蒺藜化学成分及生物活性研究

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蒺藜化学成分及生物活性研究

中药材蒺藜为蒺藜科蒺藜属植物蒺藜(Tribulus terrestris L.)的干燥成熟果实,具有抗衰老、抗菌、镇痛、调节血脂、降血糖、抑癌、利尿、性强壮、抑制酪氨酸酶等药理作用,常用于治疗冠心病、心绞痛、脑血栓、糖尿病、高血脂等疾病。本文从蒺藜的水提物中分离得到21个单体化合物(JL-1JL-21),利用1D-NMR、2D-NMR、MS、IR等波谱学手段,结合其理化性质,鉴定出其中19个化合物的化学结构,其中3个为新化合物,3个为首次从蒺藜中分得的化合物。

新化合物分别为26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25R)-5α-呋甾-2α,3β,22α,26-四醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-18)、26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25S)-5α-呋甾-2α,3β,22α,26-四醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-19)、26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(25S)-5α-呋甾-3β,22α,26-三醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)]-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-21)。首次分得的化合物分别为吉托皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-6)、曼诺皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-1)、新海柯皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)]-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-9)。

在研究化学成分的基础上,本文建立了蒺藜中8种螺甾型皂苷的SPE-HPLC-ELSD含量测定方法。这8种螺甾型皂苷分别为曼诺皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-1)、海柯皂苷元-3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-[β-D-吡喃木糖-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-2)、(25R,S)-海柯皂苷元-3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-3)、海柯皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-4)、(25R,S)吉托皂苷元-3-O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-5)、吉托皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-6)、替告皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[α-L吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃半乳糖苷(JL-7)和海柯皂苷元(JL-8)。

首先,通过对提取溶剂种类、提取方法、提取溶剂用量、提取次数以及SPE种类及洗脱条件等因素的考察,确立了最佳提取与富集方法。其次,进行了方法学考察。

实验结果表明,化合物JL-1、JL-2、JL-3、JL-4和JL-7在0.4020.00μg范围内峰面积y(lgS)和进样浓度x(lgm)具有良好的线性关系,化合物JL-5、JL-6、JL-8在0.2010.00μg范围内峰面积y(lgS)和进样浓度x(lgm)具有良好的线性关系。化合物JL-1JL-8的精密度、重复性、稳定性以及加样回收率的RSD值均小于2.0%,说明本实验所建立的含量测定方法具有精密度好、准确度高等优点。

含量测定结果表明,不同产地蒺藜药材中化合物JL-1JL-8的含量差别不是很明显,8种螺甾型皂苷的平均含量分别为0.049 mg·g-1(JL-1),0.105 mg·g-1(JL-2),0.125 mg·g-1(JL-3),0.063 mg·g-1(JL-4),0.050 mg·g-1(JL-5),0.039 mg·g-1(JL-6),0.081 mg·g-1(JL-7),0.013 mg·g-1(JL-8)。本文还利用大孔吸附树脂分离方法制备了蒺藜总呋甾皂苷和蒺藜总螺甾皂苷,并对二者的清除羟基自由基活性、抑制酪氨酸酶活性以及抑制肺癌A549细胞的增殖活性进行了对比研究。

实验结果表明,蒺藜总螺甾皂苷和总呋甾皂苷均具有清除羟基自由基、抑制酪氨酸酶及抑制肺癌A549细胞增殖的活性,其中蒺藜总螺甾皂苷的活性优于蒺藜总呋甾皂苷。综上所述,本论文从蒺藜的水提物中分离出21个单体化合物,鉴定了19个单体化合物,其中3个为新化合物,3个为首次从蒺藜中分得的化合物;建立了蒺藜中8种螺甾型皂苷的SPE-HPLC-ELSD含量测定方法;研究了蒺藜总螺甾皂苷和蒺藜总呋甾皂苷的3种生物活性。

本论文的研究结果为蒺藜药效物质的深入研究,蒺藜质量标准的完善以及蒺藜中甾体皂苷类化合物的应用研究提供了新的科学依据。