临床细菌培养鉴定流程及报告ppt课件

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常见临床标本的细菌学检验ppt课件

奥梅梁斯基法则：
100cm2 5’→10L A t → A·t *10L
100*50
N
50000N
XX个/M3= A·t
100*5
*1000= *10
→39.32N A·t （49.0；20’）
结果报告应注明 “普通琼脂平板培养”/“血琼
经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用
4 、如病人已实施治疗，应在酚红葡萄糖肉汤经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用中加入相应对抗剂。
磺胺类药物→对氨基苯甲酸5mg/100ml.
青霉素→2u青霉素酶/ml
其他抗生素→MgSO4 5mg/100ml
（五）痰： 1、先让病人用清水嗉口数次，
以除去口腔内大量杂菌。 2、取清晨第一口咳出的痰，
（晨痰） 3、作结核杆菌培养可收集24h
痰。（冰箱保存）
（六）胆汁：经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用
1、行十二指肠引流水收集“胆汁乙”1015ml。
革兰氏染色
球菌 G+杆菌:根据菌落特征,细菌染色性,形态排列选择恰当生化反应,免疫学反应及动物试验报告
G-杆菌
KIA
菌落描述:颜色,大小,溶血性,透明度,硬度,润湿度,表面光滑度,粘稠度,凸起度,边缘整齐度
经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用

临床标本的细菌学检验培训课件

• 3、封闭性脓肿要求先消毒局部皮肤或黏膜表面后，用注射器抽取，将脓液注入无菌试管内送检。疑为厌氧菌感染时，应作床边接种或置厌氧运送培养基内送检。
•临床标本的细菌 •19
谢谢
•临床标本的细菌 •20
Байду номын сангаас
• （二）标本采集 • １、采集时间一般以晨痰为好；支气管扩张症患者清晨
起床后进行体位引流，可采集大量痰标本。
• 2、标本采集方法 • （1）自然咳痰法在留取痰之前，用清水反复漱口，以减
少常居菌的污染，应从气管深部咳出痰，吐入无菌容器内。
• （2）气管镜下采集法：在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。
•临床标本的细菌学检验
第一节血液及骨髓标本一、血液标本（一）标本采集静脉采血，应严格消毒血培养瓶盖和皮肤，用无菌
采血装置采血，不换针头，直接将血液标本注入血培养瓶中，注入血液后应颠倒混匀以防凝固。采用真空采血装置可降低污染。
•临床标本的细菌 •2
• 2、采血部位以无菌操作在患者肘静脉采血。儿童和婴幼儿其采血的部位多为颈部和腹股沟，这两个部位皮肤皱褶多，易造成皮肤寄生菌污染，因此必须严格消毒。消毒过程同成人，但氯己定（洗必泰）不能用于2个月以下婴儿。成人不建议采集动脉血，不宜从静脉导管或静脉留置口取血，因其常伴有高污染率。如果必须从留置导管内采血，必须同时从外周静脉采集另外一个血培养标本，有助于对比和结果解释。静脉导管采血时，不要弃去初段血，不要用抗凝剂冲洗。
• （6）尿标本采集应及时送检，2h内进行接种，否则应置4~8℃冰箱保存，冷却保存标本时间不得超过8h。
•临床标本的细菌 •15
• 二、生殖道标本 • （一）标本采集 • 1、女性生殖道标本由妇产科医师用无菌棉拭采

[临床医学]细菌培养 PPT课件

3.1采样时间
选择消毒处理后4h内进行采样。 3.2采样面积被采表面＜100cm² ，取全部表面：被采表面≥100cm² ，取100cm² 3.3采样方法用5×5cm² 的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭纸1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭纸，连续采样1—4个规格板面积，用无菌剪剪去手接触部分，将棉拭纸放入装10ml采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭纸直接涂抹物体的方法采样。放入物品前后，瓶口必须按常规在酒精灯上烘烤，然后盖好盖塞送细菌培养。

医护人员手采样方法（试管法）

医务人员手采样目的：是为了检测医务人员的责任感，防止将带有细菌的手污染无菌伤口。 1、按无菌操作要求，进行手细菌采样。 2、选定抽查对象，（手术室参加手术者事先不能通知被抽查对象）。 4.1 采样时间在接触病人、从事医疗活动前进行采样。 4.2 采样面积及方法被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉拭纸一支在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面30cm² ）并随之转动采样棉拭纸，用无菌剪剪去手接触部位，将棉拭纸放入装有10ml采样液的试管内送检。采样面积按平方厘米计算。
医护人员手采样方法
(营养琼脂平板采样法）
进行手划痕采样
按常规洗手后，待消毒液稍干，即由其用食
指在培养基上划“十”字痕。操作完毕，即送细菌室培养。如有细菌生长，应告知被抽查者，并追踪污染源。

医疗用品采样方法
5.1采样时间在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。 5.2采样量及采样方法

创伤伤口、手术伤口分泌物细菌培养标本采样
1、同前采样及检查原则 2、标本采集：采取标本时，先用无菌生理盐水清洗病灶表面的污染杂菌，然后用无菌拭子提取病灶分泌物送检。 3、细菌培养及病原分离鉴定：标本无菌采集后立即送检，按实物采样方法采样。 4、标本处理完毕，送细菌室作细菌培养和鉴定。

细菌的培养及鉴定演示文稿

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第37页，共58页。
细菌的初步分类
• 细菌的分离与纯化：自血平板挑出待检菌株的
单菌落进行初步的鉴定。如果混有杂菌，应该重新转种分纯。
• 染色与镜检：首先通过革兰氏染色确定基本的分
类：（1）G+球菌（2）G-球菌（3）G-杆菌（4）G+ 杆菌。此外，如果镜下发现革兰氏染色阳性、椭圆形、有芽孢状的较大菌体，可能是真菌。
第8页，共58页。
分区划线法(3区)
第一区划线
灭菌接种环
第二区划线
灭菌接种环第三区划线灭菌接种环
第9页，共58页。
连续划线法
第10页，共58页。
细菌培养法
• 一般培养（需氧培养）： ★培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h • 二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱 • 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、
第33页，共58页。
抗酸染色注意事项
• 染色充分 • 脱色时间宁长勿短 • 在涂抹痰标本时严禁对载玻片进行加热
第34页，共58页。
临床标本培养基选择
• 生殖道标本根据临床医生所写的检验项目接种相应的平板及操作：
淋球菌培养接种淋球菌平板;念珠菌培养接种沙保罗培养基；支原体培养则按《支原体培养的操作规程》操作；作普通培养则接种血平板和巧克力平板
+
麦芽糖 --
脑膜炎奈瑟菌
淋病奈瑟菌
第51页，共58页。
细菌的鉴定与药敏
第52页，共58页。
卫生部重点监控的6种MDRO
MASA:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 —判断标准：对苯唑西林耐药或头孢西丁诱
导实验阳性
CRAB：耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌 —判断标准：对亚胺培南或美罗培南耐药

细菌的培养及鉴定 ppt课件

细菌的培养及鉴定
抗酸染色步骤
1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
细菌的培养及鉴定
抗酸染色步骤
2、染色包括初染、脱色、复染三步。
初染
脱色
复染
冲洗
冲洗
石炭酸复红维持 3-5’ 3%盐酸酒精30 ’’ ~1’
冲洗
干燥油镜观察
细菌的培养及鉴定
美蓝复染1 ’
抗酸染色结果
抗酸菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶呈分枝状生长。背景及非抗酸性细菌呈兰色。
细菌培养及鉴定
细菌的培养及鉴定
标本采集原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.标本容器须无菌，但不得有消毒剂 5.采样后立即送检 6.送检标本应注明细菌来的培源养及和鉴定检验目的
咳痰方法
病人先漱口，清洁口腔，去除表面的菌群病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液无痰可用3％～5％NaCl 5ml雾吸约5min导痰以清晨第二口痰为佳标本采集后放置时间不超过2小时
细菌的培养及鉴定
清洁中段尿液
尽量取早晨第一次尿液嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水女性病人 ➢收集标本前用肥皂水冲洗外阴，再以灭菌清水
冲洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿男性病人 ➢翻转包皮，清洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流,采集中段尿
采集标本后立即送检！
细菌的培养及鉴定
常用的培养基种类和用途
细菌的培养及鉴定
革兰染色步骤
涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
细菌的培养及鉴定
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘得更牢固；可改变菌体对染料的通透性；加热固定可杀死细菌，比较安全。

《细菌培养及检测》课件

结论
通过细菌培养及检测，我们可以得出细菌的生长特性和代谢情况，为研究细菌的功能和应用提供重要依据。未来的细菌检测技术发展趋势随着技术的发展，细菌检测将更加快速、准确和便捷，为医学、食品安全等领域提供更多应用。
参考文献
细菌学实验技术，张立仁等，201 6年
微生物学实验技术，张莹，201 7年
常见的细菌培养方法
固体培养基
通过稀释法、平板法和斜面法进行细菌的分离和培养。
液体培养基
用于大规模培养细菌，如发酵生产。
无菌技术
确保细菌培养过程没有外源性细菌的污染。
细菌检测方法
溶菌酶法
通过细菌细胞壁的降解来检测细菌的存在。
传统培养法
在特定培养条件下，观察细菌在培养基上的生长情况。
分子生物学方法
现代细菌学，刘乾祥，201 5年
《细菌培养及检测》PPT 课件
# 细菌培养及检测
细菌培养及检测是微生物学中非常重要的实验技术，本课件将详细介绍细菌培养的方法和检测的技术，以及实验操作中的注意事项。
什么是细菌培养
细菌培养是指将细菌分离并生长于培养基上，从而获得大量的细菌细胞的过程。细菌培养的作用和意义细菌培养的主要作用是研究和分析细菌的生长特性、生理代谢以及细菌在特定环境中的适应能力。检测细菌的方法细菌的检测方法包括传统培养法、分子生物学方法和快速检测方法等。
利用PCR、DNA测序等技术检测细菌的DNA。
快速检测方法
利用生化反应、免疫学等技术快速检测细菌。
实验操作及注ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ事项
1
实验前的准备工作
准备培养基、试剂和仪器设备，保持实验环境的无菌。
2
操作步骤
进行细菌的分离、培养和检测，注意操作的顺序和方法。

临床标本的细菌学检验.ppt

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• 结果报告
1. 阳性结果报告: (1) 初级报告 (2) 最终报告
2. 阴性结果报告：
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中枢神经系统感染的细菌学检查
• 脑脊液为一水样透明液体，存在于脑室和蛛网膜下腔内。在生理情况下，血液和脑脊液之间有血脑屏障，阻碍各种微生物通过血液进入中枢神经系统。正常人的脑脊液是绝对无菌的。在病理情况下，血脑屏障受到破坏，病原微生物及其产物进入脑脊液，引起中枢神经系统损害。此时在脑脊液中可培养检出病原微生物。
their toxins in tissues or in the blood. Systemic disease caused by the spread of the microorganisms via the circulating blood is commonly called SEPTICEMIA. 一过性、间歇性、持续性
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脑膜炎类型
观察物
细菌性的结核性的真菌性的病毒性的
优势白细胞类型
糖
分裂的多形核嗜中性粒细胞
单核细胞
很低
低
5-20mg/100ml 20-40mg/100ml
单核细胞
低 20-40mg/ml
蛋白
增高
增高
增高
涂片染色革兰染色
抗酸染色
印度墨汁
单核细胞
正常 65-70mg/ml
感染早期轻度增高
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•菌血症时血液中的细菌并不多，通常仅10～20 CFU/ml, 故采血量大阳性率高。 •采血培养应该尽量在使用抗菌药之前进行,在24 h 内采集2～3 次做血培养(一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单份血培养) 。 •对间歇性寒战或发热，应在寒战或体温高峰到来之前 0.51h采集血液，或于寒战或发烧后1h进行。 •标本运送: 采血后应该立即送检,如不能立即送检,需室温保存或置35 ℃～37 ℃孵箱中,切勿冷藏。

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2. 标本的采集与运送
⑴ 采血指征一般患者出现以下体症时可作为采血的重要指征：发热（≥38℃）或低温（≤36℃ ）、寒战、白细胞增多（计数＞ 10000×109/L），特别有“核左移”未成熟的或杆状核白细胞，皮肤黏膜出血，昏迷，多器官衰竭，血压降低，CRP升高及呼吸快，特殊患者（如血液病）出现粒细胞减少，（成熟的多形核细胞＜1000×109/L ）血小板减少等，或同时具备上述几种体征时而临床可疑菌血症应采集血培养。新生儿菌血症应该增加尿液和脑脊液培养。最好在感染患者未进行系统性抗菌药物治疗之前及时采集血培养。
下呼吸道感染者可有发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性，是下呼吸道感染细菌检查的主要标本。细菌学检验能明确感染病原，并提供有关抗菌药物对分离菌的抗菌活性，有助于疾病的治疗、流行病学调查研究和医院感染的监测。
临床细菌培养鉴定流程及报告
1.呼吸道标本(痰)中常见的分离细菌
革兰氏阳性菌
革兰氏阴性菌
临床细菌培养鉴定流程及报告
二、医学微生物学检验的基本技术
▪ 基本染色 ▪ 基本接种方法
临床细菌培养鉴定流程及报告
基本染色
主要用于形态学检查，因为形态学检查是鉴定细菌的重要手段，有助于细菌的初步鉴别，也是决定采用何种生化鉴定的重要提示。有时通过形态学检查可得到初步诊断，如痰中的抗酸杆菌和泌尿生殖器官分泌物中的淋病柰瑟菌等，染色方法主要有革兰氏染色法，抗酸染色法，鞭毛染色法，异染颗粒染色法，墨汁荚膜染色法等。
草绿色链球菌，肺炎链球菌，化脓性链球菌表皮葡萄球菌 ,金黄色葡萄球菌,其他葡萄球菌微球菌，消化链球菌，消化球菌肠球菌真杆菌，丙酸杆菌，乳酸杆菌
韦荣球菌脑菌膜炎奈瑟菌，其他奈瑟卡他莫拉菌肺炎克雷伯菌及其他克雷伯菌沙雷菌，变形杆菌大菌肠科埃细希菌氏菌及其他肠杆百日咳鲍特菌，不动杆菌
临床细菌培养鉴定流程及报告
4.结果报告 ⑴阳性结果报告初级报告：阳性血培养结果非常重要，应该立即口头报告给医生，包括革兰氏染色特性和形态，疑似何种菌等。同时记录报告日期、时间、内容以及接受报告人的姓名。中级报告：报告直接抗菌药物敏感试验结果和细菌种属的初步鉴定结果。最终报告：报告细菌种属名和标准抗菌药物敏感试验结果。 ⑵阴性结果报告普通血培养3天无菌生长可报告为“72小时培养未见细菌生长”但培养瓶要继续培养至7天，如果发现有菌生长，可发补充报告，某些特殊致病菌培养时间需延长。
临床细菌培养鉴定流程及报告
⑵采血时间及采血量采血培养应该尽量在使用抗菌药之前进行，在24小时内采集2～3份血培养（一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单份血培养）。对间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之前0.5～1小时，采集血液，或于寒战或发热后1小时进行。成人采血量8～ 10ml，儿童1～5ml。血液和肉汤之比1：5 ～ 1：10。
临床细菌培养鉴定常规报告流程
临床细菌培养鉴定流程及报告
思考题
• 1、血培养阳性结果如何分级报告？ • 2、如何根据尿液菌落计数分析尿培养结果是感染
还是污染？
临床细菌培养鉴定流程及报告
▪医学微生物实验室基本条件及设备 ▪医学微生物学检验的基本技术 ▪临床各种标本的采集、分离培养及报告方式 ▪临床常见细菌的分离鉴定
临床细菌培养鉴定流程及报告
⑶标本运送采血后应立即送检，如不能立即送检，需室温保存或置35～37℃孵箱中，切勿冷藏。自动化连续检测系统虽有允许延迟上机检测微生物生长的原理，还是应该尽量减少延迟上机时间。
临床细菌培养鉴定流程及报告
3.分离培养
⑴血培养操作过程中应注意生物安全防护。 ⑵血培养瓶处理传统手工法血培养每天至少检
查一次，注意微生物生长可视信号，应无菌抽取培养物，涂片革兰氏染色，选择合适的培养基转种，同时做药敏试验。 ⑶培养基的选择一般革兰氏阳性菌选血琼脂，革兰氏阴性球菌选血琼脂、巧克力琼脂，革兰氏阴性杆菌再加一个中国兰或麦康凯培养基，真菌需转种于真菌培养基。根据生长情况，挑取纯菌落进行进一步鉴定。
临床细菌培养鉴定流程及报告
一、医学微生物实验室基本条件及设备
▪细菌实验室 ▪无菌实验 ▪基本设备
临床细菌培养鉴定流程及报告
细菌实验室
细菌实验室是细菌检验的场所，在此完成标本接种、孵育、分离、细菌鉴定和药物敏感试验。所以细菌实验室必须具备空气及桌面消毒的条件，确保室内相对无菌。如：足够强度的紫外线灯管，耐酸碱的桌面等。
当微生物侵入血液迅速繁殖超出免疫系统清除这些微生物的能力时形成菌血症或真菌血症。 1.血培养中常见的分离菌
革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌凝固酶阴性葡萄球菌肺炎链球菌 A群B群链球菌肠球菌
革兰氏阴性菌
大肠杆菌肺炎克雷伯菌阴沟肠杆菌产气肠杆菌伤寒沙门菌绿脓杆菌鲍曼不动杆菌
临床细菌培养鉴定流程及报告
临床细菌培养鉴定流程及报告
基本接种方法
曲线划线法（又称连续划线法）、分区划线法、棋盘格划线法、倾注平板法、斜面接种法、穿刺培养法、液体培养基接种法等。
临床细菌培养鉴定流程及报告
三、临床各种标本的采集、分离培养及报告方式
▪ 血（适用胸腹水） ▪痰 ▪尿 ▪便 ▪脓
临床细菌培养鉴定流程及报告
（一）血
临床细菌培养鉴定流程及报告
（二）痰（即下呼吸道感染标本）临床通常将正常人喉以上部位称为上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌。下呼吸道感染包括急性气管～支气管炎、慢性支气管炎急性发作，支气管扩张继发感染及肺实质感染（肺炎、肺脓肿）等。病原体有细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次氏体和原虫等。
临床细菌培养鉴定流程及报告
无菌实验室
无菌实验室仅限于制备、分装无菌培养基的操作，不进行有菌标本的分离及其它操作。无菌室应达到绝对无菌的标准，使用的前后均应严格消毒灭菌（一般均为紫外线照射），仅限操作人员进入，操作时应严格关门。
临床细菌培养鉴定流程及报告
基本设备
▪ 生物安全柜 ▪ 孵育温箱（有条件的要有二氧化碳培养箱） ▪ 显微镜 ▪ 接种器具 ▪ 冰箱、冰柜 ▪ 高压灭菌设备 ▪ 火焰灯