. 19% ( 236/256 )、94. 32% ( 332/352 )、81. 66% (236/289)，kappa 检验，K =0. 77,两者具有 高度的一致性;抗酸染色涂片法检测技术的敏感度、 特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为45. 71% (176/385 )、99. 61% ( 255/256 )、99. 44% ( 176/ 177)、54. 96% (255/464)，kappa 检验，K = 0. 40，两者具有较好的一致性（见表1)。

二、 采用药敏试验、基因芯片法检测M tb 异肼、利福平耐药性结果641例标本通过培养共获得385例阳性M tb 菌 株。

排除耐药检测失败等因素，可比对的332例Mtb (痰257例，纤支镜冲洗液75例）以药敏试验检测异烟肼、利福平耐药结果为金标准，基因芯片法检 测异烟肼、利福平耐药的敏感度、特异度、阳性预测 值、阴性预测值分别为75. 41% (46/61)、99. 63% (270/271)、97. 87% (46/47)、94. 74% (270/285)和 79. 17% (38/48) ,97. 54% (277/284) ,84. 44% (38/ 45)、96. 52% (277/287)。

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利用基因芯片检测结核分支杆菌及其利福平耐药性的研究

利用基因芯片检测结核分支杆菌及其利福平耐药性的研究

利用基因芯片检测结核分支杆菌及其利福平耐药性的研究发表时间：2019-03-20T08:45:29.473Z 来源：《药物与人》2018年12月作者：窦敏范天利[导读] 探究基因芯片检测结核分支杆菌及其利福平（RFP）耐药性的效果。

青岛大学医学院窦敏范天利摘要：目的：探究基因芯片检测结核分支杆菌及其利福平（RFP）耐药性的效果。

方法：从2018年1月到2018年6月之间收治100例肺结核患者作为研究对象，均对患者实施基因芯片检测，并分析利福平耐药性；将基因芯片检测结果和传统的药敏实验结果进行对比，统计其准确性。

结果：基因芯片检测结核分支杆菌的准确率为96.0%，检测利福平耐药菌株耐药性的准确率为90.00%。

结论：基因芯片检测结核分支杆菌及其利福平耐药性的准确率较高，值得临床推广使用。

关键词：基因芯片检测；结核分支杆菌；利福平耐药性我国是人口大国，人口基数较大且流动范围较广，导致多种流行性疾病的发生率一直保持在较高水平，结核病则是多种流行性疾病中较为常见的一种，该病发生的传染率高、耐药率高、死亡率高，对于患者和密切接触人群的健康乃至生命安全均产生着严重的威胁；因而如何对传染源进行及时的诊断，并对新病例的耐药性情况实施分析，就对于早期治疗工作的开展具有重要意义。

本次研究则基于笔者工作的实际情况着重分析基因芯片检测结核分支杆菌及其利福平耐药性的详细情况，目的在于为有关工作的开展提供参考，现将研究详情做出如下整理报道。

1 资料和方法1.1一般资料从2018年1月到2018年6月之间收治100例肺结核患者作为研究对象，患者的年龄均处于19-75岁之间，平均年龄为（35.64±2.13）岁，共计100例对象中包括女性44例、其余56例为男性患者，本次研究前均已经对患者或家属说明了本次研究概况，入选者均表示知情且同意参加本次研究观察。

1.2方法均对患者实施基因芯片检测，并分析利福平耐药性；即按照全国结核病细菌学检验标准化规程实施痰涂片、分枝杆菌培养、菌种鉴定和药敏实验，所用的仪器包括上海博星基因芯片有限责任公司生产的基因芯片、日本宝生物公司生产的Taq酶、美国BECKMANCOULTER 低温高速离心机、美国Axon公司生产的Genep ix 4000B芯片扫描仪等。

基因芯片技术检测结核分枝杆菌耐药性的临床价值杨璟1王丽玲2胡荣2肖杰2阮小洁2宋家武2

基因芯片技术检测结核分枝杆菌耐药性的临床价值杨璟1王丽玲2胡荣2肖杰2阮小洁2宋家武2

基因芯片技术检测结核分枝杆菌耐药性的临床价值杨璟1 王丽玲2 胡荣2 肖杰2 阮小洁2 宋家武2发布时间：2023-05-14T03:07:24.287Z 来源：《中国科技人才》2023年5期作者：杨璟1 王丽玲2 胡荣2 肖杰2 阮小洁2 宋家武2 [导读] 目的：对结核分枝杆菌耐药性检测过程当中应用基因芯片技术的效果以及价值进行分析研究。

方法：从2019年1月至2022年11月在医院接受治疗的疑似患有结核病的患者当中随机无目的性地挑选200名参与到这一次实验研究当中。

结果：200名疑似患者当中阳性患者40名，占比20%，基因芯片检测结果显示结核病38例，非结核病2例，阳性几率为19%，耐药基因检测21例，利福平以及异烟肼基因突变3例，总突变几率为14.3%，其中，有2例为利福平以及异烟肼均耐药，双重基因突变几率为9.5%，另外1例只耐受利福平，利福平总突变几率为14.3%，异烟肼总突变几率为9.5%，耐多药几率为9.5%。

结论：结核分枝杆菌耐药性检测过程当中应用基因芯片技术具有明显的效果，能够有效减少诊断时间，提高工作效率，所以可以进行大范围推广应用。

1.珠海市人民医院呼吸科2.广东省基因芯片工程技术研究中心，珠海赛乐奇生物技术股份有限公司广东珠海 519001摘要：目的：对结核分枝杆菌耐药性检测过程当中应用基因芯片技术的效果以及价值进行分析研究。

方法：从2019年1月至2022年11月在医院接受治疗的疑似患有结核病的患者当中随机无目的性地挑选200名参与到这一次实验研究当中。

结果：200名疑似患者当中阳性患者40名，占比20%，基因芯片检测结果显示结核病38例，非结核病2例，阳性几率为19%，耐药基因检测21例，利福平以及异烟肼基因突变3例，总突变几率为14.3%，其中，有2例为利福平以及异烟肼均耐药，双重基因突变几率为9.5%，另外1例只耐受利福平，利福平总突变几率为14.3%，异烟肼总突变几率为9.5%，耐多药几率为9.5%。

基因芯片检测临床标本结核分枝杆菌

基因芯片检测临床标本结核分枝杆菌

基因芯片检测临床标本结核分枝杆菌目的：评价基因芯片檢测技术在结核病诊断中的效果。

方法：收集我院2012年4月至2013年6月符合标准的432例进行基因芯片耐药基因技术检测，同时进行传统比例法药物敏感试验，后者作为金标准，对两组检测结果进行比较评价。

结果：基因芯片技术检测结核菌异烟肼耐药性的灵敏度和特异度分别为78.13%和89.88%，与金标准差异有统计学意义（P＜0.01）；基因芯片技术检测结核菌利福平耐药性的灵敏度和特异度分别为86.57%和91.95%，与金标准差异有统计学意义（P＜0.01）；基因芯片技术检测结核菌同时耐异烟肼和利福平（耐多药）的灵敏度和特异度分别为70.11%和90.14%，与金标准差异有统计学意义（P＜0.01）。

结论：基因芯片检测技术是一种快捷、简便、灵敏度高的方法，对于结核菌耐药性的检测具有很好的效果，但直接用于临床标本检测结核菌的耐药性不够理想。

标签：基因芯片；结核分枝杆菌；耐药性结核病是一种严重危害人类健康的慢性传染病，曾一度得到控制，但20世纪80年代以来，全球呈现“复燃”的趋势，随着人类免疫缺陷病毒的出现，耐多药菌株的产生，耐药结核病控制工作面临着严峻的挑战。

为了进一步推进耐药结核病防治工作，医务工作者开展了大量基因芯片检测技术的研究，试图以基因芯片快速检测技术替代耗时的传统检测方法。

本研究以传统的比例法药物敏感试验为金标准，评估基因芯片技术检测临床各种标本中结核分枝杆菌对异烟肼、利福平耐药性的灵敏度和特异度，了解基因芯片技术在临床的应用价值，从而为耐多药结核病患者提供有效的抗结核治疗方案。

1资料与方法1.1一般资料选取我院2012年4月至2013年6月住院和门诊患者，收集患者留取的各种标本共计1350份，每份标本直接行基因芯片技术检测和罗氏培养，剔除了非结核分枝杆菌（NTM），对基因芯片技术检测阳性同时罗氏培养阳性的标本共计432份纳入进一步研究。

432份阳性标本直接行基因芯片技术耐药基因检测和比例法药物敏感试验，了解结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的耐药情况。

肺泡灌洗液结合基因芯片对肺结核早期诊断的临床意义

肺泡灌洗液结合基因芯片对肺结核早期诊断的临床意义

肺泡灌洗液结合基因芯片对肺结核早期诊断的临床意义目的探究基因芯片检查对肺结核早期诊断的临床意义。

方法从我院2012年9月～2013年12月住院的肺结核患者中选取100例，对其临床诊断情况进行总结性分析。

结果我院引进痰抗酸杆菌基因芯片技术以来，观察诸多病例，痰抗酸杆菌基因芯片检查结核菌的检出率远远高于普通的痰抗酸杆菌涂片检查，并可以鉴别出非结核分枝杆菌，而肺泡灌洗液的基因芯片检查将更大地提高肺结核病的确诊率。

结论肺泡灌洗液结合菌基因芯片为结核病的早期诊断治疗及传染源控制提供了可靠依据。

标签：肺结核；肺泡灌洗液；基因芯片目前，全球结核病的疫情十分严重，发病率仍处于上升趋势，并以每年1.1%的速度增长，结核病已经成为当今世界成年人传染病的主要杀手，对国际社会和国际公共卫生事业构成了严峻挑战。

据世界卫生组织（WHO）的估计，全球每年新发结核患者880万例，其中390万为传染性结核患者。

每年因结核病死亡约200万人。

随着结核病在全球的重新蔓延和发展，在2013年第66届世界卫生大会上，世界卫生组织史无前例地为一种疾病宣布”全球结核病处于紧急状态”；2014年，再次发出了”遏制结核病行动刻不容缓”的呼声[1]。

结核病的实验室诊断主要依赖细菌学涂片和培养检查。

由于方法所限，严重影响了结核病的及时诊断。

因此，多年来国内外学者一直在寻找快速、敏感、特异、简便的实验室诊断方法[2]。

现结合我院引进痰抗酸杆菌基因芯片技术以来对肺结核早期诊断治疗情况，报道如下。

1 资料与方法1.1一般资料本次研究中所分析的100例患者，其资料均来自我院2012年1月～2013年12月门诊接诊的患者，所选取的患者其资料都非常完善；其中女性患者36例，男性患者64例，患者中年龄33～93岁，中位年龄为（59.94±1.28）岁，病程为1～13年。

1.2 临床诊断选择病史符合肺结核发病经过，有明确结核中毒症状，而肺CT表现非典型肺结核患者，或肺CT表现符合肺結核诊断，而无明确的结核病症状的患者，或病史及肺CT均符合肺结核病表现的患者，行痰结核涂片检查，无痰送检或痰菌阴性者，进行支气管镜检查，肺泡灌洗，留取肺泡灌洗液进行抗酸杆菌基因芯片检测，结果为结核分枝杆菌复合群或非结核分枝杆菌复合群，从而确定诊断及传染性。