色谱图出图要求

液相色谱的结构原理和基本知识液相色谱操作规程液相色谱(HPLC)法是以高压下的液体为流动相，并采用颗粒极细的固定相的柱色谱分离技术。

液相色谱对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，因而弥补了气相色谱法的不足。

在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20%，而80%则需用液相色谱来分析。

液相色谱和气相色谱在基本理论方面没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别。

液相色谱分析原理(1)、液相色谱分析的流程：由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。

被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。

废液流入废液瓶。

遇到复杂的混合物分离(极性范围比较宽)还可用梯度控制器作梯度洗脱。

这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在佳条件下得以分离。

(2)、液相色谱的分离过程：同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。

它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。

分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。

分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。

组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。

若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。

不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。

其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。

高效液相色谱的术语
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）中，有一些常用的术语和概念：
1. 色谱图（Chromatogram）：色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为时间。

2. 色谱峰（Peak）：色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号。

3. 峰底（Peak Base）：峰的起点与终点之间连接的直线。

4. 峰高（Peak Height）：峰最大值到峰底的距离。

5. 峰面积（Peak Area）：峰与峰底之间的面积，又称响应值。

6. 基线（Baseline）：在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号。

7. 基线飘移（Baseline Drift）：基线随时间定向的缓慢变化。

8. 基线噪声（Baseline Nois e）：由各种因素所引起的基线波动。

以上信息仅供参考，如有需要，建议查阅高效液相色谱相关文献或咨询专业人士。

色谱图和峰参数色谱图和峰参数Ø色谱图(chromatogram)——样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elution profile)。

Ø基线(base line)——经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。

一般应平行于时间轴。

Ø噪音(noise)——基线信号的波动。

通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。

Ø漂移(drift)——基线随时间的缓缓变化。

主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。

Ø色谱峰(peak)——组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。

流出曲线上的突起部分。

正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。

不对称色谱峰有两种：前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。

前者少见。

Ø拖尾因子(tailing factor，T)——T＝，用以衡量色谱峰的对称性。

也称为对称因子(symmetry factor)或不对称因子(asymmetry factor)。

《中国药典》规定T应为0.95~1.05。

T＜0.95为前延峰，T＞1.05为拖尾峰。

Ø峰底——基线上峰的起点至终点的距离。

Ø峰高(peak height，h)——峰的最高点至峰底的距离。

Ø峰宽(peak width，W)——峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。

W＝4σØ半峰宽(peak width at half-height，Wh/2)——峰高一半处的峰宽。

Wh/2＝2.355σØ标准偏差(standard deviation，σ)——正态分布曲线x＝±1时（拐点）的峰宽之半。

正常峰的拐点在峰高的0.607倍处。

第一章色谱图概述第一节色谱图的获得色谱法（!"#$%&’$(#&)"*）是一种目前使用最广泛的和有效的分离、分析方法。

色谱（!"#$%&’$(#&%）这一概念最早是由俄国植物学家+,-.’’提出，/012年他在一根细长的玻璃管中装入碳酸钙粉末，然后把植物绿叶的石油醚的萃取液倒入管中的碳酸钙上，萃取液的色素就被吸附在管上部的碳酸钙上，再用纯净的石油醚洗脱这些被吸附的色素，于是在碳酸钙上形成了一圈一圈的色带（图34/4/），这些色带被称为色谱，这就是世界上得到的最早的色谱图。

柱中的碳酸钙被称为固定相（,’&’5$6&#*)"&,.），而用作洗脱液的石油醚则被称为流动相（%$758.)"&,.），流动相可以是气体、液体和超临界流体。

将欲被分离的混合物放在固定相上，然后用流动相去洗脱放在固定相上的混合物，这一过程称为洗脱（.89’5$6）。

在洗脱过程中混合物中的不同组分得到分离，陆续从固定相中洗脱下来。

记录这一分离和洗脱过程的图谱就是色谱图34/4/+,-.’’色谱分离示意图（&）刚刚加入萃取液；（7）已加入部分溶剂淋洗图（!"#$%&’$(#&%）。

色谱方法种类很多，分类的方法也很多。

根据流动相是气体还是液体，色谱可分为气相色谱（(&,!"#$%&’$(#&)"*）和液相色谱（85:95;!"#$%&’$(#&)"*）。

当流动相是在接近它的临界温度和压力下工作的液体，而这种液体在常温和常压下是气体时，这种流动相就不能简单地说是气体或液体了，这种色谱就称为超临界流体色谱（,9).#!#5’5!&8<895;!"#$%&’$(#&)"*）。

色谱简单流程方框图：1．.典型流程中的各部件2．色谱柱分离原理：利用不同组分在两相间具有不同的分配系数（或吸附平衡常数），当两相作相对运动时，试样中各组分就在两相间反复多次的溶解—解析（或吸附—脱附），使得原来分配系统（或吸附平衡常数）只有微小差别的各组分，产生很大的分离效果，从而将各组分分离开来。

3．色谱操作条件选择最佳流速的选择：从速率理论方程式知道，载气流速对柱效有明显的影响。

如果从小到大改变载气线速，那么它和理论板高H的关系如图（1）所示：μμ图（1）板高H与载气线速μ关系图曲线的最低点，即H最小则柱效最高，此点对应的流速即是最佳线速度。

对N2来说，最佳线速为420~600cm/min；而H2则为600~720cm/min。

在实际工作中，往往采用稍高于最佳线速的流速，以缩短分析时间。

对于一个内径为4mm 的填充柱，载气流速多选用50~80ml/min。

4．固定相的使用温度X围任何一种固定相，都有其使用温度X围。

如柱温超过其上限，则固定相会流失或分解，使柱寿命缩短甚至失效，而且污染检测器；如果低于其下限，则固定液粘度变大，使组分在液相中的扩散系数D L加大，而使传质阻力增高，柱效降低。

往往还会出现异常现象，表现为峰形不正常。

如果低于固定液的凝固点时，则其已不是液相了，失去了分配能力。

一般说来，提高柱温，各组分的挥发度都增加，分配系统变小而组分靠拢，溶剂效率降低，不利于分开。

但操作速度快，分析周期短；降低柱温，有利于分离。

但柱温太低，组分蒸气在两相中的扩散传质速率大为减小，分配不能迅速达到平衡，致使峰形变宽、柱效下降，并延长分析时间。

甚至组分蒸气会冷凝下来，使分析不能正常进行。

5．汽化温度对气化温度的要求：应有足够的温度和热容量使被测试样瞬时汽化。

一般高于柱温50℃以上，或比样品中组分的最高沸点高出20~40℃；试样在该温度下，不被分解。

汽化温度不足的危害：峰形变宽、峰不对称，降低柱效及分离度；峰形异常，不能重复。