微生物实验细菌培养接种 ppt课件
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微生物的培养(共34张PPT)
㈢.是否进行了及时细致的观察与记录
培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时 观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的 变化。
代谢类型
营养类型 能源 氢的供体 基本碳源
光能无机营养( 光能自养型)
光
无机物 二氧化碳
微生物举例
蓝细菌
绿色硫细菌
藻类
光能有机营养( 光
光能异养型)
几 种 菌 落 及 其 形 态
:由核酸和蛋白质构成。
病毒的结构
吸附
注入
合成
释放
组装
病毒的增殖一般可分五个阶段，即：
吸附→注入核酸→合成核酸和蛋白质→组装→释放
：寄生
㈡.微生物需要的营养物质及功能
微生物需要的五大类营养要素物质是：
⑴.概念 ：凡是能为微生物提供所需碳元素的 营养物质。
⑵.来源： ①无机碳源：CO2；NaHCO3等
平板划线法和稀释涂布平板法。 单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
，而空气中的其他微生物不能通过。 2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。
最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破
而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是 坏。
③高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min.
专为防止空气中微生物的污染而设计的。
二.实验操作(以培养大肠杆菌为例)
㈠.制备牛肉膏蛋白胨培养基
2.称量
4.灭菌:
将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为 100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。 5.倒平板:
培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时 观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的 变化。
代谢类型
营养类型 能源 氢的供体 基本碳源
光能无机营养( 光能自养型)
光
无机物 二氧化碳
微生物举例
蓝细菌
绿色硫细菌
藻类
光能有机营养( 光
光能异养型)
几 种 菌 落 及 其 形 态
:由核酸和蛋白质构成。
病毒的结构
吸附
注入
合成
释放
组装
病毒的增殖一般可分五个阶段，即：
吸附→注入核酸→合成核酸和蛋白质→组装→释放
：寄生
㈡.微生物需要的营养物质及功能
微生物需要的五大类营养要素物质是：
⑴.概念 ：凡是能为微生物提供所需碳元素的 营养物质。
⑵.来源： ①无机碳源：CO2；NaHCO3等
平板划线法和稀释涂布平板法。 单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
，而空气中的其他微生物不能通过。 2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。
最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破
而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是 坏。
③高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min.
专为防止空气中微生物的污染而设计的。
二.实验操作(以培养大肠杆菌为例)
㈠.制备牛肉膏蛋白胨培养基
2.称量
4.灭菌:
将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为 100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。 5.倒平板:
细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术ppt课件
20
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
18
实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
18
实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
细菌分离培养、接种技术及培养方法-精品医学课件
革兰染色法
Gram staining
临床微生物与免疫学检验教研室
一、实验目的
1.掌握细菌涂片制作方法； 2.掌握革兰染色法和细菌的基本形态； 3.了解革兰染色法的临床意义。
二、革兰染色原理
原理
细胞壁学说 等电点学说 化学学说
革兰阳性菌 细胞壁肽聚糖形成网状 结构，乙醇处理时，脱水 引起网状结构孔径变小， 通透性降低，结晶紫-碘 复合物不易脱去
实验步骤和方法
1)连续划线分离法：①将接种环火焰灭菌，待冷后取标 本少许；②左手持平板，五指固定平皿盖边缘，向外反 转手掌，装有培养基的平板于手掌内用拇指、小指和 无名指固定，并将平板边缘稍微提高呈现30～45度角， 置酒精灯前上方5～6cm；③右手持已取材的接种环， 先在平板一端涂布，然后快速大幅度左右来回以密而 不重的曲线形式作连续划线接种，使整个平板布满曲 线④划线完毕，将平板作好标记，置35℃孵育18-
革兰阴性菌
细胞壁肽聚糖含量低， 脂类物质含量高，乙醇处 理时，脂类物质溶解，细 胞壁的通透性增加，结晶 紫-碘复合物易脱去
三、实验器材和试剂
1.标本 ：金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的培养物。 2.试剂 ：革兰染液。 3.其他 ：载玻片、生理盐水、接种环、酒精灯、显微镜。
四、操作步骤
1. 细菌涂片制备 ⑴涂片：取洁净载玻片一张，按无菌的方法取1~2环生 理盐水于载玻片上，按无菌的方法各取葡萄球菌和大肠埃 菌 培养物少许，在生理盐水中均匀研磨，涂好的菌膜直径 1cm左右。 ⑵干燥：室温下自然干燥或于酒精火焰半尺高处烘干。 ⑶固定：火焰加热法。目的是杀死细菌，并使菌体与载 玻片粘附牢固，染色时不致于被染液和水冲掉。
培养方法
2 二氧化碳培养法 (1)二氧化碳孵箱：能自动调节二氧化碳的含量和温度， 使用较为方便。 (2)烛缸法：取有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，在盖及磨 口处涂以凡士林。将接种细菌的培养基放入缸中，点燃 缸内蜡烛，加盖密封。当蜡烛燃烧时会消耗缸内氧气并 产生CO2，随着缸内氧气的逐渐减少，蜡烛会自行熄 灭，此时缸内CO2浓度约为5％左右。 (3)化学法(重碳酸钠一盐酸法)：（自学）
微生物接种技术-PPT
9
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
10
（1）斜面接平板 a.划线法：见平板划线分离法。 b.点种法：一般用于观察霉菌和酵母细 胞，轻轻点在平板的表面即可。
（2）平板接斜面：一般是将经 平板分散培养得到的单菌落接 种到斜面，以便作鉴定或扩大 培养、保存之用。
11
（3）平板涂布法
14
4
1.斜面接种：
从已长好微生物移接到另一斜面管的 方法。此法用于好气性微生物的接种。
左手持菌种管和斜面管，使斜面向上， 并尽量放平。用右手先将塞拧转松动， 再拿接种环，用右手的小指、无名指和 手掌拨下塞并夹紧，同时将管口在火焰 上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管 内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部， 沿斜面划曲线或直线。
5
试管斜面接种
1.两支试管呈“V”字形 3.火焰上微烧一周 5.接种、划线
2.拔下试管塞 4.接种环灼烧、冷却 6.塞上塞子，灼烧接种环 6
2.液体接种：
将菌接种到液体培养基（试管、三角瓶等）中的 方法。
操作与上法基本一致，只是在将接种 环送入液体培养基中时使环在液体与 管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分 散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀， 即可培养。 如果菌种是培养在液体培 养基中时，一般用移液管或接种环接 种。
• 倒培养基，制成平板。 • 凝固后，另取一支吸管吸取相应的菌液0.2mL放
至平板上。 •用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂 抹均匀。倒置于37℃条件下培养1～2d， 观察菌落形态及计数菌落。
12
凝 固 后
37℃ 培养
涂布法流程图
13
思考题 （1）用接种环接种时有哪些注意事项 （2）涂布棒消毒方法有哪些？各应注意什 么？
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
10
（1）斜面接平板 a.划线法：见平板划线分离法。 b.点种法：一般用于观察霉菌和酵母细 胞，轻轻点在平板的表面即可。
（2）平板接斜面：一般是将经 平板分散培养得到的单菌落接 种到斜面，以便作鉴定或扩大 培养、保存之用。
11
（3）平板涂布法
14
4
1.斜面接种：
从已长好微生物移接到另一斜面管的 方法。此法用于好气性微生物的接种。
左手持菌种管和斜面管，使斜面向上， 并尽量放平。用右手先将塞拧转松动， 再拿接种环，用右手的小指、无名指和 手掌拨下塞并夹紧，同时将管口在火焰 上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管 内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部， 沿斜面划曲线或直线。
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试管斜面接种
1.两支试管呈“V”字形 3.火焰上微烧一周 5.接种、划线
2.拔下试管塞 4.接种环灼烧、冷却 6.塞上塞子，灼烧接种环 6
2.液体接种：
将菌接种到液体培养基（试管、三角瓶等）中的 方法。
操作与上法基本一致，只是在将接种 环送入液体培养基中时使环在液体与 管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分 散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀， 即可培养。 如果菌种是培养在液体培 养基中时，一般用移液管或接种环接 种。
• 倒培养基，制成平板。 • 凝固后，另取一支吸管吸取相应的菌液0.2mL放
至平板上。 •用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂 抹均匀。倒置于37℃条件下培养1～2d， 观察菌落形态及计数菌落。
12
凝 固 后
37℃ 培养
涂布法流程图
13
思考题 （1）用接种环接种时有哪些注意事项 （2）涂布棒消毒方法有哪些？各应注意什 么？
高中生物选修1微生物的实验室培养ppt(共54张PPT)
稀释涂布平板法
涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结 合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想， 第2步应如何进行无菌操作？
应从操作的各个细节保证“无菌”。例如， 酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触 任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。
微生物的恒温培养
微生物的恒温培养
微生物的恒温培养
3类。
（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后
分装前，要进行的是
。 调整pH
（6）右表中各成分重量确定的原则
是 依微生物的生长需要确定 。 （7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该
增加的成分
琼脂（或凝固。剂）
一、课题目标：
了解有关微生物及培养基的基础知识，进 行无菌技术的操作，进行微生物的培养。
二、课题重点和难点：
如图是酵母菌电子显微 镜下的形态结构
青霉
生殖 孢子生殖
直立菌丝 营养菌丝
腐生生活
（二）培养基
培养基（培养液）是由人工方法配制
而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养
液。
1.培养基的类型
（1）按物理状态分：固体培养基和液体培养基、
半固体培养基。 （2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。
（3）按成分分：天然培养基和合成培养基。
芽孢又小又轻，可以随风飘散。
平板划线的操作方法
C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；
且体内一般不含有叶绿素.
寄生菌 大部分病原菌
消毒与灭菌的概念及两者的区别
（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。
有的碳源同时是能源，如葡萄糖；
掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。
微生物标本接种[1](共81张PPT)
](https://img.taocdn.com/s1/m/9fc5c9a482d049649b6648d7c1c708a1284a0aa4.png)
大多数尿路病原菌能在血平皿上生长 麦康凯平皿有鉴别功能，为革兰阴性杆菌的选择性培养基
尿培养的划线方式
第一区 = 50,000 cfu/ml 第二区= 75,000 cfu/ml 第三区= 100,000 cfu/ml
沿中心线向下= 50,000 cfu/ml
长向边缘= 100,000 cfu/ml
➢管腔刷 ➢定量培养 (CVC & 外周血)
➢达到阳性的时间 (CVC & 外周血)
哪部分用于培养
Maki 滚动法
导管尖阳性培养结果
苛养菌
不要放置常规血培养>5天
•由如下微生物引起的可疑的败血症或心内膜炎:
霉菌(组织胞浆菌 , 镰刀菌, 等等
秕糠马拉癣菌
军团菌属 巴尔通体
3 分离管
新型隐球菌
血液培养
【特别提醒】 厌氧菌 从血液中培养出厌氧菌的比率相对比较少，不推荐每个
病人常规增加一个厌氧血培养，但如果必要，选用其配套的厌氧 培养基来培养厌氧菌。 营养苛刻的细菌（Fastidious Bacteria）
布鲁氏菌属可以在常规血液培养基中生长，并且尽管可以在 三天内分离到，但是推荐培养21天，且有必要进行末次接种。
尿培养的培养基
•5%血平皿（美国用羊血，欧洲用马血） •伊红美兰平皿（EMB）大肠埃希菌为金属绿
•麦康凯平皿 – LF vs NLF
•胱氨酸-乳糖-低电解质平皿（CLED） •显色平皿(BBL公司的CHROMagar ，Hardy BluEcoli Biplate)
• CUTI（Oxoid公司）; CPSID2（生物梅里埃公司）; UriSelect （Biorad公司）;
效。
血培养
常规血液培养基不能分离钩端螺旋体。 分枝杆菌（Mycobacteria） 使用常规血培养
尿培养的划线方式
第一区 = 50,000 cfu/ml 第二区= 75,000 cfu/ml 第三区= 100,000 cfu/ml
沿中心线向下= 50,000 cfu/ml
长向边缘= 100,000 cfu/ml
➢管腔刷 ➢定量培养 (CVC & 外周血)
➢达到阳性的时间 (CVC & 外周血)
哪部分用于培养
Maki 滚动法
导管尖阳性培养结果
苛养菌
不要放置常规血培养>5天
•由如下微生物引起的可疑的败血症或心内膜炎:
霉菌(组织胞浆菌 , 镰刀菌, 等等
秕糠马拉癣菌
军团菌属 巴尔通体
3 分离管
新型隐球菌
血液培养
【特别提醒】 厌氧菌 从血液中培养出厌氧菌的比率相对比较少，不推荐每个
病人常规增加一个厌氧血培养，但如果必要，选用其配套的厌氧 培养基来培养厌氧菌。 营养苛刻的细菌（Fastidious Bacteria）
布鲁氏菌属可以在常规血液培养基中生长，并且尽管可以在 三天内分离到，但是推荐培养21天，且有必要进行末次接种。
尿培养的培养基
•5%血平皿（美国用羊血，欧洲用马血） •伊红美兰平皿（EMB）大肠埃希菌为金属绿
•麦康凯平皿 – LF vs NLF
•胱氨酸-乳糖-低电解质平皿（CLED） •显色平皿(BBL公司的CHROMagar ，Hardy BluEcoli Biplate)
• CUTI（Oxoid公司）; CPSID2（生物梅里埃公司）; UriSelect （Biorad公司）;
效。
血培养
常规血液培养基不能分离钩端螺旋体。 分枝杆菌（Mycobacteria） 使用常规血培养
细菌的接种与培养—细菌的培养(微生物检验课件)
菌落
菌落与菌苔
菌落
菌落与菌苔
菌落(S型)
菌落(R型)
液体培养基生长现象
混浊生长 形成沉淀：多见于链状排列的细菌 形成菌膜：多见于厌氧菌
液体培养基生长现象
菌膜 沉淀
浑浊Βιβλιοθήκη 对照半固体培养基生长现象
有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生 长，穿刺线边缘模糊。
无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。
细菌培养技术
学会使用不同的方法培养细菌 知道接种细菌用具、接种细菌的环境要求 学会正确选择并使用接种细菌用具的方法 知道细菌在各种培养基上的生长现象
细菌培养方法
一般培养（需氧培养） ➢ 培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ➢ 培养时间：18～24h 二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等
恒温孵育箱
恒温孵育箱
恒温孵育箱
二氧化碳培养箱
厌氧罐
厌氧袋
厌氧手套箱
细菌在平板上的生长现象
菌落 ➢ 定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。 ➢ 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 ➢ 菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。
半固体培养基生长现象
斜面培养基生长现象
叙述细菌培养方法有哪些。 简述细菌在各种培养基中的生长现象。 从哪些方面描述菌落的性状？
微生物的无菌操作及接种技术(共39张PPT)
（二）接种的操作方法
2、常用的接种方法
斜面接种 划线接种 液体接种 穿刺接种
2、常用的接种方法
※ 斜面接种： • 从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面 培养基上的接种方法。 • 用于好气性微生物的接种。
※ 斜面接种
1) 标记：接种前在试管上注明菌名、接种日期、接种人姓名
2) 点燃酒精灯。 3) 接种：
(8) 将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。
斜面接种示意图
2、常用的接种方法
※ 液体接种
由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。
操作方法：
• 与斜面法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基时使环在液体与 管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上棉塞再轻轻摇匀。
• 如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种
如用果于菌 厌种气（是性培细6养菌）在培液养穿体、培检刺养查基细：中菌将时的，运接一动般能种用力移、针液保管藏自或菌滴种培管。接养种基中心平稳、快速垂直刺入培养基，至接近
用于好气性微生物的接种。
8、穿刺试接种管时能底否将部接种，针直然接穿后透培沿养接基？种线拔出
原理：超净工作台的洁净环境是在特定的空间内，洁净空气(进滤空气)按设定的方向流动而形成的。
（7）塞上棉塞 种子罐的接种口周围设有沟槽，接种时先在沟槽里注入少
（8）接种针灼烧灭菌
问题和讨论
1、什么是无菌技术？
2、如何做好无菌室的消毒和防污染工作？
3、如何做好超净台的使用与保养？ 4、无菌操作的目的是什么？
5、进入无菌室前要做好哪些准备工作？ 6、验操作过程的无菌操作要求包括哪些内容？ 7、 接种时，为何要尽量使试管平放？
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16
糖发酵试验
2020/11/29
不同细菌分解糖类的能力和代谢产物不同。
17
甲基红（methyl red）实验 2020/11/29
M - 甲基红（methyl red）实验 葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇 葡萄糖→丙酮酸
甲基红 甲基红 +
18
2020/11/29
吲哚（indol）试验
I-吲哚（indol）试验
I M Vi C试验
大肠埃希菌 + + - -
产气杆菌
- - ++
IMViC试验： 是吲哚、甲基红、V-P以及枸橼酸盐利用试验四者的合称。常用于肠道杆菌的鉴定。
23
实验小结
2020/11/29
1、三类培养基
➢液体培养基——用于增菌； 均匀混浊、沉淀、表面生长
➢ 半固体培养基——观察动力；保存菌种（6个 月）；穿刺线，扩散生长
斜面培养基
半固体培养基
结果观察——普通平板
11
2020/11/29
普通琼脂平板培养基上，大肠埃希菌形成菌苔和菌落生长现象。
注意：大小、颜色、透明度、凸起度、表面干燥或湿润、光滑或 粗糙、边缘是否整齐及血平板上的溶血情况。
12
2020/11/29
结果观察——液体培养基
13
2020/11/29
结果观察——斜面培养基
1
第二次实验课
2020/11/29
2
2020/11/29
内容
1.细菌培养法（录象） 2.基础培养基制备（讲解示教） 3. 细菌接种法（一份/组）讲解 4.人体、物品中细菌检查（一份/组）讲解 5.飞沫、空气中细菌检查（一份/桌）讲解 6.观察细菌代谢产物（讲解） 7. 第一次实验报告评讲
3
2020/11/29
精品资料
4
2020/11/29
• 你怎么称呼老师？ • 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你
是否会认为老师的教学方法需要改进？ • 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭 • “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我
笨，没有学问无颜见爹娘 ……” • “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
➢ 固体培养基——分离纯化；保存菌种（1个月） 菌落、菌苔
2、IMViC试验
第三次实验课内容
2020/11/29
24
1、热力对细菌和芽胞的杀菌作用 2、紫外线的杀菌作用 3、常用化学消毒剂的杀菌作用和抗生素敏感试验 4、耐药性变异； 5、细菌的鞭毛变异； 6、高压灭菌器的使用； 7、细菌的鉴定程序； 8、全自动微生物分析仪的基本原理及简单操作步骤
分装，高压灭菌， 15磅（121.3℃）15～20分钟
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2020/11/29
人体、物品中细菌检查
材料：普通平板 （1份/组）
钱
手
发
衣
盖上，标记 , 置 37℃，18-24h后观察。
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2020/11/29
飞沫、空气中细菌检查
材料：血平板 （1份/组）
距口15—20cm 用力咳嗽三次
置空气中 （避日光照射）
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1
2
15
2020/11/29
细菌代谢产物观察
细菌的酶不一样，对营养物质的分解能力不一样， 产生的代谢产物也不一样。
常见：
• 糖发酵试验 • 吲哚（indol）试验 • 甲基红（methyl red）实验 • VP（Voges-Proskauer）试验 • 枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验 • 尿素酶试验 • 硫化氢试验
30分钟
飞沫
空气
盖上，标记 , 置 37℃，18-24h后观察。
结果观察——血平板
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2020/11/29
表皮葡萄球菌在血 琼脂平板培养基上 形成不溶血的菌落。
甲型溶血性链球菌形 成的α溶血现象也称 为甲型溶血现象或草 绿色溶血现象，属于 不完全溶血。
金黄色葡萄球菌形成 的β溶血现象也称为乙 型溶血现象，属于完 全溶血。
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细菌培养接种法——平板划线法
2020/11/29
菌种：混合菌液 材料：普通平板 用具：接种环 方法：分区划线
原始区域
1区 2区
4区 3区
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细菌培养接种法-- 2020/11/29 斜面接种、液体接种、半固体
菌种：大肠杆菌或葡萄球菌斜面 材料：斜面、液体、半固体培养基 用具：接种环、接种针
液体培养基
基础培养基的制备
去筋膜黄牛肉绞碎500g加入1000ml蒸馏水
4℃浸泡过夜煮沸半小时
直接煮沸2小时
脱脂纱布过滤，按比例加入1％蛋白胨、0.5% NaCl，0.1%K2HPO4加热溶解补足水至1000ml
Hale Waihona Puke 调整酸碱度至pH 7.6过滤，补足失水 重新校正pH一次
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2020/11/29
检菌如无细菌生长 （液体透明）即可应用
呈黑色为（＋）。
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尿素酶试验
2020/11/29
产生氨使培养基变碱， 指示剂显红色，为阳性。 如：变形杆菌为阳性。
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IMViC试验
2020/11/29
IMViC试验
I - 吲哚（indol）试验 M - 甲基红（methyl red）试验 V - VP（Voges-Proskauer）试验 C -枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验
琼脂斜面培养基上大肠埃 希菌形成的菌苔生长现象
菌苔（mossy）
指细菌生长繁殖后，在培养基 表面形 成的一层培养物
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结果观察——半固体培养基
1、 扩散生长：具有动力的 细菌,可见培养物扩散和培 养基变混浊。 即有鞭毛的细菌：由穿刺线 向外扩散生长（羽毛状或云 雾状）
2、原位生长：没有动力的 细菌，可见培养物没有扩散， 培养基仍然澄清。 即无鞭毛的细菌： 沿穿刺 线生长
色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚 ↑
对二甲基氨基苯甲醛
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枸橼酸盐利用试验
2020/11/29
C -枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验
利用枸橼酸盐生长 +
不能利用
-
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硫化氢试验
2020/11/29
硫化氢试验（醋酸铅培养基）
某些细菌分解含硫氨基酸，生成H2S， H2S遇铁盐（如硫化亚铁、醋酸铅等）， 则形成黑褐色硫化铁（铅）沉淀物，而