实验四 细胞显微操作技术

一、实验目的1. 掌握显微镜的基本操作技能，包括取镜、安放、对光、观察和整理等步骤。

2. 学习制作临时装片，了解临时装片的基本方法。

3. 通过观察细胞，认识细胞的基本结构，如细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核等。

4. 提高观察和实验分析能力，培养科学实验素养。

二、实验材料1. 实验用具：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、滴管、蒸馏水、碘液、纱布、吸水纸。

2. 实验材料：洋葱鳞片叶、松叶、动物血液、动物神经细胞永久装片。

三、实验步骤1. 取镜和安放- 右手握住镜臂，左手托住镜座。

- 将显微镜放在实验台上，略偏左，安装好目镜和物镜。

2. 对光- 转动转换器，使低倍物镜对准通光孔，注意物镜的前端与载物台保持2厘米的距离。

- 把一个较大的光圈对准通光孔。

- 左眼注视目镜内，右眼睁开，便于以后观察画图。

- 转动反光镜，看到明亮视野。

3. 制作临时装片- 在载玻片中央滴一滴蒸馏水。

- 取洋葱鳞片叶或松叶，用刀片切成薄片。

- 用镊子夹取薄片，轻轻放在载玻片上的水滴中。

- 盖上盖玻片，注意避免产生气泡。

4. 染色- 在盖玻片一侧滴加碘液。

- 用吸水纸在盖玻片另一侧轻轻吸引，使碘液浸润标本。

5. 观察- 转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近载玻片。

- 眼睛看着物镜以免物镜碰到玻片标本。

- 左眼向目镜内看，同时反向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直到看清物像为止。

- 调整细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。

- 依次观察低倍镜和高倍镜下的细胞结构。

6. 整理- 实验结束后，将显微镜擦拭干净，放回原位。

四、实验结果与分析1. 洋葱鳞片叶细胞- 观察到细胞呈长方形，细胞壁明显，细胞膜清晰可见。

- 细胞质中存在大量淀粉粒，细胞核位于细胞中央，核仁明显。

2. 松叶细胞- 观察到细胞呈多边形，细胞壁较厚，细胞膜较薄。

- 细胞质中存在大量叶绿体，细胞核位于细胞中央，核仁不明显。

3. 动物血液细胞- 观察到红细胞呈圆形，无细胞核，细胞质中充满血红蛋白。

2023级医学实验技术专业《细胞生物学实验技术》课程实验报告学号姓名成绩实验一：光学显微技术与细胞显微测量一．实验原理光镜的成像需要光束穿透被观察的样品，用于普通光镜的生物样品必须经过一系列的组织处理并制成1~10微米的切片。

普通显微镜的成像原理：被观察的物体先通过物镜进行第一次成像，物镜会将物体放大成一个倒立的实像。

这个实像再通过目镜进行第二次放大，最终形成一个倒立的虚像。

荧光显微镜利用短波波长，激发样品，使其产生荧光，通过放大系统放大后，看到的不是样品的本色，而是其荧光。

荧光显微镜的工作原理：荧光显微镜会使用特定的荧光染料或标记物，这些物质在受到特定波长的光激发时，会发出荧光。

当被观察的样本被这种荧光染料处理后，在显微镜下用特定波长的光进行照射，样本中的荧光染料就会吸收光的能量并发出荧光。

二．实验器材普通光镜44台（两间实验室）、荧光显微镜4台（每间实验室2台）、倒置显微镜4台（每间实验室2台）、小剪、小镊、小刀、牙签、吸管、手套、载玻片、盖玻片、移液器、黄白枪头、擦镜纸、面巾纸三．实验试剂教学标本片：人血标本44片、鸡血标本44片、镜台测微尺44片、目镜测微尺44片、AO 染液（0.1mg/ mL )1.5mLx4支、碘液10mLx4瓶四．实验步骤显微测量的步骤：1．抽出目镜，旋下接目透镜，将目微尺放到目镜光阑上（刻度一面朝下），再将透镜旋上。

2．将台尺置于载物台，用低倍镜将台微尺移至视野中央，然后换用测量细胞时所用物镜，调焦，使刻度清楚。

3.转动目镜，使目微尺与台微尺的刻度平行，再使目微尺上某段两端的刻线与台微尺刻线重合，读出两端重合线间，目微尺和台微尺各多少格。

4.计算选定物镜下，目微尺每格实际长度（μm ):目微尺每格长度＝台微尺格数／目微尺格数x10μm5．取下台尺，换上细胞标本，用目微尺测量细胞大小。

先用目尺测出佰放：数，再每格长度。

每种细胞测量5-10个（不同视野），计算均值。

细胞生物学实验指导（12生工）细胞生物学实验教案实验一：特殊显微镜的使用及显微摄影术一、实验目的：1、掌握暗视野显微镜、相差显微镜的原理、构造及其使用方法。

2、掌握显微摄影装置及其操作技术，独立完成显微摄影全过程。

二、实验原理：暗视野显微镜应用丁达尔现象，装配暗示场聚光器，是入射光从聚光器斜向照明被检样品。

暗视野显微镜利用样品的散射光和放射光进行观察，只能观察物体的存在与运动而不能辨清其细微结构。

暗视场照明是照明光线仅照亮被检样品而不能进入物镜，使视场背景暗黑，样品明亮的照明方法。

相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，通过衍射和干涉现象，将肉眼看不到的相差，变为明暗的振幅差而能看到。

相差显微镜应用于生物学的主要价值，在于对透明的活体进行直接观察，无需采用是细胞致死的固定和染色的方法。

0lympus BH系列的BHS和BHT型显微镜有摄影装置，通过摄影装置，拍摄显微视场中被检样品。

三、实验仪器与试剂1、材料：洋葱鳞茎、人口腔细胞；2、器材：暗视场显微镜、相差显微镜、Olympus显微镜、活体生物样品、擦镜纸、消毒牙签、镊子、滴管、纱布、吸水纸、载玻片、盖玻片3、试剂：生理盐水（0.9%）、2%碘液、香柏油、二甲苯。

四、实验步骤与方法（一）口腔上皮细胞的制备及染色1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴生理盐水；3、用消毒牙签在自己漱净的口腔内壁轻轻地刮几下；4、把牙签上的碎屑放在生理盐水中轻涮几下；5、盖上盖玻片；6、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；7、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。

（二）洋葱鳞茎内表皮装片制作1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴蒸馏水；3、用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮置于蒸馏水中；4、盖上盖玻片；5、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；6、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。

（三）分别用暗视场显微镜和相差显微镜观察（四）显微摄影的使用将装片置于显微摄影镜下,选一清晰的视野进行拍摄并打印出来。

一、实验目的掌握制作石蜡切片中固定、包埋的基本操作技术。

二、实验用品1、实验材料：鱼2、实验试剂：10%甲醛溶液（40%甲醛10ml，蒸馏水90ml）、50%酒精、70%酒精、80%酒精、90%酒精、95%酒精、100%酒精、二甲苯、石蜡。

3、实验器具：解剖器，双面刀片，小瓶，牛皮纸、电热恒温箱、脱水机、包埋机。

三、实验步骤1、取材：用任何杀生的方法把鱼杀死，将腹腔打开，切取0.5cm3左右大小的肝脏、肠等组织。

2、固定：将切好的组织直接投入10%甲醛固定液中，固定24h。

3、脱水：50%酒精→70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。

每级1-2h。

70%酒精处可长期保存。

4、透明：1/2二甲苯+1/2100%酒精(1-2h) →纯二甲苯(1h) →纯二甲苯(1h)5、浸蜡：石蜡先置于60℃的温箱中，倒入含二甲苯及材料的小瓶中置于37℃温箱中，放置2-4小时。

6、包埋：先提升恒温箱的温度至60℃，换纯蜡3次，每次1-2h，用牛皮纸叠纸盒，置于45-60℃的烫板上，倒入材料，摆放好材料，把标签（正面向外置于底部），补足石蜡，倒好后轻轻的置于冷水盆中，注意底面要接触盆中凉水，待石蜡全部凝固后可取出晾干，也可在凉水盆中放置过夜。

四、作业分析总结石蜡切片技术中固定和包埋的操作注意事项有哪些？附：折纸盒按下列顺序折叠：(1) 折AA'及BB'；(2) 折CC'及DD'；(3) 折CE'与AE'、向外夹出EE'。

同样折出FF'，GG'及HH'；(4) 使CE'E与E'IE两三角形相叠，并沿E'C和EI重叠的折痕向后转折。

同样折其余三只角；(5)折RIJF向外，同样折出GKLH，即折成所需的纸盒。

一、实验目的掌握制作石蜡切片中切片、贴片的基本操作技术。

二、实验用品：1．实验试剂：95%酒精、100%酒精、二甲苯、明胶液、蒸馏水。

微生物显微镜直接计数法和死活细胞的鉴定[总结] 实验四微生物显微镜直接计数法和死活细胞的鉴定以及四大类微生物菌落形态的比较和识别微生物显微镜直接计数法一、实验目的1、学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。

2、学习并掌握形态观察及死活细胞的鉴别方法。

二、实验原理酵母菌显微直接计数—血球计数板三、实验材料显微镜、血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、无菌滴管、吸水纸、擦镜纸.四、实验步骤1、取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。

2、取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。

3、用10×(40x)镜观察并将计数室移至视野中央。

4、在10×(40x)镜下计数:计数5个中格的平均值，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。

注意事项:计上不计下，计左不计右。

出芽计一半。

五、实验结果将显微计数结果记录于下表中。

T表示五个中方格中的总菌数。

各中格中菌数二室平个/ml T均值 1 2 3 4 5第一室第二室六、问题与讨论在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点,有何改进方法,酵母菌死活细胞的鉴定一、实验原理美蓝是一种无毒的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。

因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色，借此即可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。

二、实验材料酵母菌悬液、 0.1 ,吕氏碱性美蓝染色液显微镜、载玻片、盖玻片。

三、实验步骤美蓝镜片的观察1)在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色掖，然后按无菌操作用吸取计数时酵母菌样品液放在染液中，混合均匀。

2)用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。

3)将制片放置约1min后镜检，低倍镜到高倍镜观察，根据颜色来区别死活细胞。

内容：1 显微鉴别法：系指用显微镜对药材或饮片的切片、粉末、解离组织或表面制片及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。

2 仪器和用具2.1 仪器生物光学显微镜、显微描绘器、滑走切片机、小型粉碎机或徒手圆筒生物切片器、镜台测微尺、离心机。

2.2 用具2.2.1 放大镜、刀片、解剖刀、镊子（包括粗镊及眼科弯镊与直镊）、剪（眼科剪与手术剪）、解剖针。

2.2.2 载玻片、盖玻片2.2.3 吸湿器（即玻璃干燥器改装蒸馏水加微量苯酚，潮气润湿药材样品用）、培养皿或小烧杯（放切片用，切片后的处理均可在其中进行）、酒精灯、铁三角架、石棉网、滴瓶、试管、试管架、滴管、玻璃棒（粗与细）、乳钵、量筒等2.2.4毛笔（从刀上刷取切片用）、铅笔（HB、3H、6H绘图用）、带盖搪瓷盘（装切片标本用）、纱布、吸水纸（滤纸）、火柴等。

3 试药与试液3.1 水合氯醛试液取水合氯醛50g，加水15ml与甘油10ml使溶解，即得。

此液为透化剂，可使干缩的细胞壁膨胀而透明，并能溶解淀粉粒、树脂、蛋白质及挥发油等。

3.2 甘油醋酸试液（斯氏液）取甘油、冰醋酸与水各等份，混合即得。

此液专用于观察淀粉形态，可使淀粉不膨胀变形，便于测量其大小。

3.3 甘油-乙醇溶液取甘油1份，50%乙醇1份，混合即得。

此液为封藏液，用于保存植物材料及临时切片，有软化组织的作用。

3.4 苏丹Ⅲ试液取苏丹Ⅲ0.01g，加90%乙醇5ml溶解后，加甘油5ml，摇匀即得。

本液应置棕色玻璃瓶内保存，在2个月内应用。

此液可使木栓化、角质化细胞壁及脂肪油、挥发油、树脂等染成红色或淡红色。

3.5 钌红试液取10%醋酸钠溶液1～2ml，加钌红适量使呈酒红色即得。

本液应临用新制。

此液可使粘液染成红色。

3.6 间苯三酚试液取间苯三酚1g，加90%乙醇100ml使溶解，滤过即得。

应置棕色玻璃瓶内，在暗处保存。

此液与浓盐酸合用，可使木化细胞壁染成红色或紫红色。