蜜蜂雄蜂幼虫安全食效性研究
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蜜蜂雄蜂幼虫安全食效性研究
摘要对蜜蜂雄蜂幼虫安全食效性进行了研究，结果表明：急性毒性试验，10.0g/kg、21.5g/kg、46.4g/kg、100g/kg 4个剂量，24h内多次给样，各组均没发生死亡现象，解剖未发现任何异常；骨髓微核试验和小鼠精子畸变试验，雄蜂幼虫在试验剂量下不具有遗传毒性。
关键词雄蜂幼虫；急性毒性；遗传毒性
雄蜂幼虫由蜂王在雄蜂房产的未受精卵孵化而成，由于雄蜂幼虫以吸收蜂王浆、花粉、蜂蜜发育而成，具有很高的药用保健价值，是十分理想的高级营养保健食品[1-5]。
近几年对其药用保健功能的报道越来越多，但国内外对其是否具有不良影响少见报道，邵有全等[6]虽对其急性毒性做了研究，但不够精确。
因此有必要对其安全食效性进行系统研究，以便使人们更进一步了解和利用这一珍品。
1材料
1.1样品
10日龄雄蜂幼虫，由浙江黄海钱提供。
1.2试验动物
昆明小鼠，清洁级，购于福州防疫站动物饲养中心。
1.3主要试剂
环磷酰胺（注射用品），上海华联制药有限公司生产；Giemsa′s stain，上海三爱思试剂有限公司生产。
1.4主要仪器
电子天平（BS124），德国Sartorius生产；移液器，德国Tripette生产；显微镜，上海精密仪器有限公司生产。
2方法
按照保健食品功能学评价程序和检验方法进行[7-8]。
试样为冻干粉。
2.1急性毒性试验
Horn法设计剂量测定LD50；LD50数值查表确定。
选择10.0g/kg、21.5g/kg、46.4g/kg、100.0g/kg 4个剂量，每组小鼠5头，体重20～22g，雌、雄分别试验，给样在24h内完成。
2.2遗传毒性试验
2.2.1骨髓微核试验。
试验动物为体重25～30g的昆明小鼠，每组5只，雌、雄分别试验。
操作步骤如下：①样本制备：设1.0g/kg、5.0g/kg、10.0g/kg、20.0g/kg 4个剂量组，蒸馏水阴性对照组和环磷酰胺（CP）40g/kg（体重）阳性对照组。
经口灌胃给予，2次给样时间间隔24h，第2次给样后6h，颈椎脱臼处死小鼠。
取胸骨，用止血钳挤出骨髓液与玻片一端的小鼠血清混匀，常规涂片。
涂片自然干燥后放入甲醇中固定10min，当日固定后保存。
次日将固定好的涂片放入Giemsa应用液中染色10min。
立即用pH值6.8的磷酸缓冲液冲洗晾干。
②阅片。
选择细胞完整、分散均匀、着色适当的区域，在油镜下按一定顺序进行计数。
计数嗜多染红细胞（PCE为蓝灰色）及带微核的细胞（MNPCE）共1 000个，每只小鼠计数微核的千分率。
同时还要观察并计数嗜多染红细胞（PCE为蓝灰色）与成熟红细胞（RBC呈粉红色）的比值，即P/N。
2.2.2小鼠精子畸变试验。
试验动物为体重25～30g的昆明小鼠，每组5只，雌、雄分别试验。
操作步骤如下：①样本制备。
设1.0g/kg、5.0g/kg、10.0g/kg、20.0g/kg 4个剂量组、蒸馏水阴性对照组和环磷酰胺（CP）50g/kg（体重）阳性对照组。
经口灌胃给予，连续5d。
于给予受试物后35d处死小鼠，取出两侧副睾，放入盛有1mL生理盐水的小烧杯中。
用眼科剪刀将副睾纵向剪1～2刀，静置3～5min，轻轻摇动。
用4层擦镜纸过滤，吸滤液涂片。
空气中干燥后，用甲醇固定8min，自然干燥。
用1%～2%伊红染色1h，用蒸馏水轻冲，干燥。
②镜检。
在低倍镜下（用绿色绿光片）找到背景清晰、精子重叠少的部位，用高倍镜顺序检查精子的形态，记数结构完整的精子。
每只动物检查1 000个精子。
计算精子畸形率。
2.3数据分析方法
数据处理用SPSS V11.5统计分析软件，采用单因子方差分析对试验数据进行分析，方差检验用Tukey′s进行。
3结果
3.1雄蜂幼虫急性毒性试验
低剂量组小鼠一切正常；46.4g/kg剂量组小鼠喂完的次日，除进食稍少外，没发现任何异常；100.0g/kg剂量组小鼠开始2d出现活动少、进食少、毛发竖直、眼睛上睑下垂、眼球突出、会阴部污秽、缺乏知觉等症状，2d后恢复正常。
观察14d，没有任何异常，解剖未发现异常，也没有死亡，称体重各组间无差异（P=0.05）。
根据Horn法查表得LD50大于100g/kg。
3.2雄蜂幼虫骨髓微核试验
雄蜂幼虫各试验组与阴性对照组无显著差异（P=0.05），与阳性对照组有极显著差异（P=0.01）。
说明雄蜂幼虫在剂量20.0g/kg时仍不具有诱导骨髓微核产生的活性（表1）。
3.3雄蜂幼虫小鼠精子畸变试验
雄蜂幼虫各试验组与阴性对照组无显著差异（P=0.05），与阴性对照组有极显著差异（P=0.01）。
说明雄蜂幼虫在剂量高达20.0g/kg时对生殖细胞仍无致突变作用（表2）。
4讨论
雄蜂幼虫对小鼠的急性毒性LD50＞100g/kg，几乎不具有急性毒性。
换算[9，10]成人的剂量则相当于人每日可取食约400g干粉，按含水量75%算[11]，即相当于约1 600g鲜雄蜂幼虫。
当试验剂量达到20.0g/kg时仍未发现其具有遗传毒性的痕迹。
雄蜂幼虫含有丰富的蛋白质、游离氨基酸、维生素、微量元素[4，11-13]及对人体具调节作用的活性物质，如酶、激素、核酸、黄酮等[2，14]。
因此，雄蜂幼虫是十分理想的营养保健品。
5参考文献
[1] 陈尚发.雄蜂蛹的经济价值及其开发前景[J].中国养蜂，1990（2）：25-26.
[2] 陈明胜.浅谈蜂蛹的药用价值[J].中国养蜂，1996（2）：21.
[3] 张桂香.蜜蜂产品的营养价值与开发研究现状[J].食品研究与开发，2002（2）：43-45.
[4] 沈平锐.蜂蛹的营养成份及其与几种营养食品的比较[J].食品科学，1991（9）：36-38.
[5] 张其康，吴珍红，杜迎刚，等.雄蜂幼虫抗疲劳作用研究[J].中国养蜂，2004，55（5）：6-7，18.
[6] 邵有全，马丽萍，祁海萍.雄蜂幼虫粉剂急性毒性试验报告[J].养蜂科技，1992（1）：14.
[7] 卫生部食品卫生监督检验所.保健食品功能学评价程序和检验方法[G]//现代保健食品研发与生产新技术新工艺及注册申报实用手册.北京：中国科技文化出版社，2005.
[8] 郑建仙.功能性食品（第三卷）[M].北京：中国轻工业出版社，2002.
[9] 徐叔云.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，1982.
[10] 苗明三.实验动物和动物实验技术[M].北京：中国中医药出版社，1990.
[11] 乔延昆.蜜蜂虫蛹的成分和利用[J].养蜂科技，1993（1）：31.
[12] 沈平锐，罗光华.蜂王幼虫的营养食效性及其在食品中的开发利用[J].食品科学，1993（3）：63-64.
[13] 董学军，郝恩坤.蜂蛹中氨基酸含量的研究[J].氨基酸和生物资源，2000，22（1）：14-15.
[14] 胡福良，陈民利，陈盛禄，等.蜜蜂幼虫、蛹抗衰老作用的试验研究[J].特产研究，1997（2）：13-15.。
