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保健食品中角鲨烯的气相色谱分析周茂君1,向仕学1,殷德桂2,张正江31 四川省疾病预防控制中心(成都 610031)2 四川省自贡市沿滩区卫生防疫站3 四川省永川市卫生防疫站[关键词] 保健食品;角鲨烯;气相色谱分析[中图分类号]O65717+1 [文献标识码]C [文章编号]1006-4028(2003)02-0186-02 角鲨烯(Squalenum )的化学名称为2,6,10,15,19,23)六甲基)2,6,10,14,18,22)二十四碳六烯。
别名:鲨烯、三十碳六烯、鱼肝油萜,Spinacene 。
该品为无色或微黄色澄明油状液体,系从深海鲨鱼肝油中精馏而成。
因其具有提高血红蛋白的携氧能力,促进新陈代谢,提高机体免疫力和降低血清总胆固醇,防止动脉粥样硬化等功能,而常作为功效成分添加于保健食品中。
角鲨烯的含量测定方法有滴定分析法、薄层色谱法(TLC 法)、气相色谱法(GC 法)及红外光谱分析法(IR 法)。
保健食品可能使用多种功效成分和相关赋形剂,其组分较为复杂,为满足保健食品市场的监督监测,新产品的开发研制及生产控制,而建立了气相色谱法测定保健食品中角鲨烯的定量分析方法。
1 实验部分111 仪器与试剂 GC-14A 型气相色谱仪(日本岛津公司),配氢火焰离子化检测器,泰立公司TL -9800色谱工作站。
三氯甲烷(AR);角鲨烯校准溶液:准确称取角鲨烯标准品(纯度\9912%)011000g 于烧杯中,以三氯甲烷溶解定量移入50m l 容量瓶中,加入三氯甲稀释至刻度。
此溶液每毫升含210mg 角鲨烯,于冰箱保存。
112 分析步骤11211 色谱分析条件 色谱柱:53mm @2m 玻璃柱,内装涂渍0128%OV -17+218%QF -1/chromosorb WAW DMCS (80~100目)。
温度:色谱柱温度230e 汽化室 260e 检测器 260e 。
气体B 氮气(N 2)B 氢气(H 2)B 空气(Air)=150kPa:60kPa:50kPa 。
蝉花菌种的分离鉴定及蝉花营养成分测定邢康康;石萍;贺宗毅;刘艳;陈仕江【摘要】[目的]研究蝉花菌种的分离、鉴定及蝉花营养成分测定.[方法]对从重庆梁平地区采集得到的蝉花进行菌种分离和鉴定,并对蝉花的营养成分进行测定.[结果]分离菌株为蝉拟青霉菌(Paecilomyces cicadae),蝉花含有粗多糖、腺苷、甘露醇、氨基酸等营养成分.[结论]该研究为重庆梁平地区蝉花资源的开发利用提供参考,对扩大传统中药资源、进一步深入研究该菌株的药理作用和人工栽培技术具有重要意义.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2018(046)028【总页数】3页(P162-163,171)【关键词】蝉花;分离鉴定;系统发育分析;营养成分【作者】邢康康;石萍;贺宗毅;刘艳;陈仕江【作者单位】重庆市中药研究院,重庆400065;重庆市中药研究院,重庆400065;重庆市中药研究院,重庆400065;重庆市蚕业科学技术研究院,重庆400700;重庆市中药研究院,重庆400065【正文语种】中文【中图分类】R284蝉花俗称蝉虫草、蝉茸、胡蝉等，是蝉拟青霉 (Paecilomyces cicadae) 等麦角菌科(Claviceptaceae)真菌寄生于一些蝉若虫后形成的菌虫复合体[1]。
《图经本草》记载：“今蜀中有一种蝉，其蜕壳头上有一角，如花冠状，谓之蝉花。
”《本草纲目》记载：“蝉花可治疗惊痫，夜啼心悸，功同蝉蜕”。
现代研究表明，蝉花中含有糖原、甘露醇、多种生物碱、蛋白质、多种氨基酸以及多种微量元素等化学成分，且糖类和蛋白质的含量相对较高[2]，具有免疫调节、代谢调节、解热镇痛、镇静催眠、改善肾功能、降血糖、抗肿瘤等药理作用。
蝉棒束孢的寄主广泛，常见的有竹蝉(Platylomia pieli)、山蝉 (Cicada flammata)、蟪蛄 (Platyleura kaempferi)、云南黑蝉 (Cicadatra shaluensis)、草蝉(Mogannia conica)、小鸣蝉 (Oncotympana ella)和透翅蝉 (Hyalessa roils)，多分布在我国南方诸省[3]。
中文通用名角鲨烯英文通用名Squalene标准号WS-10001-(HD-0818)-2002药品名称角鲨烯药品英文名Squalene主要成分本品为2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯构成的不饱和烃，系从鲨鱼肝油中精馏制得，含C30H50不得少于90.0%。
处方性状本品为无色或微黄色澄明油状液体；有鱼肝油特臭，易氧化。
本品在丙酮、乙醚、四氯化碳中极易溶解，在水中不溶。
相对密度本品的相对密度（中国药典2000年版二部附录VI A）为0.854～0.862。
折光率本品的折光率（中国药典2000年版二部附录VI F）为1.494～1.499。
酸值取乙醇与乙醚各15ml，置锥形瓶中，加酚酞指示液5滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.01mol/L）至微显粉红色，再加本品 5.0g，振摇使完全溶解，用氢氧化钠滴定液（0.01mol/L）滴定，酸值（中国药典2000年版二部附录VII H）不得过0.3。
鉴别（1）取本品0.5ml，加0.5%溴的四氯化碳溶液5ml，振摇，溴的颜色即消失。
（2）在含量测定项下记录的气相色谱图中供试品主峰的保留时间应与角鲨烯参比溶液峰的保留时间一致。
检查过氧化值取本品1.0g，加冰醋酸-氯仿（6︰4）30ml，振摇使溶解，加碘化钾的饱和溶液1ml，振摇1分钟，加水100ml与淀粉指示液1ml，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定至蓝紫色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。
消耗硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）不得过1.5ml。
溶液的颜色本品的颜色与黄绿色3号标准比色液（中国药典2000年版二部附录IX A第一法）比较，不得更深。
水分与挥发物本品的水分与挥发物（中国药典2000年版二部附录VII H）不得过0.1%。
含量测定照气相色谱法（中国药典2000年版二部附录V E）测定。
色谱条件与系统适用性试验以硅酮（OV-17）为固定相，涂布浓度2%，柱温为250℃，理论板数按角鲨烯峰计算应不低于1500，角鲨烯峰与内标物质峰的分离度应符合要求。
气相色谱法同时测定三川丹皮酚膏中4种成分含量目的建立同步测定三川丹皮酚膏中樟脑、薄荷脑、龙脑和丹皮酚4种成分含量的气相色谱法。
方法使用气相色谱仪，ZB-WAX毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 ?m）。
以氮气为载气，氢火焰离子化检测器，采用程序升温，外标法测定含量。
结果三川丹皮酚膏中的樟脑、薄荷脑、龙脑和丹皮酚等4种物质在规定范围内有良好的线性关系，平均加样回收率分别为99.82%、99.28%、98.72%、97.35%。
结论本方法简便，灵敏度高，重复性好，结果准确，适合于三川丹皮酚膏中樟脑、薄荷脑、龙脑和丹皮酚的含量测定。
标签：三川丹皮酚膏；气相色谱法；含量测定；樟脑；薄荷脑；龙脑；丹皮酚三川丹皮酚膏是由三七、川乌、丹皮酚、樟脑、薄荷脑、冰片等组成的外用膏剂，为广州中医药大学附属医院应用多年的医院制剂，具有祛风通络、逐瘀止痛、行气活血功效，主要用于关节疼痛、骨质增生、各种跌打损伤、风湿瘀阻等症。
其中，樟脑、薄荷脑、龙脑具有清凉止痒、止痛、改善局部血液循环、促进肉芽新生的功效[1]，丹皮酚具有抗病原微生物、镇痛、抗炎抗过敏、抗心率失常、免疫调节、保肝、降血糖、抑制皮肤色素合成等广泛的药理作用[2]。
本研究采用毛细管气相色谱外标法[3-4]，同时测定本品中樟脑、薄荷脑、龙脑和丹皮酚4种主要有效成分的含量，作为三川丹皮酚膏的质量控制方法。
1 仪器与试药美国V ARIAN-3900气相色谱仪（FID Detector）；ZB-WAX毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 ?m）；BP210S 型电子分析天平（赛多利斯）。
樟脑对照品（批号110747-200507）、薄荷脑对照品（批号110728-200506）、龙脑对照品（批号111688-200501）、丹皮酚对照品（批号0708-9704）均购自中国药品生物制品检定所；三川丹皮酚膏（批号20110101、20110301、20110509、20110603、20110710），广州中医药大学新药研究开发中心提供；氮气为高纯氮，氮气、氢气和空气均购自广东华明经营商行；其他试剂均为分析纯。
分析检测气相色谱法测定菜籽油中角鲨烯的含量张 洁，董榕贵*，代青维（贵州省检测技术研究应用中心，贵州贵阳 550014）摘 要：目的：建立一种菜籽油中角鲨烯的气相色谱方法。
方法：样品经氢氧化钾-甲醇溶液皂化后，用正己烷提取，经HP-5色谱柱分离，气相色谱仪分析测定，外标法定量。
结果：角鲨烯在10～100 mg·L-1呈现良好的线性关系，相关系数为0.999 8，回收率为91.0%～98.7%，相对标准偏差为3.2%～6.5%，检出限为1 mg·kg-1，定量限为3.5 mg·kg-1。
结论：该方法的线性良好，结果准确，精密度高，适用于菜籽油中角鲨烯含量的测定。
关键词：菜籽油；气相色谱；角鲨烯；皂化Determination of Squalene Content in Rapeseed Oil by GasChromatographyZHANG Jie, DONG Ronggui*, DAI Qingwei(Guizhou Testing Technology Research and Application Center, Guiyang 550014, China) Abstract: Objective: To establish a gas chromatography method for squalene in rapeseed oil. Method: The samples were saponified by potassium hydroxide and methanol solution, extracted with n-hexane, separated by HP-5 column, analyzed by gas chromatograph, and quantified by external standard method. Result: At 10～100 mg·L-1, squalene showed a good linear relationship, the correlation coefficient was 0.999 8, the recovery was 91.0%～98.7%, the relative standard deviation was 3.2%～6.5%, the limit of detection was 1 mg·kg-1, and the limit of quantification was 3.5 mg·kg-1. Conclusion: The method has good linearity, accurate results and high precision, and is suitable for the determination of squalene content in rapeseed oil.Keywords: rapeseed oil; gas chromatography; squalene; saponification菜籽油具有很高的营养价值，含有丰富的不饱和脂肪酸，尤其是亚油酸、α-亚麻酸、花生二烯酸和角鲨烯等。
气相色谱-串联质谱法测定不同产地大米中的角鲨烯李红;田福林;刘成雁;程光荣【摘要】通过比较大米中角鲨烯的不同提取方法,选用优化后的索氏提取/气相色谱-串联质谱(GC- MS/MS)法对不同产地大米中的角鲨烯进行定性及定量分析.结果表明,该方法在1-50 mg/L质量浓度范围内线性良好,相关系数为0.9987;检出限为0.1 mg/kg;在5,20 mg/kg 2个加标水平下的回收率可达96%-104%;相对标准偏差(RSD)不大于3.696.对不同产地大米中角鲨烯的分析表明,该方法的灵敏度高、重复性好,可作为区分大米不同种属、产地和品质的有效方法.%Different extraction methods of bioactive component squalene in rices were studied and a new method was developed for the determination of squalene in rices. The squalene in rices from different areas were extracted by Soxhlet extract method, and analyzed by gas chromatography - tandem mass spectrometry(GC -MS/MS). The results showed that the calibration curve was linear over the concentration of squalene in the range of 1 -50 mg/L with a correlation coefficient of 0. 998 7. The detection limit( LOD) was 0. 1 mg/kg. The recoveries of squalene at two spiked levels of 5 mg/kg and 20 mg/kg were in the range of 96% - 104% with relative standard deviations ( RSDs) no more than 3. 6% . The method was sensitive and reproducible, and could be used to distinguish effectively rices with different species, origins and qualities.【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2011(030)010【总页数】4页(P1179-1182)【关键词】气相色谱-质谱;角鲨烯;大米;索氏提取【作者】李红;田福林;刘成雁;程光荣【作者单位】辽宁省分析科学研究院,辽宁省标准化体系建设工程技术研究中心,辽宁,沈阳,110015;辽宁省分析科学研究院,辽宁省标准化体系建设工程技术研究中心,辽宁,沈阳,110015;辽宁省分析科学研究院,辽宁省标准化体系建设工程技术研究中心,辽宁,沈阳,110015;辽宁省分析科学研究院,辽宁省标准化体系建设工程技术研究中心,辽宁,沈阳,110015【正文语种】中文【中图分类】O657.63;O629.61我国是世界上最大的稻米生产国，产量和种植面积分别占世界的35%和21%［1］，全国近2/3的人口以大米为主食［2］。
气相色谱法测定蝉花中角鲨烯的含量凡军民;贾君;谢春芹;韩艳丽【摘要】Objective] To establish a method of capillary gas chromatography to detect the content of squalene in Cordyceps cicadae.[Method] Squalene in Cordyceps cicadae Shing was detected by gas chromatography.And the squalene contents in different parts of C.cicadae were com-pared.The optimal condition for the detection of squalene in C.cicadae was obtained.[Result] C.cicadae (1 g) was extracted by ultrasonic ex-traction,the product was methyl esterified at 40 ℃for 5 min by 1 m L of 0.5 mol/L sodium hydroxide-methanol solution and then extracted by n-hexane.The squalene could be determined quantitatively by GC.When the squalene concentration was from 21.43 to 214.30 μg/mL,there was a good linear relation (r=0.999 2) and a perfect method precision (RSD =3.71%),and the recovery rate was 77.80%-97.32%,and the aver-age recovery rate was 88.10% (n=9).[Conclusion] This method was simple and rapid with low pollution and high sensitivity,and it is suitable for determination of squalene content in C.cicadae.%[目的]建立毛细管气相色谱（GC）测定蝉花中角鲨烯含量的方法。
[方法]采用气相色谱法测定蝉花中角鲨烯，并对不同部位天然蝉花的角鲨烯含量进行比较，确定蝉花中角鲨烯含量测定的最佳条件。
[结果]1 g蝉花经超声波提取后，经1 mL 0．5 mol／L的氢氧化钠－甲醇溶液40℃皂化5 min，再经正已烷萃取净化，采用GC法测定角鲨烯含量。
该方法在角鲨烯质量浓度为21．43～214．30μg／mL （r＝0．9992）范围内线性关系良好，方法精密度良好（RSD＝3．71％），加标回收率为77．80％～97．32％，平均加标回收率（n＝9）为88．10％。
[结论]气相色谱法简单快速，污染小，检测灵敏度高，可用于蝉花中角鲨烯含量的测定。
【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2016(044)028【总页数】3页(P94-95,98)【关键词】蝉花;角鲨烯;气相色谱法【作者】凡军民;贾君;谢春芹;韩艳丽【作者单位】江苏农林职业技术学院，江苏句容212400;江苏农林职业技术学院，江苏句容212400;江苏农林职业技术学院，江苏句容212400;江苏农林职业技术学院，江苏句容212400【正文语种】中文【中图分类】TS201.2蝉花(Cordyceps cicadae Shing)是一些蝉的土栖若虫受到蝉拟青霉(Paecilomyes cicadae Samson)真菌寄生的产物，与名贵中药材冬虫夏草的无性系同属，金蝉花可以作为冬虫夏草的代用品，起到滋补养生的作用[1]。
研究表明，蝉花含有多种活性成分，具有调节免疫功能和脂类代谢，改善机体的营养状况，抗疲劳、解热镇痛和滋补强壮等作用[2]。
角鲨烯又名鲨烯、鲨萜，是所有细胞中甾醇的前体，不饱和程度较高，是一种非常重要的功能油脂[2-3]。
角鲨烯具有抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳、抗心血管疾病、抗感染、提高免疫调节等多种生理功能[4]，因此被广泛应用于保健食品、医药及化妆品等行业。
目前，角鲨烯含量的测定方法主要有气相色谱法(GC)[5-6] 、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)[7-8]、高效液相色谱法(HPLC)[9-10]以及超高效液相色谱法(UPLC)[11-12]。
由于角鲨烯的极性较小，易溶解于非极性溶剂中，故检出限均高于气相色谱和气质联用色谱法而很少被应用于分析检测中。
气相色谱法测定中大多数采用有机溶剂溶解直接进样，不仅污染了色谱柱，还缩短了色谱柱的使用寿命。
由于角鲨烯是一种脂质不皂化物，因此可对样品进行皂化前处理，然后萃取净化皂化液，从而可脱除样品中较多的杂质峰。
笔者建立了气相色谱法测定蝉花中角鲨烯的色谱条件，并对不同部位天然蝉花的角鲨烯含量进行了比较。
1.1 材料1.1.1 原料与试剂。
蝉花(Cordyceps cicadae Shing)产自江苏省句容市磨盘山；角鲨烯对照品(含量99.5%)，中国药品生物制品检定所，批号140721-200601；正己烷为色谱纯，国药集团化学试剂有限公司。
1.1.2 仪器与设备。
Agilent 7890A-FID气相色谱仪，MD 200氮气吹扫仪，梅特勒-托利多ME204E 电子天平，艾本森MixPuls涡旋混合仪，KH5200型超声波清洗器，DJ-04B型粉碎机。
1.2 方法1.2.1 对照品储备液的制备。
精密称取角鲨烯对照品适量，置50 mL容量瓶中，加正己烷溶解稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为214.30 mg/mL的对照储备液。
1.2.2 供试溶液的制备。
精密称定烘干至恒重的样品粉末约1 g，置于50 mL离心管中，加正己烷20 mL，在40 kHz、200 W条件下超声提取30 min，冷却后过滤，将滤液用氮气吹干。
在吹干的蝉花脂肪酸中加入0.5 mol/L氢氧化钠-甲醇溶液 1.0 mL，摇匀，40 ℃水浴加热5 min，取出冷却，加入正己烷2.0 mL萃取，静置 10 min，取上清液，过0.22 μm滤膜，作为供试溶液，备用。
1.2.3 气相色谱条件。
采用Agilent HP-5毛细管色谱柱(30.00 m × 0.32 mm × 0.25 μm，Agilent Technologies)，载气为氮气(纯度 99.999%)；空气流速400mL/min，氢气流速30 mL/min，氮气流速2 mL/min；检测器FID温度为290 ℃，进样口温度为280 ℃，进样量为1 μL，分流比为10∶1；程序升温：初始温度180 ℃，保持1 min，以10 ℃/min升温至250 ℃，保持10 min。
2.1 样品前处理条件的优化采用超声、索氏2种方法进行提取，蝉花中角鲨烯质量百分含量相当，索氏提取法较繁琐、加热回流时间较长，因此选择超声提取。
参照 GB/T 22110—2008，采用正己烷作为提取溶剂，对蝉花(1 g)提取油进行甲酯化条件的选优，结果表明，皂化温度40 ℃，皂化时间5 min，氢氧化钠-甲醇浓度0.5 mol/L，加入量1.0 mL为最佳皂化反应条件。
2.2 色谱条件的选择由于角鲨烯易溶于非极性溶剂，一般采用非极性色谱柱用于角鲨烯的分离和测定，因此该试验采用非极性色谱柱 HP-5耐高温低流失毛细管柱。
角鲨烯沸点高、难挥发，出峰时间较晚，因此采用180 ℃柱温作为初始温度，并在较文献[9]低的温度250 ℃下保持10 min，结果减少了角鲨烯检测时间，色谱峰的分离效果好且基线较平稳。
在此色谱条件下，角鲨烯标准品与样品的色谱图见图1。
2.3 方法学评价2.3.1 线性关系考察。
分别精密移取0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL对照储备液，用正己烷定容于2 mL容量瓶中，摇匀，得各浓度对照品溶液，按“2.2”色谱条件测定。
以角鲨烯质量浓度(μg/mL)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算得到回归方程Y=2.038 9X+4.123 2 (r=0.999 2，n=6)，结果表明角鲨烯质量浓度在21.43～214.30 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。
2.3.2 精密度试验。
取同一对照品溶液按“1.2.3”色谱条件测定，连续进样 6 次，计算峰面积相对标准偏差，RSD为1.15% (n=6)，表明仪器精密度良好。
2.3.3 重复性试验。
取蝉花粉6份，按“1.2.2”方法制备供试溶液，按“1.2.3”色谱条件测定，根据标准曲线计算角鲨烯的含量，得角鲨烯的平均质量分数为28.00 μg/g，RSD为3.71% (n =6)，结果表明制备方法重复性良好。
2.3.4 稳定性试验。
取同一供试溶液按“1.2.3”色谱条件测定，每隔2 h进样1次，共进样7次，计算峰面积相对标准偏差，RSD为3.23%(n=7)，表明供试品溶液在12 h内稳定。
2.3.5 回收率试验。
精密称取同一批蝉花粉样品约1 g，共9 份，分别精确加入42.86 μg/mL角鲨烯对照品溶液1.00、1.50、2.00 mL 各 3 份，按“1.2.2”方法制备供试溶液，得出角鲨烯的平均回收率为88.10%(n=9)，结果见表 1。
2.4 样品中角鲨烯含量测定采用“1.2.2”方法制备供试溶液，按“1.2.3”色谱条件测定，根据标准曲线计算角鲨烯的含量，测定结果得出，天然蝉花和蝉花虫体中角鲨烯含量分别为(26.67±0.57)、(49.61±0.38)μg/g,蝉花子座中未检出角鲨烯。
由此可以看出，蝉花子座中角鲨烯含量极其微少或不存在。
天然蝉花复合体由子座和虫体2部分构成，蝉花虫体中的角鲨烯含量大于子座，说明角鲨烯在天然蝉花中分布是不均匀的。
该试验采用的方法测定天然蝉花中角鲨烯含量为(27.76±0.57) μg/g，与卫亚丽等[5]测定结果(74.36±0.24)μg/g的差异较大。
蝉花角鲨烯含量差异的原因，可能一方面与蝉花的产地有关，另一方面与角鲨烯的提取方法有关。
具体的提取方法还有待进一步研究。
该研究建立了毛细管气相色谱测定蝉花的角鲨烯含量的方法，升温程序简单，样品分析时间短，重复性好，灵敏度高，角鲨烯色谱峰分离效果好，经过不同样品测定，定量准确，故此方法可以用于蝉花中角鲨烯含量的测定。
