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显微鉴别步骤
显微鉴别是一种常用的实验技术，用于鉴定物质的组成和性质。
下面是显微鉴别的一般步骤：
1. 准备样品：选择需要鉴定的样品，并制备适当的样品制片。
可以使用切片技术，如切薄片、涂片或压片等方法来准备样品。
2. 选择合适的显微镜：根据需要选择合适的显微镜，例如光学显微镜或电子显微镜。
3. 调节显微镜参数：根据需要调节显微镜的参数，包括放大倍数、对焦、亮度和对比度等。
4. 观察样品：将样品放在显微镜台上，通过目镜或相机观察样品。
可以使用不同的增强技术，如偏光、荧光或共聚焦等技术来获取更多信息。
5. 记录观察结果：记录观察到的特征，如颜色、形状、纹理、晶体结构等。
6. 比较与参考资料：将观察结果与已知的参考资料进行
比较，例如显微镜图谱、文献或数据库中的数据。
7. 进一步鉴定：根据观察结果和比较结果，进行进一步的鉴定。
可能需要采用化学试剂、特殊显微镜镜头或其他分析技术来确定物质的组成和性质。
8. 结论和报告：根据鉴定结果得出结论，并将鉴定结果记录在报告中。
报告中应包括所使用的方法、观察结果、比较资料以及最终的鉴定结论。
这些步骤提供了一个基本的框架，但实际的显微鉴别过程可能因样品类型、鉴定目的和设备的差异而有所不同。
具体的显微鉴别步骤应根据实际情况灵活调整。
显微鉴别法标准操作规程1. 目的建立显微鉴别法标准操作规程，规范显微鉴别法检验操作，保证检验操作规范化。
2. 范围适用于显微鉴别法的检验操作。
3. 术语或定义N/A4. 职责质量控制部对本规程的实施负责。
5. 程序5.1依据《中国药典》2020年四部及2019年版《中国药品检验标准操作规范》。
5.2 简述显微鉴别法系指用显微镜对药材或饮片的切片、粉末、解离组织或表面制片及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。
此法适用于：(1)药材或饮片性状鉴别特征不明显或外形相似而组织构造不同；(2)药材或饮片呈粉末状或巳破碎，不易辨认或区分；(3)凡含饮片粉末的制剂；(4)用显微化学方法确定药材或饮片中有效成分在组织中的分布状况及其特征。
在进行显微鉴别时，首先要将样品制成适于镜检的标本。
对于完整的药材或饮片可制成各种切面的切片；对于粉末药材或饮片（包括丸、散等成方制剂）可直接装片或作适当处理后制片。
药材或饮片切片标本的制作方法较多。
在药材或饮片鉴定的研究工作中往往将其制成石蜡切片(永久切片），因制成的石蜡切片外形较完整，厚薄均勻，且可制得连续切片，既便于观察，又能长期保存。
但由于制片技术较复杂，费时太多，不适用于日常检验。
所以在中药鉴定工作中通常采用徒手切片或滑走切片法制片；为观察叶类、花类及全草类药材或饮片的叶片、花冠、萼片、苞片等的表皮组织及其附属物的特征，还需要将其制成表面装片；为清楚地观察比较坚硬的细胞组织，如导管、纤维、石细胞等的形态，往往还要进行“组织解离”后装片，观察花粉粒、孢子等的形态特征或构造，需用花粉粒与孢子制片法制片；观察矿物药或较坚硬的动物类药材或饮片如珍珠、石决明及动物骨骼，可采用磨片法制片。
这些镜检标本片一般都是在观察前临时制备，故统称为“临时制片技术”。
5.3 仪器与用具5.3.1 仪器生物光学显微镜(应配有目镜测微尺和载物台测微尺，最好具2.5X或4X物镜头和偏光装置、显微摄影装置或显微描绘器、电脑联机装置及其图像处理软件、滑走切片机、小型粉碎机、台式离心机、医用超声仪等。
显微鉴别标准操作规程中药材、中药成品1 检验依据：《中华人民共和国药典》2010年版（一部）2 定义：通常是借助显微镜，应用植物细胞、组织学和矿物晶体光学等知识鉴别中药材或中成药的一种方法，3 检验操作方法(临时制片法)3.1 仪器和用具3.1.1 仪器生物光学显微镜、显微描绘器、滑走切片机或徒手圆筒生物切片器、镜台测微尺、离心机。
3.1.2 用具放大镜、刀片、解剖刀、镊子（包括粗镊及眼科弯镊与直镊）、剪（眼科剪与手术剪）、解剖针。
载玻片、盖玻片吸湿器（即玻璃干燥器改装蒸馏水加微量苯酚，潮气润湿药材样品用）培养皿或小烧杯（放切片用，切片后的处理均可在其中进行）、酒精灯、铁三角架、石棉网、滴瓶、试管、试管架、滴管、玻璃棒（粗与细）、乳钵、量筒毛笔（从刀上刷取切片用）铅笔（HB、4H、6H绘图用）带盖搪瓷盘（装切片标本用）纱布、吸水纸（滤纸）、火柴等。
3.2 试液3.2.1 水合氯醛试液：取水合氯醛50g，加水15ml与甘油10ml使溶解，即得。
此液为透化剂，可使干缩的细胞壁膨胀而透明，并能溶解淀粉粒、树脂、蛋白质及挥发油等。
3.2.2 甘油醋酸试液（斯氏液）：取甘油、冰醋酸与水各等份，混合即得。
此液专用于观察淀粉形态，可使淀粉不膨胀变形，便于测量其大小。
3.2.3 甘油-乙醇溶液：取甘油1份，50%乙醇1份，混合即得。
此液为封藏液，用于保存植物材料及临时切片，有软化组织的作用。
3.2.4 苏丹Ⅲ试液取苏丹Ⅲ0.01g，加90%乙醇5ml溶解后，加甘油5ml，摇匀即得。
本液应置棕色玻璃瓶内保存，在2个月内应用。
此液可使木栓化、角质化细胞壁及脂肪油、挥发油、树脂等染成红色或淡红色。
3.2.5 钌红试液：取10%醋酸钠溶液1～2ml，加钌红适量使呈酒红色即得。
本液应临用新制。
此液可使粘液染成红色。
3.2.6 间苯三酚试液：取间苯三酚1g，加90%乙醇100ml使溶解，滤过即得。
应置棕色玻璃瓶内，在暗处保存。
显微鉴定的操作方法包括显微鉴定是一种用显微镜观察和分析样品的方法，广泛应用于科研、专业实验室和法医学等领域。
下面将详细介绍显微鉴定的操作方法。
1. 准备工作在进行显微鉴定之前，需要做好以下准备工作：a. 清洁显微镜与配件：用清洁的无纺布或滤纸轻轻擦拭显微镜的各个零件，确保镜头与目镜清晰。
b. 样品准备：根据需要进行样品的处理和制备，如切片、染色等。
确保样品具有足够的细节和清晰度。
2. 调焦a. 将显微镜放在平稳的台面上，打开显微镜电源，调整照明灯的亮度，使其能够提供足够的光线。
b. 将目镜调整到最佳视角，使用调节轮使物镜与样品之间的距离最接近估计最优距离。
c. 通过转动调节轮，使样品聚焦在眼睛的焦点上。
此时可使用低倍物镜（通常为4倍或10倍）进行初步观察和调焦。
3. 焦距调整a. 在低倍物镜下调焦完成后，使用高倍物镜（如40倍或100倍）进一步调焦。
b. 将物镜转至最佳视野，使用调节轮细调焦距，使样品清晰度达到最佳状态。
c. 注意避免物镜和样品之间碰撞，以免损坏设备和样品。
4. 显微观察a. 将已调焦的显微镜放在一个适当的位置，使其稳定不动。
b. 将待观察的样品放在显微镜台上，将之与物镜对齐。
c. 通过调节台的移动装置，将样品移至物镜下方，然后逐渐移动至视野中央。
同时使用调焦和焦距调整使样品清晰可见。
d. 在观察过程中，可以旋转物镜头使得样品在不同方位显示。
若样品比较厚，可以使用调节轮改变物镜与样品距离，以观察不同深度的细胞结构。
5. 记录和分析a. 使用配备标尺的目镜深度计测量观察到的结构尺寸。
b. 观察到的细胞结构、微生物、矿物等特征可通过手绘或数码相机进行记录和保存。
c. 对观察到的样品特征进行分析和鉴定，比对参考资料，确定其可能的分类、性质或疾病。
显微鉴定是一项需要严密操作和仔细观察的技术，操作者需要具备良好的观察力和耐心。
同时，也需要对待样品具有一定的专业知识和实践经验。
在进行显微鉴定的过程中，务必保持设备和样品的清洁，以及注意显微镜和样品的安全操作。
显微鉴别操作方法（2015版中国药典）显微鉴别法系指用显微镜对中药药材（饮片）切片、粉末、解离组织或表面制片及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。
鉴别时选择具有代表性的供试品，根据各品种鉴别项的规定制片。
制剂根据不同剂型适当处理后制片。
一、药材（饮片）显微制片1.横切片或纵切片制片取供试品欲观察部位，经软化处理后，用徒手或滑走切片法，切成10～20μm的薄片，必要时可包埋后切片。
选取平整的薄片置载玻片上，根据观察对象不同，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他试液1～2滴，盖上盖玻片。
必要时滴加水合氯醛试液后，在酒精灯上加热透化，并滴加甘油乙醇试液或稀甘油，盖上盖玻片。
2.粉末制片供试品粉末过四或五号筛，挑取少许置载玻片上，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他适宜的试液，盖上盖玻片。
必要时，按上法加热透化。
3.表面制片将供试品湿润软化后，剪取欲观察部位约4mm2，—正一反置载玻片上，或撕取表皮，加适宜的试液或加热透化后，盖上盖玻片。
4.解离组织制片将供试品切成长约5mm、直径约2mm的段或厚约1mm 的片，如供试品中薄壁组织占大部分，木化组织少或分散存在，采用氢氧化钾法，若供试品质地坚硬，木化组织较多或集成较大群束，采用硝铬酸法或氯酸钾法。
（1）氢氧化钾法将供试品置试管中，加5%氢氧化钾溶液适量，加热至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去碱液，加水洗涤后，取少量置载玻片上，用解剖针撕开，滴加稀甘油，盖上盖玻片。
（2）硝铬酸法将供试品置试管中，加硝铬酸试液适量，放置至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照上法装片。
（3）氯酸钾法将供试品置试管中，加硝酸溶液（1→2）及氯酸钾少量，缓缓加热，待产生的气泡渐少时，再及时加入氯酸钾少量，以维持气泡稳定地发生，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照上法装片。
5.花粉粒与孢子制片取花粉、花药（或小的花）、孢子或孢子囊群（干燥的供试品浸于冰醋酸中软化），用玻璃棒研碎，经纱布过滤至离心管中，离心，取沉淀加新配制的醋酐与硫酸（9:1）的混合液1～3ml，置水浴上加热2～3分钟，离心，取沉淀，用水洗涤2次，取沉淀少量置载玻片上，滴加水合氯醛试液，盖上盖玻片，或加50%甘油与1%苯酚各1～2滴，用品红甘油胶[取明胶1g，加水6ml，浸泡至溶化，再加甘油7ml，加热并轻轻搅拌至完全混匀，用纱布过滤至培养皿中，加碱性品红溶液（碱性品红0.1g，加无水乙醇600ml及樟油80ml，溶解）适量，混匀，凝固后即得]封藏。
显微鉴别操作方法（2015版中国药典）显微鉴别法系指用显微镜对中药药材（饮片）切片、粉末、解离组织或表面制片及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。
鉴别时选择具有代表性的供试品，根据各品种鉴别项的规定制片。
制剂根据不同剂型适当处理后制片。
一、药材（饮片）显微制片1.横切片或纵切片制片取供试品欲观察部位，经软化处理后，用徒手或滑走切片法，切成10～20μm的薄片，必要时可包埋后切片。
选取平整的薄片置载玻片上，根据观察对象不同，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他试液1～2滴，盖上盖玻片。
必要时滴加水合氯醛试液后，在酒精灯上加热透化，并滴加甘油乙醇试液或稀甘油，盖上盖玻片。
2.粉末制片供试品粉末过四或五号筛，挑取少许置载玻片上，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他适宜的试液，盖上盖玻片。
必要时，按上法加热透化。
3.表面制片将供试品湿润软化后，剪取欲观察部位约4mm2，—正一反置载玻片上，或撕取表皮，加适宜的试液或加热透化后，盖上盖玻片。
4.解离组织制片将供试品切成长约5mm、直径约2mm的段或厚约1mm 的片，如供试品中薄壁组织占大部分，木化组织少或分散存在，采用氢氧化钾法，若供试品质地坚硬，木化组织较多或集成较大群束，采用硝铬酸法或氯酸钾法。
（1）氢氧化钾法将供试品置试管中，加5%氢氧化钾溶液适量，加热至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去碱液，加水洗涤后，取少量置载玻片上，用解剖针撕开，滴加稀甘油，盖上盖玻片。
（2）硝铬酸法将供试品置试管中，加硝铬酸试液适量，放置至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照上法装片。
（3）氯酸钾法将供试品置试管中，加硝酸溶液（1→2）及氯酸钾少量，缓缓加热，待产生的气泡渐少时，再及时加入氯酸钾少量，以维持气泡稳定地发生，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照上法装片。
5.花粉粒与孢子制片取花粉、花药（或小的花）、孢子或孢子囊群（干燥的供试品浸于冰醋酸中软化），用玻璃棒研碎，经纱布过滤至离心管中，离心，取沉淀加新配制的醋酐与硫酸（9:1）的混合液1～3ml，置水浴上加热2～3分钟，离心，取沉淀，用水洗涤2次，取沉淀少量置载玻片上，滴加水合氯醛试液，盖上盖玻片，或加50%甘油与1%苯酚各1～2滴，用品红甘油胶[取明胶1g，加水6ml，浸泡至溶化，再加甘油7ml，加热并轻轻搅拌至完全混匀，用纱布过滤至培养皿中，加碱性品红溶液（碱性品红0.1g，加无水乙醇600ml及樟油80ml，溶解）适量，混匀，凝固后即得]封藏。
显微鉴别操作方法（2015版中国药典）显微鉴别法系指用显微镜对中药药材（饮片）切片、粉末、解离组织或表面制片及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。
鉴别时选择具有代表性的供试品，根据各品种鉴别项的规定制片。
制剂根据不同剂型适当处理后制片。
一、药材（饮片）显微制片1.横切片或纵切片制片取供试品欲观察部位，经软化处理后，用徒手或滑走切片法，切成10～20μm的薄片，必要时可包埋后切片。
选取平整的薄片置载玻片上，根据观察对象不同，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他试液1～2滴，盖上盖玻片。
必要时滴加水合氯醛试液后，在酒精灯上加热透化，并滴加甘油乙醇试液或稀甘油，盖上盖玻片。
2.粉末制片供试品粉末过四或五号筛，挑取少许置载玻片上，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他适宜的试液，盖上盖玻片。
必要时，按上法加热透化。
3.表面制片将供试品湿润软化后，剪取欲观察部位约4mm2，—正一反置载玻片上，或撕取表皮，加适宜的试液或加热透化后，盖上盖玻片。
4.解离组织制片将供试品切成长约5mm、直径约2mm的段或厚约1mm 的片，如供试品中薄壁组织占大部分，木化组织少或分散存在，采用氢氧化钾法，若供试品质地坚硬，木化组织较多或集成较大群束，采用硝铬酸法或氯酸钾法。
（1）氢氧化钾法将供试品置试管中，加5%氢氧化钾溶液适量，加热至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去碱液，加水洗涤后，取少量置载玻片上，用解剖针撕开，滴加稀甘油，盖上盖玻片。
（2）硝铬酸法将供试品置试管中，加硝铬酸试液适量，放置至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照上法装片。
（3）氯酸钾法将供试品置试管中，加硝酸溶液（1→2）及氯酸钾少量，缓缓加热，待产生的气泡渐少时，再及时加入氯酸钾少量，以维持气泡稳定地发生，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照上法装片。
5.花粉粒与孢子制片取花粉、花药（或小的花）、孢子或孢子囊群（干燥的供试品浸于冰醋酸中软化），用玻璃棒研碎，经纱布过滤至离心管中，离心，取沉淀加新配制的醋酐与硫酸（9:1）的混合液1～3ml，置水浴上加热2～3分钟，离心，取沉淀，用水洗涤2次，取沉淀少量置载玻片上，滴加水合氯醛试液，盖上盖玻片，或加50%甘油与1%苯酚各1～2滴，用品红甘油胶[取明胶1g，加水6ml，浸泡至溶化，再加甘油7ml，加热并轻轻搅拌至完全混匀，用纱布过滤至培养皿中，加碱性品红溶液（碱性品红0.1g，加无水乙醇600ml及樟油80ml，溶解）适量，混匀，凝固后即得]封藏。
显微鉴别操作方法（2015版中国药典）显微鉴别法系指用显微镜对中药药材（饮片）切片、粉末、解离组织或表面制片及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。
鉴别时选择具有代表性的供试品，根据各品种鉴别项的规定制片。
制剂根据不同剂型适当处理后制片。
一、药材（饮片）显微制片1.横切片或纵切片制片取供试品欲观察部位，经软化处理后，用徒手或滑走切片法，切成10～20μm的薄片，必要时可包埋后切片。
选取平整的薄片置载玻片上，根据观察对象不同，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他试液1～2滴，盖上盖玻片。
必要时滴加水合氯醛试液后，在酒精灯上加热透化，并滴加甘油乙醇试液或稀甘油，盖上盖玻片。
2.粉末制片供试品粉末过四或五号筛，挑取少许置载玻片上，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他适宜的试液，盖上盖玻片。
必要时，按上法加热透化。
3.表面制片将供试品湿润软化后，剪取欲观察部位约4mm2，—正一反置载玻片上，或撕取表皮，加适宜的试液或加热透化后，盖上盖玻片。
4.解离组织制片将供试品切成长约5mm、直径约2mm的段或厚约1mm 的片，如供试品中薄壁组织占大部分，木化组织少或分散存在，采用氢氧化钾法，若供试品质地坚硬，木化组织较多或集成较大群束，采用硝铬酸法或氯酸钾法。
（1）氢氧化钾法将供试品置试管中，加5%氢氧化钾溶液适量，加热至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去碱液，加水洗涤后，取少量置载玻片上，用解剖针撕开，滴加稀甘油，盖上盖玻片。
（2）硝铬酸法将供试品置试管中，加硝铬酸试液适量，放置至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照上法装片。
（3）氯酸钾法将供试品置试管中，加硝酸溶液（1→2）及氯酸钾少量，缓缓加热，待产生的气泡渐少时，再及时加入氯酸钾少量，以维持气泡稳定地发生，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照上法装片。
5.花粉粒与孢子制片取花粉、花药（或小的花）、孢子或孢子囊群（干燥的供试品浸于冰醋酸中软化），用玻璃棒研碎，经纱布过滤至离心管中，离心，取沉淀加新配制的醋酐与硫酸（9:1）的混合液1～3ml，置水浴上加热2～3分钟，离心，取沉淀，用水洗涤2次，取沉淀少量置载玻片上，滴加水合氯醛试液，盖上盖玻片，或加50%甘油与1%苯酚各1～2滴，用品红甘油胶[取明胶1g，加水6ml，浸泡至溶化，再加甘油7ml，加热并轻轻搅拌至完全混匀，用纱布过滤至培养皿中，加碱性品红溶液（碱性品红0.1g，加无水乙醇600ml及樟油80ml，溶解）适量，混匀，凝固后即得]封藏。
内容：1 显微鉴别法：系指用显微镜对药材或饮片的切片、粉末、解离组织或表面制片及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。
2 仪器和用具2.1 仪器生物光学显微镜、显微描绘器、滑走切片机、小型粉碎机或徒手圆筒生物切片器、镜台测微尺、离心机。
2.2 用具2.2.1 放大镜、刀片、解剖刀、镊子（包括粗镊及眼科弯镊与直镊）、剪（眼科剪与手术剪）、解剖针。
2.2.2 载玻片、盖玻片2.2.3 吸湿器（即玻璃干燥器改装蒸馏水加微量苯酚，潮气润湿药材样品用）、培养皿或小烧杯（放切片用，切片后的处理均可在其中进行）、酒精灯、铁三角架、石棉网、滴瓶、试管、试管架、滴管、玻璃棒（粗与细）、乳钵、量筒等2.2.4毛笔（从刀上刷取切片用）、铅笔（HB、3H、6H绘图用）、带盖搪瓷盘（装切片标本用）、纱布、吸水纸（滤纸）、火柴等。
3 试药与试液3.1 水合氯醛试液取水合氯醛50g，加水15ml与甘油10ml使溶解，即得。
此液为透化剂，可使干缩的细胞壁膨胀而透明，并能溶解淀粉粒、树脂、蛋白质及挥发油等。
3.2 甘油醋酸试液（斯氏液）取甘油、冰醋酸与水各等份，混合即得。
此液专用于观察淀粉形态，可使淀粉不膨胀变形，便于测量其大小。
3.3 甘油-乙醇溶液取甘油1份，50%乙醇1份，混合即得。
此液为封藏液，用于保存植物材料及临时切片，有软化组织的作用。
3.4 苏丹Ⅲ试液取苏丹Ⅲ0.01g，加90%乙醇5ml溶解后，加甘油5ml，摇匀即得。
本液应置棕色玻璃瓶内保存，在2个月内应用。
此液可使木栓化、角质化细胞壁及脂肪油、挥发油、树脂等染成红色或淡红色。
3.5 钌红试液取10%醋酸钠溶液1～2ml，加钌红适量使呈酒红色即得。
本液应临用新制。
此液可使粘液染成红色。
3.6 间苯三酚试液取间苯三酚1g，加90%乙醇100ml使溶解，滤过即得。
应置棕色玻璃瓶内，在暗处保存。
此液与浓盐酸合用，可使木化细胞壁染成红色或紫红色。
